CN107447039B - 长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1表达Northern blot检测引物、试剂盒 - Google Patents
长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1表达Northern blot检测引物、试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种长链非编码RNA lnc‑ALVE1‑AS1表达Northern blot检测引物及试剂盒。所述引物的序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。本发明进一步提供了lnc‑ALVE1‑AS1表达Northern blot检测试剂盒，为lnc‑ALVE1‑AS1表达规律分析提供了方法和基础，在生产实践可用于检测鸡群的禽白血病天然免疫状态。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1表达Northern blot检测引物及试剂盒。
背景技术
内源性反转录病毒(endogenous retroviruses)是基因组成分，被认为源于进化中感染生物体的反转录病毒。作为远古反转录病毒感染在宿主体内的残留，加之过去对它的功能不够了解，曾将其视为垃圾DNA(Junk DNA)。直至最近有研究表明，某些内源性反转录病毒不仅对早期胚胎发育和胚胎干细胞的多能性具有重要作用，还可能与细胞天然免疫有关。
最新研究发现，内源性反转录病毒转录物是长链非编码RNA(long non-codingRNA，lncRNA)的重要来源，具有激活干扰素应答反应的潜能。事实上，lncRNA在细胞生物学调控中的作用越来越受到重视，在抗病毒天然免疫中也具有重要调节作用。内源性反转录病毒衍生的lncRNA在对抗外源性反转录病毒增殖的作用机制将逐渐被阐明，有望成为抵抗外源性病毒的新型疫苗或免疫增强剂。
禽内源性白血病病毒ALVE是最早发现的内源性反转录病毒，可能与宿主免疫应答和遗传抗性有关。特别是，来源于鸡1号染色体上的内源性反转录病毒ALVE1(长度为7.5kb)与禽白血病病毒高度同源，可能与禽白血病病毒的感染和增殖具有一定关联。
发明内容
本发明通过高通量测序在鸡基因组中鉴定出一条禽内源性反转录病毒ALVE1衍生的反义长链非编码RNA，命名为lnc-ALVE1-AS1。研究表明，lnc-ALVE1-AS1可以激活细胞抗病毒干扰素应答反应并抑制与其高度同源的外源性J亚群禽白血病病毒增殖。因此，进一步了解lnc-ALVE1-AS1在不同抗性品系鸡中的表达规律显得尤为重要。本发明的目的是提供一种能检测lnc-ALVE1-AS1表达的检测引物及试剂盒。
本发明提供了用于检测长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1表达的特异性引物，所述特异性引物的序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。
本发明进一步公开了所述特异性引物在制备lnc-ALVE1-AS1Northern blot试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1表达Northern blot检测试剂盒，包括DIG标记探针、杂交液和检测液，用于制备DIG标记探针的特异性引物序列如SEQID NO.8和SEQ ID NO.9所示。
本发明提供的长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1 Northern blot检测引物、试剂盒，为检测lnc-ALVE1-AS1的表达规律提供了研究方法和基础。此外，在生产实践可用于检测鸡群的禽白血病天然免疫状态。
附图说明
图1是lnc-ALVE1-AS1Northern blot结果图。
图2是lnc-ALVE1-AS1在鸡1号染色体上的位置示意图。
图3是lnc-ALVE1-AS1激活抗病毒干扰素应答反应图。A：过表达lnc-ALVE1-AS1对病原模式识别受体基因表达的影响；B：过表达lnc-ALVE1-AS1对干扰素刺激基因表达的影响；C：过表达lnc-ALVE1-AS1对TLR3蛋白表达的影响。
图4是lnc-ALVE1-AS1抑制J亚群禽白血病病毒增殖图。A：过表达lnc-ALVE1-AS1抑制J亚群禽白血病病毒p27蛋白表达；B：过表达lnc-ALVE1-AS1抑制J亚群禽白血病病毒滴度；C：间接免疫荧光共聚焦实验分析lnc-ALVE1-AS1对J亚群禽白血病病毒增殖的影响。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1：lnc-ALVE1-AS1全长序列的测定
(1)鉴定lnc-ALVE1-AS1的5′和3′末端序列
主要由Takara公司提供的RACE 5’/3’Kit试剂盒来完成。
首先，用Reagent提取总RNA，然后用RNase-free DNase I去除基因组。在SMARTScribeReverse Transcriptase(试剂盒提供)的作用下分别将1μg去除基因组的RNA逆转录合成5′-或3′-RACE产物。
然后，按照RACE 5’/3’Kit试剂盒的操作说明，利用通用引物UPM分别与5′-末端或3′-末端基因特异性引物(gene-specific primer，GSP)进行PCR扩增，克隆测序获得lnc-ALVE1-AS1的5′末端和3′末端序列。其中，5′-末端或3′-末端基因特异性引物的核苷酸序列如下：
5’GSP：5′-TGACGGGATGGGACACAACGCTAAACAGT-3′(SEQ ID NO.6)
3’GSP：5′-GATTCGCCGCTCCGTTGCTGGTTTCTC-3′(SEQ ID NO.7)。
(2)常规PCR扩增lnc-ALVE1-AS1产物。其中，所用引物lnc-ALVE1-AS1-F和lnc-ALVE1-AS1-R的核苷酸序列如下：
lnc-ALVE1-AS1-F：5′-ATCTTTATGTTCCATTGTCATCGC-3′(SEQ ID NO.2)
lnc-ALVE1-AS1-R：5′-GCCATTTTACCATCCACCAC-3′(SEQ ID NO.3)
其反应体系包括：100ng鸡胚成纤维细胞cDNA产物作为模板，1μL(10μM)上游引物lnc-ALVE1-AS1-F与1μL(10μM)lnc-ALVE1-AS1-R分别作为扩增引物，1μL DNA Polymerase，10μL 5x SF Buffer，1μL(10μM)dNTP Mix和32μL ddH2O。
其反应条件为：95℃3min；95℃15s，58℃90s，72℃1min，35x循环；72℃7min；4℃维持。
(3)TA克隆测序获得lnc-ALVE1-AS1的全长cDNA序列，该序列在鸡1号染色体上的位置示意图见图2。具体cDNA序列如SEQ ID NO.1。
实施例2：lnc-ALVE1-AS1过表达载体构建
本实施例2中，使用从实施例1中所获得的lnc-ALVE1-AS1全长序列，构建lnc-ALVE1-AS1过表达质粒。
具体包括如下步骤：
(1)从AZA处理96小时的鸡胚成纤维细胞中，使用Reagent提取总RNA，然后用RNase-free DNase I去除基因组。使用PrimeScript RT reagent Kit试剂盒将其逆转录成cDNA产物。
(2)以实施例2步骤(1)所获得的cDNA产物为模板，使用高保真酶扩增lnc-ALVE1-AS1全长序列，其中，所用引物lnc-ALVE1-AS1-HindIII-F和lnc-ALVE1-AS1-XbaI-R的核苷酸序列如下：
lnc-ALVE1-AS1-HindIII-F:
5′-aagcttATCTTTATGTTCCATTGTCATCGCTAAC-3′(SEQ ID NO.4)
lnc-ALVE1-AS1-XbaI-R:
5′-tctagaGCCATTTTACCATCCACCACATTG-3′(SEQ ID NO.5)
其反应体系包括：100ng实施例2步骤(1)所获得的cDNA产物作为模板，1μL(10μM)上游引物lnc-ALVE1-AS1-HindIII-F与1μL(10μM)lnc-ALVE1-AS1-XbaI-R分别作为扩增引物，1μL DNA Polymerase，10μL 5x SF Buffer，1μL(10μM)dNTP Mix和32μL ddH2O。
其反应条件为：95℃3min；95℃15s，58℃90s，72℃1min，35x循环；72℃7min；4℃维持。
(3)以实施例2步骤(2)中PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后切胶回收产物并连接至T载体进行克隆测序。测序正确的阳性克隆质粒与pcDNA3.1(+)(Invitrogen)过表达质粒载体分别用HindIII和XbaI酶切。最后，酶切回收的lnc-ALVE1-AS1目的片段DNA和pcDNA3.1(+)载体DNA用T4 DNA ligase进行连接，连接产物直接转化大肠杆菌。重组子经PCR、酶切和克隆测序鉴定正确后，命名为pcDNA3.1-lnc-ALVE1-AS1。
实施例3：lnc-ALVE1-AS1诱导抗病毒天然免疫能力分析
本实施例3中，使用从实施例2中所获得的pcDNA3.1-lnc-ALVE1-AS1过表达质粒，通过荧光定量PCR和Western-blot方法评估了lnc-ALVE1-AS1诱导抗病毒天然免疫能力。
具体包括如下步骤：
(1)将鸡胚成纤维细胞接种至6孔细胞培养板，然后转染pcDNA3.1-lnc-ALVE1-AS1过表达质粒。同时转染GFP过表达质粒作为载体对照。
(2)转染后36小时，收集细胞；
(3)提取总RNA，使用荧光定量PCR方法检测干扰素信号通路相关基因。
(4)提取总蛋白，Western-blot分析TLR3表达水平。将pcDNA3.1-lnc-ALVE1-AS1和GFP过表达质粒转染后的细胞裂解液进行SDS-PAGE,然后按照Western-blot操作步骤转移到硝酸纤维素膜，5％脱脂乳封闭后分别加入鸡TLR3抗体和HRP标记的山羊抗兔IgG进行孵育，观察结果。
通过荧光定量PCR和Western-blot分析，我们观察到lnc-ALVE1-AS1可以显著激活抗病毒天然免疫相关基因表达(图3)。
实施例4：lnc-ALVE1-AS1抗J亚群禽白血病病毒增殖能力分析
本实施例4中，使用从实施例2中所获得的pcDNA3.1-lnc-ALVE1-AS1过表达质粒，通过ELISA、TCID50和共聚焦免疫荧光方法评估了lnc-ALVE1-AS1抗J亚群禽白血病病毒增殖能力。
具体包括如下步骤：
(1)将鸡胚成纤维细胞接种至6孔或24孔细胞培养板，然后感染J亚群禽白血病病毒(毒株JS09GY3，GenBank accession number GU982308)。
(2)病毒感染后24小时，转染lnc-ALVE1-AS1过表达质粒；同时转染GFP过表达质粒作为载体对照。
(3)转染后96小时，收集上清，使用IDEXX禽白血病抗原检测试剂盒检测J亚群禽白血病病毒p27蛋白表达水平。
(4)转染后96小时，收集细胞和上清，使用TCID50方法测定J亚群禽白血病病毒滴度。
(5)转染后96小时，使用共聚焦免疫荧光测定J亚群禽白血病病毒Env蛋白表达。简要步骤如下：4％多聚甲醛室温固定20分钟，PBS洗涤三次，每次5分钟；0.5％Triton X-100室温通透15分钟，PBS洗涤三次；2％BSA室温封闭30分钟，PBS洗涤三次；加入稀释至工作浓度的ALVJ囊膜糖蛋白的特异性单抗JE9，37℃孵育1小时，PBS洗涤三次；避光条件下加入稀释至工作浓度Alexa Fluor 488标记的山羊抗鼠IgG，37℃孵育40分钟，PBS洗涤三次；避光，DAPI染色液染色10分钟，PBS洗涤三次后封片处理。最后，使用Leica SP8共聚焦显微镜进行观察拍照。
通过ELISA、TCID50和共聚焦免疫荧光实验，我们观察到lnc-ALVE1-AS1可以显著激活抑制J亚群禽白血病病毒增殖(图4)。
实施例5：lnc-ALVE1-AS1Northern blot检测
(1)lnc-ALVE1-AS1探针制备。根据Roche公司提供的DIG Northern Starter Kit试剂盒说明书，使用含有T7 RNA聚合酶启动子序列的引物和高保真酶进行常规PCR扩增获得lnc-ALVE1-AS1部分片段用于探针标记。其中，所用引物lnc-ALVE1-AS1-probe-F1和lnc-ALVE1-AS1-R1的核苷酸序列如下：
lnc-ALVE1-AS1-probe-F1(SEQ ID NO.8)：
5’-TAATACGACTCACTATAGGGACCATCTGAGTCCTTTGTG-3’
lnc-ALVE1-AS1-R1(SEQ ID NO.9)：
5’-TGTTCCATTGTCATCGCTAA-3’
取4μl PCR产物并用RNase-free水补充至10μl，依次加入4μl 5×Labeling mix、4μl 5×Transcription buffer和2μl T7 RNA polymerase，混匀并短暂离心后42度孵育1小时。然后加入2μl DNase I,RNase-free去除模板DNA，37度作用15分钟；最后加入2μl 0.2MEDTA(pH 8.0)终止反应。所获得的反应产物就是针对lnc-ALVE1-AS1的探针混合物。
(2)总RNA提取。使用从AZA或DMSO处理96小时的鸡胚成纤维细胞中提取总RNA，测定浓度后用RNase-free DNase I去除基因组。
(3)RNA电泳。在含有2％甲醛凝胶中进行RNA电泳。
(4)转膜。电泳结束后，采用毛细管电泳转印法在20×SSC中转膜过夜。
(5)固定。将尼龙膜放在80度下真空烘烤2小时使RNA固定到膜上。
(6)预杂交。将尼龙膜移至含有预杂交液的杂交管中，在分子杂交仪中68度温和震荡30分钟，进行预杂交。
(7)杂交。将尼龙膜移至含有lnc-ALVE1-AS1探针杂交液的杂交管中，在分子杂交仪中68度温和震荡，进行过夜杂交。
(8)免疫检测。杂交结束后，使用DIG Northern Starter Kit试剂盒中提供的地高辛检测试剂进行免疫反应。
(9)显色拍照。结果如图1所示，该方法可以检测lnc-ALVE1-AS1表达且AZA可以激活其表达。
SEQUENCE LISTING
<110> 扬州大学
<120> 长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1表达Northern blot检测引物、试剂盒
<130>
<160> 9
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 2136
<212> DNA
<213> 鸡
<400> 1
atctttatgt tccattgtca tcgctaacga gacggcaggc tgctcagaga cgggccacga 60
ccccgaagag aggcctcttc ctgggcgttg gccctggttg ccatcccgcc ttctgcactg 120
tttagcgttg tgtcccatcc cgtcacacag ctgacatcgc tcacggctgt ttcctgactt 180
tcgttttttc gggcactgcg cctgataatg tcccggggat ccacaagtgt agcagagccc 240
tcgggcacga ccacccgacc cagtttgtcc atccctctct ctattgacta ctgccataac 300
taagggctgg atagcagacg acatggccgc ggctatgcct tgatccgtaa gaggggcagt 360
cttctgcctg tctagcacat atttgattat ctctcctggg gtggtcagcg tggagggtgc 420
tgcccgtata agctgctgaa tatctggctg tgacttctgc ctaaagcagt caatgatcac 480
cggagcccgc gcggaaggtg ggagatctga cccttcaacc gcctttataa gacgattggc 540
aaaatccaca aaggactcag atggtccctg cgtaatttcc gcccacgggt ctgtgggttc 600
cgccaaccga gcgacctctc taaacgcctg gagagccgac gccgtaatag caaccagttc 660
ccccggtctt aataatgcag cctgaccctc tggattgccg gccattccat ccgccaaacc 720
ctttaaacga tccaagttag tccgttcccc ccgcccttga ccgttcgctg ggtgtcgggg 780
gtcgcgagtg gctgccgcta taaccgtctg tagttggact ccccaagcgt ccatccataa 840
ggcatatggg gcaggtccta aaataactct cattagattc gtgacgtcat gcggcagcag 900
cggggaggac atgagcgctt ccacttctgc catagtgatc ggggatcgta agcccttggt 960
cctgaccgta tcagccagtc ttgtgatcaa ttttggctcc agaggggtcc aggcgggtcc 1020
ctctgtctta atcactacag gcatggccac cacgggcgga cctgtactcg caagctcctc 1080
cctgatcctt gcccagtcag tcagggccgg cccaggggcc agacccgcgt gccctggctc 1140
cgcccttggc tgttccgccc cccaaggtgt gtcacccccc tggccctgct gctctcccac 1200
ccccgccagg gaaggataca aaccactccc cacataagga ggaggagggg ccgaggctgt 1260
ggcgcaatta cagccagtag ctgttccgca ctgatagcag gatgtgccaa cggttttagg 1320
tgtggccatt ttctccggcg ccatcttcgc atctcgctgc gcagttgttt ctcccacttc 1380
ctcccctttg tcgattcgcc gctccgttgc tggtttctcg atgcactccg gacctggggg 1440
agagaccctc cctcccccta atcccaacca aaactttgct tgctcagatg taacctgttc 1500
ctctcgagcc gccttcaatg cccccaaaac caatccccag gtttttaact ctcccgattt 1560
cccaagtacc attgcccgct gggagagcgc cgcggtaatg ggatcccagg accccgggga 1620
atataagtct gagggagaca taagcaaccc ttccttttgt aacagggaca acatggcccc 1680
tatttccttc ttagaaggag aggttttccc gcaataggtt ttacacgcgg acgaaatcac 1740
ctttatgacg gcttccatgc tagacccaca gggcgaccgg aatcgtgcct ggggtggact 1800
gctcagtcgt cgggcttcct tcccgtcttc caacgactct ctgagttctc ggtaggttat 1860
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cgccacgccg tctgtggccg accactattc cctaacgatc acgtcggggt caccaaatga 2040
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<212> DNA
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<210> 3
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<212> DNA
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
tgttccattg tcatcgctaa 20
Claims (3)
1.cDNA序列如SEQ ID NO.1的长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1表达Northern blot检测引物，其特征在于，所述引物的序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。
2.一种cDNA序列如SEQ ID NO.1的长链非编码RNAlnc-ALVE1-AS1表达Northern blot检测试剂盒，包括DIG标记探针、杂交液和检测液，其特征在于，用于制备DIG标记探针的特异性引物序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。
3.权利要求1所述的引物在制备lnc-ALVE1-AS1 Northern blot试剂盒中的应用。
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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2017
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107058581A (zh) * | 2017-06-02 | 2017-08-18 | 扬州大学 | 一种反义长链非编码rna在制备基因治疗剂方面的应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Expression patterns of endogenous avian retrovirus ALVE1 and its response to infection with exogenous avian tumour viruses;Hu Xuming et al.;《Arch Virol》;20161229;89-101 * |
| 内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA的功能;胡序明等;《生命科学》;20160715;第28卷(第6期);695-702 * |
| 禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学分析方法的建立及应用;朱文奇等;《中国动物传染病学报》;20151010;第23卷(第5期);15-20 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107447039A (zh) | 2017-12-08 |
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