CN107442505A - 盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的清洗方法 - Google Patents

盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的清洗方法 Download PDF

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陈云
温思羽
王斌
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Abstract

本发明公开了盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的清洗方法，清洗流动相为甲醇水溶液，该甲醇水溶液中添加有有效浓度的枸橼酸。本发明通过在流动相中添加有效浓度的枸橼酸，只需清洗很短的时间(2小时)即可将色谱柱清洗干净，使柱压恢复至新购买时的柱压；而传统常规清洗方法过夜清洗(＞12h)也无法使柱压恢复至新购买时的柱压，耗时且无法彻底解决问题。现有方法在清洗色谱柱时通常是关闭紫外灯(延长紫外寿命)，或者使用盐酸莫西沙星的最大吸收波长293nm监控色谱柱是否清洗干净(洗脱至基线平稳)；本发明发现，这些残留在色谱柱上的杂质需在245nm处监控。

Description

盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的清洗 方法
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的清洗方法。
背景技术
盐酸莫西沙星有关物质分析方法中的流动相采用的是乙腈-缓冲盐溶液(体积比30:70)。由于该流动相中缓冲盐的浓度较高，乙腈比例不能太高，否则会导致盐在泵或色谱柱中析出。但是，30％的乙腈不足以将盐酸莫西沙星供试品溶液中的杂质成分完全从色谱柱上洗脱(比如，与盐酸莫西沙星注射液高温变色有关的金属络合物杂质就极难洗脱下来，虽然含量极低，每次进样分析残留极少，但是几十次、上百次进样分析就会积少成多)。大量样品分析后常常会造成色谱柱柱压明显升高，此时必须暂停使用该色谱柱，需要对该色谱柱进行清洗。
目前常用的色谱柱清洗方法是以成本较低的甲醇为有机相，以水为水相，从低比例的有机相梯度洗脱至高比例有机相，如5％甲醇水溶液60分钟内线性梯度至95％甲醇(甚至100％甲醇)。这种清洗方法用于清洗盐酸莫西沙星有关物质分析用色谱柱时，虽然具有一定的清洗作用，但是，使用一段时间后色谱柱柱压还是不可避免的上升，无法恢复至新色谱柱柱压。当柱压升高至一定值时，为了避免对色谱仪的损伤，只能购买新的色谱柱，增加了耗材成本。
发明内容
本发明的目的在于提供一种清洗盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的方法，以有效维护色谱柱，延长其使用寿命，降低色谱耗材成本。
本发明通过下面的技术方案得以实现：
一种盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的清洗方法，清洗流动相为甲醇水溶液，该甲醇水溶液中添加有有效浓度的枸橼酸。
优选地，清洗流动相A相为甲醇，B相为枸橼酸水溶液，枸橼酸浓度为20-30μM。
优选地，清洗流速为0.8-1.2mL，清洗柱温为25-35℃，洗脱程序如下：0-20min，5％A相→65％A相；20-30min，65％A相→65％A相。
优选地，清洗监控波长为245±2nm。
本发明的优点：
1、本发明通过在在流动相中添加有效浓度的枸橼酸，只需清洗很短的时间(2小时)即可将色谱柱清洗干净，使柱压恢复至新购买时的柱压；而传统常规清洗方法过夜清洗(＞12h)也无法使柱压恢复至新购买时的柱压，耗时且无法彻底解决问题；
2、现有方法在清洗色谱柱时通常是关闭紫外灯(延长紫外寿命)，或者使用盐酸莫西沙星的最大吸收波长293nm监控色谱柱是否清洗干净(洗脱至基线平稳)；本发明发现，这些残留在色谱柱上的杂质在293nm根本没有紫外吸收，需在245nm处监控。
附图说明
图1为色谱柱C使用本发明方法清洗1-4个循环的245nm色谱图；
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步介绍本发明的技术方案。
实施例1盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的清洗方法
取4根盐酸莫西沙星注射液有关物质项目专用但因柱压过高而废弃的色谱柱A-D(品牌规格均为Agilent Eclipse Plus Phenyl-Hexyl，4.6mm×150mm，5μm)。
色谱柱A-D新购买时测试柱压及现在柱压如下表：
(1)色谱柱A、B使用常规方法过夜清洗，清洗方法如下：
流动相A相：甲醇；流动相B相：水；
清洗程序：0-20min，5％A相→65％A相；20-30min，65％A相→65％A相；30-50min，65％A相→100％A相；50-60min，100％A相→100％A相；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测波长：293nm；
洗脱循环：15个循环(15小时)。
(2)色谱柱C、D使用本发明方法清洗，清洗方法如下：
流动相A相：甲醇；流动相B相：枸橼酸水溶液，枸橼酸浓度为25μM；
清洗程序：0-20min，5％A相→65％A相；20-30min，65％A相→65％A相；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测波长：245nm；
洗脱循环：4个循环(2小时)。
色谱柱A-D分别经过上述方法清洗后的柱压测试结果如下表：
色谱柱A、B按常规方法清洗15小时后，虽然在293nm波长检测下基线非常平稳，但是柱压降低有限。而色谱柱C、D使用本发明方法清洗2h即可显著降低柱压，基本可以恢复至色谱柱的出厂柱压。图1为色谱柱C在清洗第1-4个循环时的紫外检测图，在245nm波长监测下，可以看见有明显的杂质被洗脱下来，且随着清洗循环增多，杂质峰越来越小至消失。
上述实施例说明，本发明通过在在流动相中添加有效浓度的枸橼酸，只需清洗很短的时间(2小时)即可将色谱柱清洗干净，使柱压恢复至新购买时的柱压；而传统常规清洗方法过夜清洗(＞12h)也无法使柱压恢复至新购买时的柱压，耗时且无法彻底解决问题。现有方法在清洗色谱柱时通常是关闭紫外灯(延长紫外寿命)，或者使用盐酸莫西沙星的最大吸收波长293nm监控色谱柱是否清洗干净(洗脱至基线平稳)；本发明发现，这些残留在色谱柱上的杂质在293nm根本没有紫外吸收，需在245nm处监控。

Claims (4)

1.一种盐酸莫西沙星注射液有关物质分析中反相液相色谱柱的清洗方法，清洗流动相为甲醇水溶液，其特征在于：该甲醇水溶液中添加有有效浓度的枸橼酸。
2.根据权利要求1所述的清洗方法，其特征在于：清洗流动相A相为甲醇，清洗流动相B相为枸橼酸水溶液，枸橼酸浓度为20-30μM。
3.根据权利要求2所述的清洗方法，其特征在于，清洗流速为0.8-1.2mL，清洗柱温为25-35℃，洗脱程序如下：0-20min，5％A相→65％A相；20-30min，65％A相→65％A相。
4.根据权利要求1-3任一所述的清洗方法，其特征在于：清洗监控波长为245±2nm。
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