CN107412191A - 一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种长循环脂质‑聚合物杂化纳米粒及其制备方法。本发明的纳米粒以阳离子脂质和可生物降解聚合物的混合物为壳材，药物和/或蛋白质为芯材，采用具有良好生物相容性的聚乙二醇和内源性的肝素协同作用来构建粒径大小均匀、包封率高、生物相容性高、结构稳定性好、体内半停留时间高达70小时以上的长循环脂质‑聚合物杂化纳米粒。本发明的制备方法工艺简单，操作过程方便，可实验室小规模生产，也可工业化大规模生产。

Description

一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒及其制备方法，更具体涉及以具有良好生物相容性的聚乙二醇和肝素协同修饰的脂质-聚合物杂化纳米粒及其制备方法。
背景技术
纳米药物载体是一种极具潜力和发展前景的药物输送体系。目前较普遍的两类载体是脂质体和聚合物纳米粒。脂质体具有较好的生物相容性，但是其力学性质不稳定，药物包封率低且容易泄露。聚合物纳米粒具有较好的力学稳定性，药物包封率高，能有效地控制药物释放，但其生物相容性较差。脂质-聚合物杂化纳米粒是近年来基于脂质体和聚合物纳米粒开发的一种新型药物载体，兼有脂质体和聚合物纳米粒两者的优点。
载药脂质-聚合物杂化纳米粒进入体内后，被机体视为异物，人体产生抗体与之吸附。血浆中的多种成分如血浆蛋白、脂蛋白、免疫蛋白、补体C蛋白等也吸附到纳米粒上，即调理过程，从而加速巨噬细胞的识别、吞噬，最终从体循环中被清除掉。这产生一个隐患：药物还未到达靶向部位发挥作用而富集于单核巨噬细胞系统，导致其定位作用大打折扣，极大地影响其治疗效果。因此，体内循环时间短是目前制约载药脂质-聚合物杂化纳米粒广泛应用的瓶颈问题。
采用聚合物进行表面修饰是目前公认的构建长循环纳米粒的有效手段之一，常用的修饰材料有聚乙二醇(PEG)、聚多糖、聚乙烯醇等。其中，PEG是目前报道最常用最有效的修饰材料，例如，公开号为CN103637988A的专利一种姜黄素长循环脂质体的制备方法、公开号为CN103006563A的专利一种长循环纳米粒的制备方法。目前，聚多糖(葡聚糖、水溶性壳聚糖等)已被证实能够延长纳米粒在体内的停留时间。例如，公开号为CN101874781的专利疏水改性葡聚糖修饰的长循环脂质体及其制备方法、公开号为CN101766584B聚乙二醇/水溶性壳聚糖协同修饰的长循环可降解聚合物纳米微囊及其制备方法。
目前尚未见关于长循环脂质-聚合物杂化纳米粒的技术报道，也未见对于脂质-聚合物杂化纳米粒进行表面修饰的技术报道。
发明内容
本发明第一个目的是提供一种具有更长血液半停留时间(长循环)的脂质-聚合物杂化纳米粒。
在本发明的第一方面，提供了一种聚乙二醇/肝素协同修饰的长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，所述纳米粒包括：
(a)以药物和/或蛋白质为芯材(即芯材为药物和/或蛋白质，其中所述的药物为水溶性药物，水溶性药物为非蛋白质化合物或提取物)；
(b)以阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的混合物为壳材，
并且所述的壳材包裹所述的芯材，并且在所述壳材中聚乙二醇共价键合于聚合物；
(c)肝素外层，所述的肝素外层包覆于所述的壳材上。
与现有技术相比，肝素是存在于人体内的一种聚多糖，长期以来被作为抗凝药物用于临床。一方面，肝素为内源性聚阴离子，具有良好的生物相容性，生物可降解性以及亲水性，用于纳米粒表面修饰有利于提高其稳定性、生物相容性和亲水性；另一方面，由于聚乙二醇不带电荷，阴离子的肝素可以调控带正电荷的脂质-聚合物杂化纳米粒表面为中性；有利于躲避巨噬细胞对纳米粒的吞噬。聚乙二醇/肝素协同修饰可大幅度延长脂质-聚合物杂化纳米粒的体内循环时间(血液半停留时间高达70小时以上)，以获得更充足的时间到达病变靶位，实现长效、高效的治疗效果。此外，肝素可与多种蛋白质结合，这一特性有望提高纳米粒的肿瘤靶向性。
采用聚乙二醇和肝素协同修饰的脂质/聚合物杂化纳米粒具有较好的生物相容性和结构稳定性，药物包封率高，体内循环时间长，治疗效果佳。
所述纳米粒的平均粒径为100-200nm。
在另一优选例中，所述的肝素通过物理作用吸附于壳材表面。
在另一优选例中，所述纳米粒的平均粒径为100-200nm。
在另一优选例中，所述阳离子脂质包括氯化三甲基-2,3-二油烯氧基丙基铵(DOTMA)、溴化三甲基-2,3-二油酰氧基丙基铵(DOTAP)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)的至少一种。
在另一优选例中，所述含有聚乙二醇生物可降解性聚合物包括聚己内酯聚乙二醇共聚物、聚乳酸聚乙二醇共聚物、聚乳酸-乙交酯聚乙二醇共聚物的至少一种。
在另一优选例中，所述聚己内酯聚乙二醇共聚物、聚乳酸聚乙二醇共聚物或聚乳酸-乙交酯聚乙二醇共聚物中聚己内酯、聚乳酸或聚乳酸-乙交酯与聚乙二醇的质量比为40∶60-95∶5。
在另一优选例中，所述阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的质量比为5：95-70：30。
在另一优选例中，所述含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的重均分子量为15000-300000道尔顿。
在另一优选例中，所述药物为水溶性药物，包括非蛋白质化合物或提取物的至少一种，优选包括阿霉素、维生素B2、地塞米松磷酸钠的至少一种。
在另一优选例中，所述蛋白质为牛血红白蛋白、牛血清白蛋白、超氧化物岐化酶的至少一种。
在另一优选例中，所述肝素的重均分子量为5000-30000道尔顿。
在另一优选例中，所述的纳米粒是用本发明第二方面中所述的方法制备的。
本发明第二个目的在于提供一种本发明纳米粒的制备方法。
在本发明的第二方面，提供了一种制备本发明第一方面中所述的长循环脂质-聚合物杂化纳米粒的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)提供有机溶液O，所述有机溶液O中溶解有作为壳材的阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的混合物；
(2)将溶液W1与步骤(1)所得的有机溶液O混合，经超声波分散、剪切分散和/或均质分散(如高压均质分散)，形成初乳液W1/O，
其中所述的溶液W1为水溶性药物/蛋白的水溶液；
(3)将步骤(2)所得的初乳液W1/O与外水相W2混合，经超声波分散、剪切分散和/或均质分散(如高压均质分散)，形成复乳液W1/O/W2，其中所述的W2外水相为含有肝素和表面活性剂的水溶液；
(4)将步骤(3)所得的复乳液加入到肝素的水分散液或等渗溶液中，挥去有机溶剂，从而获得表面硬化成型的纳米粒；
(5)分离步骤(4)所形成的纳米粒。
在另一优选例中，所述的方法还包括步骤(6)：将获得的纳米粒分散于生理盐水或等渗溶液。
在另一优选例中，所述的W2外水相为含有肝素、表面活性剂和氯化钠的水溶液，其中肝素的质量浓度为0.1～30％，表面活性剂的质量浓度为0.1％～10％，氯化钠的质量浓度为0.5％～10％，和/或所用的表面活性剂选自：Tween60、Tween80、Tween85、泊洛沙姆188、泊洛沙姆908或其组合。
在另一优选例中，所述的有机溶液O中的有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮或其组合。
在另一优选例中，所述的水溶性药物/蛋白的质量浓度为0.01％～30％。
在另一优选例中，所述的溶液W1还含有氯化钠，W1和W2外水相中的氯化钠的质量浓度均为0.1％～10％，优选为0.5％～2％，更佳为0.1-2％，最佳为0.9％。
在另一优选例中，所述的方法还包括步骤：对分离的纳米粒进行冻干。
本发明的第三个目的是提供一种药物组合物。
在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有药学上可接受的载体和本发明第一方面中所述的长循环脂质-聚合物杂化纳米粒。
应理解，在本发明范围内，本申请上述以及下述的各技术特征可以各种方式进行组合，以构成各种优选例。例如，对于氯化钠一般浓度范围0.1％～10％和优选范围0.5％～2％而言，一般范围的下限(0.1％)可以与优选范围的上限(2％)进行组合，从而构成范围0.1-2％。
附图说明
图1为纳米粒的激光粒度分布图
图2为纳米粒血药浓度随时间变化的曲线图
发明详述
本发明经过广泛而深入的研究，首次通过聚乙二醇和肝素的协同作用，制备了长循环脂质-聚合物杂化纳米粒。本发明的纳米粒以阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的混合物为壳材，并在外水相中加入肝素，通过聚乙二醇和肝素的协同作用来制备平均粒径大小为100-200nm(满足长循环粒径基本要求)的长循环脂质-聚合物杂化纳米粒。实验表明，本发明制备的纳米粒，聚乙二醇和肝素同时覆盖于纳米粒表面，使得纳米粒表面的亲水性大大提高，表面电荷趋于中性，聚乙二醇的分子构象更佳，因而可延长体内循环时间，以获得更充足的时间到达病变靶位，实现长效、有效的治疗效果。在此基础上完成了本发明。
阳离子脂质
如本文所用，术语“阳离子脂质”指由脂肪酸和醇作用生成的阳离子酯及其衍生物。其为两性分子，一端为亲水的含氮或磷的头，另一端为疏水(亲油)的长烃基链。
含有聚乙二醇生物可降解性聚合物
如本文所用，术语“含有聚乙二醇生物可降解性聚合物”指聚乙二醇作为单体参与聚合反应、或经过聚乙二醇修饰过的可生物降解的聚合物。较佳地，所述的聚乙二醇通过共价键结合于所述的聚合物。
可用于本发明的含有聚乙二醇生物可降解性聚合物没有特别限制，代表性的例子包括(但并不限于)：聚己内酯、聚乳酸、聚乳酸-乙交酯、聚己内酯聚乙二醇共聚物、聚乳酸聚乙二醇共聚物、聚乳酸-乙交酯聚乙二醇共聚物、或其组合。
更佳地，所述聚己内酯聚乙二醇共聚物、聚乳酸聚乙二醇共聚物或聚乳酸-乙交酯聚乙二醇共聚物中聚己内酯、聚乳酸或聚乳酸-乙交酯与聚乙二醇的质量比为40∶60-95∶5。
另外，优选的适用于本发明的壳材聚合物的重均分子量为15000-300000道尔顿，较佳地为20000-250000道尔顿。
肝素作为一种重要的多糖，因其优良的生物相容性、生物可降解性、安全无毒和价格低廉等特点在生物学领域广泛应用。
在本发明的纳米粒中，所述的肝素通过物理作用吸附于纳米粒表面。
本发明的纳米粒和协同作用
简而言之，本发明的一种聚乙二醇/肝素协同修饰的长循环脂质-聚合物杂化纳米粒包括：
(a)以药物和/或蛋白质为芯材(即芯材为药物和/或蛋白质，其中所述的药物为非蛋白质类化合物或提取物)；
(b)以阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的混合物为壳材，并且所述的壳材包裹所述的芯材，并且在所述壳材中聚乙二醇共价键合于聚合物；
(c)肝素外层，所述的肝素外层包覆于所述的壳材上。
所述纳米粒的平均粒径为100-200nm。
普通纳米粒进入体循环系统后，易被单核巨噬细胞系统(MPS)识别和吞噬，从而降低药物在病灶部位的浓度。CN101766584B聚乙二醇/水溶性壳聚糖协同修饰的长循环可降解聚合物纳米微囊及其制备方法是发明人的在先申请，该技术通过聚乙二醇和阳离子的水溶性壳聚糖协同修饰带负电荷的聚合物纳米微囊，提高聚合物纳米微囊表面亲水性，使电性趋向于中性，体内半停留时间达到60多小时。然而，对于带正电荷的脂质-聚合物杂化纳米粒体系，聚乙二醇和水溶性壳聚糖修饰组合并不合适，无法调控纳米粒表面电荷趋近于中性。因此，本发明选用一种亲水性的、阴离子聚多糖-肝素，既能满足提高纳米粒表面的亲水性，又能调控纳米粒表面电荷趋近于中性，肝素能够调控纳米粒表面聚乙二醇的构象更佳，成为更佳的长循环药物载体，为了便于理解本发明，本发明人提供了以下基本机理。然而，应理解，本发明的保护范围并不受限于本发明的基本机理。
申请人认为，通过聚乙二醇和肝素的协同作用，主要通过以下因素延长纳米粒在血液中的循环时间：提高纳米粒表面的亲水性、调节表面电荷接近中性，以及调控聚乙二醇在纳米粒表面的构象更佳。
具体而言，聚乙二醇通过其在纳米粒的表面构象来躲避体内巨噬细胞的吞噬，延长体内停留时间。肝素作为一种亲水性的、阴离子的聚多糖可以有效调节纳米粒的表面亲水性和表面电荷从而抑制调理。
纳米粒及其制备方法
本发明提供了具有长的血液半停留时间的纳米粒及其制备方法。
通常，本发明的制备方法包括以下步骤：
(1)提供有机溶液O，所述有机溶液O中溶解有作为壳材的阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物；
(2)将溶液W1与步骤(1)所得的有机溶液O混合，经超声波分散、剪切分散和/或均质分散，形成初乳液W1/O，
(3)将步骤(2)所得的初乳液W1/O与外水相W2混合，经超声波分散、剪切分散和/或均质分散，形成复乳液W1/O/W2，
(4)将步骤(3)所得的复乳液加入到肝素的水分散液或等渗溶液中，挥去有机溶剂，从而获得表面硬化成型的纳米粒；
(5)分离步骤(4)所形成的纳米粒。
此外，本发明方法制得的长循环脂质-聚合物杂化纳米粒可任选被冻干，从而制得纳米粒冻干粉。
由于本发明纳米粒具有优异的血液半停留时间，因此本发明纳米粒可用作靶向药物载体。
本发明的主要优点在于：
本发明的纳米粒以阳离子脂质和可生物降解聚合物的混合物为壳材，药物和/或蛋白质为芯材，采用具有良好生物相容性的聚乙二醇和内源性的肝素协同作用来构建粒径大小均匀、包封率高、生物相容性高、结构稳定性好、体内半停留时间高达70小时以上的长循环脂质-聚合物杂化纳米粒。本发明的制备方法工艺简单，操作过程方便，可实验室小规模生产，也可工业化大规模生产。
本发明的长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，粒径范围在100-200nm，生物相容性好，结构稳定性高，药物包封率高，血液半停留时间可长达70小时以上。符合临床静脉注射和静脉滴注的要求，符合大规模生产的要求，具备良好的市场前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的解释和说明，但本发明并不受其限制。
实施例1
将0.5mL 1％(质量浓度)的阿霉素水溶液加入到5mL含10％(质量浓度)氯化三甲基-2,3-二油烯氧基丙基铵和聚乳酸聚乙二醇的共聚物(聚乳酸与聚乙二醇的质量比为40∶60)(两者质量比为5:95)混合物的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 0.1％肝素的外水相中，经27W超声或200bar高压均质2min后，加入150mL 0.1％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为87.5％，血液半停留时间为77.2小时。
实施例2
将0.5mL 15％(质量浓度)的牛血清白蛋白水溶液加入到5mL 5％(质量浓度)的溴化三甲基-2,3-二油酰氧基丙基铵和聚己内酯聚乙二醇的共聚物(聚己内酯与聚乙二醇的质量比为50∶50)(两者质量比为40:60)混合物的二氯甲烷、丙酮的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 5％肝素的外水相中，经400W超声或1000bar高压均质30s后，加入150mL 0.5％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为89.2％，血液半停留时间为78.4小时。
实施例3
将0.5mL 30％(质量浓度)的维生素B2水溶液加入到5mL 5％(质量浓度)的二油酰基磷脂酰乙醇胺和聚乳酸-乙交酯聚乙二醇的共聚物(聚乳酸-乙交酯与聚乙二醇的质量比为70∶30)(两者质量比为70:30)混合物的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 10％肝素的外水相中，经400W超声或1000bar高压均质30s后，加入150mL 0.1％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为88.5％，血液半停留时间为75.7小时。
实施例4
将0.5mL 15％(质量浓度)的牛血红白蛋白水溶液加入到5mL 10％(质量浓度)的氯化三甲基-2,3-二油烯氧基丙基铵和聚乳酸-乙交酯聚乙二醇的共聚物(聚乳酸-乙交酯与聚乙二醇的质量比为70∶30)(两者质量比为70:30)的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 15％肝素的外水相中，经27W超声或200bar高压均质2min后，加入150mL 0.5％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为86.1％，血液半停留时间为72.6小时。
实施例5
将0.5mL 20％(质量浓度)的地塞米松磷酸钠水溶液加入到5mL 10％(质量浓度)的溴化三甲基-2,3-二油酰氧基丙基铵和聚乳酸-乙交酯聚乙二醇的共聚物(聚乳酸与聚乙二醇的质量比为95∶5)(两者质量比为60:40)的二氯甲烷、丙酮的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 5％肝素的外水相中，经27W超声或200bar高压均质2min后，加入150mL 0.5％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为86.2％，血液半停留时间为77.1小时。
实施例6
将0.5mL 5％(质量浓度)的超氧化物岐化酶水溶液加入到5mL 5％(质量浓度)的二油酰基磷脂酰乙醇胺和聚己内酯聚乙二醇的共聚物(聚己内酯与聚乙二醇的质量比为80∶20)(两者质量比为40:60)的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 30％肝素的外水相中，经400W超声或1000bar高压均质30s后，加入150mL 10％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为87.4％，血液半停留时间为78.6小时。
实施例7
将0.5mL 2％(质量浓度)的阿霉素和超氧化物岐化酶(两者质量比1:1)水溶液加入到5mL 5％(质量浓度)的氯化三甲基-2,3-二油烯氧基丙基铵和聚乳酸聚乙二醇的共聚物(聚乳酸与聚乙二醇的质量比为80∶20)(两者质量比为40:60)的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL0.5％肝素的外水相中，经400W超声或1000bar高压均质30s后，加入150mL 0.5％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为85.7％，血液半停留时间为74.2小时。
实施例8
将0.5mL 5％(质量浓度)的维生素B2和牛血清白蛋白(两者质量比2:1)水溶液加入到5mL 5％(质量浓度)的二油酰基磷脂酰乙醇胺和聚己内酯聚乙二醇的共聚物(聚己内酯与聚乙二醇的质量比为80∶20)(两者质量比为40:60)的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 0.5％肝素的外水相中，经400W超声或1000bar高压均质30s后，加入150mL 0.5％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为88.2％，血液半停留时间为73.9小时。
实施例9
将0.5mL 5％(质量浓度)的地塞米松磷酸钠和牛血红白蛋白(两者质量比1:2)水溶液加入到5mL 5％(质量浓度)的二油酰基磷脂酰乙醇胺和聚乳酸聚乙二醇的共聚物(聚乳酸与聚乙二醇的质量比为80∶20)(两者质量比为40:60)的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 0.5％肝素的外水相中，经400W超声或1000bar高压均质30s后，加入150mL 0.5％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为86.9％，血液半停留时间为76.8小时。
实施例10
采用聚乙二醇表面修饰的脂质-聚合物杂化纳米粒(对比例)
将0.5mL 5％(质量浓度)的牛血清白蛋白水溶液加入到5mL 10％(质量浓度)的氯化三甲基-2,3-二油烯氧基丙基铵和聚己内酯聚乙二醇的共聚物(聚己内酯与聚乙二醇的质量比为90∶10)(两者质量比为50:50)的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 0.5％聚乙烯醇的外水相中，经400W超声或1000bar高压均质30s后，加入150mL 0.5％聚乙烯醇的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为70.9％，血液半停留时间为17.2小时。
实施例11
采用肝素表面修饰的脂质-聚合物杂化纳米粒(对比例)
将0.5mL 10％(质量浓度)的阿霉素水溶液加入到5mL 10％(质量浓度)的氯化三甲基-2,3-二油烯氧基丙基铵和聚乳酸-乙交酯共聚物(两者质量比为40:60)的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 0.1％肝素的外水相中，经27W超声或200bar高压均质2min后，加入150mL 0.1％肝素的水溶液中，室温常压下连续搅拌4小时以上，直至纳米粒表面硬化。离心、洗涤、冻干收集纳米粒。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为81.5％，血液半停留时间为10.8小时。
实施例12
聚乙二醇/水溶性壳聚糖协同修饰的长循环可降解聚合物纳米微囊(对比例)
将1mL 5％(质量浓度)的阿霉素溶液加入到2mL 5％(质量浓度)的聚乳酸聚乙二醇的共聚物(聚乳酸与聚乙二醇的质量比为80∶20)的二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂溶液中，超声27W或高压均质200bar乳化30s，将制成的初乳液加入到50mL 0.5％部分脱乙酰化壳聚糖的外水相中，经400W超声或1000bar高压均质2min后，加入200mL0.5％部分脱乙酰化壳聚糖的水溶液中，旋转蒸发除去有机溶剂，直至微囊表面硬化。离心、洗涤、冻干收集微囊。
采用实施例13的方法评价纳米粒的包封率为73.6％，血液半停留时间为63.5小时。
实施例13
对上述实施例1-9制备的纳米粒进行以下评价：
(1)粒径及粒径分布的测定
粒径及其分布采用激光散射粒度分布仪(Zetasizer Nano ZS，MalvernInstruments，Ltd，UK)在25℃下进行测定。把纳米粒的冻干粉分散在等渗磷酸盐缓冲溶液，于合适的测试浓度下进行测定。
粒径分布结果示于图1。其中，实施例1-9的纳米粒粒径为100-200纳米，平均粒径约140±20纳米。此外，约80％以上的微粒的粒径处于120-160纳米范围内。
(2)表面亲水性
评价纳米粒表面亲水性的高低采用测量纳米粒表面的静态接触角。步骤如下：将1mg/mL纳米粒悬浮液悬涂于干净平滑的载玻片上，转速为1500rpm，时间45s。于60℃下将体系中的水分挥发完全形成纳米粒膜。然后在25℃下，使用静态接触角仪测量纳米粒表面的静态接触角。每个测量的结果取样品5个不同位置测量数据的平均值。
结果示于表1。
(3)表面电荷
纳米粒表面电荷采用测定表面ζ电位，把纳米粒的冻干粉分散在等渗磷酸盐缓冲溶液，使用ζ电位仪于合适的测试浓度下进行测定。所有的测量是在25℃和100-2000Hz的条件下进行的。
结果示于表1。结果表明，本发明纳米粒的表面电荷趋于中性。
(4)体内停留时间评价
采用荧光素香豆素-6标记实施例1-9的表面修饰纳米粒用来定量血液中纳米粒的含量。ICR鼠，体重范围在25±5g。禁食过夜后，将实施例1-9的荧光标记的表面修饰纳米粒，通过尾静脉注射浓度为10mg/mL的纳米粒悬浮液，给药剂量为10mL/kg(小鼠体重)。分别在注射后的给定时间点(0-48h)立即采血，每样采0.5mL，置于20℃下待分析。血液样品中纳米粒的定量方法如下：血液样品在冷冻前加入含0.1mM EDTA的去离子水。接着将冷冻的血液样品震荡、解冻。冷冻、解冻这样的过程重复3次，以确保细胞完全破坏，分离出其中的纳米粒。此后，血液样品冻干36h，所有血液样品冻干品均加入准确计量的乙腈，于25℃下机械震动18h萃取其中的香豆素-6。萃取液用荧光分光光度计在Ex 485nm和Em 530nm下测量其值。每种纳米粒梯度浓度同空白血液的混合物，用同上的处理方法绘制标准曲线。对照标准曲线，由测得的各血液样品的荧光值对应计算得血液中纳米粒存留量，进一步计算各血液样品的存留量占初始给药量的百分比，作为血液存留百分比。
绘制血药浓度随时间变化的曲线(图2)，使用药代动力学软件DAS2.0计算得到血液半停留时间(表2)。结果表明，对比例采用聚乙二醇/水溶性壳聚糖协同修饰的可降解聚合物纳米微囊在血液中的半停留时间可达60小时以上，而本发明采用聚乙二醇/肝素协同表面修饰的脂质-聚合物杂化纳米粒的血液半停留时间可达70多小时，可有效延长体内停留时间，是一种非常理想的药物靶向输送载体。
表1纳米粒表面亲水性、表面电荷、包封率的比较
表2纳米粒的血液半停留时间比较
样品 血液半停留时间(小时)
实施例1 77.2
实施例2 78.4
实施例3 75.7
实施例4 72.6
实施例5 77.1
实施例6 79.5
实施例7 74.2
实施例8 73.9
实施例9 76.8
实施例10(对照) 17.2
实施例11(对照) 10.8
实施例12(对照) 63.5

Claims (10)

1.一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，其特征在于，所述纳米粒包括：
(a)以药物和/或蛋白质为芯材；
(b)以阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的混合物为壳材，所述的壳材包裹所述的芯材，并且在所述壳材中聚乙二醇共价键合于聚合物；
(c)肝素外层，所述的肝素通过物理作用吸附于所述壳材表面。
2.如权利要求1所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，其特征在于，所述阳离子脂质包括氯化三甲基-2,3-二油烯氧基丙基铵(DOTMA)、溴化三甲基-2,3-二油酰氧基丙基铵(DOTAP)或二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)的至少一种。
3.如权利要求1所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，其特征在于，所述含有聚乙二醇生物可降解性聚合物包括聚己内酯聚乙二醇共聚物、聚乳酸聚乙二醇共聚物或聚乳酸-乙交酯聚乙二醇共聚物的至少一种，所述共聚物中聚己内酯、聚乳酸或聚乳酸-乙交酯与聚乙二醇的质量比为40：60-95：5。
4.如权利要求1-3任一所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，其特征在于，所述含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的重均分子量为15000-300000道尔顿。
5.如权利要求1所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，其特征在于，所述肝素的重均分子量为5000-30000道尔顿。
6.如权利要求1所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，其特征在于，所述阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的质量比为5：95-70：30。
7.如权利要求1所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，其特征在于，所述纳米粒的平均粒径为100-200nm。
8.如权利要求1所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒，其特征在于，所述药物为水溶性药物，包括非蛋白质化合物或提取物的至少一种。
9.制备如权利要求1-8任一所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒的方法，其特征在于，
(1)提供有机溶液O，所述有机溶液O中溶解有作为壳材的阳离子脂质和含有聚乙二醇生物可降解性聚合物的混合物；
(2)将药物/蛋白质的水溶液与步骤(1)所得的有机溶液O混合，经超声波分散、剪切分散和/或均质分散，形成初乳液；
(3)将步骤(2)所得的初乳液与含有肝素和表面活性剂的水溶液混合，经超声波分散、剪切分散和/或均质分散，形成复乳液；
(4)将步骤(3)所得的复乳液加入到肝素的水分散液或等渗溶液中，挥去有机溶剂，从而获得表面硬化成型的纳米粒；
(5)分离步骤(4)所形成的纳米粒。
10.一种药物组合物，其特征在于，它含有药学上可接受的载体和如权利要求1-8任一所述的一种长循环脂质-聚合物杂化纳米粒。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019135715A1 (en) * 2018-01-05 2019-07-11 Nanyang Technological University Lipid-polymer hybrid nanoparticles
CN112716915A (zh) * 2021-02-03 2021-04-30 中国药科大学 仿生纳米载体及其在制备脑胶质瘤治疗药物的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103006563A (zh) * 2011-09-23 2013-04-03 魏奇 一种长循环纳米粒的制备方法
WO2014046630A1 (en) * 2012-09-19 2014-03-27 Keskin, Dilek Tumor targeted liposomal drug delivery system
CN103893123A (zh) * 2014-04-21 2014-07-02 国家纳米科学中心 一种脂质体-聚合物杂化纳米粒子及其制备方法和应用
CN104524591A (zh) * 2014-12-10 2015-04-22 江南大学 一种介导肝素细胞内传递的交联纳米载体的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103006563A (zh) * 2011-09-23 2013-04-03 魏奇 一种长循环纳米粒的制备方法
WO2014046630A1 (en) * 2012-09-19 2014-03-27 Keskin, Dilek Tumor targeted liposomal drug delivery system
CN103893123A (zh) * 2014-04-21 2014-07-02 国家纳米科学中心 一种脂质体-聚合物杂化纳米粒子及其制备方法和应用
CN104524591A (zh) * 2014-12-10 2015-04-22 江南大学 一种介导肝素细胞内传递的交联纳米载体的制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019135715A1 (en) * 2018-01-05 2019-07-11 Nanyang Technological University Lipid-polymer hybrid nanoparticles
CN112716915A (zh) * 2021-02-03 2021-04-30 中国药科大学 仿生纳米载体及其在制备脑胶质瘤治疗药物的应用

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