CN107389576A - 一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法 - Google Patents

一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法 Download PDF

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陶菡
赵静
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Abstract

本发明公开了一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，A：绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线；B、根据啶虫脒吸光度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与啶虫脒吸光度值之间相互关系的线性回归方程；C:制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品；D:取C品进行吸收光谱扫描，测定其在735 nm波长处的吸光度值，计算C品与A2品的吸光度差值，将该吸光度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。该方法不需要专业人员操作，具有操作简便、检测快速、成本低廉、检测结果直观、适合现场检测等优势。

Description

一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法
技术领域
本发明涉及一种检测啶虫脒的方法，特别是一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法。
背景技术
啶虫脒是一种新型杀虫剂，具有触杀、胃毒和较强的渗透作用，杀虫速效，用量少、活性高、杀虫谱广、持效期长，对环境相容性好等。啶虫脒可用于防治水稻、蔬菜、果树、茶树的半翅目、鳞翅目及鞘翅目等害虫，还可杀卵，因此被广泛应用于农产品和肉制品的害虫防治。按我国农药毒性分级标准，啶虫脒属中等毒性杀虫剂。由于啶虫脒的广泛使用，它已经进入和广泛存在于人类生活环境中，对人类的身体健康和生存环境造成了极大的潜在威胁。因此，有必要采取措施有效监测农产品和肉制品中啶虫脒含量。
目前啶虫脒农药的检测方法主要有仪器分析方法、酶抑制法、免疫分析法、生物传感器法、化学发光技术、比色法等。仪器分析方法主要包括气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、离子色谱法及色谱-质谱联用等，仪器分析方法不足之处在于所需仪器设备价格昂贵，需要有专业人员操作，不适合在现场快速检测。酶抑制法的不足之处在于其敏感度和可重复性有待提高，灵敏度不如仪器法。免疫分析法的不足之处在于易产生假阳性。生物传感器法的不足之处在于目前许多生物传感器技术的稳定性不高，导致实践中存在使用寿命较短等问题。化学发光技术的不足之处在于其信号输出容易受环境的干扰，导致检测结果不可靠。传统的比色法包括目视比色法和光电比色法，其中目视比色法常用的是标准系列法，但缺陷在于眼睛观察存在主观误差，准确度比较低；光电比色法相比于目视比色法虽然消除了主观误差，但测量的准确度、灵敏度仍然低，且应用范围窄。另外，近年来采用的酶抑制法比色检测啶虫脒农药残留，其灵敏度低、成本高。
现有利用纳米金比色检测的方法绝大多数是利用其聚集变色效应，其不足在于：该方法容易受到非靶标引起的非特异性聚集影响，非特异聚集将导致结果不准确，特异性不够。因此，现有的检测方法存在需要专业人员操作、操作复杂、检测时间长、费用高、检测结果不直观、不适合现场快速检测的缺点。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法。本发明不需要专业人员操作，具有操作简便、检测快速、成本低廉、检测结果直观、适合现场检测等优势。
本发明的技术方案：一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，包括有以下步骤：
A：绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线
A1: 制备已知啶虫脒浓度的检测溶液，得A1品；
A2：制备空白对照溶液，得A2品；
A3：取A1品和 A2品进行吸收光谱扫描，测定其735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱；
A4：根据吸收光谱绘制得到啶虫脒吸光度变化量标准曲线；
B、根据啶虫脒吸光度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与啶虫脒吸光度值之间相互关系的线性回归方程；
C:制备未知啶虫脒浓度的待测溶液，得C品；
D: 取C品进行吸收光谱扫描，测定其在735 nm波长处的吸光度值，计算C品与A2品的吸光度差值，将该吸光度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线的具体方法为：
A1: 制备已知啶虫脒浓度的检测溶液，包括：
A1-1：取多支刻度离心管，分别加入啶虫脒核酸适配体序列溶液和纳米金溶液，混匀后孵育，然后每支刻度离心管对应加入一种已知浓度的啶虫脒标准液，混匀后再孵育，得A1-1品；
A1-2：在A1-1品中加入醋酸钠缓冲液，然后再加入H2O2溶液和ABTS溶液混匀即可制备得到检测溶液，为A1品；
A2：取1支刻度离心管，用三蒸水替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1-1和A1-2的方法即可制备得到空白对照溶液，为A2品；
A3：取A1品和A2品进行吸收光谱扫描，测定其在735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱；
A4：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品与A2品之间的吸光度差值作为纵坐标，啶虫脒浓度作为横坐标绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线；
所述步骤B中的线性回归方程为，y=0.000252C + 0.00464，y为吸光度差值=含啶虫脒的待测品的吸光度值- A2品的吸光度值，C为啶虫脒浓度；
所述的制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品的具体方法为：
C、用实际样液替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1-1和A1-2的方法即可制备得到未知啶虫脒浓度的待测溶液，为C品。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述的啶虫脒核酸适配体序列溶液中啶虫脒核酸适配体序列组成为：5’-TGTAATTTGTCTGCAGCGGTTCTTGATCGCTGACACCATA TTATGAAGA-3’，其浓度为0.625 μM 。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述的纳米金溶液的浓度为5.31 nM；H2O2溶液的浓度为2M；ABTS溶液的浓度为25 mM 。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述的醋酸钠缓冲液pH值为5，其浓度为3.5mM 。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述的步骤A3及步骤D中，吸收光谱扫描为：取待测品置于96孔酶标板中，用酶标仪进行吸收光谱扫描，扫描波长范围为300 - 800 nm，测定待测品在735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述的A1品、A2品或C品制备过程中：加入啶虫脒核酸适配体序列溶液和纳米金溶液充分混匀后置于25—35℃条件下孵育25—35min，然后加入10 μL的已知浓度的啶虫脒标准液、三蒸水或实际样液混匀后置于25—35℃条件下孵育25—35min，之后加入醋酸钠缓冲液，最后再加入H2O2溶液和ABTS溶液混匀。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述的线性回归方程可检测啶虫脒浓度范围为10—50 μg/L。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述的啶虫脒核酸适配体序列溶液的用量为1.0—3.0μL；所述的纳米金溶液的用量为67.5—72.5μL；H2O2溶液的用量为8.5—11.5μL；ABTS溶液的用量为8.5—11.5μL；所述的醋酸钠缓冲液的用量为393—413μL 。
前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述的啶虫脒核酸适配体序列溶液的用量为2.0μL；所述的纳米金溶液的用量为70.0μL；H2O2溶液的用量为10.0μL ；ABTS溶液的用量为10.0μL；所述的醋酸钠缓冲液的用量为403μL 。
本发明的有益效果：
1、醋酸钠缓冲液中的纳米金由于吸附和包裹了啶虫脒核酸适配体序列，使纳米金表面的负电荷浓度升高并抑制其过氧化物酶活性，在H2O2作用下无法催化氧化ABTS，体系表现为红色；当加入啶虫脒后，啶虫脒核酸适配体序列与之结合并离开纳米金表面，纳米金的过氧化物酶活性得到恢复，纳米金在H2O2作用下可催化氧化底物ABTS，体系由原先的红色变成绿色或灰绿色，颜色变化明显，因此本方法具有肉眼可辨的特点，检测结果直观；在735nm处出现特征吸收峰，且吸光值变化幅度与啶虫脒的浓度成正比，因而该方法可以用于啶虫脒检测。
、本方法利用样品在醋酸钠缓冲液体系中测得的吸光值的变化值，并查标准曲线，求得不同样品中啶虫脒的浓度，因此检测不需要依赖大型仪器设备，不需要专业人员操作，且操作简单快速，检测快速、成本低廉，可用于农产品、肉制品等中啶虫脒残留的快速检测。
、本发明方法可以测定步骤（1）中检测溶液的啶虫脒浓度的范围为10-50 μg/L。按照国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)对检出限（LOD）作出的规定：“检出限以浓度（或质量）表示，是指由特定的分析步骤能够合理地检测出的最小分析信号xL求得的最低浓度cL（或质量 qL）”，根据3σ/s可计算出本分析方法检测啶虫脒的最低检测限为0.9 μg/L。
如附图4所示，用本发明方法测定3份不同地点取得的废水-1、废水-2和西红柿汁，往样品中分别加入50 μg/L和100 μg/L的啶虫脒，得到的回收率为在98.2%以上，证明本方法可靠。
而从附图3中可以看出，本发明建立的方法可以特异性地检测出啶虫脒，其他竞争性农药对啶虫脒的检测几乎无干扰。
附图说明
附图1为检测体系加入啶虫脒前后的颜色和吸光度变化示意图；
附图2为啶虫脒吸光度变化量标准曲线；
附图3为其它农药对啶虫脒检测的影响示意图；
附图4为应用于实际样品中啶虫脒残留的检测示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
本发明的实施例1：一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，包括有以下步骤：
A：绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线
A1-1:制备已知啶虫脒浓度的检测溶液：取14支1.5 mL刻度离心管，分别加入2.0 μL的浓度为0.625 μM 的啶虫脒核酸适配体序列溶液和70 .0μL 的浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于30℃条件下孵育30min，然后每支刻度离心管对应加入5 μL的一种已知浓度的啶虫脒标准液，充分混匀后置于30℃条件下孵育30min后，得A1-1品；
A1-2:在A1-1品中加入403 μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入10.0 μL的浓度为2M的 H2O2溶液和10.0 μL 的浓度为25mM的ABTS溶液充分混匀得到500 μL的检测溶液，为A1品。
测定制备的已知啶虫脒浓度的检测溶液(A1品),啶虫脒核酸适配体序列溶液的终浓度为2.5 nM，纳米金溶液的终浓度为0.743 nM，H2O2溶液的终浓度为40 mM，ABTS溶液的终浓度为500 μM，醋酸钠缓冲液的终浓度为2.82mM。
：制备空白对照溶液：另取1支刻度离心管，分别加入2 .0μL 的浓度为0.625 μM的啶虫脒核酸适配体序列溶液和70.0 μL 浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于30℃条件下孵育30min，然后加入5.0 μL的三蒸水，充分混匀后置于30℃条件下孵育30min，再加入403μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入10.0 μL的浓度为2M的 H2O2溶液和10.0 μL 的浓度为25mM的ABTS溶液充分混匀得到500 μL的空白对照溶液，为A2品；
A3：取14支不同啶虫脒浓度的A1品，每支200μL，和200μL 的A2品，分别置于96孔酶标板中，用酶标仪进行吸收光谱扫描，扫描波长范围为300 - 800 nm，测定735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱。附图1即为检测溶液加入啶虫脒前后的颜色和吸光度变化示意图，从附图1中可以证明用该方法检测啶虫脒是可行的。附图1中，
(1)为：纳米金 + 啶虫脒核酸适配体序列的吸光度变化曲线；
(2)为：纳米金 +啶虫脒核酸适配体序列+ 200 μg/L 啶虫脒的吸光度变化曲线；
(3) 为：纳米金+啶虫脒核酸适配体序列+ 100 μg/L 啶虫脒的吸光度变化曲线；
(4) 为：ABTS + H2O2 的吸光度变化曲线；
(5) 为：ABTS + H2O2 + 100 μg/L 啶虫脒的吸光度变化曲线；
A4：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品，和A2品的吸光度差值作为纵坐标，啶虫脒浓度作为横坐标绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线。该标准曲线如附图2所示；
B、根据啶虫脒吸光度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与啶虫脒吸光度值之间相互关系的线性回归方程，线性回归方程为，y=0.000252C + 0.00464，其中y为吸光度差值=含啶虫脒的待测品的吸光度值-A2品的吸光度值，C为啶虫脒浓度。
制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品
另取1支刻度离心管，分别加入2.0 μL 的浓度为0.625 μM的啶虫脒核酸适配体序列溶液和70.0 μL 的浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于30℃条件下孵育30min，然后加入5.0 μL的含有啶虫脒的样品，即实际样液，如待测废水样本、西红柿汁等，充分混匀后置于30℃条件下孵育30min后，再加入403μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入10.0 μL的浓度为2 M的 H2O2溶液和10.0 μL 的浓度为25 mM 的ABTS溶液充分混匀得到500μL的待测溶液，为C品。
取200μL 的C品置于96孔酶标板中，用酶标仪进行吸收光谱扫描，扫描波长范围为300 - 800 nm，测定C品在735 nm波长处的吸光度值，计算C品与A2品的吸光度差值，将该吸光度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。例如，当计算得到C品和A2品的吸光度差值y为0.0148时，根据线性回归方程y=0.000252C + 0.00464，即可得出C品中啶虫脒的浓度C是40.3 μg/L。
啶虫脒核酸适配体序列溶液中啶虫脒核酸适配体序列组成为：5’-TGTAATTTGTCTGCAGCGGTTCTTGATCGCTGACACCATA TTATGAAGA-3’，醋酸钠缓冲液的pH值为5。
线性回归方程可检测啶虫脒浓度范围为10—50 μg/L。
本发明的实施例2：一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，包括有以下步骤：
A：绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线
A1-1:制备已知啶虫脒浓度的检测溶液：取14支1.5 mL刻度离心管，分别加入1.0 μL的浓度为0.625 μM 的啶虫脒核酸适配体序列溶液和67.5μL 的浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于25℃条件下孵育35min，然后每支刻度离心管对应加入5 μL的一种已知浓度的啶虫脒标准液，充分混匀后置于25℃条件下孵育35min后，得A1-1品；
A1-2:在A1-1品中加入393 μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入8.5 μL的浓度为2M的 H2O2溶液和8.5μL 的浓度为25mM的ABTS溶液充分混匀得到检测溶液，为A1品。
：制备空白对照溶液：另取1支刻度离心管，分别加入1 .0μL 的浓度为0.625 μM的啶虫脒核酸适配体序列溶液和67.5 μL 浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于25℃条件下孵育35min，然后加入5.0 μL的三蒸水，充分混匀后置于25℃条件下孵育35min，再加入393 μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入8.5μL的浓度为2M的 H2O2溶液和8.5μL 的浓度为25mM的ABTS溶液充分混匀得到空白对照溶液，为A2品；
A3：取14支不同啶虫脒浓度的A1品，每支200μL，和200μL 的A2品，分别置于96孔酶标板中，用酶标仪进行吸收光谱扫描，扫描波长范围为300 - 800 nm，测定735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱。
：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品，和A2品的吸光度差值作为纵坐标，啶虫脒浓度作为横坐标绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线。该标准曲线如附图2所示；
B、根据啶虫脒吸光度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与啶虫脒吸光度值之间相互关系的线性回归方程，线性回归方程为，y=0.000252C + 0.00464，其中y为吸光度差值=含啶虫脒的待测品的吸光度值-A2品的吸光度值，C为啶虫脒浓度。
制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品
另取1支刻度离心管，分别加入1.0 μL 的浓度为0.625 μM的啶虫脒核酸适配体序列溶液和67.5 μL 的浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于25℃条件下孵育35min，然后加入5.0 μL的含有啶虫脒的样品，即实际样液，如待测废水样本、西红柿汁等，充分混匀后置于25℃条件下孵育35min后，再加入393μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入8.5μL的浓度为2 M的 H2O2溶液和8.5 μL 的浓度为25mM 的ABTS溶液充分混匀得到待测溶液，为C品。
取200μL 的C品置于96孔酶标板中，用酶标仪进行吸收光谱扫描，扫描波长范围为300 - 800 nm，测定C品在735 nm波长处的吸光度值，计算C品与A2品的吸光度差值，将该吸光度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。例如，当计算得到C品和A2品的吸光度差值y为0.0148时，根据线性回归方程y=0.000252C + 0.00464，即可得出C品中啶虫脒的浓度C是40.3 μg/L。
啶虫脒核酸适配体序列溶液中啶虫脒核酸适配体序列组成为：5’-TGTAATTTGTCTGCAGCGGTTCTTGATCGCTGACACCATA TTATGAAGA-3’，醋酸钠缓冲液的pH值为5。
线性回归方程可检测啶虫脒浓度范围为10—50 μg/L。
本发明的实施例3：一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，包括有以下步骤：
A：绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线
A1-1:制备已知啶虫脒浓度的检测溶液：取14支1.5 mL刻度离心管，分别加入3.0 μL的浓度为0.625 μM 的啶虫脒核酸适配体序列溶液和72.5μL 的浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于35℃条件下孵育25min，然后每支刻度离心管对应加入5 μL的一种已知浓度的啶虫脒标准液，充分混匀后置于35℃条件下孵育25min后，得A1-1品；
A1-2:在A1-1品中加入413 μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入11.5 μL的浓度为2M的 H2O2溶液和11.5μL 的浓度为25mM的ABTS溶液充分混匀得到检测溶液，为A1品。
：制备空白对照溶液：另取1支刻度离心管，分别加入3.0 μL 的浓度为0.625 μM的啶虫脒核酸适配体序列溶液和72.5 μL 浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于35℃条件下孵育25min，然后加入5.0 μL的三蒸水，充分混匀后置于35℃条件下孵育25min，再加入413μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入11.5μL的浓度为2M的 H2O2溶液和11.5μL 的浓度为25mM的ABTS溶液充分混匀得到空白对照溶液，为A2品；
A3：取14支不同啶虫脒浓度的A1品，每支200μL，和200μL 的A2品，分别置于96孔酶标板中，用酶标仪进行吸收光谱扫描，扫描波长范围为300 - 800 nm，测定735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱。
：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品，和A2品的吸光度差值作为纵坐标，啶虫脒浓度作为横坐标绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线。该标准曲线如附图2所示；
B、根据啶虫脒吸光度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与啶虫脒吸光度值之间相互关系的线性回归方程，线性回归方程为，y=0.000252C + 0.00464，其中y为吸光度差值=含啶虫脒的待测品的吸光度值-A2品的吸光度值，C为啶虫脒浓度。
制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品
另取1支刻度离心管，分别加入3.0 μL 的浓度为0.625 μM的啶虫脒核酸适配体序列溶液和72.5 μL 的浓度为5.31nM的纳米金溶液，充分混匀后置于35℃条件下孵育25min，然后加入5.0 μL的含有啶虫脒的样品，即实际样液，如待测废水样本、西红柿汁等，充分混匀后置于35℃条件下孵育25min后，再加入413μL的浓度为3.5mM的醋酸钠缓冲液，最后再加入11.5μL的浓度为2 M的 H2O2溶液和11.5 μL 的浓度为25 mM 的ABTS溶液充分混匀得到待测溶液，为C品。
取200μL 的C品置于96孔酶标板中，用酶标仪进行吸收光谱扫描，扫描波长范围为300 - 800 nm，测定C品在735 nm波长处的吸光度值，计算C品与A2品的吸光度差值，将该吸光度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。例如，当计算得到C品和A2品的吸光度差值y为0.0148时，根据线性回归方程y=0.000252C + 0.00464，即可得出C品中啶虫脒的浓度C是40.3 μg/L。
啶虫脒核酸适配体序列溶液中啶虫脒核酸适配体序列组成为：5’-TGTAATTTGTCTGCAGCGGTTCTTGATCGCTGACACCATA TTATGAAGA-3’，醋酸钠缓冲液的pH值为5。
线性回归方程可检测啶虫脒浓度范围为10—50 μg/L。

Claims (10)

1. 一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：包括有以下步骤：
A：绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线
A1: 制备已知啶虫脒浓度的检测溶液，得A1品；
A2：制备空白对照溶液，得A2品；
A3：取A1品和 A2品进行吸收光谱扫描，测定其735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱；
A4：根据吸收光谱绘制得到啶虫脒吸光度变化量标准曲线；
B、根据啶虫脒吸光度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与啶虫脒吸光度值之间相互关系的线性回归方程；
C:制备未知啶虫脒浓度的待测溶液，得C品；
D: 取C品进行吸收光谱扫描，测定其在735 nm波长处的吸光度值，计算C品与A2品的吸光度差值，将该吸光度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。
2.根据权利要求1所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线的具体方法为：
A1: 制备已知啶虫脒浓度的检测溶液，包括：
A1-1：取多支刻度离心管，分别加入啶虫脒核酸适配体序列溶液和纳米金溶液，混匀后孵育，然后每支刻度离心管对应加入一种已知浓度的啶虫脒标准液，混匀后再孵育，得A1-1品；
A1-2：在A1-1品中加入醋酸钠缓冲液，然后再加入H2O2溶液和ABTS溶液混匀即可制备得到检测溶液，为A1品；
A2：取1支刻度离心管，用三蒸水替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1-1和A1-2的方法即可制备得到空白对照溶液，为A2品；
A3：取A1品和A2品进行吸收光谱扫描，测定其在735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱；
A4：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品与A2品之间的吸光度差值作为纵坐标，啶虫脒浓度作为横坐标绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线；
所述步骤B中的线性回归方程为，y=0.000252C + 0.00464，y为吸光度差值=含啶虫脒的待测品的吸光度值- A2品的吸光度值，C为啶虫脒浓度；
所述的制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品的具体方法为：
C、用实际样液替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1-1和A1-2的方法即可制备得到未知啶虫脒浓度的待测溶液，为C品。
3. 根据权利要求2所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述的啶虫脒核酸适配体序列溶液中啶虫脒核酸适配体序列组成为：5’-TGTAATTTGTCTGCAGCGGTTCTTGATCGCTGACACCATA TTATGAAGA-3’，其浓度为0.625 μM 。
4. 根据权利要求2所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述的纳米金溶液的浓度为5.31nM；H2O2溶液的浓度为2 M；ABTS溶液的浓度为25 mM 。
5. 根据权利要求2所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述的醋酸钠缓冲液pH值为5，其浓度为3.5mM 。
6. 根据权利要求2所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述的步骤A3及步骤D中，吸收光谱扫描为：取待测品置于96孔酶标板中，用酶标仪进行吸收光谱扫描，扫描波长范围为300 - 800 nm，测定待测品在735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱。
7. 根据权利要求2所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述的A1品、A2品或C品制备过程中：加入啶虫脒核酸适配体序列溶液和纳米金溶液充分混匀后置于25—35℃条件下孵育25—35min，然后加入5 μL的已知浓度的啶虫脒标准液、三蒸水或实际样液混匀后置于25—35℃条件下孵育25—35min，之后加入醋酸钠缓冲液，最后再加入H2O2溶液和ABTS溶液混匀。
8. 根据权利要求2所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述的线性回归方程可检测啶虫脒浓度范围为10 - 50 μg/L。
9.根据权利要求2所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述的啶虫脒核酸适配体序列溶液的用量为1.0—3.0μL；所述的纳米金溶液的用量为67.5—72.5μL；H2O2溶液的用量为8.5—11.5μL；ABTS溶液的用量为8.5—11.5μL；所述的醋酸钠缓冲液的用量为393—413μL。
10. 根据权利要求9所述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，其特征在于：所述的啶虫脒核酸适配体序列溶液的用量为2.0μL；所述的纳米金溶液的用量为70.0μL；H2O2溶液的用量为10.0μL；ABTS溶液的用量为10.0μL；所述的醋酸钠缓冲液的用量为403μL。
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