CN107387044B - 一种利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，包括：（1）采集目标煤层气田资料，分析煤层原位真菌群落结构；（2）本源真菌高效菌群培育；（3）微生物增产煤层气。本发明利用真菌降解大分子化合物的高效能力，采用从煤层培育本源真菌菌群，实现厌氧降解煤产甲烷的微生物增产煤层气过程，能够更好地适应目标煤层环境，快速实现煤层原位生物甲烷转化，解决生物降解煤产甲烷速率及产量的问题，提高煤层气产量，提升煤层气井服务年限，推动微生物增产煤层气技术应用，促进煤层气产业发展。
Description
技术领域
本发明属于煤层气开采、增产领域，涉及一种利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，具体地说是一种利用煤层本源真菌厌氧降解煤来促进甲烷生成以提高生物煤层气产量的方法。
背景技术
煤层气是一种新型清洁能源，也是我国重要的接替能源，在优化能源结构、改善能源供给方面发挥重要作用。然而，煤层气抽采率低的现状限制了煤层气行业的发展。微生物增产煤层气利用微生物降解煤产甲烷的特性，在煤层原位通过煤的生物甲烷转化实现煤层气资源再生，提高煤层气储量、增加煤层渗透率，进而实现煤层气增产，提高抽采量。微生物增产煤层气具有低能耗、绿色、无污染、在提高煤层气抽采率的同时增加煤层气储量等优势，能源和经济价值重大，应用前景广阔。但由于生物降解煤产甲烷的产量及速率较低，导致该技术的现场应用情况不理想。因此，如何提高生物甲烷产量是亟待解决的问题。
煤是一种复杂大分子化合物，包含大量的苯环、脂环和杂环，结构极为致密。一方面，煤分子中含有丰富有机物，能够作为碳源被微生物所利用；而另一方面，煤的大分子性又对生物降解提出了更高要求。目前普遍采用细菌厌氧降解煤的方法，结合产甲烷菌厌氧产甲烷的特性，以实现微生物增产煤层气。如CN201210035682.0公开了一种利用外源微生物增产煤层气的方法，具体为利用外源菌激活煤层中的本源菌，降解煤表面有机质生成甲烷，其中外源菌种组成为水解发酵细菌、产氢产乙酸菌、纤维素分解菌和产甲烷菌；CN201610710769.1公开了一种利用本源菌提高煤层气产量的方法，具体为利用煤层本源细菌以实现煤层气的增产，其中细菌种类主要是厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria)，产甲烷菌的古菌类群是甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)和甲烷叶菌属(Methanolobus)；王爱宽在论文“褐煤本源菌生气特征及其作用机理”公开了利用本源活性厌氧细菌将褐煤为底物进行生物气生成的模拟实验，其中本源细菌主要为纤维素分解细菌。
与细菌相比，真菌具有优秀的降解能力，在生物降解复杂大分子方面表现出广阔的应用前景，如合成染料、木质素、多环芳烃等的降解。而木质素衍生物和多环芳烃是煤的主要组分。且真菌与产甲烷菌在牛瘤胃中能够厌氧降解木质素类化合物产生甲烷。由此，利用煤层本源真菌实现大分子煤的厌氧生物降解，将有效提高生物降解煤的效率，促进后续生物甲烷的生成，显著提高生物煤层气产量。提升微生物增产煤层气效能。
发明内容
本发明旨在提供一种利用煤层本源真菌高效代谢大分子化合物的能力降解煤，增强生物降解煤产甲烷效率，以提高生物煤层气产量的方法。
本发明提供了一种利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，是通过以下技术方案实现的：
Ⅰ、煤层本源真菌菌群的异位培育：收集目标煤层气田地质资料，从目标区域采集煤样与水样，培育厌氧降解煤产甲烷的煤层本源真菌与产甲烷菌混合菌群；
Ⅱ、微生物降解煤产甲烷的原位实现：将Ⅰ中获得的菌液注入目标煤层中，封闭产气后，在注入井出口持续监测产出气体组分和浓度变化，利用煤层气抽采方式收集产生的甲烷。
所述提高煤层气产量的方法，具体包括以下步骤：
（1） 收集目标煤层气田地质资料，在煤层气井口处进行采集水样，样品瓶需提前进行灭菌，预加入还原剂并冲入氮气，水样需取满至瓶中无空气残留，24h内低温运送至实验室，并遮光保存；
（2） 利用分子生物学方法分析水样中的微生物群落构成，获得煤层原位微生物群落结构情况，明确菌群培育目标；
（3） 以目标煤层煤样为唯一碳源，以目标煤层温度为培养温度，提供营养成分，同时添加抗生素以抑制细菌的生长，从水样中富集产甲烷菌群；以单位质量煤产出甲烷量及产甲烷速率为主要指标，经过反复的转接、驯化，富集功能菌群，缩短产气周期，得到产甲烷混合菌群；
（4） 采用分子生物学方法对步骤（3）获得的高效功能菌群加以鉴定，明确其中的真菌和产甲烷菌构成；
（5） 对步骤（3）获得的高效功能菌群进行逐级放大发酵，扩增菌种数目，获得满足现场实施的大体积发酵液；
（6） 采用高压钻孔注入的方式，将步骤（5）获得的发酵液，缓慢注入目标煤层中，注入完毕后封孔；
（7） 封孔期间检测钻孔内气体组分及浓度变化，从甲烷产量及产率两方面评价煤层气增产实施效果；
（8） 封孔结束后，进行煤层气抽采。
上述方法中，所述的抗生素包括抑制细菌生长的氨苄青霉素、链霉素、万古霉素。
所述转接、驯化、培养、发酵均为厌氧条件下进行。
所述产甲烷混合菌群为厌氧降解煤的煤层本源真菌和产甲烷古菌构成的微生物菌群。
所述真菌菌群既包括严格厌氧真菌菌群，也包括兼性厌氧真菌菌群。
所述的分子生物学方法包括克隆文库、高通量测序技术、qPCR方法；利用克隆文库、高通量测序技术分析微生物群落结构，通过qPCR技术进行菌群定量分析。
所述的封孔时间根据功能菌群在实验室条件下的产气周期确定最短时间；根据功能菌群的实验室降解参数明确最大甲烷产生量，同时结合实际生产情况确定具体封孔时间。
本发明的有益效果：
（1）利用煤层原位真菌降解煤，充分发挥真菌在大分子化合物代谢方面的优势，有效促进煤的厌氧生物降解产甲烷，解决生物降解煤产甲烷速率及产量的问题。
（2）利用本源微生物降解煤，不存在菌种入侵的威胁，且获得的功能菌群对煤层的适应性强，能够快速实现煤层原位生物甲烷转化。
（3）利用煤层原位真菌提高煤层气产量，提升煤层气井服务年限，推动微生物增产煤层气技术应用，促进煤层气产业发展，对缓解化石能源紧张，实现煤炭的高效、绿色开发和能源的循环利用等具有重大理论和实际意义。
附图说明
图1为本发明提高生物煤层气产量的方法流程框图；
图2为本发明实施例1中在实验室条件下煤层原位真菌降解无烟煤产甲烷情况；
图3为本发明实施例2中在实验室条件下煤层原位真菌降解烟煤产甲烷情况。
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明，但不局限于以下实施例。
实施例1：提高生物煤层气产量的方法
该方法具体步骤如下：
第一步，目标煤层气田为沁水盆地煤层气田南部某区域9#煤层，收集相关地质资料，采集煤层气赋存的储层煤样，在煤层气井口产出水样，利用Miseq高通量测序技术对采集的水样进行微生物群落结构分析；
结果显示，储层压力为4.3Mpa，储层温度为35℃。产甲烷菌的古菌类群主要为产甲烷菌，细菌主要为变形菌门和厚壁菌门，真菌主要为子囊菌门和担子菌门。
第二步，以煤为唯一碳源，从产出水样中富集降解煤产甲烷的微生物菌群。培养环境与产出水的矿化度一致，pH为7.3，富集培养温度为35℃，矿化度为1200mg/L。添加的抗生素为终浓度0.1mM的氨苄青霉素和终浓度0.2mM的链霉素。经过10代转接、培养、驯化获得厌氧降解煤产甲烷的煤层原位真菌与产甲烷菌混合功能菌群。
其中，产甲烷菌群的富集培养基组分为：
1L富集培养基包含K2HPO4 0.4 g，MgCl2 2.0 g，KH2PO4 0.4g，酵母提取物1.0 g，NH4Cl 1.0 g，刃天青0.001 g，半胱氨酸0.5 g，Na2S 0.2 g，NaHCO3 0.2 g，乙酸钠2.0 g，KCl 0.2 g，NaCl 2.0 g，微量元素溶液10.0 ml，维生素溶液10.0 ml，pH 7.0。
1L微量元素溶液包括：FeCl2·4H2O 1.5mg，AlK(SO4)2 10mg，ZnCl2 70mg，NiCl2·6H2O 24mg，MnCl2·4H2O 100mg，NaMoO4 6mg，CuCl2 2mg，H3BO3 36mg，CoCl2·6H2O 190 mg，25% HCl 10 ml/L
1L维生素溶液包括：生物素 2mg，叶酸2mg，B6 10mg，B2 5mg，B1 5mg，烟酸 5mg，B12 0.1mg，硫辛酸 5mg，对氨基苯甲酸 5mg。
在不添加抗生素的条件下，采用相同操作及条件富集获得了细菌参与的产甲烷混合菌群，以作为对照。获得的厌氧降解煤产甲烷高效菌群在实验室条件下的甲烷生成情况见图2所示。结果显示，添加抗生素以后，甲烷产量最高增加了61.48%，平均增加值为42.3%；平均产甲烷速率提高了53.96%。
第三步，利用Miseq高通量测序技术分析功能菌群微生物结构，结果显示产甲烷菌主要为甲基营养型产甲烷菌，包括Methancella（甲烷胞菌属）和Methanosaeta（甲烷鬃菌属）；真菌主要为发酵、降解菌，包括Alternaria（链格孢菌属）和Amorphotheca（煤油菌属）等。
实施例2：提高烟煤生物煤层气产量的方法
该方法具体步骤如下：
第一步，目标煤样为从沁水盆地北部区域获得的长焰煤煤样，菌种来源为从实施例1中富集得到的真菌与产甲烷菌混合菌群。
第二步，以目标长焰煤煤样为唯一碳源，进行微生物降解煤产生物煤层气实验。培养环境pH为7.0，培养温度为35℃。添加的抗生素为终浓度0.1mM的氨苄青霉素和终浓度0.2mM的链霉素。
第三步，在实验室条件下培养30天，并对产气效果进行评价，长焰煤的产气量达到200 µmol/g煤，菌群对增加烟煤生物煤层气产量表现出较好的效果。
Claims (8)
1.一种利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，其特征在于：包括煤层本源真菌菌群的异位培育和微生物降解煤产甲烷的原位实现相结合的方法，具体包括以下步骤：
（1） 收集目标煤层气田地质资料，在煤层气井口处进行采集水样，样品瓶需提前进行灭菌，预加入还原剂并冲入氮气，水样需取满至瓶中无空气残留，24h内低温运送至实验室，并遮光保存；
（2） 利用分子生物学方法分析水样中的微生物群落构成，获得煤层原位微生物群落结构情况，明确菌群培育目标；
（3） 以目标煤层煤样为唯一碳源，以目标煤层温度为培养温度，提供营养成分，同时添加抗生素以抑制细菌的生长，从水样中富集真菌与产甲烷菌的混合产甲烷菌群；以单位质量煤产出甲烷量及产甲烷速率为主要指标，经过反复的转接、驯化，富集功能菌群，缩短产气周期，得到产甲烷的高效混合菌群；在菌群培养的初期加入抗生素以抑制细菌生长、培育真菌菌群；
（4） 采用分子生物学方法对步骤（3）获得的高效功能菌群加以鉴定，明确其中的真菌和产甲烷菌构成；
（5） 对步骤（3）获得的高效功能菌群进行逐级放大发酵，扩增菌种数目；
（6） 采用高压钻孔注入的方式，将步骤（5）获得的发酵液，缓慢注入目标煤层中，注入完毕后封孔；封闭产气后，在注入井出口持续监测产出气体组分和浓度变化，利用煤层气抽采方式收集产生的甲烷；
（7） 封孔期间检测钻孔内气体组分及浓度变化，从甲烷产量及产率两方面评价煤层气增产实施效果；
（8） 封孔结束后，进行煤层气抽采。
2.根据权利要求1所述的利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，其特征在于：步骤（3）中所得到的产甲烷混合菌群由煤层原位真菌和产甲烷菌构成，真菌为严格厌氧或兼性厌氧。
3.根据权利要求1所述的利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，其特征在于：步骤（2）、（4）中，所述分子生物学方法包括高通量测序技术、克隆文库和qPCR方法，具体操作为：利用高通量测序技术和克隆文库技术分析样品中的微生物群落结构，通过qPCR技术对菌群进行定量分析。
4.根据权利要求1所述的利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，其特征在于：步骤（5）中，逐级放大发酵经历了100 mL、1 L、10 L、100 L、1000 L不同体系的发酵过程，以满足现场实施所需。
5.根据权利要求1所述的利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，其特征在于：
所述的封孔时间根据功能菌群在实验室条件下的产气周期确定最短时间；根据功能菌群的实验室降解参数明确最大甲烷产生量，同时结合实际生产情况确定具体封孔时间。
6.根据权利要求1所述的利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，其特征在于：所述的抗生素包括抑制细菌生长、而对真菌和产甲烷菌不影响的氨苄青霉素、链霉素、万古霉素中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，其特征在于：在菌群培养的初期加入抗生素以抑制细菌、促进真菌生长，添加抗生素时，氨苄青霉素的最终浓度为0.1mM，链霉素的最终浓度为0.2mM。
8.根据权利要求1所述的利用煤层本源真菌提高生物煤层气产量的方法，其特征在于：所述转接、驯化、培养、发酵均为厌氧条件下进行。
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