CN107375436A - 一种水翁有效成分的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种水翁有效成分的提取方法，属于植物提取领域，包括以下步骤：首先以水翁的果实和花蕾作为原料，将其清洗后干净后，于室温下自然晾干，将水翁果实于特定条件下搅打成浆状，并于超声波环境中进行处理，在于均质机中与自制活性液混合提取后，然后离心分离得到上清液a和固形物，再将水翁花蕾和所述固形物采用微波萃取的方式进行提取，提取后再次离心分离上清液b，最后将所述上清液a、b混合后放入大孔树脂的层析柱中进行洗脱，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分，本发明可提高水翁有效成分的提取率。
Description
【技术领域】
本发明涉及植物提取领域，尤其是一种水翁有效成分的提取方法。
【技术背景】
水翁，又称水榕，属于桃金娘科，我国主要分布于广东、海南、广西、云南等地，其耐湿性强，喜生于水边，一般土壤可生长，有一定的抗污染能力，刚成熟的水翁果色泽鲜红，似五味子，熟透的水翁果呈紫黑色，是一种好吃的保健水果。水翁还具有很高的医疗价值可入药，具有清热散毒、祛风解表、消食化滞等作用。长期以来被民间用来制备清热凉茶和防治伤风、感冒；其中，关于水翁花蕾的化学成分及现代药理活性研究较多，但对水翁果中活性有效成分的研究涉及较少且不深入，目前未见有关水翁果中活性成分的研究报道，尤其是降血糖的功效，具有一定的促进胰岛素的分泌作用和胰岛损伤修复作用。
综上所述，水翁有效成分的提取具有较高的经济利用价值，但是在提取有效成分时还存在诸多问题，例如有效成分难以提取，且现有的提取方法难以去除其中的各类杂质，从而导致水翁中有效成分的提取率和纯化率较低，不能满足当今消费人群的需求。
【发明内容】
鉴于以上提出的问题，本发明提供了一种水翁有效成分的提取方法，可以较为完全的保持其中的营养成分，还能提高水翁有效成分的提取率，为水翁的深入利用提供了技术支持。
本发明的技术方案如下：
一种水翁有效成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其4-5倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状，将混合液放于超声波环境中，在温度为45-48℃的条件下提取40-45min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a放入超高压均质机中，按照6-8g/100g的用量加入活性液，于温度为43-45℃的条件下处理80-100min，得到混合物a，将所述混合物a通过离心机于转速为8000-9000r/min的条件下离心6-8min，得上清液a和固形物a备用；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后与步骤(2)所述固形物a混合，向其中加入其6-8倍体积的乙醇溶液，于功率为520-550W的微波萃取设备中提取6-8min后取出，再将其放于的水浴罐中提取42-45min后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为7500-8000r/min的条件下离心7-9min，所得上清液b备用；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分。
进一步地，在步骤(2)中，所述超声波的频率为32-38KHz。
进一步地，在步骤(2)中，所述超高压均质机设定压力值为220-250MPa。
进一步地，在步骤(2)中，所述的活性液由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在28-31℃下培养16-18h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为29-32℃、振荡速度为120-140r/min的条件下振荡12-14h，然后稀释成浓度为107-9个/mL的菌悬液，得到活性液。
进一步地，所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照2-3:1-1.2:0.8-1.4:0.01-0.03:35-40:1000的质量比混合制成。
进一步地，在步骤(3)中，所述水翁花蕾粉碎后过20-40目筛。
进一步地，在步骤(3)中，所述乙醇的体积浓度为52-54％。
进一步地，在步骤(3)中，所述水浴温度为50-55℃。
进一步地，在步骤(4)中，所述乙醇溶液的体积浓度为20-22％。
本发明提供了一种水翁有效成分的提取方法，与现有技术相比，具有以下有益效果：
1.本发明首先以水翁的果实和花蕾作为原料，将其清洗后干净后，于室温下自然晾干，将水翁果实于特定条件下搅打成浆状，并于超声波环境中进行处理，在于均质机中与自制活性液混合提取后，然后离心分离得到上清液a和固形物，再将水翁花蕾和所述固形物采用微波萃取的方式进行提取，提取后再次离心分离上清液b，最后将所述上清液a、b混合后放入大孔树脂的层析柱中进行洗脱，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分。其中，将水翁果实于特定条件下搅打成浆状，并于超声波环境中进行处理，可分离出水翁果实中的水溶性有效成分，结合了超声波进行提取，能通过特定范围频率的超声波振动和强烈的空化作用，迫使水翁果实的细胞破裂，细胞内的多种极性成分加速提取到水中，从而缩短了提取时间，并且有利于保护营养成分的活性，增加了有效成分的溶解速率，又减少了提取时间；然后利用自制的活性液进行酶解处理，其中酶解处理是于超高压均质机中进行的，两者相结合的方式可使酶解过程于湍流、空穴、剪切等复合力的作用下进行，可使所得产品更为均质、乳化，进而提高水翁果实有效成分的提取效率，然后将所得的物质离心分离固形物和上清液a，将所得的固形物和水翁花蕾采用微波萃取的方式进行提取，这种方法可使样品和溶剂中的偶极分子在高频微波能的作用下，高速速度变换其正、负极，产生偶极涡流、离子传导和高频率摩擦，从而在短时间内产生大量的热量，偶极分子旋转导致的弱氢键破裂、离子迁移等加速了溶剂分子对样品基体的渗透，在较短时间内将植物的组织细胞壁破坏，形成微小的孔洞和裂纹，这样细胞外的萃取介质便非常容易进入细胞内，溶解并释放细胞内的物质，然后将微波萃取所得的物质离心分离得到上清液b。本发明所采用的每一个技术手段都是相互配合、相互促进的，且步步为营、环环相扣的，所产生的总的技术效果远远高于单个技术手段所产生的技术手段的简单加和。
2.本发明所制备的活性液的工艺能够高效制备果胶酶、纤维素酶、糖化酶等，进而为本发明的酶解过程提供充足的活性酶，本发明以米曲霉作为菌种，采用自制方法得到营养液进行培养，其中，所述营养液是由硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照特定的比例制作而成，在营养液的作用下能够满足米曲霉生长时对环境的要求，为促进霉的生长提供能量，各无机离子为产生的酶活性提供了促进作用，本发明中所采用的技术手段相互配合、相互促进，从不同方面和角度促进活性液的制备，大幅提升提高制备效率。
总之，本发明提供的水翁有效成分的提取方法，可以较为完全的保持其中的营养成分，还能提高水翁有效成分的提取率，为水翁的深入利用提供了技术支持。
【具体实施方式】
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1
一种水翁有效成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其4倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状，将混合液放于超声波环境中，在温度为45℃的条件下提取40min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a放入超高压均质机中，按照6g/100g的用量加入活性液，于温度为43℃的条件下处理80min，得到混合物a，将所述混合物a通过离心机于转速为8000r/min的条件下离心6min，得上清液a和固形物a备用；其中，所述超声波的频率为32KHz；所述超高压均质机设定压力值为220MPa；
所述的活性液由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在28℃下培养16h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为29℃、振荡速度为120r/min的条件下振荡12h，然后稀释成浓度为107个/mL的菌悬液，得到活性液；所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照2:1:0.8:0.01:35:1000的质量比混合制成；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后与步骤(2)所述固形物a混合，向其中加入其6倍体积的乙醇溶液，于功率为520W的微波萃取设备中提取6min后取出，再将其放于的水浴罐中提取42min后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为7500r/min的条件下离心7min，所得上清液b备用；其中，所述水翁花蕾粉碎后过20目筛；所述乙醇的体积浓度为52％；所述水浴温度为50℃；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分，其中，所述乙醇溶液的体积浓度为20％。
实施例2
一种水翁有效成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其5倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状，将混合液放于超声波环境中，在温度为48℃的条件下提取45min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a放入超高压均质机中，按照8g/100g的用量加入活性液，于温度为45℃的条件下处理100min，得到混合物a，将所述混合物a通过离心机于转速为9000r/min的条件下离心8min，得上清液a和固形物a备用；其中，所述超声波的频率为38KHz；所述超高压均质机设定压力值为250MPa；
所述的活性液由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在31℃下培养18h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为32℃、振荡速度为140r/min的条件下振荡14h，然后稀释成浓度为109个/mL的菌悬液，得到活性液；所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照3:1.2:1.4:0.03:40:1000的质量比混合制成；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后与步骤(2)所述固形物a混合，向其中加入其8倍体积的乙醇溶液，于功率为550W的微波萃取设备中提取8min后取出，再将其放于的水浴罐中提取45min后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为8000r/min的条件下离心9min，所得上清液b备用；其中，所述水翁花蕾粉碎后过40目筛；所述乙醇的体积浓度为54％；所述水浴温度为55℃；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分，其中，所述乙醇溶液的体积浓度为22％。
实施例3
一种水翁有效成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其4.5倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状，将混合液放于超声波环境中，在温度为47℃的条件下提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a放入超高压均质机中，按照7g/100g的用量加入活性液，于温度为44℃的条件下处理90min，得到混合物a，将所述混合物a通过离心机于转速为8500r/min的条件下离心7min，得上清液a和固形物a备用；其中，所述超声波的频率为36KHz；所述超高压均质机设定压力值为240MPa；
所述的活性液由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在29℃下培养17h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为30℃、振荡速度为130r/min的条件下振荡13h，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液，得到活性液；所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照2.6:1.1:1.2:0.02:36:1000的质量比混合制成；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后与步骤(2)所述固形物a混合，向其中加入其7倍体积的乙醇溶液，于功率为530W的微波萃取设备中提取7min后取出，再将其放于的水浴罐中提取44min后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为7600r/min的条件下离心8min，所得上清液b备用；其中，所述水翁花蕾粉碎后过30目筛；所述乙醇的体积浓度为53％；所述水浴温度为54℃；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分，其中，所述乙醇溶液的体积浓度为21％。
对比例1
一种水翁有效成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其4.5倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状，将混合液放于超声波环境中，在温度为47℃的条件下提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为8500r/min的条件下离心7min，得上清液a和固形物a备用；其中，所述超声波的频率为36KHz；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后与步骤(2)所述固形物a混合，向其中加入其7倍体积的乙醇溶液，于功率为530W的微波萃取设备中提取7min后取出，再将其放于的水浴罐中提取44min后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为7600r/min的条件下离心8min，所得上清液b备用；其中，所述水翁花蕾粉碎后过30目筛；所述乙醇的体积浓度为53％；所述水浴温度为54℃；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分，其中，所述乙醇溶液的体积浓度为21％。
对比例2
一种水翁有效成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其4.5倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状得到固液混合物a，将所述固液混合物a放入超高压均质机中，按照7g/100g的用量加入活性液，于温度为44℃的条件下处理90min，得到混合物a，将所述混合物a通过离心机于转速为8500r/min的条件下离心7min，得上清液a和固形物a备用；其中，所述超高压均质机设定压力值为240MPa；
所述的活性液由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在29℃下培养17h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为30℃、振荡速度为130r/min的条件下振荡13h，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液，得到活性液；所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照2.6:1.1:1.2:0.02:36:1000的质量比混合制成；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后与步骤(2)所述固形物a混合，向其中加入其7倍体积的乙醇溶液，于功率为530W的微波萃取设备中提取7min后取出，再将其放于的水浴罐中提取44min后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为7600r/min的条件下离心8min，所得上清液b备用；其中，所述水翁花蕾粉碎后过30目筛；所述乙醇的体积浓度为53％；所述水浴温度为54℃；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分，其中，所述乙醇溶液的体积浓度为21％。
对比例3
一种水翁有效成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其4.5倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状，将混合液放于超声波环境中，在温度为47℃的条件下提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a放入超高压均质机中，按照7g/100g的用量加入活性液，于温度为44℃的条件下处理90min，得到混合物a，将所述混合物a通过离心机于转速为8500r/min的条件下离心7min，得上清液a和固形物a备用；其中，所述超声波的频率为36KHz；所述超高压均质机设定压力值为240MPa；
所述的活性液由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在29℃下培养17h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为30℃、振荡速度为130r/min的条件下振荡13h，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液，得到活性液；所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照2.6:1.1:1.2:0.02:36:1000的质量比混合制成；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后向其中加入其7倍体积的乙醇溶液，于功率为530W的微波萃取设备中提取7min后取出得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为7600r/min的条件下离心8min，所得上清液b备用；其中，所述水翁花蕾粉碎后过30目筛；所述乙醇的体积浓度为53％；所述水浴温度为54℃；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分，其中，所述乙醇溶液的体积浓度为21％。
对比例4
一种水翁有效成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其4.5倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状，将混合液放于超声波环境中，在温度为47℃的条件下提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a放入超高压均质机中，按照7g/100g的用量加入活性液，于温度为44℃的条件下处理90min，得到混合物a，将所述混合物a通过离心机于转速为8500r/min的条件下离心7min，得上清液a和固形物a备用；其中，所述超声波的频率为36KHz；所述超高压均质机设定压力值为240MPa；
所述的活性液由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在29℃下培养17h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为30℃、振荡速度为130r/min的条件下振荡13h，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液，得到活性液；所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照2.6:1.1:1.2:0.02:36:1000的质量比混合制成；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后与步骤(2)所述固形物a混合，向其中加入其7倍体积的乙醇溶液浸泡提取44min后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为7600r/min的条件下离心8min，所得上清液b备用；其中，所述水翁花蕾粉碎后过30目筛；所述乙醇的体积浓度为53％；所述水浴温度为54℃；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分，其中，所述乙醇溶液的体积浓度为21％。
实验例
效果试验(一)
胃排空试验：实验动物适应饲养1周，分为7组，每组各饲养10只实验动物。各小组每天喂养实施例1-3和对比例1-4制备的水翁有效成分(0.05g/100g体重)，共30d，所述水翁有效成分用其3倍质量的水稀释。
试验时每只大鼠通过腹腔注射盐酸多巴胺，建立大鼠胃排空延迟模型，每天灌喂水翁有效成分，末次灌喂后1h脱颈处死，以胃全重和胃净重的差值为胃内残留物重，计算胃内残留物占所灌半固体糊重量的百分比为胃残留率；全部结果见表1。
表1水翁有效成分的保健效果
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | |
| 残留率(％) | 62.5 | 61.6 | 63.1 | 82.5 | 83.2 | 90.4 | 87.6 |
表1的结果表明：本发明实施例1-3的水翁有效成分可使小鼠胃中食物的残留量降低，说明本发明的产品能有效促进食物消化，有健胃消食的功效；同时还说明本发明方法所提取的水翁有效成分的含量较高，较少的用量即能达到使小鼠胃中食物的残留量降低的目的。
效果试验(二)
止咳试验：实验小鼠分为7组，每组各饲养10只。各小组每天喂养实施例1-3和对比例1-4制备的水翁有效成分(0.05g/100g体重)，共30d，所述水翁有效成分用其3倍质量的水稀释。
试验时，所述实验小鼠是通过尾静脉注射四氧嘧啶筛选建立小鼠血糖模型，所选小鼠的血糖含量为11-20mmol/L，将筛选出的小鼠随机分组，每天灌喂水翁有效成分，末次灌喂后1h通过摘球取血法测定血糖含量；全部结果见表2。
表2水翁有效成分的保健效果
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | |
| 血糖含量(mmol/L) | 5.86 | 5.73 | 5.89 | 7.62 | 7.91 | 8.13 | 8.69 |
表2的结果表明：本发明实施例1-3的水翁有效成分可使小鼠的血糖含量大大降低至正常范围，说明本发明方法所提取的水翁有效成分的含量较高，较少的用量即能达到使小鼠降血糖的功效。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料：以水翁的果实和花蕾作为原料，将水翁果实和水翁花清洗干净后，于室温下自然晾干；
(2)水翁果实处理：将步骤(1)所述水翁果实中加入其4-5倍体积的水后放入榨汁机中充分搅打成浆状，将混合液放于超声波环境中，在温度为45-48℃的条件下提取40-45min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a放入超高压均质机中，按照6-8g/100g的用量加入活性液，于温度为43-45℃的条件下处理80-100min，得到混合物a，将所述混合物a通过离心机于转速为8000-9000r/min的条件下离心6-8min，得上清液a和固形物a备用；
(3)水翁花处理：将步骤(1)所述水翁花蕾粉碎后与步骤(2)所述固形物a混合，向其中加入其6-8倍体积的乙醇溶液，于功率为520-550W的微波萃取设备中提取6-8min后取出，再将其放于的水浴罐中提取42-45min后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为7500-8000r/min的条件下离心7-9min，所得上清液b备用；
(4)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b通过填充有大孔树脂的层析柱，用乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述水翁有效成分。
2.根据权利要求1所述一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述超声波的频率为32-38KHz。
3.根据权利要求1所述一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述超高压均质机设定压力值为220-250MPa。
4.根据权利要求1所述的一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述的活性液由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在28-31℃下培养16-18h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为29-32℃、振荡速度为120-140r/min的条件下振荡12-14h，然后稀释成浓度为107-9个/mL的菌悬液，得到活性液。
5.根据权利要求4所述的一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、氯化钾、氯化钠、硫酸铁、葡萄糖、水按照2-3:1-1.2:0.8-1.4:0.01-0.03:35-40:1000的质量比混合制成。
6.根据权利要求1所述一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述水翁花蕾粉碎后过20-40目筛。
7.根据权利要求1所述一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述乙醇的体积浓度为52-54％。
8.根据权利要求1所述一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述水浴温度为50-55℃。
9.根据权利要求1所述一种水翁有效成分的提取方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述乙醇溶液的体积浓度为20-22％。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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