CN107375342A - 一种由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明时间一种由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法及应用,方法包括:(1)取一定量的鲎血细胞按1:1‑1:15加入裂解液进行冻融裂解,(2))裂解后,经离心得到鲎细胞裂解液;(3)鲎细胞裂解液与赋形剂混合,冻干得冻干粉;(4)将冻干粉按1:1‑1:15比例加入到水溶液中,得实际使用形态的妇科洗液。所述妇科洗液的应用,该应用是将上述妇科洗液应用于由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌引起的妇科阴道炎。本发明与现有妇科洗液相比,本发明的妇科洗液天然绿色,其含有的鲎素肽的抑菌机理,作用位点多,不易产生抗药性,可长期使用,不会导致菌群混乱,消除了抗生素类药物容易产生抗药性的缺陷,产品无细胞毒性,无迟发性超敏,无刺激具有极大的市场价值。
Description
技术领域
本发明涉及妇科洗液、妇科凝胶等妇科用品技术领域,具体是一种由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法及应用。
背景技术
阴道炎是妇科常见病,近年来呈现高发趋势,大约70-80%的妇女此生都会患上此病,此病的特点是发病频繁,治疗后容易复发。常规的治疗药物容易引起阴道中细菌的紊乱,造成阴道抵抗力下降,容易再次感染。另外,频繁的使用抗生素类药物还易引起细菌、真菌的抗药性,更会影响日后的治疗效果。
鲎,隶属节肢动物门,,Arthropoda,是一种生活在海洋中的大型节肢动物,在早古生代的奥陶纪出现,至今已有4亿多年的历史,是动物界具有独特进化地位的“活化石”之一。其中东方鲎属中的东方鲎(又叫中国鲎)Tachypleus tridentatus分布于我国沿海的浙江、福建、台湾、广西和广东。鲎的血液能提取鲎试剂,后来又发现鲎素对真菌、流感病毒、口腔泡疹病毒及获得性免疫缺陷综合症病毒(HIV)有抗性。所以鲎是可大力开发的珍贵海洋药用动物资源。
鲎细胞裂解液中含有丰富的鲎素肽、SOD、多种氨基酸等成分。鲎素肽是1988年Nakamura T.等从中国鲎血细胞碎屑里用酸提取法得到的一种17氨基酸且含2个二硫键的β-折叠结构的抗菌肽。鲎素抗菌肽主要存在于鲎血细胞里的小颗粒中,通过和细菌脂糖形成复合物,在低浓度下就能抑制革兰氏阴性及阳性细菌的生长。鲎素在低pH、高温下相当稳定,是一种很有应用潜力的抗菌活性物质。
发明内容
本发明的目的在于克服现有妇科洗液的不足,提供一种由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法及应用。
本发明实现目的的技术方案如下:
一种由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法,该方法包括步骤如下:
(1)取一定量的鲎血细胞按1:1-1:15加入裂解液进行冻融裂解;
(2)裂解后,经离心得到鲎细胞裂解液,其中,离心的转数为3000-5000转/分;
(3)取100份鲎细胞裂解液与0.1-3份赋形剂均匀混合,然后罐装到瓶中进行冻干,得冻干粉成品;
(4)将上述冻干粉按1:1-1:15比例加入到水溶液中,得实际使用形态的妇科洗液。
而且,所述步骤(3)中赋形剂为去除热源的乳糖,所述进行冻干的具体步骤为:-50℃预冻1小时,真空度10Pa,然后均匀升温,制品到达24℃,开启渗气阀,开始二次干燥,制品温度到达31℃,破解真空,制品出仓得鲎素肽冻干粉成品。
而且,在所述步骤(4)中的水溶液中进一步加入2%-5%的芦荟提取液或玫瑰提取液。
一种如权利要求1所述妇科洗液的应用,该应用是将上述妇科洗液应用于由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌引起的妇科阴道炎。
本发明的优点和效果是:
1、本发明与现有妇科洗液相比,本发明的鲎细胞裂解液(鲎素肽)为天然物质,绿色、天然;其含有的鲎素肽的抑菌机理,作用位点多,不易产生抗药性,可长期使用,不会导致菌群混乱,消除了抗生素类药物容易产生抗药性的缺陷。
2、本发明产品除含有鲎素肽外,还含有多种氨基酸等营养成分,可以起到抑菌、修复、滋养阴道的作用。
3、本发明产品绿色、无细胞毒性,无迟发性超敏,无刺激具有极大的市场价值。
附图说明
图1为1:1比例妇科洗液在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图;
图2为1:5比例妇科洗液在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图;
图3为1:10比例妇科洗液在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图;
图4为1:15比例妇科洗液在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图;
图5为高纯水在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图;
图6为阴道炎样液加入1:1比例产品后在2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图;
图7为阴道炎样液加入1:15比例产品后在2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图。
具体实施方式
下面结合具体实施方案对本发明进一步说明,其具体实施方案应该理解为仅为举例说明,不是限定性的,不能以下述举例说明来限定本发明的保护范围。
一种由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法,该方法包括步骤如下:
(1)取一定量的鲎血细胞按1:1-1:15加入裂解液进行冻融裂解;
(2)裂解后,经离心得到鲎细胞裂解液;
其中,经离心转数为3000-5000转/分。
(3)取100份鲎细胞裂解液与0.1-3份赋形剂均匀混合,然后罐装到瓶中进行冻干,得冻干粉成品;
其中,所述赋形剂为去除热源的乳糖,所述冻干条件为-50℃预冻1小时,真空度10Pa,然后程序升温,制品到达24℃,开启渗气阀,开始二次干燥,制品温度到达31℃,破解真空,制品出仓得鲎素肽冻干粉成品。
(4)将上述冻干粉按1:1-1:15比例加入到水溶液中,得实际使用形态的妇科洗液;
其中,在所述水溶液中进一步加入2%-5%的芦荟提取液或玫瑰提取液,以便达到更好的保湿,消炎作用。
一种上述妇科洗液的应用,该应用是将上述妇科洗液应用于由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌引起的妇科阴道炎。
对上述妇科洗液进行抑菌试验
第一类实验,将上述妇科洗液分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌进行2分钟和20分钟的抑菌试验,实验步骤如下:
1)首先用营养琼脂做4支斜面,沙氏琼脂培养基2个斜面。每个菌两管,营养琼脂用于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,沙氏琼脂培养基用于白色念球菌。
2)制备磷酸盐缓冲液(PBS),PH=7.2,0.03mol/L的缓冲液:磷酸氢二钠十二水,7.13g;磷酸二氢钾,1.36g;加1L蒸馏水,121度灭菌15min备用。
3)从划线的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌平板上取菌,将其划在斜面上,将斜面放在37度生化培养箱中培养24h。
4)用2mlPBS分两次洗一个试管中的菌,两个试管用4mlPBS将其全部洗出,制备菌悬液备用。
5)将要验证的样品—鲎细胞裂解液(鲎素肽)干粉,用注射用水1:1、1:5、1:10、1:15稀释,然后分装到两个试管中,与对比物高纯水组一起构成5种样液。
6)取菌悬液100ul滴于5ml样液中,开始计时,作用2min、20min各计时一次。2min、20min时各取0.5ml样液投入5ml PBS缓冲液试管中,充分混合得A。然后稀释做梯度,做2-4个梯度。从中取1ml样液加入到9ml PBS试管中,充分混合得B,从B中取1ml样液加入到9mlPBS试管中,依次类推。
7)然后将上述做的梯度吸0.5ml放入平板中,加入15ml 40-50度的营养琼脂培养液或沙氏琼脂培养液,混合均匀后,将其放入37度48h做活菌计数。真菌是27度72h做活菌计数。
8)经计算2分钟的细菌抑菌率在85%以上,20分钟的抑菌率在77%以上;2分钟和20分钟的真菌抑菌率均在60%以上。
第二类实验,将上述妇科洗液对患有阴道炎的阴道粘液进行29分钟的抑菌试验,
取患有阴道炎的阴道粘液进行培养,比照上述实验步骤,在培养后的阴道粘液中加入按1:1、1:5、1:10、1:15稀释的产品,测其抑菌率,实验结果表明,抑菌率均在90%以上。
实施例1
鲎血细胞和裂解剂按1:10裂解冻融得到鲎血细胞裂解液,该裂解液的冻干粉与水溶解液1:1混合得到试验样品,将该试验样品进行大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌的抑菌试验,试验结果见表1,结果照片见图1、5。
实施例2
实验步骤与实施例1一致,所不同的是冻干粉与水溶解液按照1:5比例混合得到试验样品。试验结果见表1,结果照片见图2、5。
实施例3
实验步骤与实施例1一致,所不同的冻干粉与水溶解液按照1:10比例混合得到试验样品。试验结果见表1,结果照片见图3、5。
实施例4
实验步骤与实施例1一致,所不同的冻干粉与水溶解液按照1:15比例混合得到试验样品。试验结果见表1,结果照片见图4、5。
表1为纯化水、1:1、1:5、1:10、1:15稀释的产品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌的抑菌率。
表1
实施例5
取患有阴道炎的阴道粘液进行培养,将其加入1:1稀释比例的产品,测其抑菌率,抑菌率均在90%以上。结果照片见图6。
实施例6
实验步骤与实施例5一致,所不同的是加入1:15稀释比例的产品,测其抑菌率,抑菌率均在90%以上。结果照片见图7。
Claims (4)
1.一种由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法,其特征在于该方法包括步骤如下:
(1)取一定量的鲎血细胞按1:1-1:15加入裂解液进行冻融裂解;
(2)裂解后,经离心得到鲎细胞裂解液,其中,离心的转数为3000-5000转/分;
(3)取100份鲎细胞裂解液与0.1-3份赋形剂均匀混合,然后罐装到瓶中进行冻干,得冻干粉成品;
(4)将上述冻干粉按1:1-1:15比例加入到高纯水溶液中,得实际使用形态的妇科洗液。
2.根据权利要求1所述的由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法,其特征在于:所述步骤(3)中赋形剂为去除热源的乳糖,所述进行冻干的具体步骤为:-50℃预冻1小时,真空度10Pa,然后均匀升温,制品到达24℃,开启渗气阀,开始二次干燥,制品温度到达31℃,破解真空,制品出仓得鲎素肽冻干粉成品。
3.根据权利要求1所述的由鲎细胞裂解液制备妇科洗液的方法,其特征在于:在所述步骤(4)中的高纯水溶液中进一步加入2%-5%的芦荟提取液或2%-5%的玫瑰提取液。
4.一种如权利要求1所述妇科洗液的应用,其特征在于:该应用是将上述妇科洗液应用于由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌引起的妇科阴道炎。
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