CN107328883A - 一种鼠李糖生产企业快速准确测定鼠李糖含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鼠李糖生产企业快速准确测定鼠李糖含量的方法。将样品稀释或溶解至适当浓度后，经过简单膜过滤即可进样检测。检测条件：以氢离子色谱柱为分离柱，以体积分数0.2~0.8‰的稀硫酸溶液作为流动相，流速为0.3~0.5mL/min，柱温30~40℃。样品经过预处理后，通过一次进样、单柱色谱即可快速的测定出样品中L‑鼠李糖含量。本方法尤其适用于混合糖液中L‑鼠李糖含量的测定，准确度高，可操作性好。

Description

一种鼠李糖生产企业快速准确测定鼠李糖含量的方法

技术领域

本发明公开了一种鼠李糖生产企业快速准确测定鼠李糖含量的方法，属于定量分析检测方法领域，具体涉及一种高效液相色谱快速准确测定样品中L-鼠李糖含量的方法。

背景技术

L-鼠李糖（L-Rhamnose monohydrate），C₆H₁₂O₅，又称6-脱氧-L-甘露糖，或甲基戊糖，自然界里主要存在于植物多糖、糖苷、植物胶及细菌多糖中。L-鼠李糖的纯品为无色粉末，呈结晶状，其甜度是蔗糖的33％。L-鼠李糖可食用，可用作甜味剂，可用于生产香精香料；可以作为药物的中间体、合成强心药物；可作为肠道渗透测试剂使用，并具有抗癌作用；还可用于农作物疾病的防治等。

目前L-鼠李糖的检测方法包括化学方法，如二硝基水杨法（DNS法），高效液相色谱法，薄层色谱法和毛细管气相色谱法等。以前两种方法较为常用，其中DNS化学法操作繁琐、检测精度低、易受干扰；高效液相色谱法更受青睐。在L-鼠李糖的生产过程中常伴随有D-半乳糖，在普通高效液相色谱法检测中，D-半乳糖和L-鼠李糖通常不能有效分开，在色谱图中以同一个色谱峰显示，影响测量准确度；对于这种情况，需要采用双柱高效液相色谱法。由于双柱高效液相色谱造价更为昂贵，在糖类生产企业中普及率不高，不能满足企业生产中要求快速有效测定样品的目的。对于单柱高效液相色谱测定L-鼠李糖的方法，目前国内专利中尚未见提及。有文章公布采用waters高效糖分析柱，利用梯度洗脱分离，建立了同时测定烟草中水溶性糖的新方法：高效液相色谱一蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)；该方法虽然采用单柱色谱，但是预处理繁琐，耗时长，也不能满足企业快速测定的要求。

曹莉在《单糖的离子色谱法分离及检测》（出自《中国医药导刊》2012年，第14卷第10期，总第108，期P1838~1840）中，建立分离测定包括鼠李糖和半乳糖在内的8中单糖成分的高效阴离子色谱法。该方法利用离子色谱分析柱，采用脉冲安培检测器，以NaOH碱溶液为流动相，检出限2-26μg/L。该方法适用于单糖的检测，需将样品中的单糖组分分离后检测；对于样品中的多糖，需要分离后使用使用蒽酮比色法测定。

马定远等在《柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成》（出自《分析化学研究简报》2002年，第30卷第6期，P702~705）中，报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。该方法需对6种还原单糖（鼠李糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、木糖）首先进行1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化处理，然后采用反向高效液相色谱、250nm紫外检测和使用梯度洗脱，实现6中单糖的分离并具有良好的峰形。该方法需对样品进行衍生处理，预处理流程繁杂、耗时长，同样不能满足企业快速测定的要求。

发明内容

针对上述L-鼠李糖测定方法中存在的不足和困难，本发明提供了一种鼠李糖生产企业快速准确测定鼠李糖含量的方法。

为解决上述问题，本发明通过下述技术方案得以实现：

以糖分析专用氢离子色谱柱为分离柱，以体积分数0.2~0.8‰的稀硫酸超纯水溶液作为流动相，在流速0.3~0.5mL/min，柱温30~40℃，柱压0.3~0.5KPa，的条件下检测，进样浓度：固形物0.1~0.6% Bx，进样量：10~20μL。

本发明方法的待测样品为企业生产L-鼠李糖过程中的中间品、半成品和成品；包括液体样品和固体样品。

本发明方法，待测样品中含有的大量无机盐、无机酸和小分子有机酸，不会影响测定结果。所述无机盐包括硫酸钠、氯化钠等，所述无机酸包括盐酸、硫酸等。生产企业以植物胶为原料生产L-鼠李糖，是在酸性条件下水解胶体，所得到含有L-鼠李糖及其它糖类的水解混合溶液，该溶液为酸性溶液，溶液中除含有大量氢离子外，还含有大量的无机和有机离子。

待测样品为包含L-鼠李糖、D-半乳糖在内的单糖、双糖、低聚糖的混合物。

因为L-鼠李糖和D-半乳糖性质相似，在很多HPLC检测条件中，很难将这两种物质分离，即其色谱峰是重叠在一起的，无法检测或得不到准确的结果。本发明方法，经一次进样、一个色谱柱分离，即可测定出样品中L-鼠李糖、D-半乳糖含量，并同时测定出其它单糖、双糖和低聚糖的含量。

进样前需对样品进行预处理，处理方法为：用超纯水稀释或溶解待测样品，至固形物0.1~0.6% Bx，再用0.25~0.45μm的滤膜过滤。

本发明的一种鼠李糖生产企业快速准确测定鼠李糖含量的方法，简单、准确、快捷，一般在10~30min即可完成检测，非常适用于企业在生产过程中对中间产品和半成品的实时检测监控，同时也适合于成品出厂检测。

本发明方法另一个优点是，可以排除D-半乳糖对测定的干扰，可同时检测出L-鼠李糖和D-半乳糖以及其它单糖、双糖和低聚糖的含量。并且，该方法对待测样品要求低，允许样品中含有无机盐、无机酸和小分子有机酸，可操作性好。

附图

图1为企业生产过程中L-鼠李糖中间产品的色谱图及检测结果。

图2为企业生产过程中L-鼠李糖结晶母液色谱图及检测结果。

图3为企业生产过程中L-鼠李糖成品的色谱图及检测结果。

具体实施方式

实施例1

以植物胶为原料生产L-鼠李糖，在酸性条件下水解胶体，得到含有L-鼠李糖、D-半乳糖及其它糖类的水解混合溶液，该溶液为酸性溶液。取待测溶液适量，用超纯水稀释或溶解待测样品，至固型物0.1% Bx，用0.45μm滤膜过滤后，用高效液相色谱检测。检测条件为：

色谱柱：Bio-Rad糖分析专用H⁺型离子色谱柱；

检测器：示差检测器；

流动相：体积分数0.33‰的稀硫酸溶液；

柱温：35℃；

流速：0.4mL/min；

进样量：20μL。

经检测得到图1所示色谱图及检测结果。由图1的检测结果可知，该水解混合溶液中L-鼠李糖含量为9.00%，D-半乳糖含量为36.96%，L-阿拉伯糖含量为21.18%，D-葡萄糖醛酸含量为10.74%，同时还有1.04%的葡萄糖醛酸内酯和16.79%无机盐/酸，以及4.29%的其它杂糖。

实施例2

L-鼠李糖生产过程中，通常需要对L-鼠李糖进行结晶提纯，经离心分离或过滤分离后得到L-鼠李糖的结晶成品和结晶母液。取该结晶母液适量，用超纯水稀释或溶解待测样品，至固型物0.2% Bx，用0.45μm滤膜过滤后，用高效液相色谱检测。检测条件为：

色谱柱：Bio-Rad糖分析专用H⁺型离子色谱柱；

检测器：示差检测器；

流动相：体积分数0.33‰的稀硫酸溶液；

柱温：35℃；

流速：0.4mL/min；

进样量：10μL。

经检测得到图2所示色谱图及检测结果。由图2的检测结果可知，该结晶母液中L-鼠李糖含量为32.58%，同时含有42.83%的D-半乳糖和18.61%杂糖。

实施例3

取实施例2所述的L-鼠李糖结晶成品适量，用超纯水稀释或溶解待测样品，至固型物0.1~0.2%Bx，用0.45μm滤膜过滤后，用高效液相色谱检测。检测条件与实施例2相同。

经检测得到图3所示色谱图及检测结果。由图3的检测结果可知，该L-鼠李糖结晶成品含量为99.76%，同时含有0.24%的D-半乳糖。

Claims (1)

1.一种鼠李糖生产企业快速准确测定鼠李糖含量的方法，采用高效液相色谱法测定，测定条件：分离柱：Bio-rad 的H型分离柱；检测器：示差检测器；流动相：体积分数0.2~0.8‰的稀硫酸溶液；柱温：30~40℃；流速：0.3~0.5mL/min；进样浓度：固形物0.1~0.6% Bx；进样量：10~20μL；其特征在于：

(1)待测样品为企业生产L-鼠李糖过程中的中间品、半成品和成品；包括液体样品和固体样品；所述待测样品中，允许含有无机盐、无机酸和小分子有机酸；所述无机盐包括硫酸钠、氯化钠等，所述无机酸包括盐酸、硫酸等；所述待测样品为包含L-鼠李糖、D-半乳糖在内的单糖、双糖、低聚糖的混合物；

(2)进样检测前样品预处理：用超纯水溶液稀释或溶解待测样品，至固形物0.1~0.6%Bx，再用0.25~0.45μm的滤膜过滤;

(3)经一次进样、一个色谱柱分离，即可测定出样品中L-鼠李糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖含量，并同时测定出其它单糖、双糖和低聚糖的含量。