CN107326102A - 一种艾滋病试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种艾滋病试剂盒，包括PCR反应试剂、标签引物Tag、LTR基因特异性引物和探针、GAG基因特异性引物和探针、RNaseP内控靶基因引物、阳性对照品、阴性对照品、TaqDNA聚合酶和PCR反应液和探针。本发明引入了高效的内标系统，解决了靶基因和内标同时扩增而导致的相互抑制和干扰等问题，能够高效的监控整个PCR扩增整个过程，避免出现假阴性结果。

Description

一种艾滋病试剂盒
技术领域
本发明涉及一种试剂盒，具体是一种艾滋病试剂盒。
背景技术
人类免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus,HIV)是导致一种慢性致死性疾病艾滋病(Acquiredimmunedefiiencysyndrome,AIDS)的病原微生物。由于艾滋病具有传染性和高致死性，因此已经成为世界范围内重点防控的主要疾病之一。自第一例艾滋病病例于1981首次报告艾滋病病例以来，到目前为止，艾滋病已造成超过两千五百万人死亡。中国自1985年首次发现艾滋病病例以来，艾滋病的流行呈快速爬升倾向。近年来，中国艾滋病的感染与发病人数也增长较快。中国艾滋病现状，据联合国驻华机构显示的数据，目前中国艾滋病病毒感染者约84万人，加上已经过世的24万人，总数应在100万人左右。根据世界卫生组织预测，目前虽然中国艾滋病病毒携带者占总人口的比例虽然很低，但感染总人数在亚洲位居第2位，在全球居第14位。鉴于中国是世界人口基数最大，人口最为密集的国家，一旦艾滋病大规模流行将成为一场公共卫生灾难。HIV的诊断目前常用的诊断手段包括病毒学诊断和血清学诊断，HIV感染的病毒学诊断技术常用方法为共培养法，即用正常人外周血液分离单个核细胞，加PHA刺激并培养后，加入病人单个核细胞进行艾滋病的诊断。血清学检测中，酶联免疫法是目前诊断艾滋病的一个主要手段。HIV酶联免疫试剂目前已经普遍用于临床，急诊，血液筛查等各个领域。但是，酶联免疫方法作为一种间接滞后的检测方法，他所检测的目标是人体内产生的抗体而不是病原体本身。因此，虽然酶联免疫方法经过几代的改良和进化，在灵敏度、特异性、精确度和稳定性等方面有了巨大的提高。近年来核酸分子检测技术在检验医学和临床研究中显示出强大的优势，相比较酶联免疫诊断技术具有灵敏度高、特异性强、诊断快速等优点。血清中的HIVRNA是病毒复制和艾滋病进程的确切标志，所以血清中HIVRNA的检测，已成为诊断艾滋病的“金标准”方法。近几年来，通过荧光定量PCR方法直接检测HIVRNA已经成为一种通用艾滋病医学检测方法，大大提高了艾滋病的检测准确性，有利于疾病的早期诊断，可将“窗口期”大大的缩短。在艾滋病预防过程中，艾滋病高危人群的诊断是“防艾”的关键环节，而核酸诊断试剂在确诊艾滋病病毒携带者的过程中发挥了重要作用，目前，已经成为艾滋病确诊的金标准试剂。艾滋病核酸定量检测目前已经是通过国家认证临床PCR实验室的常规检测项目之一。在艾滋病患者确诊，用药和疗效预判，以及康复治疗过程中具有指导意义。同时，艾滋病病毒载量的精确判读，也为患者提供了准确的病情控制信息。HIV为逆转录病毒科慢病毒亚科，HIV有十分高的遗传变异率，高度变异区在env基因内，变异率为20％-30％。gag和pol基因虽然较少变异，但是也存在一定概率变异，分别为gag1基因约5％-22％，pol基因为15％。所以，对于HIV核酸检测试剂来说，所用扩增引物的保守性和基因型覆盖能力，以及检测不同基因型样品的灵敏度是否一致，一直是评价此类诊断试剂产品性能的重要指标之一。也是困扰当今HIV诊断试剂向国际化发展的技术壁垒之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种艾滋病试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种艾滋病试剂盒，包括PCR反应试剂、标签引物Tag、LTR基因特异性引物和探针、GAG基因特异性引物和探针、RNaseP内控靶基因引物、阳性对照品、阴性对照品、TaqDNA聚合酶和PCR反应液和探针。
作为本发明进一步的方案：所述LTR基因特异性引物由内外两套引物组成，其中，内套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.1所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.2所示，外套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.3所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.4所示。
作为本发明进一步的方案：还包括磁珠法核酸提取试剂盒和HIV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液A、漂洗液B、漂洗液C、洗脱液、磁珠液；HIV核酸扩增试剂盒包括RT-PCR反应液、酶混合液、HIV-内标、HIV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。
作为本发明再进一步的方案：所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠0.8-2.0％，异硫氰酸胍3.5-5.5mol/L，1-10mM/LEDTA(PH7.5)；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液A组成为含有TritonX-1000.5-2.0ml/100ml，氯化锂0.5-1mol/L；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液B组成为含氯化钾0.1-0.3mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液C组成为含有氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mol/LTris.HCl(PH8.3)，0.01-0.05％Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明引入了高效的内标系统，解决了靶基因和内标同时扩增而导致的相互抑制和干扰等问题，能够高效的监控整个PCR扩增整个过程，避免出现假阴性结果。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中，一种艾滋病试剂盒，包括PCR反应试剂、标签引物Tag、LTR基因特异性引物和探针、GAG基因特异性引物和探针、RNaseP内控靶基因引物、阳性对照品、阴性对照品、TaqDNA聚合酶和PCR反应液和探针。
所述LTR基因特异性引物由内外两套引物组成，其中，内套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.1所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.2所示，外套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.3所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.4所示。
本发明艾滋病试剂盒还包括磁珠法核酸提取试剂盒和HIV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液A、漂洗液B、漂洗液C、洗脱液、磁珠液；HIV核酸扩增试剂盒包括RT-PCR反应液、酶混合液、HIV-内标、HIV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。
所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠0.8-2.0％，异硫氰酸胍3.5-5.5mol/L，1-10mM/LEDTA(PH7.5)；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液A组成为含有TritonX-1000.5-2.0ml/100ml，氯化锂0.5-1mol/L；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液B组成为含氯化钾0.1-0.3mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液C组成为含有氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mol/LTris.HCl(PH8.3)，0.01-0.05％Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。
实施例1：本发明艾滋病试剂盒，包括PCR反应试剂、标签引物Tag、LTR基因特异性引物和探针、GAG基因特异性引物和探针、RNaseP内控靶基因引物、阳性对照品、阴性对照品、TaqDNA聚合酶和PCR反应液和探针。所述LTR基因特异性引物由内外两套引物组成，其中，内套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.1所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.2所示，外套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.3所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.4所示。本发明艾滋病试剂盒还包括磁珠法核酸提取试剂盒和HIV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液A、漂洗液B、漂洗液C、洗脱液、磁珠液；HIV核酸扩增试剂盒包括RT-PCR反应液、酶混合液、HIV-内标、HIV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠0.8％，异硫氰酸胍3.5mol/L，1-10mM/LEDTA(PH7.5)；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液A组成为含有TritonX-1000.5ml/100ml，氯化锂0.5mol/L；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液B组成为含氯化钾0.1mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液C组成为含有氯化钠0.1mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mol/LTris.HCl(PH8.3)，0.01-0.05％Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。
实施例2：本发明艾滋病试剂盒，包括PCR反应试剂、标签引物Tag、LTR基因特异性引物和探针、GAG基因特异性引物和探针、RNaseP内控靶基因引物、阳性对照品、阴性对照品、TaqDNA聚合酶和PCR反应液和探针。
所述LTR基因特异性引物由内外两套引物组成，其中，内套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.1所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.2所示，外套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.3所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.4所示。
本发明艾滋病试剂盒还包括磁珠法核酸提取试剂盒和HIV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液A、漂洗液B、漂洗液C、洗脱液、磁珠液；HIV核酸扩增试剂盒包括RT-PCR反应液、酶混合液、HIV-内标、HIV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠2.0％，异硫氰酸胍5.5mol/L，1-10mM/LEDTA(PH7.5)；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液A组成为含有TritonX-1002.0ml/100ml，氯化锂1mol/L；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液B组成为含氯化钾0.3mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液C组成为含有氯化钠0.3mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mol/LTris.HCl(PH8.3)，0.01-0.05％Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (4)

1.一种艾滋病试剂盒，其特征在于，包括PCR反应试剂、标签引物Tag、LTR基因特异性引物和探针、GAG基因特异性引物和探针、RNaseP内控靶基因引物、阳性对照品、阴性对照品、TaqDNA聚合酶和PCR反应液和探针。
2.根据权利要求1所述的艾滋病试剂盒，其特征在于，所述LTR基因特异性引物由内外两套引物组成，其中，内套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.1所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.2所示，外套引物中上游引物的碱基序列如SEQIDNO.3所示，下游引物的碱基序列如SEQIDNO.4所示。
3.根据权利要求1所述的艾滋病试剂盒，其特征在于，还包括磁珠法核酸提取试剂盒和HIV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液A、漂洗液B、漂洗液C、洗脱液、磁珠液；HIV核酸扩增试剂盒包括RT-PCR反应液、酶混合液、HIV-内标、HIV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。
4.根据权利要求1所述的艾滋病试剂盒，其特征在于，所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠0.8-2.0％，异硫氰酸胍3.5-5.5mol/L，1-10mM/LEDTA(PH7.5)；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液A组成为含有TritonX-1000.5-2.0ml/100ml，氯化锂0.5-1mol/L；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液B组成为含氯化钾0.1-0.3mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液C组成为含有氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80％乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mol/LTris.HCl(PH8.3)，0.01-0.05％Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。
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