CN107278906B - 一种富含sod的辣木种植方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种富含SOD的辣木种植方法，包括辣木组织培养、组培苗移栽管理、大田移栽、栽培管理、病虫防治及定型修剪、整枝及采摘；同时辣木叶采用超微粉碎破壁技术加工成辣木粉，辣木粉与木瓜、刺梨、红糖混合进行发酵，获得SOD增量肥III，最后阶段喷施SOD增量肥III进一步的促进了辣木的生长，确保辣木富含SOD。本发明根据辣木组培过程及各个生长期的生长特点，通过施用不同的SOD肥料，以促使辣木生长过程中SOD的合成，最终获得高含量SOD辣木。采用本发明种植方法得到的辣木粉中SOD的活性达到200U/mg以上。

Description

一种富含SOD的辣木种植方法

技术领域

本发明属于植物种植技术领域，涉及一种辣木种植方法，具体涉及一种富含SOD的辣木种植方法。

背景技术

辣木Moringa oleifera Lam.又称鼓槌树(Drumstick tree)，属辣木科辣木属多年生乔木。辣木是世界上最热门的高营养多用途植物，其叶片和果荚中含多种氨基酸、丰富的维生素和矿物质，含钙量是牛奶的4倍以上，含有跟大豆差不多的蛋白质，是一种高钙植物产品。中国卫生部2012年批准辣木叶为新资源食品。

人们认为自由基(也称游离基)与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。由于自由基非常活泼，化学反应性极强，参与一系列的连锁反应，能引起细胞生物膜上的脂质过氧化，破坏了膜的结构和功能。它能引起蛋白质变性和交联，使体内的许多酶及激素失去生物活性，机体的免疫能力、神经反射能力、运动能力等系统活力降低，同时还能破坏核酸结构和导致整个机体代谢失常等，能够促使某些疾病的发生和机体的衰老。

研究证明，SOD能够清除氧自由基。SOD，英文名Orgotein，是超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase)的简称，又名肝蛋白。SOD被视为生命科技中具有神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。由于现代生活压力、环境污染、各种辐射等都会造成人体内氧自由基大量形成，适当的摄入SOD对人体健糠非常有益。目前也已经有相关的补充保健品存在，但是一方面价格偏高，另一方面，对于越来越追求健糠的现代人，希望通过富含SOD的食补来代替药补，可以使营养更均衡，效果更明显，也更容易坚持，并且成本很低。因此，食补是最佳的补充SOD途径之一。

辣木于1940年从印度引入我国，较常食用的品种有以下三种：印度传统辣木、印度改良辣木(印度T.N.农业大学的改良种)和非洲辣木，目前在我国云南、海南、福建、广东和广西等地广为引种栽培，其相关食品的开发已经成为热点。但是由于栽培和生长受地域和气温限制大，常规栽培产量低，退化快。目前较常食用的三种辣木的辣木叶虽然含有一定的SOD，但相较于木瓜、刺梨等，辣木SOD含量并不突出，而且由于品种和地域不同，辣木SOD含量也差别很大。基于以上原因，有必要研究提高辣木SOD含量的种植方法。

现有技术尚无关于增强辣木中SOD含量的培育或种植方法的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供了一种富含SOD的辣木种植方法，同时提供辣木粉加工方法。本发明的种植方法获得的辣木叶加工成的辣木粉中SOD的活性达到200U/mg以上。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种富含SOD的辣木种植方法，其中，包括以下的步骤：

(1)辣木组织培养

a、外植体的选择和处理：选择均匀、饱满的一年生辣木种子作为外植体，然后去除质白翼，剥壳，依次用70～75％乙醇溶液处理30～50s，0.08～0.12％升汞溶液处理8～18min，之后无菌水冲洗2遍以上；

b、种子发芽培养：将处理过的种子接种于改良MS培养基上，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，在25～28℃温度下进行发芽培育；

c、不定芽诱导培养：当种子萌发后无菌苗长到3～5cm时，切去根及子叶，保留上胚轴作为不定芽材料，以改良MS+0.4～0.8mg/L 6-BA+0.04～0.08mg/LNAA为培养基，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行不定芽诱导培养；

d、继代增殖分化培养：将不定芽切成1～3cm长的茎段，接入于改良MS培养基上，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，加入0.1～0.3mg/L 6-BA和0.01～0.03mg/L NAA，调节PH5.8，进行继代增殖分化培养；

e、生根培养：将继代增殖分化培养的3～5cm健壮丛生芽接种到改良MS+0.4～0.8mg/L IAA+0.1～0.3mg/L NAA生根培养基上，培养基添加2.0～6.0g/LSOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行生根培养至生根，出根20天后及时从培养基中移栽出来；

所述改良MS是将MS中的大量元素含量降低1/2，微量元素含量增加2倍；

(2)组培苗移栽管理：将已生根的组培苗移至室外练苗3～5天，于温室大棚内移栽到栽培基质中，栽培基质由河沙、珍珠岩、腐熟的辣木叶、泥炭土组成；

(3)大田移栽：在苗长到19～22cm高时开始大田移栽及定植；选择有灌溉条件、排水优良、弱酸性至中性的沙壤土或壤土；种植前先搞通排灌水，平地起畦，山地开成梯田，每畦种植两排，每亩定植700～900株，挖穴深35～45cm，每穴下500g腐熟农家肥作为底肥，种植后回填土略斜压实；

(4)栽培管理：在幼苗种植后的前一个月定期浇水，保持土壤适度湿润，定植一个月后，若有自然降雨，即可不再浇水，在干旱季节适当灌溉，在种植期间，不除草；当辣木苗长高至30～40cm时，喷施SOD增量肥I号；所述SOD增量肥I号包括EDTA络合锌6～30份、EDTA络合锰6～30份、EDTA络合铜6～30份、EDTA络合钼3～5份、EDTA络合镍3～5份、EDTA络合钛3～5份；

(5)病虫防治：采用物理防治和生物防治联合使用；

(6)定型修剪、整枝及施肥：

a、辣木树高度在1.5～1.8m，主茎直径达2.0～3.0cm时，离地60cm处截干，培养3～4个一级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

b、当一级分枝长到15～25cm时，喷施SOD增量肥II号；所述SOD增量肥II号包括氨基酸络合锌6～30份、氨基酸络合锰6～30份、氨基酸络合铜6～30份、氨基酸络合钼3～5份、氨基酸络合镍3～5份、氨基酸络合钛3～5份；

c、当一级分枝长到60cm、直径达≥2.0cm时，在离分枝处30cm高处再次截干，待二级分枝长至40～60cm时，进行摘心断顶，每个一级分枝上选留3～4个二级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

(7)每经过10～20天，当二级分枝上的嫩牙生长至30～40cm时，便可采摘10～15cm长的嫩枝叶；

(8)每次采摘鲜叶后的第三天，对辣木树喷施SOD增量肥III；

所述SOD增量肥III是由以下方法制备获得：

a、破碎：将新鲜成熟木瓜、刺梨进行破碎；

b、辣木粉的制备：将两次截干时废弃的辣木叶经自然晾晒或60℃以下低温干燥，控制水分≤8.0％，然后采用超微粉碎进行破壁粉碎，过300～900目筛(粒度44～15μm)；

c、装发酵罐：将50～80份水、0.5～10份红糖、1～20份木瓜，1～20份刺梨、5～10份辣木粉，装在发酵罐中搅拌均匀，密封；

d、发酵：于25～28℃温度发酵，发酵过程中，每天打开顶部阀门放气10～20分钟，发酵2～4个月，过滤，获得SOD增量肥III。

进一步地，所述SOD增量剂，是由以下方法制备获得：

a、按重量比1：1称取新鲜成熟木瓜和刺梨，清洗后粉碎打桨，加入重量4倍的PH值6.8、浓度为100mmol/L、含5mol/L EDTA和20mmol/L焦亚硫酸钠的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液，在常温下不断搅拌，浸提2小时，150目过滤，滤液经连续离心30min，获得上清液，用HCl调整其PH值至5.0，常温下静置30min后，经连续离心30min，收集沉淀物，加入4倍重量的去离子水，搅拌溶解，得粗品溶液；

b、粗品溶液加热至45℃，用NaOH溶液调整PH值至9.0，滴加粗品溶液总质量0.02％的修饰保护剂月桂酰氯，不断搅拌，保温并维持粗酶液PH 9.0不变，反应1小时后，快速冷却至30℃以下，离心去除沉淀物杂质，收集上清液，用HCl调整PH值至6.5，快速升温至65℃，不断搅拌，保温反应10分钟后，快速冷却至30℃以下，离心10min，收集上清液，得精品溶液；

c、精品溶液加入其体积1.5倍的4℃以下预冷过的95％乙醇，边加边缓慢搅拌，于0～4℃下静置10分钟后，离心10min，收集SOD精品沉淀，冷冻干燥，得SOD增量剂。

进一步地，所述腐熟的辣木叶是由辣木叶进行堆肥获得。

进一步地，所述栽培基质由重量比1：1：1：1的河沙、珍珠岩、腐熟的辣木叶、泥炭土组成。

进一步地，施用SOD增量肥I号时配制成质量百分比浓度为0.2％～2％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩50～80kg。

进一步地，施用SOD增量肥II号时配制成质量百分比浓度为0.2％～2％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩50～80kg。

进一步地，施用SOD增量肥III时，每亩用原液稀释30～100倍，喷施时要均匀地喷洒在树干、叶片背面上。

本发明富含SOD的辣木种植方法具有以下的有益效果：

1、本发明辣木苗长势快，定干时间早，节约了大量的人力物力，辣木叶产量较多，全年能够采摘辣木叶片次数8～15次。通过本发明方法种植辣木，育苗成功率高、成长速度快、长大后枝叶多，有利于促进辣木树的良性生态发展，转化更高经济价值，从而带动辣木相关产业的健糠、快速发展。

2、本发明辣木根系发达，耐贫瘠，只以农家肥作为底肥即可。在生长过程中，不同阶段实施各种专用栽培肥料，可以提高辣木SOD生成量。

3、根据金属离子的不同，SOD家族可以分为四种：Cu/Zn-SOD、Fe-SOD、Mn-SOD和Ni-SOD，辣木SOD为Cu/Zn-SOD类型。微量元素锌、锰、铜等是SOD的重要组成成分，参与辣木生长阶段SOD的合成。适量的镍、钼、钛能促进辣木叶片中SOD的生成量及活性，还能增强辣木植株的抗逆性和抗衰老能力。在辣木各个生长期进行SOD增量施肥，可增加植物体中SOD酶的含量及活性，提高植物抗病虫害和干旱的能力，保证了辣木植株的正常生长。

4、辣木叶SOD存在于辣木细胞质和叶绿体中，外层由细胞壁包裹，采用传统高效粉碎工艺的100～200目粉碎，SOD几乎检测不出，需要破壁技术将SOD释放出来。本发明采用超微粉碎技术可以使辣木叶破壁，能在很短的时间内将辣木叶粉碎成粒径均匀的超微粉体，SOD等有效成分得以完全释放，再将含量高的SOD辣木粉与红糖、木瓜，刺梨搅拌均匀进行发酵获得SOD增量肥III，SOD增量肥III直接被辣木叶和树干吸收，更好地促进辣木生长。

5、本发明富含SOD的辣木种植方法，根据辣木的各期生长特点进行SOD增量施肥设计，通过施用不同的肥料，以促使辣木生长过程中SOD的合成，最终获得高含量SOD的辣木。经检测，采用本发明的种植获得的辣木叶加工成辣木粉中SOD的活性达到200U/mg以上。

具体实施方式

实施例1

本发明富含SOD的辣木种植方法，包括以下的步骤：

(1)辣木组织培养

a、外植体的选择和处理：选择均匀、饱满的一年生辣木种子作为外植体，然后去除质白翼，剥壳，依次用75％乙醇溶液处理40s，0.1％升汞溶液处理12min，之后无菌水冲洗4遍；

b、种子发芽培养：将处理过的种子接种于改良MS培养基上，培养基添加4.0g/LSOD增量剂、2.6g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，在26℃温度下进行发芽培育；

c、不定芽诱导培养：当种子萌发后无菌苗长到3～5cm时，切去根及子叶，保留上胚轴作为不定芽材料，以改良MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA为培养基，培养基添加4.0g/LSOD增量剂、2.6g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行不定芽诱导培养；

d、继代增殖分化培养：将不定芽切成1～3cm长的茎段，接入于改良MS培养基上，培养基添加4.0g/L SOD增量剂、2.7g/L琼脂和20g/L蔗糖，加入0.1mg/L6-BA和0.01mg/L NAA，调节PH5.8，进行继代增殖分化培养；

e、生根培养：将继代增殖分化培养的3～5cm健壮丛生芽接种到改良MS+0.6mg/LIAA+0.1mg/L NAA生根培养基上，培养基添加4.0g/L SOD增量剂、2.65g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行生根培养至生根，出根20天后及时从培养基中移栽出来；

所述改良MS是将MS中的大量元素含量降低1/2，微量元素含量增加2倍；

(2)组培苗移栽管理：将已生根的组培苗移至室外练苗3天，于温室大棚内(空气湿度>65％，夜晚达到85％)移栽到栽培基质中，栽培基质由重量比1：1：1：1的河沙、珍珠岩、腐熟的辣木叶、泥炭土组成；

(3)大田移栽：在苗长到19～22cm高时开始大田移栽及定植；选择有灌溉条件、排水优良、弱酸性至中性的沙壤土或壤土；种植前先搞通排灌水，平地起畦，山地开成梯田，每畦种植两排，每亩定植800株，挖穴深45cm，每穴下500g腐熟农家肥作为底肥，种植后回填土略斜压实；

(4)栽培管理：在幼苗种植后的前一个月定期浇水，保持土壤适度湿润，定植一个月后，若有自然降雨，即可不再浇水，在干旱季节适当灌溉，在种植期间，不除草；当辣木苗长高至30～40cm时，喷施SOD增量肥I号，施用SOD增量肥I号时配制成质量百分比浓度为1.5％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩60kg；所述SOD增量肥I号包括EDTA络合锌25份、EDTA络合锰25份、EDTA络合铜25份、EDTA络合钼5份、EDTA络合镍5份、EDTA络合钛5份；

(5)病虫防治：采用物理防治和生物防治联合使用；

(6)定型修剪、整枝及施肥：

a、辣木树高度在1.5～1.8m，主茎直径达2.0～3.0cm时，离地60cm处截干，培养3～4个一级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

b、当一级分枝长到15～25cm时，喷施SOD增量肥II号；施用SOD增量肥II号时配制成质量百分比浓度为1.5％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩60kg；所述SOD增量肥II号包括氨基酸络合锌25份、氨基酸络合锰25份、氨基酸络合铜25份、氨基酸络合钼4份、氨基酸络合镍4份、氨基酸络合钛4份；

c、当一级分枝长到60cm、直径达≥2.0cm时，在离分枝处30cm高处再次截干，待二级分枝长至40～60cm时，进行摘心断顶，每个一级分枝上选留3～4个二级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

(7)每经过10～20天，当二级分枝上的嫩牙生长至30～40cm时，便可采摘10～15cm长的嫩枝叶；

(8)每次采摘鲜叶后的第三天，对辣木树喷施SOD增量肥III，提高辣木叶SOD生成；施用SOD增量肥III时，每亩用原液1.2kg稀释到50kg，喷施时要均匀地喷洒在树干、叶片背面上。

所述SOD增量肥III是由以下方法制备获得：

a、破碎：将新鲜成熟木瓜、刺梨进行破碎；

b、辣木粉的制备：将两次截干时废弃的辣木叶经自然晾晒或60℃以下低温干燥，控制水分≤8.0％，然后采用超微粉碎进行破壁粉碎，过900目筛；

c、装发酵罐：将70份水、6份红糖、15份木瓜，15份刺梨、7份辣木粉，装在发酵罐中搅拌均匀，密封；

d、发酵：于25℃温度发酵，发酵过程中，每天打开顶部阀门放气10分钟，发酵70天，过滤，获得SOD增量肥III。

经按GB/T 5009.171方法检测，实施例1的方法种植得到的辣木叶加工成辣木粉中SOD的活性为281U/mg。

实施例2

本发明富含SOD的辣木种植方法，包括以下的步骤：

(1)辣木组织培养

a、外植体的选择和处理：选择均匀、饱满的一年生辣木种子作为外植体，然后去除质白翼，剥壳，依次用75％乙醇溶液处理50s，0.1％升汞溶液处理10min，之后无菌水冲洗5遍；

b、种子发芽培养：将处理过的种子接种于改良MS培养基上，培养基添加3.0g/LSOD增量剂、2.2g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，在25℃温度下进行发芽培育；

c、不定芽诱导培养：当种子萌发后无菌苗长到3～5cm时，切去根及子叶，保留上胚轴作为不定芽材料，以改良MS+0.4mg/L 6-BA+0.04mg/L NAA为培养基，培养基添加3.0g/LSOD增量剂、2.5g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行不定芽诱导培养；

d、继代增殖分化培养：将不定芽切成1～3cm长的茎段，接入于改良MS培养基上，培养基添加3.0g/L SOD增量剂、2.5g/L琼脂和20g/L蔗糖，加入0.1mg/L6-BA和0.01mg/L NAA，调节PH5.8，进行继代增殖分化培养；

e、生根培养：将继代增殖分化培养的3～5cm健壮丛生芽接种到改良MS+0.5mg/LIAA+0.2mg/L NAA生根培养基上，培养基添加3.0g/L SOD增量剂、2.5g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行生根培养至生根，出根20天后及时从培养基中移栽出来；

所述改良MS是将MS中的大量元素含量降低1/2，微量元素含量增加2倍；

(2)组培苗移栽管理：将已生根的组培苗移至室外练苗5天，于温室大棚内(空气湿度>65％，夜晚达到85％)移栽到栽培基质中，栽培基质由重量比1：1：1：1的河沙、珍珠岩、腐熟的辣木叶、泥炭土组成；

(3)大田移栽：在苗长到19～22cm高时开始大田移栽及定植；选择有灌溉条件、排水优良、弱酸性至中性的沙壤土或壤土；种植前先搞通排灌水，平地起畦，山地开成梯田，每畦种植两排，每亩定植900株，挖穴深40cm，每穴下500g腐熟农家肥作为底肥，种植后回填土略斜压实；

(4)栽培管理：在幼苗种植后的前一个月定期浇水，保持土壤适度湿润，定植一个月后，若有自然降雨，即可不再浇水，在干旱季节适当灌溉，在种植期间，不除草；当辣木苗长高至30～40cm时，喷施SOD增量肥I号，施用SOD增量肥I号时配制成质量百分比浓度为1.0％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩50kg；所述SOD增量肥I号包括EDTA络合锌15份、EDTA络合锰15份、EDTA络合铜15份、EDTA络合钼3份、EDTA络合镍3份、EDTA络合钛3份；

(5)病虫防治：采用物理防治和生物防治联合使用；

(6)定型修剪、整枝及施肥：

a、辣木树高度在1.5～1.8m，主茎直径达2.0～3.0cm时，离地60cm处截干，培养3～4个一级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

b、当一级分枝长到15～25cm时，喷施SOD增量肥II号；施用SOD增量肥II号时配制成质量百分比浓度为1.0％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩50kg；所述SOD增量肥II号包括氨基酸络合锌15份、氨基酸络合锰15份、氨基酸络合铜15份、氨基酸络合钼3份、氨基酸络合镍3份、氨基酸络合钛3份；

c、当一级分枝长到60cm、直径达≥2.0cm时，在离分枝处30cm高处再次截干，待二级分枝长至50cm时，进行摘心断顶，每个一级分枝上选留3～4个二级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

(7)每经过10～20天，当二级分枝上的嫩牙生长至30～40cm时，便可采摘10～15cm长的嫩枝叶；

(8)每次采摘鲜叶后的第三天，对辣木树喷施SOD增量肥III，提高辣木叶SOD生成；施用SOD增量肥III时，每亩用原液1.2kg稀释到50kg，喷施时要均匀地喷洒在树干、叶片背面上。

所述SOD增量肥III是由以下方法制备获得：

a、破碎：将新鲜成熟木瓜、刺梨进行破碎；

b、辣木粉的制备：将两次截干时废弃的辣木叶经自然晾晒或60℃以下低温干燥，控制水分≤8.0％，然后采用超微粉碎进行破壁粉碎，过900目筛；

c、装发酵罐：将70份水、4份红糖、6份木瓜，6份刺梨、5份辣木粉，装在发酵罐中搅拌均匀，密封；

d、发酵：于26℃温度发酵，发酵过程中，每天打开顶部阀门放气20分钟，发酵50天，过滤，获得SOD增量肥III。

经按GB/T 5009.171方法检测，实施例2的方法种植得到的辣木叶加工成辣木粉中SOD的活性为236U/mg。

实施例3

本发明富含SOD的辣木种植方法，包括以下的步骤：

(1)辣木组织培养

a、外植体的选择和处理：选择均匀、饱满的一年生辣木种子作为外植体，然后去除质白翼，剥壳，依次用70％乙醇溶液处理30s，0.1％升汞溶液处理18min，之后无菌水冲洗3遍；

b、种子发芽培养：将处理过的种子接种于改良MS培养基上，培养基添加2.0g/LSOD增量剂、2.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，在25℃温度下进行发芽培育；

c、不定芽诱导培养：当种子萌发后无菌苗长到3～5cm时，切去根及子叶，保留上胚轴作为不定芽材料。以改良MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA为培养基，培养基添加2.0g/LSOD增量剂、2.5g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行不定芽诱导培养；

d、继代增殖分化培养：将不定芽切成1～3cm长的茎段，接入于改良MS培养基上，培养基添加2.0g/L SOD增量剂、2.5g/L琼脂和20g/L蔗糖，加入0.1mg/L6-BA和0.01mg/L NAA，调节PH5.8，进行继代增殖分化培养；

e、生根培养：将继代增殖分化培养的3～5cm健壮丛生芽接种到改良MS+0.5mg/LIAA+0.3mg/L NAA生根培养基上，培养基添加2.0g/L SOD增量剂、2.5g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行生根培养至生根，出根20天后及时从培养基中移栽出来；

所述改良MS是将MS中的大量元素含量降低1/2，微量元素含量增加2倍；

(2)组培苗移栽管理：将已生根的组培苗移至室外练苗4天，于温室大棚内(空气湿度>65％，夜晚达到85％)移栽到栽培基质中，栽培基质由重量比1：1：1：1的河沙、珍珠岩、腐熟的辣木叶、泥炭土组成；

(3)大田移栽：在苗长到19～22cm高时开始大田移栽及定植；选择有灌溉条件、排水优良、弱酸性至中性的沙壤土或壤土；种植前先搞通排灌水，平地起畦，山地开成梯田，每畦种植两排，每亩定植800株，挖穴深45cm，每穴下500g腐熟农家肥作为底肥，种植后回填土略斜压实；

(4)栽培管理：在幼苗种植后的前一个月定期浇水，保持土壤适度湿润，定植一个月后，若有自然降雨，即可不再浇水，在干旱季节适当灌溉，在种植期间，不除草；当辣木苗长高至30～40cm时，喷施SOD增量肥I号，施用SOD增量肥I号时配制成质量百分比浓度为0.5％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩60kg；所述SOD增量肥I号包括EDTA络合锌20份、EDTA络合锰20份、EDTA络合铜20份、EDTA络合钼5份、EDTA络合镍5份、EDTA络合钛5份；

(5)病虫防治：采用物理防治和生物防治联合使用；

(6)定型修剪、整枝及施肥：

a、辣木树高度在1.5～1.8m，主茎直径达2.0～3.0cm时，离地60cm处截干，培养3～4个一级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

b、当一级分枝长到15～25cm时，喷施SOD增量肥II号；施用SOD增量肥II号时配制成质量百分比浓度为0.5％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩60kg；所述SOD增量肥II号包括氨基酸络合锌25份、氨基酸络合锰25份、氨基酸络合铜25份、氨基酸络合钼4份、氨基酸络合镍4份、氨基酸络合钛4份；

c、当一级分枝长到60cm、直径达≥2.0cm时，在离分枝处30cm高处再次截干，待二级分枝长至60cm时，进行摘心断顶，每个一级分枝上选留3～4个二级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

(7)每经过10～20天，当二级分枝上的嫩牙生长至30～40cm时，便可采摘10～15cm长的嫩枝叶；

(8)每次采摘鲜叶后的第三天，对辣木树喷施SOD增量肥III，提高辣木叶SOD生成；施用SOD增量肥III时，每亩用原液稀释50倍，喷施时要均匀地喷洒在树干、叶片背面上。

所述SOD增量肥III是由以下方法制备获得：

b、破碎：将新鲜成熟木瓜、刺梨进行破碎；

b、辣木粉的制备：将两次截干时废弃的辣木叶经自然晾晒或60℃以下低温干燥，控制水分≤8.0％，然后采用超微粉碎进行破壁粉碎，过900目筛；

c、装发酵罐：将80份水、8份红糖、12份木瓜，12份刺梨、10份辣木粉，装在发酵罐中搅拌均匀，密封；

d、发酵：于28℃温度发酵，发酵过程中，每天打开顶部阀门放气10分钟，发酵80天，过滤，获得SOD增量肥III。

经按GB/T 5009.171方法检测，实施例3的方法种植得到的辣木叶加工成辣木粉中SOD的活性为213U/mg。

对比实施例1：

一种辣木种植方法，包括以下的步骤：

(1)辣木苗床准备：

辣木苗床选择靠近种植地，除去杂草、石块等杂物，平整好土地，然后放入河沙，厚度20～25厘米，苗床上方架设40％左右的遮光网遮荫，荫棚高1.7米，长宽依苗床规模的实际地形而定；

(2)辣木种子处理

选择均匀、饱满的一年生辣木种子倒入已配好的1000～1200倍液多菌灵药水中浸泡12～24小时；

(3)辣木装袋育苗：

辣木育苗袋营养土要求肥沃、疏松，用净土、栽培基质由重量比1：1：1：1的河沙、珍珠岩、椰糠、泥炭土组成，营养袋规格12×17厘米，苗床宜作低墒，宽80厘米左右，装袋要求紧、满，将装好营养土的营养袋排置于苗床上，袋间相互靠紧，播入沙床后一周左右，幼苗开始出土，当子叶刚展开时，移置到排置好的营养袋里，移袋时要非常小心，不能伤及幼苗的任何部位，栽好后尽快用800倍绿亨2号液或其它杀菌剂浇透；

(4)辣木幼苗管理：

辣木移栽成活后每15天浇一次800倍绿亨2号等杀菌剂，并随时注意观察虫害，要经常淋水，保持袋内土壤湿润，但水不宜太多，以防烂根。幼苗长至4～6片叶子时，即可除去遮荫网炼苗；

(5)大田移栽：

在苗长到19～22cm高时开始大田移栽及定植；选择有灌溉条件、排水优良、弱酸性至中性的沙壤土或壤土；种植前先搞通排灌水，平地起畦，山地开成梯田，每畦种植两排，每亩定植800株，挖穴深45cm，每穴下500g腐熟农家肥作为底肥，种植后回填土略斜压实；

(6)栽培管理：在幼苗种植后的前一个月定期浇水，保持土壤适度湿润，定植一个月后，若有自然降雨，即可不再浇水，在干旱季节适当灌溉，在种植期间，不除草；当辣木苗长高至30～40cm时，喷施SOD增量肥I号，施用SOD增量肥I号时配制成质量百分比浓度为1.5％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩60kg；所述SOD增量肥I号包括EDTA络合锌25份、EDTA络合锰25份、EDTA络合铜25份、EDTA络合钼5份、EDTA络合镍5份、EDTA络合钛5份；

(7)病虫防治：采用物理防治和生物防治联合使用；

(8)定型修剪、整枝及施肥：

a、辣木树高度在1.5～1.8m，主茎直径达2.0～3.0cm时，离地60cm处截干，培养3～4个一级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

b、当一级分枝长到15～25cm时，喷施SOD增量肥II号；施用SOD增量肥II号时配制成质量百分比浓度为1.5％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩60kg；所述SOD增量肥II号包括氨基酸络合锌25份、氨基酸络合锰25份、氨基酸络合铜25份、氨基酸络合钼4份、氨基酸络合镍4份、氨基酸络合钛4份；

c、当一级分枝长到60cm、直径达≥2.0cm时，再次截干，待二级分枝长至40～60cm时，进行摘心断顶，每个一级分枝上选留3～4个二级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

(9)每经过10～20天，当二级分枝上的嫩牙生长至30～40cm时，便可采摘10～15cm长的嫩枝叶；

(10)每次采摘鲜叶后的第三天，对辣木树喷施SOD增量肥III，提高辣木叶SOD生成；施用SOD增量肥III时，每亩用原液1.2kg稀释到50kg，喷施时要均匀地喷洒在树干、叶片背面上。

所述SOD增量肥III是由以下方法制备获得：

a、破碎：将新鲜成熟木瓜、刺梨进行破碎；

b、辣木粉的制备：将两次截干时废弃的辣木叶经自然晾晒或60℃以下低温干燥，控制水分≤8.0％，然后采用超微粉碎进行破壁粉碎，过900目筛；

c、装发酵罐：将70份水、6份红糖、15份木瓜，15份刺梨、7份辣木粉，装在发酵罐中搅拌均匀，密封；

d、发酵：于25℃温度发酵，发酵过程中，每天打开顶部阀门放气10分钟，发酵70天，过滤，获得SOD增量肥III。

经按GB/T 5009.171方法检测，对比实施例1的方法种植得到的辣木叶加工成辣木粉中SOD的活性为188U/mg。

对比实施例2：

一种辣木种植方法，包括以下的步骤：

(1)辣木苗床准备：

辣木苗床选择靠近种植地，除去杂草、石块等杂物，平整好土地，然后放入河沙，厚度20～25厘米，苗床上方架设40％左右的遮光网遮荫，荫棚高1.7米，长宽依苗床规模的实际地形而定；

(2)辣木种子处理：

选择均匀、饱满的一年生辣木种子倒入已配好的1000～1200倍液多菌灵药水中浸泡12～24小时；

(3)辣木装袋育苗：

辣木育苗袋营养土要求肥沃、疏松，用净土、栽培基质由重量比1：1：1：1的河沙、珍珠岩、椰糠、泥炭土组成。营养袋规格12×17厘米，苗床宜作低墒，宽80厘米左右；装袋要求紧、满，将装好营养土的营养袋排置于苗床上，袋间相互靠紧；播入沙床后一周左右，幼苗开始出土，当子叶刚展开时，移置到排置好的营养袋里，移袋时要非常小心，不能伤及幼苗的任何部位，栽好后尽快用800倍绿亨2号液或其它杀菌剂浇透；

(4)辣木幼苗管理

辣木移栽成活后每15天浇一次800倍绿亨2号等杀菌剂，并随时注意观察虫害，要经常淋水，保持袋内土壤湿润，但水不宜太多，以防烂根；幼苗长至4～6片叶子时，即可除去遮荫网炼苗；

(5)大田移栽：在苗长到19～22cm高时开始大田移栽及定植；选择有灌溉条件、排水优良、弱酸性至中性的沙壤土或壤土；种植前先搞通排灌水，平地起畦，山地开成梯田，每畦种植两排，每亩定植800株，挖穴深45cm，每穴下500g腐熟农家肥作为底肥，种植后回填土略斜压实；

(6)栽培管理：在幼苗种植后的前一个月定期浇水，保持土壤适度湿润，定植一个月后，若有自然降雨，即可不再浇水，在干旱季节适当灌溉，在种植期间，不除草；

(7)病虫防治：采用物理防治和生物防治联合使用；

(8)定型修剪、整枝及施肥：

a、辣木树高度在1.5～1.8m，主茎直径达2.0～3.0cm时，离地60cm处截干，培养3～4个一级分枝；

b、当一级分枝长到60cm、直径达≥2.0cm时，再次截干，待二级分枝长至60cm时，进行摘心断顶，每个一级分枝上选留3～4个二级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

(9)每经过10～20天，当二级分枝上的嫩牙生长至30～40cm时，便可采摘10～15cm长的嫩枝叶；

(10)每次采摘鲜叶后的第三天，对辣木树喷施植物动力2003 1000倍叶面喷雾。

经按GB/T 5009.171方法检测，对比实施例2的方法种植得到的辣木叶加工成辣木粉中SOD的活性为50U/mg。

实验过程及结果：

1、取实施例1、实施例2、实施例3、对比实施例1和对比实施例2方法种植的鲜辣木叶，鲜辣木叶包括第一次截干收集的辣木叶、第二次截干收集的辣木叶和最后采摘鲜叶；将三次收集的辣木叶分别经自然晾晒干燥，控制水分6.0％，然后采用超微粉碎进行破壁粉碎，过900目筛；按GB/T 5009.171方法检测SOD活性含量，SOD活性含量如表1所示：

表1三种不同阶段采摘的辣木叶SOD活性含量(破壁粉碎)

从表1的对比数据可以看出：1、实施例1与对比实施例1比较，表明实施组培技术并添加SOD增量剂能够显著增加SOD含量；2、对比实施例1与对比实施例2比较，表明在辣木栽培管理过程中，在辣木生长阶段喷施SOD增量肥I、SOD增量肥II和SOD增量肥III，能显著增加辣木叶的SOD活性含量；3、本发明在栽培管理过程中，在不同的阶段添加SOD增量剂、SOD增量肥I、SOD增量肥II和SOD增量肥III，更能促进辣木叶的SOD活性含量，使其辣木叶的SOD含量不断增加；4、将富含SOD的辣木粉与木瓜、刺梨、红糖混合进行发酵，获得SOD增量肥III，最后阶段喷施SOD增量肥III进一步的促进了辣木的生长，确保辣木富含SOD。

2、取实施例1、实施例2、实施例3、对比实施例1和对比实施例2方法种植的鲜辣木叶，分别在50℃条件下通风干燥，控制水分为6.0％，用传统高效粉碎机进行100目、200目粉碎和用300目以上的超微粉碎，分别按GB/T5009.171方法检测SOD活性含量，SOD活性含量如表3所示：

表2辣木叶干粉SOD活性含量(U/mg)

	100目	200目	325目	900目
					实施例1	4	20	271	281
实施例2	2	12	233	236
					实施例3	2	16	214	213
对比实施例1	1	10	160	188
					对比实施例2	0	3	47	50

从表2的对比数据可以得出，破壁粉碎对SOD含量检测影响显著，采用传统高效粉碎工艺的100～200目粉碎，SOD几乎检测不出，需要破壁粉碎技术将SOD释放出来。

以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。

Claims (6)

1.一种富含SOD的辣木种植方法，其特征在于，包括以下的步骤：

(1)辣木组织培养

a、外植体的选择和处理：选择均匀、饱满的一年生辣木种子作为外植体，然后去除质白翼，剥壳，依次用70～75％乙醇溶液处理30～50s，0.08～0.12％升汞溶液处理8～18min，之后无菌水冲洗2遍以上；

b、种子发芽培养：将处理过的种子接种于改良MS培养基上，培养基添加2.0～6.0g/LSOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，在25～28℃温度下进行发芽培育；

c、不定芽诱导培养：当种子萌发后无菌苗长到3～5cm时，切去根及子叶，保留上胚轴作为不定芽材料，以改良MS+0.4～0.8mg/L 6-BA+0.04～0.08mg/L NAA为培养基，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行不定芽诱导培养；

d、继代增殖分化培养：将不定芽切成1～3cm长的茎段，接入于改良MS培养基上，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，加入0.1～0.3mg/L 6-BA和0.01～0.03mg/L NAA，调节PH5.8，进行继代增殖分化培养；

e、生根培养：将继代增殖分化培养的3～5cm健壮丛生芽接种到改良MS+0.4～0.8mg/LIAA+0.1～0.3mg/L NAA生根培养基上，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行生根培养至生根，出根20天后及时从培养基中移栽出来；

所述改良MS是将MS中的大量元素含量降低1/2，微量元素含量增加2倍；

(2)组培苗移栽管理：将已生根的组培苗移至室外练苗3～5天，于温室大棚内移栽到栽培基质中，栽培基质由河沙、珍珠岩、腐熟的辣木叶、泥炭土组成；

(3)大田移栽：在苗长到19～22cm高时开始大田移栽及定植；选择有灌溉条件、排水优良、弱酸性至中性的沙壤土或壤土；种植前先搞通排灌水，平地起畦，山地开成梯田，每畦种植两排，每亩定植700～900株，挖穴深35～45cm，每穴下500g腐熟农家肥作为底肥，种植后回填土略斜压实；

(4)栽培管理：在幼苗种植后的前一个月定期浇水，保持土壤适度湿润，定植一个月后，若有自然降雨，即可不再浇水，在干旱季节适当灌溉，在种植期间，不除草；当辣木苗长高至30～40cm时，喷施SOD增量肥I号；所述SOD增量肥I号包括EDTA络合锌6～30份、EDTA络合锰6～30份、EDTA络合铜6～30份、EDTA络合钼3～5份、EDTA络合镍3～5份、EDTA络合钛3～5份；

(5)病虫防治：采用物理防治和生物防治联合使用；

(6)定型修剪、整枝及施肥：

a、辣木树高度在1.5～1.8m，主茎直径达2.0～3.0cm时，离地60cm处截干，培养3～4个一级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

b、当一级分枝长到15～25cm时，喷施SOD增量肥II号；所述SOD增量肥II号包括氨基酸络合锌6～30份、氨基酸络合锰6～30份、氨基酸络合铜6～30份、氨基酸络合钼3～5份、氨基酸络合镍3～5份、氨基酸络合钛3～5份；

c、当一级分枝长到60cm、直径达≥2.0cm时，在离分枝处30cm高处再次截干，待二级分枝长至40～60cm时，进行摘心断顶，每个一级分枝上选留3～4个二级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；

(7)每经过10～20天，当二级分枝上的嫩牙生长至30～40cm时，便可采摘10～15cm长的嫩枝叶；

(8)每次采摘鲜叶后的第三天，对辣木树喷施SOD增量肥III；

所述SOD增量肥III是由以下方法制备获得：

a、破碎：将新鲜成熟木瓜、刺梨进行破碎；

b、辣木粉的制备：将两次截干时废弃的辣木叶经自然晾晒或60℃以下低温干燥，控制水分≤8.0％，然后采用超微粉碎进行破壁粉碎，过300～900目筛；

c、装发酵罐：将50～80份水、0.5～10份红糖、1～20份木瓜，1～20份刺梨、5～10份辣木粉，装在发酵罐中搅拌均匀，密封；

d、发酵：于25～28℃温度发酵，发酵过程中，每天打开顶部阀门放气10～20分钟，发酵2～4个月，过滤，获得SOD增量肥III；

所述SOD增量剂，是由以下方法制备获得：

a、按重量比1：1称取新鲜成熟木瓜和刺梨，清洗后粉碎打桨，加入重量4倍的PH值6.8、浓度为100mmol/L、含5mol/L EDTA和20mmol/L焦亚硫酸钠的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液，在常温下不断搅拌，浸提2小时，150目过滤，滤液经连续离心30min，获得上清液，用HCl调整其PH值至5.0，常温下静置30min后，经连续离心30min，收集沉淀物，加入4倍重量的去离子水，搅拌溶解，得粗品溶液；

b、粗品溶液加热至45℃，用NaOH溶液调整PH值至9.0，滴加粗品溶液总质量0.02％的修饰保护剂月桂酰氯，不断搅拌，保温并维持粗酶液PH 9.0不变，反应1小时后，快速冷却至30℃以下，离心去除沉淀物杂质，收集上清液，用HCl调整PH值至6.5，快速升温至65℃，不断搅拌，保温反应10分钟后，快速冷却至30℃以下，离心10min，收集上清液，得精品溶液；

c、精品溶液加入其体积1.5倍的4℃以下预冷过的95％乙醇，边加边缓慢搅拌，于0～4℃下静置10分钟后，离心10min，收集SOD精品沉淀，冷冻干燥，得SOD增量剂。

2.如权利要求1所述的富含SOD的辣木种植方法，其特征在于：所述腐熟的辣木叶是由辣木叶进行堆肥获得。

3.如权利要求1所述的富含SOD的辣木种植方法，其特征在于：所述栽培基质由重量比1：1：1：1的河沙、珍珠岩、腐熟的辣木叶、泥炭土组成。

4.如权利要求1所述的富含SOD的辣木种植方法，其特征在于：施用SOD增量肥I号时配制成质量百分比浓度为0.2％～2％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩50～80kg。

5.如权利要求1所述的富含SOD的辣木种植方法，其特征在于：施用SOD增量肥II号时配制成质量百分比浓度为0.2％～2％的肥料水溶液，然后喷施，用量为每亩50～80kg。

6.如权利要求1所述的富含SOD的辣木种植方法，其特征在于：施用SOD增量肥III时，每亩用原液稀释30～100倍，喷施时要均匀地喷洒在树干、叶片背面上。