CN107252442A - 丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用,丹参通脉方配方:丹参15 g,川芎12 g,葛根12 g,三七6 g,水煎法制作后,用0.22μm Millipore滤器除菌过滤三次后使用。该药物制备简单,能够显著降低患者血脂值,降低主动脉瓣膜钙化相关蛋白表达,减轻瓣膜间质细胞成骨化蛋白表达,从病理形成源头对主动脉瓣钙化进行防治,解决了老年性主动脉瓣钙化长期依赖外科手术、难以预防的难题,具有重大的医学应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用。
背景技术
主动脉瓣钙化及其进展导致的钙化性主动脉瓣狭窄属于老年性瓣膜病,是一种严重危害人类健康的疾病。瓣膜钙化的确切病因尚未完全阐明。但临床及实验研究表明,瓣膜钙化多见于60~65岁以上的老年人,其发病率随年龄增长而增高,结合瓣膜退行性变的特点,认为老年性钙化性瓣膜病的病因,可能与老年人全身代谢紊乱,特别是钙磷代谢紊乱有关。业已证明,衰老的过程常伴有细胞内钙含量增加,钙跨膜分布梯度降低,钙从骨骼向软组织转移,因而骨钙与血钙梯度和细胞外钙与细胞内钙梯度降低,最终导致细胞内钙含量增加而产生功能障碍。这种钙转移可能与老年人维生素D缺乏有关。
主要发病机制包括:内皮细胞损伤、脂蛋白沉积、慢性炎症反应、细胞外基质重构等。多数学者认为,由于心瓣膜及其支架长期经受血流不断冲击、磨损及机械应力作用,可能是其致病基础,特别是在主动脉压力增高者。还有学者认为,遗传也可能与瓣膜钙化有关。
随着人口老龄化、生活水平的提高、平均寿命的延长,瓣膜钙化发病率呈不断上升趋势。然而,目前对主动脉瓣钙化,尚无有效的药物干预措施,手术或介入治疗换瓣仍是治疗首选。
治疗手段包括:
主动脉瓣置换术
主动脉瓣置换术现已广泛应用于治疗主动脉瓣狭窄,是一种安全有效的治疗方法。据国外统计资料,65岁以上老年人手术存活率可达85%~95%,5年存活率达60%。若合并冠心病应在主动脉瓣置换术时同时进行冠脉搭桥术。Blakemen等对100例75岁以上主动脉瓣狭窄病人进行了研究,单纯施行主动脉瓣置换术44例,同时进行冠脉搭桥术56例,术后平均随访23个月,存活率71%。主动脉瓣置换术是治疗老年性主动脉瓣病唯一选择,并已成为安全有效的方法。主动脉瓣置换术可明显改善长期生存率和生活质量。高龄不应成为这种手术的禁忌证。
经皮穿刺球囊瓣膜成形术
经皮球囊扩张术是一种治疗瓣膜狭窄的新技术,Cribier等报告应用该法治疗92例严重钙化的主动脉瓣狭窄患者,平均主动脉跨瓣压差从9.98±3.46kPa降至3.99±1.73kPa,平均主动脉瓣口面积增加1倍,临床症状明显改善。66例术前心功能Ⅲ~Ⅳ级,出院时58例转为Ⅰ~Ⅱ级。
手术期少数病人可发生急性心肌梗死、体循环栓塞、心脏破裂伴心包填塞。部分病人发生严重瓣膜反流、穿孔、撕裂、心律失常等。
因此提出老年性退行性心脏瓣膜病的球囊扩张的适应证是:①严重瓣膜狭窄需紧急进行非心脏手术者;②严重的主动脉瓣狭窄伴明显心功能不全者,宜先行球囊扩张术,为瓣膜置换创造有利条件;③二尖瓣尚柔软的患者;④外科手术风险极大的患者。
主动脉瓣去钙化术
McBride等应用超声声能对22例严重主动脉瓣狭窄者行去钙化术,结果主动脉瓣口面积成倍加大,平均跨瓣压差下降到术前的1/3。King等总结分析了92例主动脉瓣去钙化术结果,平均随访7年,心功能改善61%。Worley用电液压冲击波去除沉积于狭窄瓣膜上的钙化块获得成功。
去钙化术的优点是:①可改变瓣膜的解剖结构,恢复瓣膜功能;②术后可获得较低跨瓣压力阶差;③不需抗凝,血栓栓塞发生率低;④心内膜炎发生率低。缺点是狭窄易复发,且技术操作有一定难度。
去钙化术的指针是:①75岁以上退行性主动脉瓣狭窄;②主动脉瓣和(或)瓣环钙化;③轻~中度主动脉瓣狭窄伴有严重冠心病;④左室功能差,射血分数<0.25;⑤不能作抗凝治疗的患者。
由于主动脉瓣狭窄患者年龄普遍较大,且多合并有高血压、糖尿病等其他基础疾病,无疑增加了手术风险。因此,迫切需要对主动脉瓣钙化发病机制进行深入探讨,探讨新的防治策略。
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因。脂质代谢障碍为动脉粥样硬化的病变基础,其特点是受累动脉病变从内膜开始,一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成,进而纤维组织增生及钙质沉着,并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化,导致动脉壁增厚变硬、血管腔狭窄。病变常累及大中肌性动脉,一旦发展到足以阻塞动脉腔,则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样,因此称为动脉粥样硬化。
陈芳、孙洁、朱中玉、沈晓君,丹参通脉方治疗动脉粥样硬化临床研究,河南,中医学报,2014年,第29卷,第404-405页。文中通过试验观察丹参通脉方对83例心、脑动脉粥样硬化患者血浆TC、TG、HDL、LDL、ApoAl、ApoB、LPa水平及颈动脉内膜中膜厚度(IMT)的影响,探讨丹参通脉方调节血脂水平,干预AS病变发生发展等临床防治作用。治疗组在常规治疗的基础上加用丹参通脉方治疗后血清TC、LDL-C、ApoB水平降低的程度与对照组给予瑞舒伐他汀常规治疗后比较差异显著(P<0.05),提示联合使用丹参通脉方改善血脂的疗效优于常规治疗。颈动脉内膜中膜厚度检测及斑块积分情况显示,治疗组治疗后AS斑块明显消退,与治疗前及对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者均未发现明显不良反应。笔者的前期研究证实,中药单体丹参酮ⅡA和葛根素具有调节血脂,保护血管内皮细胞,拮抗高同型半胱氨酸引起的血管平滑肌异常增殖等良好的抗动脉粥样硬化作用。在前期工作的基础上,根据临证经验观察,笔者将丹参通脉方方剂应用于临床AS及其所致心脑血管疾病的治疗。本试验中,丹参通脉方治疗后,血清TC、TG、LDL-C、ApoB、LPa水平降低,HDL水平升高,进一步证实丹参通脉方能有效的调节血脂水平。治疗组治疗后血清TC、LDL-C、ApoB降低程度与对照组比较差异显著,提示联合使用丹参通脉方改善血脂的疗效优于常规治疗。
从瓣膜钙化的病理形态上分析,发现钙化的瓣膜首先在胶原纤维中有细胞外中性脂肪浸润,随后钙盐沉积。故有学者认为,导致动脉粥样硬化的易患因素也是导致瓣膜钙化的易患因素。目前认为,瓣膜钙化并非简单的钙磷被动沉积过程,而是类似动脉粥样硬化,由多种细胞和信号蛋白介导的主动性调控病理过程。上文中丹参通脉方治疗动脉粥样硬化,主要是通过调节血脂、干预颈动脉AS斑块的发生发展来达到治疗目的。申请人在对主动脉瓣钙化发病机制进行深入探讨的基础上,从避免手术风险,为广大老年性主动脉瓣膜钙化患者家庭减轻经济负担,提出了从调节血脂水平,调控瓣膜钙化相关蛋白表达,在中药领域中寻找能够有效防治瓣膜钙化的药物的研究方向。
类似药物:
通脉口服液
成份:葛根、丹参、川芎。
性状:本品为棕红色液体;气微香,味甜、微苦。
功能主治:活血通脉。用于缺血性心脑血管疾病,动脉硬化,脑血栓,脑缺血,冠心病,心绞痛。
通脉颗粒
成份:丹参、川芎、葛根。
性状:本品为棕黄色的颗粒;气微,味甜、微苦。
功能主治:活血通脉。用于缺血性心脑血管疾病,动脉硬化,脑血栓,脑缺血,冠心病,心绞痛。
发明内容
鉴于现有治疗老年性主动脉瓣钙化药物的空白,本发明提供了丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用。具体技术方案如下:
丹参通脉方配方:丹参15g,川芎12g,葛根12g,三七6g,水煎法制作后,用0.22μmMillipore滤器除菌过滤三次后使用。
丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用:
高胆固醇+维生素D2喂养大白兔,每天经口灌胃给予3mg/kg和6mg/kg丹参通脉浸膏;瓣膜间质细胞在钙化培养基中培养,给予瓣膜间质细胞丹参通脉方干预。
实验结果:
(1)丹参通脉方可降低主动脉瓣钙化大白兔血脂水平,以胆固醇水平为主;丹参通脉方可降低主动脉瓣膜钙化相关蛋白表达;
(2)丹参通脉方可减少茜素红染色钙化结节形成,减轻瓣膜间质细胞成骨化蛋白表达;丹参通脉方可减少成骨化相关炎症因子表达。
本发明中用到的药品和仪器如下:
药品
瑞舒伐他汀(可定),阿斯利康制药有限公司生产(批号:J20120006);
同型半胱氨酸(HCY),美国Sigma-Aldrich公司,批号:c7352;
DMEM,Solarbio公司;
FBS胎牛血清,500mL/瓶,美国Gibico公司;
ELISA试剂盒(IL-6,IL-8及MCP-1)购自美国ebioscience公司;
Trizol:100ml/瓶,Solarbio公司;
逆转录试剂盒及荧光定量PCR试剂盒,Transgen公司;
免疫荧光一抗抗体:BIP、β-actin抗体,美国Santa Cruz公司;
CY3标记二抗及DAPI,博士德;
ECL发光液及Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒:Transgen公司。
仪器
细胞培养箱(Kendro公司);
FACS Calibur流式细胞仪(美国BD公司);
StepOnePlus Realtime PCR系统(美国ABI公司);
光学及荧光显微镜(Olympus公司);
酶标仪(Thermo公司)。
本发明中药配方中各原料药理如下:
丹参:味苦,微寒;归心、肝经。活血祛瘀,通经止痛,清心除烦,凉血消痈。用于胸痹心痛,脘腹胁痛,瘕瘕积聚,热痹疼痛,心烦不眠,月经不调,痛经经闭,疮疡肿痛。
川芎:辛,温。入肝、胆经。行气开郁,法风燥湿,活血止痛。治风冷头痛旋晕,胁痛腹疼,寒痹筋挛,经闭,难产,产后瘀阻块痛,痈疽疮疡。用于月经不调,经闭痛经,瘕腹痛,胸胁刺痛,跌扑肿痛,头痛,风湿痹痛。
葛根:味甘、辛,性凉。归肺、胃经。解肌退热,透疹,生津止渴,升阳止泻。用于表证发热,项背强痛,麻疹不透,热病口渴,阴虚消渴,热泻热痢,脾虚泄泻。
三七:甘、微苦,温。归肝、胃经。散瘀止血,消肿定痛。用于咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌扑肿痛。
本发明提供了丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用,在经典的丹参通脉方基础上加以改进,获得了良好的预防和治疗老年性主动脉瓣钙化效果。方中丹参入心经活血祛瘀、通经止痛为君药;川芎行气开郁,助丹参活血,为臣药;葛根生津止渴,补气升阳,以气行血,为佐药;三七止血散瘀,防丹参、川芎活血太过伤正,为使药。
本发明提供的丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用,与现有技术相比具有以下有益效果:
1、本发明提供的丹参通脉方的应用解决了老年性主动脉瓣钙化长期依赖外科手术、难以预防的难题,能够显著降低患者血脂值,降低主动脉瓣膜钙化相关蛋白表达,减轻瓣膜间质细胞成骨化蛋白表达,从病理形成源头对主动脉瓣钙化进行防治;
2、本发明提供的丹参通脉方的应用,药物来源广、毒性小、价格低、制备简单、疗效确切,大大减轻了老年性主动脉瓣钙化患者的家庭经济负担。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果,以下结合本发明的优选实施例进行详细描述。
动物实验
选取体重2.5kg-3.0kg雄性新西兰大白兔作为模型动物,检测血糖、血脂等生化指标和心脏超声无异常后,随机分为四组:
第一组:正常对照组(n=6),给予正常饮食喂养;
第二组:模型组,高胆固醇+维生素D2喂养组(high cholesterol+vitaminD2group,HC+vitD2,n=7),在正常家兔饲料中添加0.5%胆固醇,并在饮用水中加入50,000IU/天维生素D2;
第三组:丹参通脉方低剂量喂养组(n=7),在HC+vitD2饮食基础上,每天经口灌胃给予3mg/kg丹参通脉浸膏;
第四组:丹参通脉方高剂量喂养组(n=7),在HC+vitD2饮食基础上,每天经口灌胃给予6mg/kg丹参通脉浸膏。
连续干预3个月后,检测如下指标:血糖、血脂等生化指标,结果如表1所示:
表1干预3个月后大白兔的生化指标
由表1可以看出,灌喂丹参通脉浸膏的大白兔,总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯值明显低于未灌喂丹参通脉浸膏的模型组,表明丹参通脉方可降低主动脉瓣钙化大白兔血脂水平,以胆固醇水平为主。
免疫组化检测瓣膜钙化情况,利用免疫组化技术对瓣膜进行染色,选择osteoponin和Runx2两项指标阳性区域进行比较分析,结果如表2所示;
表2干预3个月后大白兔的免疫组化检测瓣膜钙化情况
由表2可以看出,灌喂丹参通脉浸膏的大白兔,Runx2、Osteopontin百分比明显小于未灌喂丹参通脉浸膏的模型组,结果显示丹参通脉方可减少模型组主动脉瓣钙化指标阳性区域,可降低主动脉瓣膜钙化相关蛋白表达。
细胞实验
胶原酶消化法分离培养猪主动脉瓣膜间质细胞,免疫荧光检测α-SMA和vimentin表达均阳性,符合瓣膜间质细胞兼具平滑肌细胞和成纤维细胞表型的特点。
首先,使用oxLDL(氧化型低密度脂蛋白)对瓣膜间质细胞进行干预,在钙化培养基中,给予瓣膜间质细胞不同浓度oxLDL(0,10,50,100μg/mL)孵育72小时,免疫印迹法检测RAGE和钙化信号通路相关蛋白BMP2、Runx2、osteopontin表达水平,发现随着oxLDL浓度的升高,RAGE、BMP2、Runx2、osteopontin表达均显著增高。
其次,将分离培养的瓣膜间质细胞随机分为五组:
第一组:正常对照组(control group),钙化培养基中培养;
第二组:模型组,含100μg/mL的oxLDL钙化培养基中培养;
第三组:丹参通脉方低剂量组,含100μg/mL的oxLDL钙化培养基基础上,加入丹参通脉药液使其浓度为1mg/mL;
第四组:丹参通脉方中剂量组,含100μg/mL的oxLDL钙化培养基基础上,加入丹参通脉药液使其浓度为10mg/mL;
第五组:丹参通脉方高剂量组,含100μg/mL的oxLDL钙化培养基基础上,加入丹参通脉药液使其浓度为50mg/mL。
培养72小时后,通过茜素红染色,观察钙化结节的面积大小,结果如表3所示:
表3瓣膜间质细胞茜素红染色钙化结节情况
由表3可知,丹参通脉方干预组的钙化结节面积明显少于模型组,且随剂量的增大,钙化结节面积减少得越多。表明丹参通脉方可减少茜素红染色钙化结节形成。
培养72小时后,利用免疫组化技术对瓣膜间质细胞进行染色,选择osteoponin和Runx2两项指标阳性区域进行比较分析,结果如表4所示:
表4瓣膜间质细胞成骨化蛋白表达情况
由表4可知,丹参通脉方干预组的骨化蛋白表达量明显少于模型组,且随剂量的增大,骨化蛋白表达量减少得越多,表明丹参通脉方可减轻瓣膜间质细胞成骨化蛋白表达。
培养72小时后,通过PCR法检测瓣膜间质细胞IL-8、IL-6、MCP-1的表达量,结果如表5所示:
表5瓣膜间质细胞相关炎症因子表达情况
由表5可以看出,丹参通脉方干预组的mRNA表达量明显少于模型组,且随剂量的增大,mRNA表达量减少得越多,表明丹参通脉方可抑制瓣膜间质细胞IL-8、IL-6、MCP-1基因表达。
分析动物实验和细胞实验的结果,可以得到以下结论:
(1)丹参通脉方可降低主动脉瓣钙化血脂水平,尤其是胆固醇水平,丹参通脉方还可降低主动脉瓣膜钙化相关蛋白表达;
(2)给予瓣膜间质细胞丹参通脉方干预后,免疫印迹和细胞免疫荧光检测均发现NF-κB入核明显减少,从而抑制IL-8、IL-6、MCP-1基因表达,并显著减少钙化信号通路相关蛋白Runx2和osteoponin表达水平,抑制瓣膜间质细胞向成骨细胞样分化。
以下结合临床上的治疗病例对本发明中丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用及效果作出详细说明:
自2014年至2016年,使用该方治疗主动脉瓣钙化123例,女性37例,男性86例,年龄63-94岁,病程最短半年最长32年。治疗后症状明显缓解114人,总有效率92.7%,且均未发现明显不良反应。
典型病例
1、康慧军,男,82岁,间断活动后胸闷气短五年余,心脏彩超显示主动脉瓣中重度狭窄,EF60%,左室舒张功能减退,外科会诊后建议手术治疗,但患者要求药物保守治疗,应用阿司匹林、他汀类药物患者症状改善不明显,给予丹参通脉方一天三次,一次一剂,两周后症状较之前缓解,活动后胸闷减轻。
2、牛明辉,男,65岁,间断胸闷心慌六年余,下肢水肿,入院检查BNP1050mg/mL,心脏彩超显示主动脉瓣重度狭窄伴关闭不全,EF35%,外科会诊后考虑患者手术风险高,患者及家属要求药物保守治疗,给予利尿,改善心衰药物后,患者症状有所缓解,但仍有胸闷症状,加用丹参通脉方一日两次,一次一剂,一周后,胸闷症状缓解。
3、许茹芸,女,78岁,发作性晕厥三年余,加重一天入院,心脏彩超显示主动脉瓣重度狭窄,EF75%,外科会诊后认为患者有手术措施,但高龄且患者合并肝硬化、PT降低,考虑术后出血风险大,患者遂考虑保守治疗,入院后患者再次发作晕厥一次,给予丹参通脉方一日二次,一次一剂,疗程三个月,随访无新发晕厥。
本发明提供的丹参通脉方在抗主动脉瓣钙化方面的应用,取得了很好的防治主动脉瓣钙化的效果。对于轻度老年性主动脉瓣钙化患者,服药两周至一个月,可使心悸、心绞痛发作频率降低;对于中度老年性主动脉瓣钙化患者,服药三个月至半年,心悸、气急、心绞痛发作频率降低;对于重度老年性主动脉瓣钙化患者,坚持服药,可减轻心绞痛。
由以上试验和病例可知,本发明提供的丹参通脉方在抗主动脉瓣钙化方面的应用,科学合理,使用方便,成本低,能够预防和治疗老年性主动脉瓣钙化,具有重大的医学价值和应用前景。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换,只要不脱离本发明技术方案的精神和范围,均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (2)
1.丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用。
2.一种根据权利要求1所述的丹参通脉方在抗老年性主动脉瓣钙化方面的应用,其特征在于,丹参通脉方配方:丹参15 g,川芎12 g,葛根12 g,三七6 g,水煎法制作后,用0.22μm Millipore滤器除菌过滤三次后使用。
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CN107252442B (zh) | 2018-05-04 |
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