CN107213277A - 一种药物组合物及其制备方法、应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物领域，具体而言，涉及一种药物组合物及其制备方法、应用。一种药物组合物，该药物组合物的原料包括按重量份数计的以下组分：玫瑰5‑15份、甘草30‑100份、珍珠露水草1‑5份、广藿香10‑40份。本发明提供的乳液、药物组合物能显著改善紫外线辐射诱导的皮肤宏观损伤和组织病理学病变，并能显著提高皮肤组织中抗氧化酶的活力，降低脂质过氧化物MDA的含量，抑制炎症因子的过度表达和细胞外基质的降解，维持弹性纤维、胶原纤维结构的完整性，从而保护皮肤免受紫外线辐射的损害。

Description

一种药物组合物及其制备方法、应用

技术领域

本发明涉及药物领域，具体而言，涉及一种药物组合物及其制备方法、应用。

背景技术

皮肤老化是机体衰老的外在表现，是一个复杂的、多因素综合作用的过程，可导致皮肤组织学和功能性损伤。皮肤衰老通常分为内源性衰老和外源性老化，前者即自然衰老，是由遗传因素等引起的不可逆过程，后者是指由于环境因素如紫外线辐射、吸烟、风吹日晒或接触有毒有害化学物质等引起的皮肤老化。

皮肤光老化的主要临床表现为皮肤松弛、结节、皮革样外观、明显干燥和脱屑，光老化部位皮肤呈黄色或灰黄色、较粗糙、用力伸展时皱纹不会消失，久之则出现色素斑点或类似老年斑等色素沉着异常，甚至表现为深浅不均的色素失调现象。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物组合物及其制备方法、应用，其旨在减缓或者改善皮肤光老化的问题。

本发明提供一种技术方案：

一种药物组合物，该药物组合物的原料包括按重量份数计的以下组分：

玫瑰5-15份、甘草30-100份、珍珠露水草1-5份、广藿香10-40份。

进一步地，上述玫瑰8-10份、甘草60-65份、珍珠露水草2-3份、广藿香24-28份。

上述的药物组合物的制备方法，其包括：将粉碎的药物组合物的原料进行萃取；萃取为CO₂超临界萃取、微波辅助萃取或者超声波辅助提取中的一种。

进一步地，上述原料采用CO₂超临界萃取，包括：

将装有粉碎的原料的萃取釜在CO₂超临界流体内浸泡，控制萃取釜中压力为24-30MPa；然后将浸泡后的物质分离釜中进行分离，控制分离釜中压力为5-7.5MPa，加温至35-42℃，分离时间为1-5小时；去除CO₂得到有效成分。

进一步地，上述原料采用微波辅助萃取，包括：

将混合有原料与乙醇的混合物置于微波萃取仪中，萃取2-4次，每次萃取时间为20-30s，向萃取液中加入硫酸钠或硫酸镁，去除有机溶剂，得到有效成分。

进一步地，上述乙醇与原料的比例为3-5ml/g。

进一步地，上述原料采用超声波辅助提取，包括：

将混合有原料与乙醚的混合物进行超声提取20-40min，超声的频率为80-120Hz，提取2-4次，回收提取液中的乙醚，得到有效成分。

进一步地，上述乙醚与原料的比例为8-12ml/g。

进一步地，上述制备方法还包括混合中链脂肪酸甘油酯NCT、辛普高效增溶剂SF-410以及有效成分。

进一步地，上述药物组合物在制备抗皮肤衰老药物中的应用。

本发明实施例提供的一种药物组合物及其制备方法、应用的有益效果是：

本发明提供的乳液、药物组合物能显著改善紫外线辐射诱导的皮肤宏观损伤和组织病理学病变，并能显著提高皮肤组织中抗氧化酶的活力，降低脂质过氧化物MDA的含量，抑制炎症因子的过度表达和细胞外基质的降解，维持弹性纤维、胶原纤维结构的完整性，从而保护皮肤免受紫外线辐射的损害。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1示出了对小鼠宏观观察统计学分析数据；

图2示出了实验期间各组皮肤厚度(n＝9)；

图3示出了小鼠皮肤胶原纤维光密度值和胶原含量；

图4示出了小鼠皮肤组织中CAT(A)、GSH-Px(B)和SOD(C)活力以及MDA(D)含量的测定结果；

图5示出了小鼠皮肤组织中炎性因子IL-1β(A)、IL-6(B)、TNF-a(C)、COX-2(D)以及PGE2(E)含量的测定结果；

图6示出了小鼠皮肤组织中MMP-1(A)及MMP-3(B)含量的测定结果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的一种药物组合物及其制备方法、应用进行具体说明。

一种药物组合物，该药物组合物的原料包括按重量份数计的以下组分：

玫瑰5-15份、甘草30-100份、珍珠露水草1-5份、广藿香10-40份。

本发明的原料中，玫瑰为蔷薇科的灌木玫瑰的花；甘草为豆科植物甘草的根和根状茎；珍珠露水草为鸭跖草科植物蛛丝毛蓝耳草的根；广藿香为唇形科植物广藿香的干燥地上部分。

玫瑰具有理气解郁、活血散淤的功效，能够温养人的心肝血脉，舒发体内郁气，从而达到去除黑斑，防皱纹的目的。

广藿香的化学成分主要为挥发油、黄酮和生物碱三大类。其中,挥发油是其主要的活性成分，主要成分为广藿香醇、广藿香酮以及广藿香烯。广藿香及其挥发油具有抗炎镇痛、抗氧化、抗过敏、抗菌、止呕、胃肠道调节和免疫调节等药效。

从甘草中提取的甘草次酸对氧自由基具有清除作用。

从珍珠露水草中提取的蜕皮激素具有很强的渗透性，在液态状态下能快速被皮肤吸收，增强细胞新陈代谢及活化，具有良好的去角质、去斑增白以及修复面部黄褐斑、外伤性黑斑、雀斑、黑色素沉着等作用，还能有效促进胶原蛋白的合成。

发明人发现采用按重量份数计的5-15份的玫瑰、30-100份的甘草、1-5份的珍珠露水草以及10-40份的广藿香可以有效预防皮肤衰老，可以治疗或者预防皮肤松弛、结节，老化部位呈黄色或灰黄色、较粗糙、用力伸展时皱纹不会消失，产生各种斑点等问题。

进一步地，上述的原料包括按重量份数计的：玫瑰8-10份、甘草60-65份、珍珠露水草2-3份以及广藿香24-28份。具体地，在本实施例中，玫瑰9.5份、甘草62份、珍珠露水草2.5份、广藿香26份。

本发明还提供一种上述的药物组合物的制备方法，其包括：将粉碎的药物组合物的原料进行提取；该提取方法为萃取为CO₂超临界萃取、微波辅助萃取以及超声波辅助提取中的一种。

具体地，将上述的药物粉碎，粉碎后采用对原料中的有效组分进行提取，萃取的方法为：CO₂超临界萃取、微波辅助萃取或者超声波辅助提取中的一种。

进一步地，采用CO₂超临界萃取，具体方法如下：将原料粉碎至粒径为10-16目，将粉碎后的原料装入萃取釜内，将萃取釜在CO₂超临界流体内浸泡2小时，控制萃取釜中压力为24-30MPa。

然后将浸泡后的物质置于分离釜中进行分离，控制分离釜中压力为5-7.5MPa，加温至35-42℃，分离时间为1-5小时；去除CO₂得到有效成分。

此外，如果采用微波辅助萃取法对原料进行提取，具体操作步骤如下：

将原料粉碎至30-50目，混合原料将混合有原料与乙醇的混合物置于微波萃取仪中，在300W的功率下萃取2-4次，每次萃取时间为20-30s，合并、过滤得到萃取液并静置使其分层，去掉水层后加入适量的无水硫酸钠或者无水硫酸镁，旋蒸去除有机溶剂，得到有效成分。

进一步地，上述乙醇与原料的比例为3-5ml/g；具体地，乙醇与原料的比例为4ml/g。

在其他实施例中，采用超声波辅助提取原料，具体操作步骤如下：

将原料粉碎至20-30目，将混合有原料与乙醚的混合物进行超声提取20-40min，超声的频率为80-120Hz，提取2-4次，去除提取液中的乙醚，得到有效成分。

进一步地，上述乙醚与原料的比例为8-12ml/g。具体地乙醚与原料的比例为10ml/g。

进一步地，上述制备方法好包括混合中链脂肪酸甘油酯NCT、辛普高效增溶剂SF-410以及有效成分。

具体地，将中链脂肪酸甘油酯NCT、辛普高效增溶剂SF-410以及上述的有效成分与水混合均匀，即可封装。

本发明还提供一种方案，药物组合物在制备抗皮肤衰老药物中的应用。

在本发明的其他实施例中，也可将上述的药物组合物制备为面膜等其他护肤品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物主要由以下步骤制得：

称量原料：玫瑰50g、甘草300g、珍珠露水草10g以及广藿香100g，混合上述原料后粉碎至10目，将粉碎后的原料装入萃取釜内，将萃取釜在CO₂超临界流体内浸泡2小时，控制萃取釜中压力在24-30MPa的范围内。然后将浸泡后的物质置于分离釜中进行分离，控制分离釜中压力为5-7.5MPa，加温至35℃，分离釜中分离时间为1小时；去除CO₂得到有效成分。

实施例2

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物主要由以下步骤制得：

称量原料：玫瑰500g、甘草3333g、珍珠露水草135g以及广藿香1390g。

混合上述原料后粉碎至14目，将粉碎后的原料装入萃取釜内，将萃取釜在CO₂超临界流体内浸泡2小时，控制萃取釜中压力在24-30MPa的范围内。然后将浸泡后的物质置于分离釜中进行分离，控制分离釜中压力为5-7.5MPa，加温至42℃，分离釜中分离时间为5小时；去除CO₂得到有效成分。

实施例3

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物主要由以下步骤制得：

称量原料：称量玫瑰150g、甘草1000g、珍珠露水草50g以及广藿香400g。

混合上述原料后粉碎至30目，将粉碎后的原料与4800ml的乙醇装入烧瓶中，将烧瓶置于微波萃取仪中，在300W的功率下萃取3次，每次萃取时间为25s；将3次的萃取液合并、过滤并静置使其分层，去掉水层后加入适量无水硫酸钠静置过夜，旋转蒸发除去有机溶剂，得挥发油有效成分。

实施例4

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物主要由以下步骤制得：

称量原料：称量玫瑰80g、甘草600g、珍珠露水草20g以及广藿香240g。

混合上述原料后粉碎至30目，将粉碎后的原料与3760ml的乙醇装入烧瓶中，将烧瓶置于微波萃取仪中，在300W的功率下萃取2次，每次萃取时间为30s；将2次的萃取液合并、过滤并静置使其分层，去掉水层后加入适量无水硫酸镁静置过夜，旋转蒸发除去有机溶剂，得挥发油有效成分。

实施例5

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物主要由以下步骤制得：

称量原料：玫瑰500g、甘草3333g、珍珠露水草135g、广藿香1390g。混合上述原料后粉碎至40目，将原料以及21432ml无水乙醇装入烧瓶中，将烧瓶置于微波萃取仪中，在300W的功率下3次，每次萃取时间为25s；将3次的萃取液合并、过滤并静置使其分层，去掉水层后加入适量无水硫酸镁静置过夜，旋转蒸发除去有机溶剂，得挥发油有效成分。

实施例6

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物主要由以下步骤制得：

称量原料：玫瑰8g、甘草60g、珍珠露水草2g以及广藿香24g。混合上述原料后粉碎至20目，将原料以及940ml乙醚装入萃取瓶中，进行超声提取20min，超声的频率为80Hz，提取2次，收集、合并提取液后去除提取液中的乙醚，得到有效成分。

实施例7

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物主要由以下步骤制得：

称量原料：玫瑰10g、甘草65g、珍珠露水草3g以及广藿香28g。混合上述原料后粉碎至30目，将原料以及848ml乙醚装入萃取瓶中，进行超声提取40min，超声的频率为120Hz，提取4次，收集、合并提取液后去除提取液中的乙醚，得到有效成分。

实施例8

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物主要由以下步骤制得：

称量原料：玫瑰95g、甘草62g、珍珠露水草25g、广藿香26g。混合上述原料后粉碎至20目，将原料以及1080ml乙醚装入萃取瓶中，进行超声提取40min，超声的频率为100Hz，提取2次，收集、合并提取液后去除提取液中的乙醚，得到有效成分。

试验例

将实施例1制得的药物组合物抗小鼠皮肤光老化作用实验。

将实施例1制得的有效成分溶于丙二醇-乙醇(8:2，vol/vol)的溶剂中，配制成浓度分别为4，8，16mg/ml的药物组合物。

实验小鼠：KM小鼠，体重约18～22g，雌性，SPF级，购于广州中医药大学实验动物中心，动物合格证号为：SCXK(粤)2013-0020。

雌性KM小鼠63只，动物在温度为23±2℃、湿度为55±10％和光暗周期12h的SPF级环境下饲养，自由饮水进食，正常饲养一周后，随机平均分成7组，分别为：正常对照组(Naive Control，NC)、脱毛对照组(Sham Control，SC)、模型对照组(Model Control，MC)、溶媒对照组(Vehicle Control，VC)、药物组合物低剂量组(药物-L)、药物组合物中剂量组(药物-M)、药物组合物高剂量组(药物-H)，实验周期为十周。对上述KM小鼠的分组与给药情况如表1所示。表中：UV照射是指紫外线照射。

表1实验小鼠分组处理与给药情况

对上述实验组每周五次(周三，周日除外)进行给药，给药情况如表1。

皮肤光老化动物模型的制备如下：

将3根UVA灯管(波长：320-400nm，峰值：365nm)和7根UVB灯管(波长：285-350nm，峰值：310-315nm)并列穿插安装于自制的紫外线辐射箱中，作为辐射光源。造模前，UV灯管预热10min，并隔一定时间用紫外辐射仪(Waldmann UV800,Germany)进行紫外辐射强度测定，待光源稳定后，再将相应组别小鼠分别放入自制的不锈钢鼠笼内，鼠笼与箱内UV灯管相距30cm进行照射。预实验结果及相关参考文献表明，最小红斑量(MED)为100mJ/cm²。因此，UVA联合UVB的辐射剂量第一周按一个MED(100mJ/cm²)进行照射，每周照射5次，往后每周照射剂量比前一周递增一个MED，直至第四周4个MED为止，之后保持4个MED直至第十周实验结束，紫外辐照总剂量达17J/cm2。

实施例1制得的药物组合物抗小鼠皮肤光老化进行检测，检测过程以及检测结果评价标准如下：

1.皮肤宏观评价

实验期间，每周六对小鼠背部皮肤与光老化相关的宏观特征(弹性、皱纹、增厚、粗糙、红斑等)进行观察评价。用乙醚将小鼠麻醉后对其背部正中皮肤进行拍照，并根据表2所示皮肤光老化评分标准对其皮肤进行宏观评分(0-正常皮肤，6-严重受损皮肤)，共检查十周。

表2皮肤光老化评价准则

2.皮肤弹性测试(提皮测试)

根据Tsukahara等人建立的提皮测试方法对小鼠皮肤弹性进行评价，用乙醚将小鼠轻度麻醉后，将小鼠背部皮肤沿其正中线靠后的位置用拇指和食指轻轻提起(以小鼠四肢不悬空为度，后立即放开，并记录皮肤恢复至初始状态的时间)，共检查十周。

3.皮肤厚度测量

用乙醚将小鼠轻度麻醉后，用同样方法将小鼠背部皮肤轻轻提起，用游标卡尺测量小鼠皮肤厚度(MM)，记录。每周进行皮肤厚度测量，共检查十周。

检测以及测试结果如下：

1.药物组合物对光老化小鼠背部皮肤宏观表现的影响

在整个实验期间，SC组小鼠呈现正常的皮肤纹理，皮肤细腻、红润、有光泽，未见皱纹及松弛现象，提示脱毛操作对小鼠皮肤的宏观表现无影响。紫外线辐射造模四周后，MC组和VC组小鼠开始出现粗深皱纹、红斑、水肿、不规则增厚以及皮革样等典型的皮肤光老化宏观损伤，提示皮肤光老化模型建立成功且溶媒丙二醇-乙醇对紫外线辐射诱导的皮肤光老化无保护作用。在第十周末，药物-H组小鼠背部皮肤呈现健康的光滑状态，伴随少量细小皱纹；药物-M组小鼠未见肉色皮损现象，但可见少量浅皱纹；虽然药物-L组小鼠仍出现深皱纹和轻微红斑等光老化现象，但较VC组有明显的好转。造模四周后，MC组与VC组的皮肤宏观评分较SC组显著升高(p<0.05)，而MC组与VC组之间的宏观评分无显著差异(p>0.05)，与SC组比较，从第六周开始，药物治疗组的宏观评分显著降低(p<0.05)。上述实验结果提示，药物对紫外线辐射诱导的皮肤宏观损伤有抑制作用。

2.药物组合物对光老化小鼠皮肤弹性的影响

图1示出了对小鼠宏观观察统计学分析数据，具体地，图1中，A表示实验期间各组宏观表现评分；B表示实验期间各组提皮恢复时间。#p<0.05vs.SC组；*p<0.05vs.VC组(x±s，n＝9)。

由图1可知，皮肤弹性测试结果提示，从第四周开始，MC组与VC组的提皮恢复时间较SC组显著延长(p<0.05)，皮肤弹性显著降低，而MC组与VC组的提皮恢复时间相似，差异无统计学意义(p>0.05)。从第六周开始，实施例1的药物组合物给药后，提皮恢复时间均较VC组显著降低(p<0.05)，皮肤弹性显著升高，其中以中高剂量组更为显著。上述实验结果显示，局部给予实施例1的药物组合物治疗可显著对抗紫外线诱导光老化小鼠的皮肤弹性下降。

3.药物组合物对光老化小鼠皮肤厚度的影响

图2示出了实验期间各组皮肤厚度(n＝9)，由图2中的实验结果可知，小鼠皮肤厚度测量结果显示，在整个实验期间，各组小鼠皮肤逐渐增厚，其中以MC组及VC组小鼠皮肤增厚最为严重，两组无显著性差异(p>0.05)，提示本实验造模成功且溶媒丙二醇-乙醇治疗对紫外线诱导的皮肤异常增厚无对抗作用。从第五周开始MC组与VC组的小鼠皮肤厚度均较SC组显著增厚(p<0.05)。从第七周开始，与VC组相比较，局部涂敷实施例1提供的药物组合物能显著抑制紫外线辐射引起的皮肤增厚(p<0.05)，其中以药物-H组治疗效果最好。

4.药物组合物对光老化小鼠皮肤组织结构的影响

对紫外线辐射诱导的光老化小鼠皮肤组织结构损伤进行观察。NC与SC组小鼠呈现出清晰完整的健康皮肤组织结构，表皮层较薄且厚度均匀，角质层正常无过度角质化现象；表皮与真皮间呈现波浪状连接，明显可见表皮突与真皮乳头；真皮处可见排列规则且结构完整的毛囊与皮脂腺，未见出血及炎性浸润。相比之下，MC组与VC组小鼠呈现典型的皮肤光老化组织结构特征，紫外线辐射引起角质层角化过度，表皮不规则增厚；表皮层与真皮层间的波浪状连接趋于平缓，表皮突与真皮乳头消失；此外，真皮层出现出血及大量的炎性细胞浸润现象。药物-L组的皮肤组织结构情况较MC组与VC组有一定程度的改善，角质层角化程度有所减轻，表皮层厚度有所下降，毛囊、皮脂腺结构较为完整，未见出血现象但可见少量炎性浸润。药物-M与药物-H组呈现出相对完整的皮肤组织结构，表皮层厚度显著下降，角质层厚度亦恢复正常；表皮与真皮连接处趋于波浪状，可见表皮突与真皮乳头；真皮层中毛囊与皮脂腺排列规则，且未见出血与炎性细胞浸润情况。上述病理学检查结果表明，本实施例提供的药物组合物对皮肤光老化小鼠皮肤组织结构具有保护作用。

5.药物组合物对光老化小鼠皮肤弹性纤维的影响

弹性纤维赋予皮肤弹性，具有支撑、抗牵拉的作用，并对外界机械损伤有防护作用。弹性纤维的数量与分布情况都将直接影响皮肤的外观。NC组与SC组可见清晰的弹性纤维网状结构，形态细长，排列整齐有序，提示脱毛操作对弹性纤维的结构无破坏作用。而施加长期慢性紫外线辐射后，MC组与VC组的皮肤弹性纤维均出现增粗、扭曲、断裂、变性、排列紊乱无规则等典型皮肤光老化特征，部分甚至降解成颗粒状或无定形团块。药物-L组小鼠皮肤弹性纤维较VC组有所好转，呈现细长状态且排列较有序；药物-M组可见细长且排列有序的弹性纤维，部分呈交织状；药物-H组小鼠的皮肤弹性纤维有明显的改善，其数量显著上升，且呈细长交织状，排列整齐有序，部分已恢复网状结构。上述结果提示，实施例1提供的药物组合物能抵御紫外线辐射引起的弹性纤维损伤，维持其正常的生理结构形态。

6.药物组合物对光老化小鼠皮肤胶原纤维的影响

胶原纤维主要由胶原蛋白构成，赋予皮肤张力和韧性，维持皮肤的充盈程度。NC组与SC组真皮胶原纤维呈波浪状，排列整齐有规则，分布均匀，相互交错，疏密有致。而经十周的紫外线辐射后，MC与VC组真皮胶原纤维含量减少，排列紊乱无规则，分布不均，断裂稀疏。经实施例1提供的药物组合物治疗后，光老化小鼠真皮胶原纤维均有一定程度的恢复。药物-L组皮肤切片可见波浪状胶原纤维，排列均匀有序，但分布稍稀疏；药物-M组与药物-H组真皮胶原纤维呈波浪状，排列整齐有序，分布均匀，其致密程度虽不及NC组与SC组，但亦比MC组VC组有显著的上升。

图3示出了小鼠皮肤胶原纤维光密度值和胶原含量，进一步地，图3A示出了Masson染色切片胶原纤维光密度值(OD)结果，Masson染色切片胶原纤维光密度值(OD)结果如图3A所示，NC组与SC的胶原纤维OD值无显著性差异(p>0.05)，提示脱毛操作对胶原纤维的密度无显著影响。MC组与SC组比较，真皮胶原纤维OD值显著降低(p<0.05)；而MC组与VC组比较，二者的胶原纤维OD值无显著性差异(p>0.05)，提示皮肤光老化模型建立成功，及溶媒对胶原纤维的密度无明显影响。与VC组比较，实施例1的药物组合物治疗能显著增加真皮胶原纤维的OD值，其中以高剂量的效果最佳，接近正常水平。上述结果表明，实施例1得到的药物组合物具有保护胶原纤维免受紫外线辐射损伤的作用。

图3B示出了胶原含量结果，NC组与SC组比较，二者的胶原含量无显著性意义(p>0.05)，同时，MC组与VC组比较，二者的胶原含量差异亦无统计学意义(p>0.05)，提示脱毛操作及溶媒对胶原含量均无明显影响。但与SC组相比较，MC组的胶原含量大约下降20％，而与VC组比较，药物-M组与药物-H组的胶原含量分别提高16.65％和17.90％。试剂盒测定胶原含量结果与上述的胶原纤维染色的观察结果基本一致，所以，实施例1的药物组合物可促进胶原的合成或抑制胶原的降解。

7.药物组合物提高光老化小鼠皮肤组织中抗氧化酶的活性

图4示出了小鼠皮肤组织中CAT(A)、GSH-Px(B)和SOD(C)活力以及MDA(D)含量的测定结果。其中：#p<0.05vs.SC组；*p<0.05vs.VC组(x±s，n＝9)。

抗氧化酶(CAT、GSH-Px和SOD)的活性是评价机体抗氧化能力的重要指标。由图4可知，NC组与SC组比较，二者抗氧化酶(CAT、GSH-Px和SOD)的活性无明显差异(p>0.05)，同时，MC组与VC组比较，二者抗氧化酶的活性亦无明显差异(p>0.05)，提示脱毛操作与溶媒均不引起抗氧化酶活性的显著变化。而与SC组比较，长期紫外线辐射导致MC组的CAT、GSH-Px和SOD活力分别下降了38.76％，23.81％和22.50％(p<0.05)，提示MC组小鼠机体内氧化应激压力显著上升，皮肤光老化模型建立成功。与VC组比较，皮肤涂布给予药物组合物治疗可显著增加抗氧化酶(CAT、GSH-Px和SOD)的活力。尤其以药物-H组的治疗效果最佳，使CAT活性提高63.01％，GSH-Px活性提高38.21％及SOD活性提高16.41％(与VC组比较，p<0.05)。上述实验结果提示，本发明提供的药物组合物能显著提升皮肤组织中抗氧化酶的活性，从而对抗紫外线辐射诱导的体内氧化应激压力的显著上升。

8.药物组合物降低光老化小鼠皮肤组织中MDA的含量

MDA是机体内脂质过氧化反应的产物，是评价体内脂质过氧化程度的重要指标。如图4D所示，NC组与SC组比较，二者间MDA含量的差异无统计学意义(p>0.05)，同时，MC组与VC组比较，二者间MDA含量的差异亦无统计学意义(p>0.05)，提示脱毛操作与溶媒对MDA的含量均无明显影响。与SC组比较，MC组与VC组的MDA含量升高了约1倍(p<0.05)，提示紫外线辐射诱导较为严重的脂质过氧化程度，本实验造模成功。相反，与VC组比较，药物组合物能显著降低MDA的含量，结果呈剂量依赖关系。其中以中高剂量药物组合物的治疗效果较优(p<0.05)。上述实验结果表明，药物组合物治疗能显著减轻紫外线辐射诱导的皮肤脂质过氧化程度。

9.药物组合物抑制光老化小鼠皮肤组织中炎症介质的过度表达

图5示出了小鼠皮肤组织中炎性因子IL-1β(A)、IL-6(B)、TNF-a(C)、COX-2(D)以及PGE2(E)含量的测定结果。其中，#p<0.05vs.SC组；*p<0.05vs.VC组(x±s，n＝9)。

如图5所示，NC组与SC组之间或MC组与VC组之间的炎症因子(IL-1β，IL-6，TNF-α，COX-2以及PGE2)含量水平相近，均无显著性差异(p>0.05)，提示脱毛操作与溶媒对炎症因子的含量均无显著影响。与SC组比较，紫外线辐射可引起MC组与VC组各类炎症因子含量的显著增加(p<0.05)。而药物组合物治疗可降低IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2以及PGE2等各种炎症因子的异常表达，其中以中高剂量的效果较好(与VC组比较，p<0.05)。上述结果提示，药物组合物能抑制与皮肤光老化相关的炎症因子的过度表达。

10.药物组合物抑制光老化小鼠皮肤组MMP-1与MMP-3的异常分泌MMPs

图6示出了小鼠皮肤组织中MMP-1(A)及MMP-3(B)含量的测定结果。其中，#p<0.05vs.SC组；*p<0.05vs.VC组(x±s，n＝9)。

MMP-1与MMP-3，是降解胶原的主要酶类，可引起皮肤的松弛和皱纹。如图6示，NC组与SC组之间或MC组与VC组之间MMP-1与MMP-3的水平均相近，均无显著性差异(p>0.05)，而与SC组比较，MC组小鼠皮肤组织中MMP-1与MMP-3的含量分别升高21.88％和30.70％(p<0.05)。上述结果提示，脱毛操作与溶媒对MMPs含量均无显著影响，且本实验皮肤光老化模型建立成功。相反，与VC组比较，虽然药物-L组MMP-1含量没有明显下降，但药物-M组与药物-H组MMP-1含量则呈显著的下降趋势(与VC组比较，p<0.05)；而药物组合物三个剂量组均可显著抑制紫外线辐射诱导的MMP-3异常分泌(与VC组比较，p<0.05)。上述实验结果表明，药物组合物能显著降低紫外线辐射诱导的MMPs的异常分泌，从而抑制胶原的过度降解。

需要说明的是，上述试验例以实施例1制得的药物组合物进行实验，相应的，发明人就实施例1-8制得的药物组合物也进行了上述的实验，证实了实施例1-8的药物组合物也具有缓解或者抵抗小鼠皮肤老化的作用。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的原料包括按重量份数计的以下组分：

玫瑰5-15份、甘草30-100份、珍珠露水草1-5份、广藿香10-40份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述原料包括按重量份数计的以下组分：

所述玫瑰8-10份、所述甘草60-65份、所述珍珠露水草2-3份、所述广藿香24-28份。

3.如权利要求1-2任一项所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括将粉碎的所述药物组合物的所述原料进行提取得到有效成分；所述提取采用的方法为CO₂超临界萃取、微波辅助萃取以及超声波辅助提取中的一种。

4.根据权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，将所述原料采用所述CO₂超临界萃取进行提取，包括：

将装有所述原料的萃取釜在CO₂超临界流体内浸泡，控制所述萃取釜中压力为24-30MPa；然后将浸泡后的物质于分离釜中进行分离，加温至35-42℃，控制所述分离釜中压力为5-7.5MPa，分离时间为1-5小时；去除CO₂得到所述有效成分。

5.根据权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，将所述原料采用所述微波辅助萃取进行提取，包括：

将混合有所述原料与乙醇的混合物置于微波萃取仪中，萃取2-4次，每次萃取时间为20-30s，得到萃取液，向所述萃取液中加入硫酸钠或者硫酸镁，去除有机溶剂，得到所述有效成分。

6.根据权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述乙醇与所述原料的比例为3-5ml/g。

7.根据权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，将所述原料采用所述超声波辅助提取进行提取，包括：

将混合有所述原料与乙醚的混合物进行超声提取2-4次；每次提取时间为20-40min，超声的频率为80-120Hz，得到提取液后去除所述提取液中的所述乙醚，得到所述有效成分。

8.根据权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述乙醚与所述原料的比例为8-12ml/g。

9.根据权利要求3-8任一项所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，还包括混合中链脂肪酸甘油酯NCT、辛普高效增溶剂SF-410以及所述有效成分。

10.权利要求1或2所述的药物组合物在制备抗皮肤衰老药物中的应用。