CN107174592A - 一种猴头菇复合多糖组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种猴头菇复合多糖组合物及其制备方法和应用。一种猴头菇复合多糖组合物，包括重量份如下的各组分：猴头菇提取物0.5‑5份、姬松茸提取物0.5‑5份、茯苓提取物0.5‑5份、中性三七多糖提取物0‑5份。本发明的猴头菇复合多糖组合物有助于免疫力低下者及肿瘤患者增强免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、大便干燥、烦躁失眠等症状，有效减轻放化疗及手术对肿瘤病人的危害，延长肿瘤病人的生存期。

Description

一种猴头菇复合多糖组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种猴头菇复合多糖组合物及其制备方法和应用。
背景技术
国际上，真菌多糖被称为“生物反应调节剂”，简称“BRM”，具有广泛的药理作用，如调节免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗溃疡、抗细菌和抗凝聚的作用，提高肝功能和解毒力，提高动物耐缺氧能力和氧的利用率，降低血液的粘稠度，增加心肌收缩力，改善心律、降血糖、镇静、镇痛、平喘、止咳、化痰等功效。多糖类化合物具有较好的生物相容性，基本无毒副作用。近年来，多糖已成为药品和保健食品研究开发的重要领域。
猴头菇作为食材，是美味菜肴。同时，猴头菇也是药材，用猴头菇这一药材制成的药品叫猴菇片，在《中华人民共和国卫生部药品标准》第15册207页有记载：“本品为猴头菇经加工制成的片剂，具有养胃和中的功效，用于胃、十二指肠溃疡及慢性胃炎的治疗。”另外，现代医学和药理学的很多研究对猴头菇多糖的药用功效概括为提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂等多种生理功能。猴头菇多糖的抗肿瘤活性，具有毒副作用小、与化疗药物联用有协同效应的特点。它的活性部分是由(1-3)键连接的主链和(1-6)键连接而成的葡聚糖。作用机理是通过增加巨噬细胞的吞噬作用，促进免疫球蛋白形成，升高白细胞，提高淋巴细胞转化率和机体本身的抗病能力。
姬松茸(Agaricus blazei Muril1)又名小松菇、巴西蘑菇，属担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，蘑菇科，蘑菇属，原产于巴西，是一种美味的食(药)用真菌。姬松茸香嫩可口、鲜甜味美，糖类、蛋白质、维生素以及矿质营养元素等物质的含量较高，作为一种食品，备受人们的欢迎。姬松茸子实体中蛋白质和多糖含量为香菇的2倍以上，是一种含糖质和蛋白质非常丰富的食用菌，近年来研究发现，姬松茸具有抑制肿瘤细胞的生长、抗肿瘤、降血糖、改善糖尿病、降胆固醇、改善动脉硬化的作用。姬松茸多糖具有螺旋状的三维立体结构，是一种β型的葡聚糖。此类多糖进入人体后不会被消化系统消化、分解。而是直接作用于细胞膜上的受体，使其发生药理作用。第39届日本癌症学会总会发表的临床医学报告显示姬松茸多糖能抑制过高的免疫机能，令免疫系统长期保持最佳状态。所以姬松茸多糖也被视为有一种强而有力抵抗过滤性病毒的物质，可以预防病毒和有害物质进入身体脆弱的组织中。值得一提的是，姬松茸多糖在那些无法进行手术也无法使用放射或化学疗法的情况下，它也同样有效。日本三重大学部同风本文博士用15种食用菌的多糖喂养小鼠，进行抗癌实验结果，姬松茸多糖的痊愈率90.10％，阻止率为99.4％，抗癌效果在15种真菌里的居首位。
茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。茯苓多糖为我国传统中药茯苓的主要有效成分，具有抗肿瘤、抗病毒、增强机体免疫力、抗氧化、降血糖血脂、保肝、催眠等作用，可用于医疗、保健等领域，具有广阔的开发应用前景茯苓多糖的免疫调节作用。其不仅能够提高非特异性免疫系统功能。而且能够提高特异性免疫系统功能。能特异地增强小鼠对致敏红细胞的体液免疫反应性和小鼠免疫应答早期免疫活性细胞的反应性。近年来的研究表明。茯苓多糖能诱导和促进多种细胞因子的产生。这些因子可能是其发挥药物效应的分子介质。茯苓多糖具有显著的抗肿瘤活性，对小鼠Sm肉瘤细胞和小鼠艾氏腹水癌(EAC)以及肝癌H22瘤株有明显的抑制作用。对人慢性骨髓性白血病K细胞的增殖有明显的抑制作用。对s和EAC瘤株的抑制作用与口服5-Fu相似。有些实验还显示出了茯苓多糖对肿瘤细胞的直接杀伤作用，与抗肿瘤药物或放射疗法合用可增强其疗效和降低毒副作用。茯苓多糖能显著降低动物体内自由基水平，提高动物体内自由清除酶的活力，提高动物耐寒和抗疲劳能力，说明茯苓多糖具有较好的抗衰老作用。专利CN201510356086.6公开一种养胃的猴头菇复合制剂，其含有猴头菇提取物、蜂胶提取物、蒲公英提取物、香菇提取物、白术提取物、三七提取物、百合提取物、砂仁提取物、白芍提取物、黄芪提取物、海参粉、壳聚糖、低聚木糖、蛋黄粉、大豆蛋白粉。专利CN 201410317140.1公开了一种复方姬松茸多糖组合物及其应用，它是由姬松茸5-15份，黄芪15-45份，黄芩5-18份，香菇10-38份，板蓝根10-30份，金银花10-20份，甘草10-35份的中药材组成。专利CN 201210439373.X公开了一种复方茯苓的制剂，组成该制剂的活性成分及其重量含量是：银杏叶提取物40-80％、茯苓提取物25-50％、乳酸亚铁1-10％，余为辅料。但将猴头菇、姬松茸和茯苓组合复配的技术还没有报道。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种猴头菇复合多糖组合物及其制备方法和应用，有助于免疫力低下者及肿瘤患者增强免疫力。
本发明提供了如下的技术方案：
一种猴头菇复合多糖组合物，包括重量份如下的各组分：猴头菇提取物0.5-5份、姬松茸提取物0.5-5份、茯苓提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0-5份。
在上述方案中优选的是，包括重量份如下的各组分：猴头菇提取物0.5-5份、姬松茸提取物0.5-5份、茯苓提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0.5-5份。
在上述方案中优选的是，包括重量份如下的各组分：猴头菇提取物4.5份、姬松茸提取物1份、茯苓提取物0.5份。
在上述方案中优选的是，括重量份如下的各组分：猴头菇提取物4.5份、姬松茸提取物1份、茯苓提取物0.5份、中性三七多糖提取物0.5份。
在上述任一方案中优选的是，剂量为6克，猴头菇提取物0.5-5克、姬松茸提取物0.5-5克、茯苓提取物0.5-5克、中性三七多糖提取物0-5克。
在上述任一方案中优选的是，剂量为6.5克，猴头菇提取物0.5-5克、姬松茸提取物0.5-5克、茯苓提取物0.5-5克、中性三七多糖提取物0.5-5克。
在上述任一方案中优选的是，剂量为6克，猴头菇提取物4.5克、姬松茸提取物1克、茯苓提取物0.5克。
在上述任一方案中优选的是，剂量为6.5克，猴头菇提取物4.5克、姬松茸提取物1克、茯苓提取物0.5克、中性三七多糖提取物0.5克。
在上述任一方案中优选的是，还包括辅料。
在上述任一方案中优选的是，所述猴头菇提取物的提取率为8-13％，所述姬松茸提取物的提取率为14-16％，所述茯苓提取物的提取率为0.5-0.7％，所述中性三七多糖提取物收率为0.32-0.42％。
在上述任一方案中优选的是，所述猴头菇提取物中猴头菇多糖的含量为29-35％，所述姬松茸提取物中姬松茸多糖的含量为16-18％，所述茯苓提取物中茯苓多糖的含量为40-42％，所述中性三七多糖提取物中的中性三七多糖含量为80-94％。
在上述任一方案中优选的是，所述猴头菇提取物的提取方法：将猴头菇粉碎，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入5-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述猴头菇提取物的提取方法：将猴头菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物。
在上述任一方案中优选的是，硫酸-蒽酮法测定所述猴头菇提取物中，猴头菇多糖的含量为29.79％。
在上述任一方案中优选的是，所述姬松茸提取物的提取方法：称取姬松茸，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入7-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入6-7倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述姬松茸提取物的提取方法：称取姬松茸，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物。
在上述任一方案中优选的是，硫酸-蒽酮法测定所述姬松茸提取物中，姬松茸多糖的含量为16.25％。
在上述任一方案中优选的是，所述茯苓提取物的提取方法：称取茯苓，加入9-11倍量水浸泡11-13小时，回流提取7-8h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取4-6h，滤除溶液，药材再加入2-4倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述茯苓提取物的提取方法：称取茯苓，加入10倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入3倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物。
在上述任一方案中优选的是，硫酸-蒽酮法测定所述茯苓提取物中，茯苓多糖的含量为40.62％。
在上述任一方案中优选的是，所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入9-11倍量水，沸水浴煮5-9h，收集滤液，第二次加入4-6倍量水，沸水浴5-9h，合并两次滤液，4000-5000rpm离心4-6min，取上清，70-90℃旋转浓缩至原体积的1/9-1/7，静置22-26h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，40-60℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成28-32mg/mL，4000-5000rpm离心8-12min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(3)用水洗脱，洗脱4-6倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/11-1/9的体积；
(4)将步骤(3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析35-37h，每3-5h换一次水；
(5)步骤(4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
在上述任一方案中优选的是，所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h，合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清，80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(3)用水洗脱，洗脱5倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/10的体积；
(4)将步骤(3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水；
(5)步骤(4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
在上述任一方案中优选的是，硫酸-蒽酮法测定所述中性三七多糖提取物中，中性三七多糖的含量为93.6％。
在上述任一方案中优选的是，所述猴头菇复合多糖组合物可加入或不加辅料制备成口服剂型。
在上述任一方案中优选的是，所述口服剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
本发明还提供所述的猴头菇复合多糖组合物的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述猴头菇提取物的提取方法和猴头菇多糖的含量测定：将猴头菇粉碎，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入5-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物，硫酸-蒽酮法测定猴头菇多糖的含量；
(2)所述姬松茸提取物的提取方法和姬松茸多糖的含量测定：称取姬松茸，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入7-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入6-7倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物，硫酸-蒽酮法测定姬松茸多糖的含量；
(3)所述茯苓提取物的提取方法和茯苓多糖的含量测定：称取茯苓，加入9-11倍量水浸泡11-13小时，回流提取7-8h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取4-6h，滤除溶液，药材再加入2-4倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物，硫酸-蒽酮法测定姬松茸多糖的含量；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入9-11倍量水，沸水浴煮5-9h，收集滤液，第二次加入4-6倍量水，沸水浴5-9h，合并两次滤液，4000-5000rpm离心4-6min，取上清，70-90℃旋转浓缩至原体积的1/9-1/7，静置22-26h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，40-60℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(4.2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成28-32mg/mL，4000-5000rpm离心8-12min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(4.3)用水洗脱，洗脱4-6倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/11-1/9的体积；
(4.4)将步骤(4.3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析35-37h，每3-5h换一次水；
(4.5)步骤(4.4)得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物；
(5)将所述猴头菇提取物、姬松茸提取物、茯苓提取物、所述中性三七多糖提取物混合得所述的猴头菇复合多糖组合物。
在上述任一方案中优选的是，步骤(1)中，所述猴头菇提取物的提取方法：将猴头菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，所述姬松茸提取物的提取方法：称取姬松茸，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中，所述茯苓提取物的提取方法：称取茯苓，加入10倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入3倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物。
在上述任一方案中优选的是，步骤(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h，合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清，80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
(4.2)利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
(4.3)用水洗脱，洗脱5倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/10的体积；
(4.4)将步骤(4.3)浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水；
(4.5)将步骤(4.4)得到的洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物。
本发明所述的猴头菇复合多糖组合物用于增强免疫力低下者或肿瘤患者免疫力的药物的制备。
本发明1袋复方猴头菇多糖组合物中三种多糖提取物单剂量为6g，人口服推荐用量为：一天2-3次，一次1-2袋。或剂量为6.5g，人口服推荐用量为：一天2-3次，一次1-2袋。
本发明的猴头菇复合多糖组合物有助于免疫力低下者及肿瘤患者增强免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、大便干燥、烦躁失眠等症状，有效减轻放化疗及手术对肿瘤病人的危害，延长肿瘤病人的生存期。
附图说明
图1是本发明一种猴头菇复合多糖组合物及其制备方法和应用的一优选实施例的中的中性三七多糖的高效凝胶渗透色谱图。
具体实施方式
为了进一步了解本发明的技术特征，下面结合具体实施例对本发明进行详细地阐述。实施例只对本发明具有示例性的作用，而不具有任何限制性的作用，本领域的技术人员在本发明的基础上做出的任何非实质性的修改，都应属于本发明的保护范围。
本发明中使用的提取过三七总皂苷的废渣即三七总皂苷废渣，包括采用任何方式提取三七总皂苷后得到的废渣，也可以从提取三七总皂苷的原料药厂得到。实施例1：猴头菇复合多糖颗粒剂
包括：
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
本实施例猴头菇复合多糖颗粒剂的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述猴头菇提取物的提取方法：将猴头菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物。所述猴头菇提取物的提取率为12.69％，硫酸-蒽酮法测定所述猴头菇提取物中猴头菇多糖的含量为29.79％；
(2)所述姬松茸提取物的提取方法：称取姬松茸，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物。所述姬松茸提取物的提取率为14.36％，硫酸-蒽酮法测定所述姬松茸提取物中姬松茸多糖的含量为16.25％；
(3)所述茯苓提取物的提取方法：称取茯苓，加入10倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入3倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入3倍95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物。所述茯苓提取物的提取率为0.70％，硫酸-蒽酮法测定所述茯苓提取物中茯苓多糖的含量为40.62％；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)三七粗多糖的提取：称取提取过三七总皂苷的废渣1kg，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h。合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清。80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入三倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入三倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖。
(4.2)DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化粗多糖
(4.2.1)装柱：湿法装柱，柱子塞入棉花，柱内加入蒸馏水并保持一小段液位，玻璃棒按压棉花祛除气泡。用玻璃棒引导匀浆沿柱内壁缓慢倒入柱内，不能产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，用水清洗层析柱边沿。装柱时不能有断层，然后用蒸馏水平衡，柱规格为2.4×40cm。
(4.2.2)上样：三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液0.45μm滤头过滤，上样。上样时，将层析柱出液口打开，待蒸馏水下移至柱床表面时，关闭出液口，用滴管沿柱内壁加入三七多糖溶液，打开出液口，让样品液全部流入柱子内部，并用少量蒸馏水冲洗柱内壁，然后行洗脱。
(4.2.3)洗脱：用水洗脱，洗脱约5倍柱体积，流速为0.8mL/min，每管接2mL，减压浓缩至1/10的体积。
(4.2.4)透析：把透析袋剪成每段约10cm，放于蒸馏水中煮沸30min，洗三遍后再煮沸10min，蒸馏水洗干净。透析袋可以使用三次，第二次用2％NaHCO3和1mmol/L EDTA煮沸后清洗。分别将浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，约1/2体积，用透析夹夹紧透析袋两端，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水。
(4.2.5)冷冻干燥：将洗脱液收集于50mL离心管，装约16mL，-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机36h，取出后加入约1mL蒸馏水溶解，摇匀。-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机24h。取出后封口于干燥器中保存。蒽酮-硫酸法测定中性三七多糖PNPS I，PNPS I(中性多糖)含量93.6％，中性三七多糖提取物得率0.42％，中性三七多糖PNPS I高效凝胶渗透色谱图如图1所示；高效凝胶渗透色谱测得数均分子量为11170，重均分子量为31590，多分散性系数D(Mw/Mn)为2.828。
(5)所述猴头菇提取物、所述姬松茸提取物、所述茯苓提取物、中性三七多糖提取物混合，加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
本实施例的制备方法中，得到的中性三七多糖，采用MTT法测定中性三七多糖对人牙周膜干细胞体外增殖的影响
采用常规细胞培养法培养细胞。取7代对数生长期的人牙周膜干细胞，计数后调细胞浓度，接种于96孔板，100个/孔，每孔90μl，CO2培养箱培养12小时后分别加中性三七多糖(PNPS I)以及三七粗多糖溶液各10μl，使作用于细胞的终浓度为6.72mg/ml、4.48mg/ml、2.24mg/ml、1.12mg/ml、560ug/ml、280ug/ml、140ug/ml、70ug/ml，每个浓度设6个平行孔，阴性对照为等体积MEM-ALPHA培养液，加生理盐水10μl。48小时后，加MTT溶液(5mg/ml)20μl每孔，继续培养4小时，每孔加入150μlDMSO充分溶解，用酶标仪测定各孔的A570值。计算不同浓度的A570的OD值，实验结果见表1：
表1三七多糖对人牙周膜干细胞体外增殖的影响实验结果(n＝6)
注：*P<0.05；**P<0.01
由表1中数据可知，中性三七多糖PNPSⅠ在浓度35～1120ug/ml，对人牙周膜干细胞具有明显的增殖促进作用；相对于三七粗多糖，中性三七多糖PNPSⅠ对人牙周膜干细胞的增殖促进作用更为显著。
实施例2：猴头菇复合多糖片剂
包括：
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，压片，包薄膜衣，分装12000片，100片/瓶。
本实施例猴头菇复合多糖颗粒剂的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述猴头菇提取物的提取方法：将猴头菇粉碎，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.06，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物。所述猴头菇提取物的提取率为12.69％，硫酸-蒽酮法测定所述猴头菇提取物中猴头菇多糖的含量为29.79％；
(2)所述姬松茸提取物的提取方法：称取姬松茸，加入12倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物。所述姬松茸提取物的提取率为14.36％，硫酸-蒽酮法测定所述姬松茸提取物中姬松茸多糖的含量为16.25％；
(3)所述茯苓提取物的提取方法：称取茯苓，加入10倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入3倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.06，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物。所述茯苓提取物的提取率为0.70％，硫酸-蒽酮法测定所述茯苓提取物中茯苓多糖的含量为40.62％；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)三七粗多糖的提取：称取提取过三七总皂苷的废渣1kg，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h。合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清。80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入三倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入三倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖。
(4.2)DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化粗多糖
(4.2.1)装柱：湿法装柱，柱子塞入棉花，柱内加入蒸馏水并保持一小段液位，玻璃棒按压棉花祛除气泡。用玻璃棒引导匀浆沿柱内壁缓慢倒入柱内，不能产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，用水清洗层析柱边沿。装柱时不能有断层，然后用蒸馏水平衡，柱规格为2.4×40cm。
(4.2.2)上样：三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液0.45μm滤头过滤，上样。上样时，将层析柱出液口打开，待蒸馏水下移至柱床表面时，关闭出液口，用滴管沿柱内壁加入三七多糖溶液，打开出液口，让样品液全部流入柱子内部，并用少量蒸馏水冲洗柱内壁，然后行洗脱。
(4.2.3)洗脱：用水洗脱，洗脱约5倍柱体积，流速为0.8mL/min，每管接2mL，减压浓缩至1/10的体积。
(4.2.4)透析：把透析袋剪成每段约10cm，放于蒸馏水中煮沸30min，洗三遍后再煮沸10min，蒸馏水洗干净。透析袋可以使用三次，第二次用2％NaHCO3和1mmol/L EDTA煮沸后清洗。分别将浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，约1/2体积，用透析夹夹紧透析袋两端，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水。
(4.2.5)冷冻干燥：将洗脱液收集于50mL离心管，装约16mL，-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机36h，取出后加入约1mL蒸馏水溶解，摇匀。-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机24h。取出后封口于干燥器中保存。蒽酮-硫酸法测定中性三七多糖PNPS I，PNPS I(中性多糖)含量93.6％，中性三七多糖提取物得率0.42％，高效凝胶渗透色谱测得数均分子量为11170，重均分子量为31590，多分散性系数D(Mw/Mn)为2.828。
(5)所述猴头菇提取物、所述姬松茸提取物、所述茯苓提取物、所述中性三七多糖提取物混合，加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，压片，包薄膜衣，分装12000片，100片/瓶。
实施例3：猴头菇复合多糖颗粒剂
包括：
猴头菇提取物 0.5kg
姬松茸提取物 5.0kg
茯苓提取物 0.5kg
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
本实施例猴头菇复合多糖颗粒剂的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述猴头菇提取物的提取方法：将猴头菇粉碎，加入16倍量水浸泡11小时，回流提取5h，滤除溶液，药材再加入14倍量的水回流提取2h，滤除溶液，药材再加入4倍量的水回流提取2h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.04，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为20h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物。所述猴头菇提取物的提取率为12.69％，硫酸-蒽酮法测定所述猴头菇提取物中猴头菇多糖的含量为29.79％；
(2)所述姬松茸提取物的提取方法：称取姬松茸，加入16倍量水浸泡11小时，回流提取5h，滤除溶液，药材再加入14倍量的水回流提取2h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取2h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物。所述姬松茸提取物的提取率为14.36％，硫酸-蒽酮法测定所述姬松茸提取物中姬松茸多糖的含量为16.25％；
(3)所述茯苓提取物的提取方法：称取茯苓，加入9倍量水浸泡11小时，回流提取7h，滤除溶液，药材再加入4倍量的水回流提取6h，滤除溶液，药材再加入2倍量的水回流提取2h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为20h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物。所述茯苓提取物的提取率为0.52％，硫酸-蒽酮法测定所述茯苓提取物中茯苓多糖的含量为40.62％；
(4)所述猴头菇提取物、所述姬松茸提取物和所述茯苓提取物混合，加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
实施例4：猴头菇复合多糖颗粒剂
包括：
加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
本实施例猴头菇复合多糖颗粒剂的制备方法，包括以下各步骤：
(1)所述猴头菇提取物的提取方法：将猴头菇粉碎，加入12倍量水浸泡13小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.08，加入95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物。所述猴头菇提取物的提取率为12.69％，硫酸-蒽酮法测定所述猴头菇提取物中猴头菇多糖的含量为29.79％；
(2)所述姬松茸提取物的提取方法：称取姬松茸，加入12倍量水浸泡13小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入7倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物。所述姬松茸提取物的提取率为14.36％，硫酸-蒽酮法测定所述姬松茸提取物中姬松茸多糖的含量为16.25％；
(3)所述茯苓提取物的提取方法：称取茯苓，加入11倍量水浸泡13小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入6倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入4倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.08，加入95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物。所述茯苓提取物的提取率为0.7％，硫酸-蒽酮法测定所述茯苓提取物中茯苓多糖的含量为42.62％；
(4)所述中性三七多糖提取物的提取方法：
(4.1)三七粗多糖的提取：称取提取过三七总皂苷的废渣1kg，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h。合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清。80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入三倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入三倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖。
(4.2)DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化粗多糖
(4.2.1)装柱：湿法装柱，柱子塞入棉花，柱内加入蒸馏水并保持一小段液位，玻璃棒按压棉花祛除气泡。用玻璃棒引导匀浆沿柱内壁缓慢倒入柱内，不能产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，用水清洗层析柱边沿。装柱时不能有断层，然后用蒸馏水平衡，柱规格为2.4×40cm。
(4.2.2)上样：三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液0.45μm滤头过滤，上样。上样时，将层析柱出液口打开，待蒸馏水下移至柱床表面时，关闭出液口，用滴管沿柱内壁加入三七多糖溶液，打开出液口，让样品液全部流入柱子内部，并用少量蒸馏水冲洗柱内壁，然后行洗脱。
(4.2.3)洗脱：用水洗脱，洗脱约5倍柱体积，流速为0.8mL/min，每管接2mL，减压浓缩至1/10的体积。
(4.2.4)透析：把透析袋剪成每段约10cm，放于蒸馏水中煮沸30min，洗三遍后再煮沸10min，蒸馏水洗干净。透析袋可以使用三次，第二次用2％NaHCO3和1mmol/L EDTA煮沸后清洗。分别将浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，约1/2体积，用透析夹夹紧透析袋两端，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水。
(4.2.5)冷冻干燥：将洗脱液收集于50mL离心管，装约16mL，-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机36h，取出后加入约1mL蒸馏水溶解，摇匀。-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机24h。取出后封口于干燥器中保存。蒽酮-硫酸法测定中性三七多糖PNPS I，PNPS I(中性多糖)含量93.6％，中性三七多糖提取物得率0.42％，高效凝胶渗透色谱测得数均分子量为11170，重均分子量为31590，多分散性系数D(Mw/Mn)为2.828。
(5)所述猴头菇提取物、所述姬松茸提取物、所述茯苓提取物、所述中性三七多糖提取物混合，加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。
实验例1：猴头菇复合多糖组合物肿瘤患者免疫功能及生存质量的影响
1资料与方法
1.1一般资料
选择36例2013年6月一2014年6月肿瘤患者作为研究对象，男性患者18例，女性患者18例，年龄18～75岁，平均年龄(65.2±5.3)岁。所有患者经病理组织学或细胞学检查均确诊为晚期恶性肿瘤，诊断标准参照《常见恶性肿瘤诊治规范》中的相关规定，并依据国际抗癌联盟(UICC)临床分期，治疗前所有患者的卡氏评分均≥60分，其中8例患者为胃癌，7例患者为肝癌，7例患者为肺癌，6例患者为大肠癌，2例患者为乳腺癌，4例患者为胰腺癌，2例患者为膀胱癌。
1.2方法
所有患者随机分为3组，观察组12人，对照组1 12人，对照组2 12人。
观察组予实施例1的猴头菇复合多糖组合物(1袋6.5克，其中猴头菇提取物4.5g、姬松茸提取物1g、茯苓提取物0.5g、中性三七多糖0.5g)早晚各1次，一次2袋，连服3周。
对照组1为猴头菇复合多糖组合物(1袋6.5克，其中猴头菇提取物6.2g、姬松茸提取物0.1g，茯苓提取物0.1g、中性三七多糖0.1g，制备方法与实施例1相同)早晚各1次，一次2袋，连服3周。
对照组2为猴头菇复合多糖组合物(1袋6.5克，其中猴头菇提取物3g、姬松茸提取物3g、茯苓提取物0.5g，制备方法与实施例1相同)早晚各1次，一次2袋，连服3周。
治疗结束后对患者治疗前后的免疫功能变化和生存质量进行观察和比较。
1.3疗效评价标准
疗效以临床症状缓解情况进行评价：治疗后疼痛消失为显著缓解；与治疗前相比疼痛有明显减轻为部分缓解；与治疗前相比疼痛减轻但疼痛仍明显为轻度缓解；与治疗前相比疼痛无减轻为无效。缓解有效率＝[(显著缓解+部分缓解)/总例数]×100％。
1.4统计学方法
采用SPSS17.0统计软件对统计所得的具体数据进行分析，所有计量资料用均t检
验，所有计量资料用均数±标准差表示，计数资料比较采用t检验，如果P<0.05，则表示结果有统计学意义。
2结果
2.1 36例患者治疗前后免疫功能变化情况比较分析
患者治疗前后免疫功能变化情况见表1，由表中数据可知，实施例1治疗后患者外周血中的T细胞亚群CD3、CD4与治疗前相比均有显著的提高(P<0.05)，CD8与治疗前相比无显著变化(P>0.05)，而NK细胞比例有显著的提高(P<0.05)。
表1患者治疗前后免疫功能变化情况比较
*与治疗前比较，P＜0.05
2.2 36例患者治疗前后生活质量变化情况比较分析
患者治疗前后KPS评分、体重变化情况见表2，由表中数据可知，实施例1治疗前后患者的体重无显著变化(P>0.05)，而KPS评分有了显著的提高(P<0.05)。
表2患者治疗前后KPS评分、体重变化情况比较
*与治疗前比较，P＜0.05
3疗效
表3患者治疗后疗效结果
4结论
在本次研究中，实施例1治疗后患者外周血中的T细胞亚群CD3、CD4、NK与治疗前相比均有显著的提高，CD8与治疗前相比无显著变化(P>0.05)。另外，患者食少纳呆、心悸自汗、疲倦乏力、气短懒言等临床症状缓解有效率分别为79.5％、79.9％、83.0％、79.8％。由此可见通过猴头菇复合多糖组合物治疗，患者的免疫功能和生活质量均有了显著提高，不仅能够提高患者的免疫功能，同时还能有效改善患者食少纳呆、心悸自汗、疲倦乏力、气短懒言等临床症状，提高患者的生存质量。

Claims (10)

1.一种猴头菇复合多糖组合物，包括重量份如下的各组分：猴头菇提取物0.5-5份、姬松茸提取物0.5-5份、茯苓提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0-5份。
2.根据权利要求1所述的猴头菇复合多糖组合物，其特征在于：包括重量份如下的各组分：猴头菇提取物0.5-5份、姬松茸提取物0.5-5份、茯苓提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0.5-5份。
3.根据权利要求1所述的猴头菇复合多糖组合物，其特征在于：包括重量份如下的各组分：猴头菇提取物4.5份、姬松茸提取物1份、茯苓提取物0.5份。
4.根据权利要求1所述的猴头菇复合多糖组合物，其特征在于：包括重量份如下的各组分：猴头菇提取物4.5份、姬松茸提取物1份、茯苓提取物0.5份、中性三七多糖提取物0.5份。
5.根据权利要求1所述的猴头菇复合多糖组合物，其特征在于：剂量为6克，猴头菇提取物0.5-5克、姬松茸提取物0.5-5克、茯苓提取物0.5-5克、中性三七多糖提取物0-5克。
6.根据权利要求1所述的猴头菇复合多糖组合物，其特征在于：剂量为6.5克，猴头菇提取物0.5-5克、姬松茸提取物0.5-5克、茯苓提取物0.5-5克、中性三七多糖提取物0.5-5克。
7.根据权利要求1所述的猴头菇复合多糖组合物，其特征在于：剂量为6克，猴头菇提取物4.5克、姬松茸提取物1克、茯苓提取物0.5克。
8.根据权利要求1所述的猴头菇复合多糖组合物，其特征在于：剂量为6.5克，猴头菇提取物4.5克、姬松茸提取物1克、茯苓提取物0.5克、中性三七多糖提取物0.5克。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的猴头菇复合多糖组合物的制备方法，包括以下各步骤：
（1）所述猴头菇提取物的提取方法：将猴头菇粉碎，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入5-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.04-1.08，加入95%乙醇至含醇量75%，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述猴头菇提取物；
（2）所述姬松茸提取物的提取方法：称取姬松茸，加入12-16倍量水浸泡11-13小时，回流提取5-8h，滤除溶液，药材再加入7-14倍量的水回流提取2-4h，滤除溶液，药材再加入6-7倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95%乙醇至乙醇量为75%，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述姬松茸提取物；
（3）所述茯苓提取物的提取方法：称取茯苓，加入9-11倍量水浸泡11-13小时，回流提取7-8h，滤除溶液，药材再加入4-6倍量的水回流提取4-6h，滤除溶液，药材再加入2-4倍量的水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至相对密度为1.04-1.08，加入95%乙醇至乙醇量为75%，醇沉时间为20-26h，抽去上清液得沉淀并干燥，得所述茯苓提取物；
（4）所述中性三七多糖提取物的提取方法：
（4.1）提取过三七总皂苷的废渣，第一次加入9-11倍量水，沸水浴煮5-9h，收集滤液，第二次加入4-6倍量水，沸水浴5-9h，合并两次滤液，4000-5000rpm离心4-6min，取上清，70-90℃旋转浓缩至原体积的1/9-1/7，静置22-26h，离心，弃沉淀，缓慢加入3倍无水乙醇，边加边搅拌，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀，75%乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入3倍无水乙醇，3-5℃放置10-14h，抽滤得沉淀，75%乙醇洗涤沉淀，40-60℃烘箱烘干，即得三七粗多糖；
（4.2）利用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化所述三七粗多糖，将所述三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成28-32mg/mL，4000-5000rpm离心8-12min，上清液用0.45μm滤头过滤，上样；
（4.3）用水洗脱，洗脱4-6倍柱体积，流速为0.8mL/min，接洗脱液，减压浓缩至1/11-1/9的体积；
（4.4）将步骤（4.3）浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，放于蒸馏水中透析35-37h，每3-5h换一次水；
（4.5）步骤（4.4）得到的将洗脱液冷冻干燥得所述中性三七多糖提取物；
（5）将所述猴头菇提取物、姬松茸提取物、茯苓提取物、所述中性三七多糖提取物混合得所述的猴头菇复合多糖组合物。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的猴头菇复合多糖组合物用于增强免疫力低下者或肿瘤患者免疫力的药物的制备。
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