CN107164254B - 微生物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提出了一种微生物及其用途和获得番茄红素的方法，该微生物过表达包括选自tHMG1，BtCarG，PaCrtB，McCrtI，INO2，yap1，spt15‑5，taf25‑3，GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB，ADH2，ACS6，ALD6，EUTE，ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8基因的至少之一；以及沉默包括选自GAL1，GAL7，GAL10，GAL80，ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Yjl064W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一。利用根据本发明实施例的微生物，生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。

Description

微生物及其用途

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体的，本发明涉及微生物及其用途，更具体的，本发明涉及微生物、获得番茄红素的方法和微生物在制备番茄红素中的用途。

背景技术

番茄红素的开发生产主要有天然产物提取、化学合成、微生物发酵等方法。天然产物提取主要是通过成熟果实的萃取纯化获得番茄红素，然而这种生产方式受气候、品种、地理位置、成熟度等诸多不可控因素影响，具有明显的季节性，含量不稳定性，并且大面积种植、养殖的成本较高，含量通常也比较低。另外，高纯度的番茄红素在萃取纯化技术上非常困难，这些共同造成了番茄红素的成品十分昂贵。化学合成法具有原料易得价廉、反应条件温和、反应速率快、产物容易与反应体系分离的优点，但由于双键立体选择性难以控制及不同程度的化学试剂残留，其产品的质量、安全性及使用范围都受到了限制。微生物发酵法主要是利用微生物的生物代谢，将葡萄糖、淀粉、黄豆饼粉等廉价原料转化为番茄红素，这种方法不受季节、地域、气候等因素的影响，原料易获取、生产周期短、工艺操作简单、成本低廉、产物质量可控、产物易纯化、安全性高，并且环境污染较少，不仅解决了因种植植物等而占用大量耕地的问题，也解决了化学合成不环保的弊端。最重要的是，发酵法生产的番茄红素属于天然型产品，其活性与天然植物提取的活性成分一致，被认为是番茄红素生产最有前景的方法。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

目前研究较多的番茄红素产生菌的主要是三孢布拉氏霉菌。但是三孢布拉氏霉菌在传代过程中容易发生退化现象，使得番茄红素产量减少，另伴有黄曲霉毒素等有毒成分的合成，另一方面，这两种微生物的生长周期相较于酵母和大肠杆菌较长，大大降低了其生产效率，从而造成了生产番茄红素的难度加大。

为此，本发明的一个目的在于提出了一种微生物，该微生物生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种微生物。根据本发明的实施例，所述微生物过表达包括选自tHMG1，BtCarG，PaCrtB，McCrtI，INO2，yap1，spt15-5，taf25-3，GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB，ADH2，ACS6，ALD6，EUTE，ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8基因的至少之一；以及沉默包括选自GAL1，GAL7，GAL10，GAL80，ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Yjl064W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一。利用根据本发明实施例的微生物，生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。

根据本发明的实施例，上述微生物还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述微生物是酵母菌。酵母菌的生长周期短，利用本发明实施例的微生物生产番茄红素的效率进一步提高。

根据本发明的实施例，所述微生物进一步包括可操作调控ERG9基因。根据本发明的实施例，所述可操作调控ERG9基因包括但不限于替换ERG9基因的启动子，进而使得ERG9基因的表达可以根据需要进行调控，使微生物生产番茄红素的效率进一步提高。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种获得番茄红素的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将前面所述的微生物进行发酵处理；以及将发酵处理产物进行萃取处理，以便获得所述番茄红素。利用根据本发明实施例的获得番茄红素的方法，能够高产量、高效率获得番茄红素，且番茄红素的纯度高。

根据本发明的实施例，上述获得番茄红素的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，利用根据本发明实施例的获得番茄红素的方法，获得的番茄红素产量更高、效率更高，纯度也更高。

根据本发明的实施例，所述发酵处理是通过如下方式实现的：将所述微生物进行基础发酵处理和两级分批补料发酵处理，所述基础发酵处理是在基本发酵培养基中进行的，所述两级分批补料发酵处理是通过在所述基本发酵培养基基础上依次补加第一补料培养基和第二补料培养基实现的，其中，所述基本发酵培养基为含有2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.8％KH₂PO₄和2％葡萄糖的YPD含盐培养基；所述第一补料培养基为含有500g/L葡萄糖，5g/L MgSO4，3.5g/L K₂SO₄，0.28g/L Na₂SO₄和10g/L酵母提取物的YPD含盐培养基；所述第二补料培养基为乙醇或甘油。发明人通过实验发现，采用上述发酵处理方式，微生物的扩增速率高、番茄红素的产率也进一步提高。

根据本发明的实施例，所述萃取处理包括：将所述发酵处理产物进行超声破碎处理及有机萃取处理。发明人对发酵产物进行萃取处理过程中发现，将发酵处理后产物进行超声破碎处理，相比于采用盐酸蒸煮的方法，番茄红素的降解大幅降低，萃取处理后获得的番茄红素的产量进一步提高。

在本发明的第三方面，本发明提出了前面所述微生物在制备番茄红素中的用途。如前所述，利用本发明实施例的微生物，生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。

附图说明

图1是根据本发明实施例1的敲除盒片段1的结构示意图；

图2是根据本发明实施例1的敲除盒片段2的结构示意图；

图3是根据本发明实施例1的敲除盒片段3的结构示意图；

图4是在敲除GAL1/7/10和GAL1/7/10/80的菌株中的不同启动子的强度；

图5是第二代工程菌株摇瓶发酵结果；

图6是根据本发明实施例4的敲除盒片段4的结构示意图；以及

图7是根据本发明实施例的发酵培养基的筛选结果图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

微生物

在本发明的第一方面，本发明提出了一种微生物。根据本发明的实施例，该微生物过表达包括选自tHMG1，BtCarG，PaCrtB，McCrtI，INO2，yap1，spt15-5，taf25-3，GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB，ADH2，ACS6，ALD6，EUTE，ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8基因的至少之一；以及沉默包括选自GAL1，GAL7，GAL10，GAL80，ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Yjl064W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一。利用根据本发明实施例的微生物，生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。

本申请所述的微生物用于生产番茄红素，相比于现有技术，其产量得到了显著提高，能够至少达到2g/L。

根据本发明的具体实施例，所述微生物还可以进一步包括可操作调控ERG9基因。本申请所述的可操作调控ERG9基因是指替换ERG原始的启动子，从而实现通过葡萄糖调控ERG9的表达，从而增加番茄红素的产量。

需要说明的是，发明人通过实验，发现：表达BtCarG，PaCrtB，McCrtI基因能够达到在酵母体内高效合成番茄红素的目的；沉默GAL1，7，10或GAL1，7，10，80能够达到利用半乳糖诱导或利用葡萄糖浓度调节生产番茄红素的目的；表达INO2，yap1，spt15-5，taf25-3基因是抗逆基因，可以增加番茄红素的产量；表达GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB中的一个或多个基因能够平衡酵母体内的还原力，可以增加番茄红素的产量；表达ADH2，ACS2，ALD6，EUTE中的一个或多个基因能够增加合成番茄红素的前体物质的供应，增加番茄红素的产量；表达ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8中的一个或多个基因，能够平衡有关番茄红素合成中的MVA途径，增加番茄红素的产量；沉默ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Yjl064W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一，能够从整体上调节酵母系统，从而增加番茄红素的产量。利用根据本发明实施例的微生物，番茄红素的产量得到显著提高。

获得番茄红素的方法

在本发明的第二方面，本发明提出了一种获得番茄红素的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将前面所述的微生物进行发酵处理；以及将发酵处理产物进行萃取处理，以便获得所述番茄红素。利用根据本发明实施例的获得番茄红素的方法，能够高产量、高效率获得番茄红素，且番茄红素的纯度高。

根据本发明的具体实施例，所述发酵处理是通过基础发酵处理和两级分批补料发酵处理进行的，具体如下所述：

将保种管从-80度冰箱中取出放置冰上解冻，然后划YPD平板，于30度培养箱中培养，然后挑取单克隆至含5mL基本发酵培养基(为包含2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.8％KH₂PO₄和2％葡萄糖的YPD含盐培养基)(YPD是常用于培养酵母的一种培养基)的PA瓶中，30度摇床中培养，转速为220rmp。待种子液变浑浊后(一般为指数期，OD＝5-8，14-18小时)转接至50mL新鲜的基本发酵培养基中(250mL三角瓶)，转接量为1％左右。放于30度摇床中培养，转速为220rmp。待种子液长至对数期时(一般14-18小时)转接至200mL新鲜的基本发酵培养基中(500mL三角瓶)，转接量为1％左右。放于30度摇床中培养，转速为220rmp。长至对数期的种子液作为上罐种子液。初始接种OD调至0.5，所需种子液体积根据公式进行计算(如发酵液体积为2500mL，种子液OD值为n，则接种种子液体积为25000﹡0.5/n mL)。开始发酵后，控制pH值为5.5，通气量为1.5vvm，初始搅拌速率设置为300rpm，溶氧维持在30％以上(300-600rpm)。

当培养时葡萄糖浓度降至2g/L左右时开始补料葡萄糖(以补加第一补料培养基的形式提供，第一补料培养基为含有500g/L葡萄糖，5g/L MgSO₄，3.5g/L K₂SO₄，0.28g/LNa₂SO₄和10g/L酵母提取物的YPD含盐培养基)，初始补料速率为10mL/L发酵液/h，以维持发酵液中葡萄糖的残留浓度在1g/L左右，每两个小时取样测量一次OD600值和检测一次葡萄糖含量，当葡萄糖浓度低于1g/L时增加补料速率。当OD值增加缓慢时(开始进入稳定期)停止补料葡萄糖，此时开始监测乙醇残留量，当乙醇浓度降至5g/L时开始补料乙醇或者是甘油(第二补料培养基，包含乙醇或甘油)，初始补料速率为10mL/L发酵液/h。随后每4h取样检测一次乙醇或甘油含量，当乙醇或甘油浓度低于5g/L时调整补料速率。颜色有变化后开始提取产物检测产物变化，当番茄红素浓度不再增加时结束发酵。

其中，发明人发现，在基本发酵培养基中培养菌体，相比于现有技术的培养基，菌体的生长速度和生长状态均显著优于现有技术，补加的第一补料培养基，有效保证了菌体的快速和健康的生长，补加的第二补料培养基，有效提高了番茄红素的产量。根据本发明的再一具体实施例，所述萃取处理包括：将所述发酵处理后产物进行超声破碎处理以及有机萃取处理。发明人对发酵处理后的萃取过程进行了优化筛选，发明人发现，采用超声处理的方式相比于采用盐酸蒸煮的方式，番茄红素的降解速率大幅降低，番茄红素的产量稳定。另外，需要说明的是，本申请所述的“有机萃取处理”是指采取有机溶剂对超声破碎处理产物进行萃取，有机萃取的方式不受特别限制，如根据本发明的具体实施例，可以采用丙酮溶剂从超声破碎处理产物中萃取番茄红素。

用途

在本发明的第三方面，本发明提出了前面所述的微生物在制备番茄红素中的用途。发明人经过实验证实，本申请所述的微生物在生产番茄红素方面具有显著的优势，番茄红素的产量高、番茄红素的降解速率低，生产周期短。

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1 第一代工程菌株J1011-3的构建

在本实施例中，发明人详细介绍了J1011-3菌株的构建过程。

首先构建ΔLEU2：pGAL1-BtCarG(Blakeslea trispora)敲除盒，即敲除盒片段1，设计上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到ΔLEU2：：pGAL1-BtCarG(Blakesleatrispora)敲除盒，如敲除盒片段1如图1所示，敲除盒片段1具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到酵母30000B基因组上，整合位点为LEU2，由于原酵母中的LEU2没有活性，而整合后的同源左臂含有LEU2完整基因，固转化后采用SD-Leu固体板(合成酵母氮源YNB 6.7g/L，葡萄糖20g/L，缺亮氨酸的混合氨基酸粉末1.3g/L，2％琼脂粉)进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株命名为J1011-1。

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再构建ΔURA3：pGAL1-PaCrtB(Pantoea agglomerans)；pGAL10-McCrtI(Mucorcircinelloides)敲除盒，即敲除盒片段2，敲除盒片段2具有如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。设计上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到ΔURA3：：pGAL1-PaCrtB(Pantoea agglomerans)；pGAL10-McCrtI(Mucorcircinelloides)敲除盒，敲除盒片段2如图2所示。利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到酵母J1011-2基因组上，整合位点为URA3，转化后采用SD-HIS固体板(合成酵母氮源YNB 6.7g/L，葡萄糖20g/L，缺组氨酸的混合氨基酸粉末1.3g/L，2％琼脂粉)进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株命名为J1011-2。

ACGCAGATAATTCCAGGTATTTTGAAGCAGAACTTTTATTTATCATCGAATTGACTATTGCATTATTTCTATTTTGCAAAGAGGAGAAAGAATTAGGAAAGTTCATACTTCAAAAAGTTTTCCAACTTTCTCACACGAAAGGCCTCACGAAAAGGACTGTTCGTAGAATGCTAACATACAAAATTTTGTTAATTTCGTTATGTGCGGATCAGACGGAGTACTTGTCCAAATTAATAAACGATGAGCTGTTAAAAAAGGGGGATATTTTTACCCAAAAATTTTTTGCAACTAATCAAGGTAAGGAATTTTTGAAGAGACTATTTTCATTGACCGAATCAGAGTTTTATAGAGGATTTTTACTAGGAAATGAGAATTTTTGGAAATTTTTAAGAAAAGTTACAGCAATGAAAGAGCAGAGCGAGAGCATTTTTGAATATTTAAATGAATCGATCAAGACAGACAGCAATATTTTGACAAATGAGAACTTCATGTGGGTCCTAGGACTATTAGATGAAATTTCATCAATGGGTGCCGTTGGAAATCACTGGGAAATAGAATACAAGAAATTGACAGAAAGTGGTCATAAAATTGATAAGGAGAATCCATACAAGAAATCGATCGAATTATCATTGAAATCCATTCAACTAACATCACACTTGCTGGAAGATAATAACGATCTGCGTAAAAACGAGATATTCGCTATTATTCAAGCTTTGGCACATCAATGCATCAATCCGTGTAAGCAGATAAGTGAATTTGCAGTGGTAACGCTAGAGCAGACGCTCATCAATAAAATCGAAATTCCAACTAATGAGATGGAATCGGTAGAAGAATTAATTGAGGGCGGATTACTACCGTTGCTAAATTCGAGTGAAACACAGGAAGACCAGAAAATCCTCATTTCATCCATATTAACAATAATTTCAAATGTTTATTTGCATTATTTGAAACTAGGGAAGACAAGCAACGAAACGTTTTTGAAAATTTTGAGTATTTTCAATAAATTTGTAGAGGACTCAGATATTGAAAAAAAGCTACAGCAATTAATACTTGATAAGAAGAGTATTGAGAAGGGCAACGGTTCATCATCTCATGGATCTGCACATGAACAAACACCAGAGTCAAACGACGTTGAAATTGAGGCTACTGCGCCAATTGATGACAATACAGACGATGATAACAAACCGAAGTTATCTGATGTAGAAAAGGATTAAAGATGCTAAGAGATAGTGATGATATTTCATAAATAATGTAATTCTATATATGTTAATTACCTTTTTTGCGAGGCATATTTATGGTGAAGGATAAGTTTTGACCATCAAAGAAGGTTAATGTGGCTGTGGTTTCAGGGTCCATAAAGCTTTTCAATTCATCATTTTTTTTTTATTCTTTTTTTTGATTTCGGTTTCCTTGAAATTTTTTTGATTCGGTAATCTCCGAACAGAAGGAAGAACGAAGGAAGGAGCACAGACTTAGATTGGTATATATACGCATATGTAGTGTTGAAGAAACATGAAATTGCCCAGTATTCTTAACCCAACTGCACAGAACAAAAACCTGCAGGAAACGAAGGTACCCAATTCGCCCTATAGTGAGTCGTATTACGCGCGCTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATAGATCCGTCGAGTTCAAGAGAAAAAAAAAGAAAAAGCAAAAAGAAAAAAGGAAAGCGCGCCTCGTTCAGAATGACACGTATAGAATGATGCATTACCTTGTCATCTTCAGTATCATACTGTTCGTATACATACTTACTGACATTCATAGGTATACATATATACACATGTATATATATCGTATGCTGCAGCTTTAAATAATCGGTGTCACTACATAAGAACACCTTTGGTGGAGGGAACATCGTTGGTACCATTGGGCGAGGTGGCTTCTCTTATGGCAACCGCAAGAGCCTTGAACGCACTCTCACTACGGTGATGATCATTCTTGCCTCGCAGACAATCAACGTGGAGGGTAATTCTGCTAGCCTCTGCAAAGCTTTCAAGAAAATGCGGGATCATCTCGCAAGAGAGATCTCCTACTTTCTCCCTTTGCAAACCAAGTTCGACAACTGCGTACGGCCTGTTCGAAAGATCTACCACCGCTCTGGAAAGTGCCTCATCCAAAGGCGCAAATCCTGATCCAAACCTTTTTACTCCACGCGCCAGTAGGGCCTCTTTAAAAGCTTGACCGAGAGCAATCCCGCAGTCTTCAGTGGTGTGATGGTCGTCTATGTGTAAGTCACCAATGCACTCAACGATTAGCGACCAGCCGGAATGCTTGGCCAGAGCATGTATCATATGGTCCAGAAACCCTATACCTGTGTGGACGTTAATCACTTGCGATTGTGTGGCCTGTTCTGCTACTGCTTCTGCCTCTTTTTCTGGGAAGATCGAGTGCTCTATCGCTAGGGGACCACCCTTTAAAGAGATCGCAATCTGAATCTTGGTTTCATTTGTAATACGCTTTACTAGGGCTTTCTGCTCTGTCATCTTTGCCTTCGTTTATCTTGCCTGCTCATTTTTTAGTATATTCTTCGAAGAAATCACATTACTTTATATAATGTATAATTCATTATGTGATAATGCCAATCGCTAAGAAAAAAAAAGAGTCATCCGCTAGGGGAAAAAAAAAAATGAAAATCATTACCGAGGCATAAAAAAATATAGAGTGTACTAGAGGAGGCCAAGAGTAATAGAAAAAGAAAATTGCGGGAAAGGACTGTGTTATGACTTCCCTGACTAATGCCGTGTTCAAACGATACCTGGCAGTGACTCCTAGCGCTCACCAAGCTCTTAAAACGGGAATTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACGCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGAGCAAATTAAAGCCTTCGAGCGTCCCAAAACCTTCTCAAGCAAGGTTTTCAGTATAATGTTACATGCGTACACGCGTTTGTACAGAAAAAAAAGAAAAATTTGAAATATAAATAACGTTCTTAATACTAACATAACTATAAAAAAATAAATAGGGACCTAGACTTCAGGTTGTCTAACTCCTTCCTTTTCGGTTAGAGCGGATGTGGGGGGAGGGCGTGAATGTAAGCGTGACATAACTAATTACATGATATCGACAAAGGAAAAGGGGCCTGTTCAAATAACATTAGAATTATGAACTCTAAAAACTTCTGGCAACAAATTGTTAATAAAAGAAGCTGGAGTTTGACCGTTTGATTGTGGAAAGAAATAGAAAAACATGAACATAACCCAGAATGCAGCTCTTAACCAAAACCAAACTGGAAATGTTGATTCAGCATCTGGTTCTTCCAATGGTGCTTGAGTGTTTTCCATTTCGATCTTTCTTGGCTTTGGTGTTTTACCGAAAGACTTAACAACTTGATCAGAAGTCAACTTTGAACCTGCCAAAACAATTGGAACACCTGTACCTGGATGAGTTGAAGCACCAACGAAAAACAAATTATCGTATCTACCTGTAGAATCCTTAGTTGATGGTCTGAACCACAAAACTTGCAAAACATCATGAGACAAACCCAAGATTGAACCTCTCCACAAATTAAACTTAGATTGCCAAACTGCTGGATCGTTAACTTGTTCATGTTCGATCAAATCAGCGAAGTTTGACATGCCCAATCTTCTTTCAATAACTGCCAAAACCATCTTTCTTGCCTTATCAACCATAGCTGGATAATTTTCTGTAGATGCGTCACCAGTTTTTGACTTCATATGACCGATTGGAACCAAAACAATAACAGAATCTTTACCATCTGGTGCAGCAGATGGATCGATTCTTGATGGAACGTTAACGTAGAAAGAAGCTTCTGATGGCAAACCGAAATCCTTAAAAATTTCATCGAATGATTCTTGGTATGCTTCAGCCAAGAAAATGTTATGAACATCCAATTGTGGAACCTTAGTAGACATTGACCAGTAGAAAGAGATAGATGAAGATGTCAATTTCTTAGAAGCCAATGTGTTTTGAGTCCATCTACATGGTGGTAACAAATTATGGTATGCGTAAACCAAATCAGCATTACAAACAACTGCATCAGCATCGATGATATGACCGTTTTCCAATGTAACACCAGTAACTTGCTTTGTTGCATCATCAGTATTAATCTTTGCAACTGGAGCGTTATATATGAATTCAGCATCGTACTTTTGCTTTGCGATAGCTTCCAACTTTTGAACAACCATATTAAAACCACCTCTTGGATACCAAATACCTTCAGCAAATTCAGTGTATTGCAACAAAGAGTAAACTGCT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ID NO：2)。

再构建Δgal1，Δgal7，Δgal10:pGAL10-tHMG1敲除盒，即敲除盒片段3，敲除盒片段3具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。设计上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到Δgal1，Δgal7，Δgal10::pGAL10-tHMG1敲除片段，敲除盒片段3的结构如图3所示。利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到酵母J1011-2基因组上，整合位点为GAL1，GAL7和GAL10，转化后采用SD-Trp固体板(合成酵母氮源YNB 6.7g/L，葡萄糖20g/L，缺色氨酸的混合氨基酸粉末1.3g/L，2％琼脂粉)进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株命名为J1011-3.

TTCACCGATTCTGAGCGAATCACAGGTGAGAAATTTGGATTCGAAATAAACCTAAAAAAACTATCCAATAAGGCTTCCATAGGCTTCGTATTTCCCGACCATTCCAATTGGAAAAATTGAGCGCTGTCTTCCATGATCTTAGATAAAGCCTTAATACTTGGCTCATTTCCATTTGAGGTTAGCTCTAGCAACTGGTAAAGCATTTGAAGACCAGTTGGATCATCTCTATGCTGCCTATAGTAAGTGGAAAATAAAGTAGTAATAACGATACCTGTCACGTTCGAAACGAGATTATTGTTCGAATTATAAAGGCCATGTATAATGTTTGATTTGACGTATCCTAAGTCGTGGCTATTGCTCTTAATTAAATTGTTTCCCCCTAGCATTGAATTTTTCAACAGCATACCGGCGGTAGCTCTATTGTTCTGAAGATCCTGTAGGGAGTAGTGTTGCTTCAATACATCATCAGATTCGCCTTCAATTAAAATATAACACAAATAATTGAGAAATTCAGGTTGCAGCTGGAAGTTCTCCATAGCTTCCATTGCGTTATTACGAATCTCTGGATTTGGTGACATACAGTTCTGTAAAAGAGTTGCTAGTTGCAACACATAGTCTTCGGCGGGCTTCCATGTCGATGCCATCTTTATTCACTTAACTACTGCTAACAATTCTGGAAACCAAAGACTGCGGAATATTCTGATATGTATTACTACTATTCGCTGCTCTTCTGCATAATTAATACTGAAAAGTTTTTCATACTTTTAAACATAACCTTTTTTTAAGCAAAACTCTATGACCCGGATTAGAAAACTACGAAAAGAGGGTAATAACATAGGTGCAGGATTTCCATCGATAACGACGCCGACAATGAGCCTTGCTGCAACATCCAATTAGGACTAATAACTATCGTAGGAATTTCTACGTAATAAACTTCAACAGAGCCTAAAATTTGAAAATAAATAATCTAGAGGGGAAACTTAAAGAAATTCTATTCTTGTCAATAAAGTGGAAATCTGTCAGATGTCACAGTTTCTTTATTTGTGACACATATTTTCAACATAAATTCAGGCATTAGTGCTGTAAGCACAAAAAGTTGTGGCGATATGAATATTCCAGATTTTACTTACAAGCTGCATTGTAGTCTTACAATTCTTTTTTTCTTTTTTTTTTTTTATGGAAAGGACCACTCTTACATAACTAGAATAGCATTAAGAATCAGATTTACAGATAAAGATGACATTATTTTATATATATATTGTCACTCCGTTCAAGTCGACAACCAATAAAAAATTTAAAAAAAGCCAGGCAGTTAATAGAAAAAATATGATATGAATGAATATTCCACTTTCTTTTCACAGCTTGTCTGTAAGCGGATGCCGGGAGCAGACAAGCCCGTCAGGGCGCGTCAGCGGGTGTTGGCGGGTGTCGGGGCTGGCTTAACTATGCGGCATCAGAGCAGATTGTACTGAGAGTGCACCATAAACGACATTACTATATATATAATATAGGAAGCATTTAATAGACAGCATCGTAATATATGTGTACTTTGCAGTTATGACGCCAGATGGCAGTAGTGGAAGATATTCTTTATTGAAAAATAGCTTGTCACCTTACGTACAATCTTGATCCGGAGCTTTTCTTTTTTTGCCGATTAAGAATTAATTCGGTCGAAAAAAGAAAAGGAGAGGGCCAAGAGGGAGGGCATTGGTGACTATTGAGCACGTGAGTATACGTGATTAAGCACACAAAGGCAGCTTGGAGTATGTCTGTTATTAATTTCACAGGTAGTTCTGGTCCATTGGTGAAAGTTTGCGGCTTGCAGAGCACAGAGGCCGCAGAATGTGCTCTAGATTCCGATGCTGACTTGCTGGGTATTATATGTGTGCCCAATAGAAAGAGAACAATTGACCCGGTTATTGCAAGGAAAATTTCAAGTCTTGTAAAAGCATATAAAAATAGTTCAGGCACTCCGAAATACTTGGTTGGCGTGTTTCGTAATCAACCTAAGGAGGATGTTTTGGCTCTGGTCAATGATTACGGCATTGATATCGTCCAACTGCATGGAGATGAGTCGTGGCAAGAATACCAAGAGTTCCTCGGTTTGCCAGTTATTAAAAGACTCGTATTTCCAAAAGACTGCAACATACTACTCAGTGCAGCTTCACAGAAACCTCATTCGTTTATTCCCTTGTTTGATTCAGAAGCAGGTGGGACAGGTGAACTTTTGGATTGGAACTCGATTTCTGACTGGGTTGGAAGGCAAGAGAGCCCCGAAAGCTTACATTTTATGTTAGCTGGTGGACTGACGCCAGAAAATGTTGGTGATGCGCTTAGATTAAATGGCGTTATTGGTGTTGATGTAAGCGGAGGTGTGGAGACAAATGGTGTAAAAGACTCTAACAAAATAGCAAATTTCGTCAAAAATGCTAAGAAATAGGTTATTACTGAGTAGTATTTATTTAAGTATTGTTTGTGCACTTGCCTATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGGAAATTGTAAACGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCGCGCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGCGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGTACTACACGGTCCAATGGATAAACATTTTTTATCAACACTATGATATATAAATATAATAGTTTTTCGTATATATATTCCTTTTTTTGGTCAATTTTTGAAATTTTCGTAGAAAAGGGAGAGACAAAACACATTATATCAATGAAAACGTACAAAAAGTAGATAAAGTCAGTGCTTAAACACGTCTTTTCCTTAAAAATACTTTATTATTTTTATTTTATTGAGAGGGTGGTTTAAAAATAGAAATAGAGAGAGAGGTACATACATAAACATACGCGCACAAAAGCAGAGATTAGGATTTAATGCAGGTGACGGACCCATCTTTCAAACGATTTATATCAGTGGCGTCCAAATTGTTAGGTTTTGTTGGTTCAGCAGGTTTCCTGTTGTGGGTCATATGACTTTGAACCAAATGGCCGGCTGCTAGGGCAGCACATAAGGATAATTCACCTGCCAAGACGGCACAGGCAACTATTCTTGCTAATTGACGTGCGTTGGTACCAGGAGCGGTAGCATGCGGGCCTCTTACACCTAATAAGTCCAACATGGCACCTTGTGGTTCTAGAACAGTACCACCACCGATGGTACCTACTTCGATGGATGGCATGGATACGGAAATTCTCAAATCACCGTCCACTTCTTTCATCAATGTTATACAGTTGGAACTTTCAACATTTTGTGCAGGATCTTGTCCTAATGCCAAGAAAACAGCTGTCACTAAATTAGCTGCATGTGCGTTAAATCCACCAACAGACCCAGCCATTGCAGATCCAACCAAATTCTTAGCAATGTTCAACTCAACCAATGCGGAAACATCACTTTTTAACACTTTTCTGACAACATCACCAGGAATAGTAGCTTCTGCGACGACACTCTTACCACGACCTTCGATCCAGTTGATGGCAGCTGGTTTTTTGTCGGTACAGTAGTTACCAGAAACGGAGACAACCTCCATATCTTCCCAGCCATACTCTTCTACCATTTGCTTTAATGAGTATTCGACACCTTTAGAAATCATATTCATACCCATTGCGTCACCAGTAGTTGTTCTAAATCTCATGAAGAGTAAATCTCCTGCTAGACAAGTTTGAATATGTTGCAGACGTGCAAATCTTGATGTAGAGTTAAAAGCTTTTTTAATTGCGTTTTGTCCCTCTTCTGAGTCTAACCATATCTTACAGGCACCAGATCTTTTCAAAGTTGGGAAACGGACTACTGGGCCTCTTGTCATACCATCCTTAGTTAAAACAGTTGTTGCACCACCGCCAGCATTGATTGCCTTACAGCCACGCATGGCAGAAGCTACCAAACAACCCTCTGTAGTTGCCATTGGTATATGATAAGATGTACCATCGATAACCAAGGGGCCTATAACACCAACGGGCAAAGGCATGTAACCTATAACATTTTCACAACAAGCGCCAAATACGCGGTCGTAGTCATAATTTTTATATGGTAAACGATCAGATGCTAATACAGGAGCTTCTGCCAAAATTGAAAGAGCCTTCCTACGTACCGCAACCGCTCTCGTAGTATCACCTAATTTTTTCTCCAAAGCGTACAAAGGTAACTTACCGTGAATAACCAAGGCAGCGACCTCTTTGTTCTTCAATTGTTTTGTATTTCCACTACTTAATAATGCTTCTAATTCTTCTAAAGGACGTATTTTCTTATCCAAGCTTTCAATATCGCGGGAATCATCTTCCTCACTAGATGATGAAGGTCCTGATGAGCTCGATTGCGCAGATGATAAACTTTTGACTTTCGATCCAGAAATGACTGTTTTATTGGTTAAAACCATTTATATTGAATTTTCAAAAATTCTTACTTTTTTTTTGGATGGACGCAAAGAAGTTTAATAATCATATTACATGGCAATACCACCATATACATATCCATATCTAATCTTACTTATATGTTGTGGAAATGTAAAGAGCCCCATTATCTTAGCCTAAAAAAACCTTCTCTTTGGAACTTTCAGTAATACGCTTAACTGCTCATTGCTATATTGAAGTACGGATTAGAAGCCGCCGAGCGGGCGACAGCCCTCCGACGGAAGACTCTCCTCCGTGCGTCCTGGTCTTCACCGGTCGCGTTCCTGAAACGCAGATGTGCCTCGCGCCGCACTGCTCCGAACAATAAAGATTCTACAATACTAGCTTTTATGGTTATGAAGAGGAAAAATTGGCAGTAACCTGGCCCCACAAACCTTCAAATCAACGAATCAAATTAACAACCATAGGATAATAATGCGATTAGTTTTTTAGCCTTATTTCTGGGGTAATTAATCAGCGAAGCGATGATTTTTGATCTATTAACAGATATATAAATGCAAAAGCTGCATAACCACTTTAACTAATACTTTCAACATTTTCGGTTTGTATTACTTCTTATTCAAATGTCATAAAAGTATCAACAAAAAATTGTTAATATACCTCTATACTTTAACGTCAAGGAGAAAAAACTATAGCGCAATGATTGAATAGTCAAAGATTTTTTTTTTTTAATTTTTTTTTTTTCATAGAACTTTTTATTTAAATAAATCACGTCTATATATGTATCAGTATAACGTAAAAAAAAAAACACCGTCAGTTAAACAAAACATAAATAAAAAAAAAAAGAAGTGTCAAATCAAGTGTCAAATGTATACTTCTTTTTTTTACTTTGTTCAGAACAACTTCTCATTTTTTTCTACTCATAACTTTAGCATCACAAAGTACACAATAATAACGAGTAGTAACACTTTTATAGTTCATACATGCTTCAACTACTTAATAAATGATTGTATGATAATGTTTTCAATGTAAGAGATTTCGATTATCCACAAACTTTGAAACACAGGGACACAATTCTTGATATGCTTTCAACCGCTGCGTTTTGGATACCTATTCTTGACATAATATGACTACCATTTTGTTATTGTACGTGGGGCAGTTGACGTCTTATCATATGTCAAAGTCATTTGCGAAGTTCTTGGCAAGTTGCCAACTGACGAGATGCAGTAAAAAGAGATTGCCGTCTTGAAACTTTTTGTCCTTTTTTTTTTCCGGGGACTCTACGAGAACCCTTTGTCCTACTGATTAATTTTGTACTGAATTTGGACAATTCAGATTTTAGTAGACAAGCGCGAGGAGGAAAAGAAATGACAGAAAAATTCCGATGGACAAGAAGATAGGAAAAAAAAAAAGCTTTCACCGATTTCCTAGACCGGAAAAAAGTCGTATGACATCAGAATGAAAAATTTTCAAGTTAGACAAGGACAAAATCAGGACAAATTGTAAAGATATGATAAATCATTTGATTCAGCGCCAATTTGCCCTTTTCCATTTTCCATTAAATCTCTGTTCTCTCTTACTTATATGATGATTAGGTATCATCTGTATAAAACTCCTTTCTTAATTTCACTCTAAAGCATACCCCATAGAGAAGATCTTTCGGTTCGAAGACATTCCTACGCATAATAAGAATAGGAGGGAATAATGCCAGACAATCTATCATTACATTTAAGCGGCTCTTCAAAAAGATTGAACTCTCGCCAACTTATGGAATCTTCCAATGAGACCTTTGCGCCAAATAATGTGGATTTGGAAAAAGAGTATAAGTCATCTCAGAGTAATATAACTACCGAAGTTTATGAGGCATCGAGCTTTGAAGAAAAAGTAAGCTCAGAAAAACCTCAATACAGCTCATTCTGGAAGAAAATCTATTATGAATATGTGGTCGTTGACAAATCAATCTTGGGTGTTTCTATTCTGGATTCATTTATGTACAACCAGGACTTGAAGCCCGTCGAAAAAGAAAGGCGGGTTTGGTCCTGGTACAATTATTGTTACTTCTGGCTTGCTGAATGTTTCAATATCAACACTTGGCAAATTGCAGCTACAGGTCTACAACTGGGTCTAAATTGGTGGCAGTGTTGGATAACAATTTGGATTGGGTACGGTTTCGTTGGTGCTTTTGTTGTTTTGGCCTCTAGAGTTGGATCTGCTTATCATTTGTCATTCCCTATATCATCTAGAGCATCATTCGGTATTTTCTTCTCTTTATGGCCTGTTATTAATAGAGTCGTCATGGCCATCGTTTGGTATAGTGTCCAAGCTTATATTGCGGCAACTCCCGTATCATTAA(SEQ ID NO：3)。

更进一步，发明人通过实验验证，J1011-3具有高产番茄红素的性能，同时过表达BtCarG，PaCrtB，McCrtI基因所获得的酵母菌株，其番茄红素的产量优于其它基因组合。

在以下实验中，发明人进一步对J1011-3菌株进行改造，具体如下所述：

实施例2 启动子和终止子的选择

为了能用半乳糖进行诱导，需要敲除代谢半乳糖的基因GAL1,GAL7,GAL10。因此特征启动子的背景菌株为敲除基因GAL1,7,10。半乳糖价格较高，并不适用于工业化生产，因此在敲除基因GAL1,7,10的基础上敲除GAL80，以期通过对葡萄糖量的控制达到对基因表达的调控。所得到的启动子信息用于构建控制类胡萝卜素合成相关基因的表达。

如图4所示，在ΔGAL1/7/10/80菌株和ΔGAL1/7/10菌株中不论是诱导型启动子或是组成型启动子在稳定期强度基本一致。可见，敲除GAL80可以起到不加半乳糖即可诱导基因表达，诱导强度跟与半乳糖诱导强度相当。

酵母属于真核生物，在其体内过表达基因需要选择合适的启动子和终止子，经过反复多次实验，发明人选择了P_GAL1，P_GAL7，P_GAL10，P_GAL1-10，P_GAL10-1和P_HXT1作为表达基因的启动子。其中，P_GAL1具有如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，P_GAL7具有如SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列，P_GAL10具有如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列，P_GAL1-10具有如SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，P_GAL10-1具有如SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列，P_HXT1具有如SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列。

AGTACGGATTAGAAGCCGCCGAGCGGGCGACAGCCCTCCGACGGAAGACTCTCCTCCGTGCGTCCTGGTCTTCACCGGTCGCGTTCCTGAAACGCAGATGTGCCTCGCGCCGCACTGCTCCGAACAATAAAGATTCTACAATACTAGCTTTTATGGTTATGAAGAGGAAAAATTGGCAGTAACCTGGCCCCACAAACCTTCAAATCAACGAATCAAATTAACAACCATAGGATAATAATGCGATTAGTTTTTTAGCCTTATTTCTGGGGTAATTAATCAGCGAAGCGATGATTTTTGATCTATTAACAGATATATAAATGCAAAAGCTGCATAACCACTTTAACTAATACTTTCAACATTTTCGGTTTGTATTACTTCTTATTCAAATGTCATAAAAGTATCAACAAAAAATTGTTAATATACCTCTATACTTTAACGTCAAGGAGAAAAAACTATA(SEQ ID NO：4)。

GACGGTAGCAACAAGAATATAGCACGAGCCGCGAAGTTCATTTCGTTACTTTTGATATCGCTCACAACTATTGCGAAGCGCTTCAGTGAAAAAATCATAAGGAAAAGTTGTAAATATTATTGGTAGTATTCGTTTGGTAAAGTAGAGGGGGTAATTTTTCCCCTTTATTTTGTTCATACATTCTTAAATTGCTTTGCCTCTCCTTTTGGAAAGCTATACTTCGGAGCACTGTTGAGCGAAGGCTCATTAGATATATTTTCTGTCATTTTCCTTAACCCAAAAATAAGGGAAAGGGTCCAAAAAGCGCTCGGACAACTGTTGACCGTGATCCGAAGGACTGGCTATACAGTGTTCACAAAATAGCCAAGCTGAAAATAATGTGTAGCTATGTTCAGTTAGTTTGGCTAGCAAAGATATAAAAGCAGGTCGGAAATATTTATGGGCATTATTATGCAGAGCATCAACATGATAAAAAAAAACAGTTGAATATTCCCTCAAAA(SEQ ID NO：5)。

TACTTCAATATAGCAATGAGCAGTTAAGCGTATTACTGAAAGTTCCAAAGAGAAGGTTTTTTTAGGCTAAGATAATGGGGCTCTTTACATTTCCACAACATATAAGTAAGATTAGATATGGATATGTATATGGTGGTATTGCCATGTAATATGATTATTAAACTTCTTTGCGTCCATCCAAAAAAAAAGTAAGAATTTTTGAAAATTCAATATAA(SEQID NO：6)。

TATAGTTTTTTCTCCTTGACGTTAAAGTATAGAGGTATATTAACAATTTTTTGTTGATACTTTTATGACATTTGAATAAGAAGTAATACAAACCGAAAATGTTGAAAGTATTAGTTAAAGTGGTTATGCAGCTTTTGCATTTATATATCTGTTAATAGATCAAAAATCATCGCTTCGCTGATTAATTACCCCAGAAATAAGGCTAAAAAACTAATCGCATTATTATCCTATGGTTGTTAATTTGATTCGTTGATTTGAAGGTTTGTGGGGCCAGGTTACTGCCAATTTTTCCTCTTCATAACCATAAAAGCTAGTATTGTAGAATCTTTATTGTTCGGAGCAGTGCGGCGCGAGGCACATCTGCGTTTCAGGAACGCGACCGGTGAAGACCAGGACGCACGGAGGAGAGTCTTCCGTCGGAGGGCTGTCGCCCGCTCGGCGGCTTCTAATCCGTACTTCAATATAGCAATGAGCAGTTAAGCGTATTACTGAAAGTTCCAAAGAGAAGGTTTTTTTAGGCTAAGATAATGGGGCTCTTTACATTTCCACAACATATAAGTAAGATTAGATATGGATATGTATATGGTGGTATTGCCATGTAATATGATTATTAAACTTCTTTGCGTCCATCCAAAAAAAAAGTAAGAATTTTTGAAAATTCAATATAA(SEQ IDNO：7)。

TTATATTGAATTTTCAAAAATTCTTACTTTTTTTTTGGATGGACGCAAAGAAGTTTAATAATCATATTACATGGCAATACCACCATATACATATCCATATCTAATCTTACTTATATGTTGTGGAAATGTAAAGAGCCCCATTATCTTAGCCTAAAAAAACCTTCTCTTTGGAACTTTCAGTAATACGCTTAACTGCTCATTGCTATATTGAAGTACGGATTAGAAGCCGCCGAGCGGGCGACAGCCCTCCGACGGAAGACTCTCCTCCGTGCGTCCTGGTCTTCACCGGTCGCGTTCCTGAAACGCAGATGTGCCTCGCGCCGCACTGCTCCGAACAATAAAGATTCTACAATACTAGCTTTTATGGTTATGAAGAGGAAAAATTGGCAGTAACCTGGCCCCACAAACCTTCAAATCAACGAATCAAATTAACAACCATAGGATAATAATGCGATTAGTTTTTTAGCCTTATTTCTGGGGTAATTAATCAGCGAAGCGATGATTTTTGATCTATTAACAGATATATAAATGCAAAAGCTGCATAACCACTTTAACTAATACTTTCAACATTTTCGGTTTGTATTACTTCTTATTCAAATGTCATAAAAGTATCAACAAAAAATTGTTAATATACCTCTATACTTTAACGTCAAGGAGAAAAAACTATA(SEQ IDNO：8)。

GATTTTACGTATATCAACTAGTTGACGATTATGATATCTTTATAGATTTTAAGGTGGGGAAAGAACATGAGACCCCAGATGGAATTGATTATGGGGACATTGTTGCCTTTATATATAATTTCAATATACTAATTCAAATGATTAAAAACGTGAGGGGGACACGCAACTTCGGGTGTTAAGAAATATTTTGCTACATTAGATAATGGTGGAGTTTCCTGGCTTGTCGGATAAAAGCCATCAAATGTCGCAGCAGCTCATGTTTACGTTTGCTGTCTTCTGCCCACGTCATATGAGTGGTATTCTTCTATCAGCACTTGATGAATATTCTTTTTCTCATATATCTGAAAGACAAAAGATCGGCACGGCAATGCCCTGCAGCATTTCTTCCTAGTTTTTCCGAATTTCCATTACGTATTGGATCTTGTGCGCATATTTGTCAGTCCTTCACGGAAAAAAAAAAAGAGCACTGGGTCACTTCGGAAAAACTTTTGACTCAATGCAACAGTGTCATAATCCTTTGCGCTGTCTCTTTGAAGAAAAATCAGGAGTGCAAGATATCGATTAATTCCTTGGAAGTTATGATGGTTAGTCTTAGTTTAACTCTCTTGAAGAAGGGTTTTTTCAGTTGGTCAACACTCTTTAGAGGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAGAATTCTTCATGTAATTTACCATGATTCTACGTTTTTGCAAGCAAAAATGAAGATAATCCGAGCGCATGCGCAAGTAGTCCCTGCCATGCCGCTTCGGAAAAACTTTCGAAACCAATACTCCTTACATCCGCCTTGAATTTAGGACCTACAATTGTTGTCTCTTCTGCTTGAACCAATAAGCCCTAGAAACCTTACACCCTAATTTGCACAAGAAAACTACGAAAAAATTTTTTCCTCTTTTTTCCGCAGCTCCAATCTCGCCCTGCTATTTTTTTGGTTCGGAGAAAAATAGTCGGTCGATATGAATTGAAGTTTCATTGTGGCCACTCGTTTAGGAATGGAATAACCTCCGCGAATGGAAAAAAAGAACTCGGAATATCAAAAATTCCGGCTCAAAGGAAAAATTTGCTTCAGGAGGGGGGAATTATATTCCAGATGAGACCTGCA(SEQ IDNO：9)。

选择任意的终止子(比如T_ADH2，T_GAL10，T_CYC1，T_GPM1和T_PGK1等)作为表达基因的终止子，这些元件的组合搭配能够实现多个基因的过表达。

实施例3 第二代工程菌株的构建

在本实施例中，发明人以J1011-3菌株为基础，在J1011-3菌株上调整BtCarG(Blakeslea trispora)，PaCrtB(Pantoea Agglomerans)和McCrtI(Mucorcircinelloides)这三个基因的拷贝数，获得第二代菌株。

其中第二代工程菌株的具体特性如表1所示。按照设计选择合适的启动子和终止子，用上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到各相应片段，利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到酵母J1011-3基因组上，转化后采用筛选抗性固体板进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株详见表1。

表1：第二代工程菌株

其中，McCrtI具有如SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列，PaCrtB具有如SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列，BtCarG具有如SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列。

ATGTCTAAGAAACATATCGTTATCATCGGTGCTGGTGTTGGTGGTACTGCAACAGCTGCAAGATTGGCTAGAGAAGGTTTTAAAGTTACAGTTGTTGAAAAGAATGATTTTGGTGGTGGTAGATGTTCATTGATCCATCATCAAGGTCATAGATTCGATCAAGGTCCATCTTTGTATTTGATGCCAAAGTACTTCGAAGATGCTTTCGCAGATTTGGATGAAAGAATCCAAGATCATTTGGAATTGTTGAGATGTGATAACAACTACAAGGTTCATTTCGATGATGGTGAATCTATCCAATTGTCTTCAGATTTGACTAGAATGAAAGCTGAATTGGATAGAGTTGAAGGTCCATTGGGTTTCGGTAGATTTTTAGATTTCATGAAGGAAACTCATATCCATTACGAATCAGGTACATTGATCGCTTTGAAGAAAAATTTCGAATCTATCTGGGATTTGATCAGAATTAAATACGCACCAGAAATTTTTAGATTGCATTTGTTCGGTAAAATCTATGATAGAGCATCTAAGTACTTCAAGACTAAGAAAATGAGAATGGCTTTTACTTTCCAAACAATGTACATGGGCATGTCACCATACGATGCTCCAGCAGTTTACTCTTTGTTGCAATACACTGAATTTGCTGAAGGTATTTGGTATCCAAGAGGTGGTTTTAATATGGTTGTTCAAAAGTTGGAAGCTATCGCAAAGCAAAAGTACGATGCTGAATTCATATATAACGCTCCAGTTGCAAAGATTAATACTGATGATGCAACAAAGCAAGTTACTGGTGTTACATTGGAAAACGGTCATATCATCGATGCTGATGCAGTTGTTTGTAATGCTGATTTGGTTTACGCATACCATAATTTGTTACCACCATGTAGATGGACTCAAAACACATTGGCTTCTAAGAAATTGACATCTTCATCTATCTCTTTCTACTGGTCAATGTCTACTAAGGTTCCACAATTGGATGTTCATAACATTTTCTTGGCTGAAGCATACCAAGAATCATTCGATGAAATTTTTAAGGATTTCGGTTTGCCATCAGAAGCTTCTTTCTACGTTAACGTTCCATCAAGAATCGATCCATCTGCTGCACCAGATGGTAAAGATTCTGTTATTGTTTTGGTTCCAATCGGTCATATGAAGTCAAAAACTGGTGACGCATCTACAGAAAATTATCCAGCTATGGTTGATAAGGCAAGAAAGATGGTTTTGGCAGTTATTGAAAGAAGATTGGGCATGTCAAACTTCGCTGATTTGATCGAACATGAACAAGTTAACGATCCAGCAGTTTGGCAATCTAAGTTTAATTTGTGGAGAGGTTCAATCTTGGGTTTGTCTCATGATGTTTTGCAAGTTTTGTGGTTCAGACCATCAACTAAGGATTCTACAGGTAGATACGATAATTTGTTTTTCGTTGGTGCTTCAACTCATCCAGGTACAGGTGTTCCAATTGTTTTGGCAGGTTCAAAGTTGACTTCTGATCAAGTTGTTAAGTCTTTCGGTAAAACACCAAAGCCAAGAAAGATCGAAATGGAAAACACTCAAGCACCATTGGAAGAACCAGATGCTGAATCAACATTTCCAGTTTGGTTTTGGTTAAGAGCTGCATTCTGGGTTATGTTCATGTTTTTCTATTTCTTTCCACAATCAAACGGTCAAACTCCAGCTTCTTTTATTAACAATTTGTTGCCAGAAGTTTTTAGAGTTCATAATTCTAATGTTATTTGA(SEQ ID NO：10)。

ATGTCACAACCACCATTATTGGACCACGCTACACAAACTATGGCAAACGGTTCTAAATCTTTCGCTACTGCTGCTAAATTATTCGACCCAGCAACAAGAAGATCTGTATTGATGTTGTACACCTGGTGTAGACATTGCGATGACGTTATAGATGACCAAACTCACGGTTTTGCTTCAGAAGCTGCAGCCGAAGAAGAAGCTACACAAAGATTGGCAAGATTAAGAACTTTGACATTAGCTGCATTCGAAGGTGCCGAAATGCAAGATCCAGCTTTTGCCGCTTTCCAAGAAGTTGCATTAACCCATGGTATTACTCCTAGAATGGCTTTGGATCACTTAGACGGTTTTGCAATGGATGTCGCCCAAACAAGATACGTAACCTTCGAAGACACTTTAAGATATTGTTACCATGTCGCCGGTGTTGTCGGTTTGATGATGGCTAGAGTAATGGGTGTTAGAGATGAAAGAGTTTTAGATAGAGCATGTGACTTGGGTTTAGCCTTCCAATTGACAAACATAGCTAGAGATATAATAGATGACGCAGCCATAGACAGATGCTATTTGCCAGCTGAATGGTTACAAGATGCAGGTTTGACTCCTGAAAATTACGCTGCAAGAGAAAACAGAGCCGCTTTAGCCAGAGTTGCTGAAAGATTGATAGATGCAGCCGAACCATATTACATCTCTTCACAAGCTGGTTTGCATGATTTGCCACCTAGATGCGCATGGGCCATTGCTACCGCAAGATCTGTTTACAGAGAAATCGGTATTAAAGTCAAGGCTGCAGGTGGTTCCGCATGGGATAGAAGACAACACACTTCTAAAGGTGAAAAGATCGCTATGTTGATGGCCGCTCCTGGTCAAGTTATTAGAGCAAAGACCACCAGAGTCACCCCAAGACCAGCCGGTTTATGGCAAAGACCTGTTTAA(SEQ ID NO：11)。

ATGTTGACATCTTCAAAATCTATTGAGTCTTTTCCAAAAAATGTTCAACCATATGGTAAGCACTACCAGAATGGTTTGGAGCCAGTCGGTAAGTCTCAAGAAGACATTTTATTGGAACCATTCCATTACTTATGTTCAAACCCAGGTAAAGATGTCAGAACTAAAATGATTGAAGCTTTCAACGCTTGGTTGAAGGTCCCTAAGGACGATTTAATTGTTATTACTAGAGTTATTGAAATGTTACATTCTGCTTCTTTGTTAATTGACGATGTTGAAGATGATTCTGTTTTGAGAAGGGGTGTCCCAGCTGCACATCACATTTATGGTACACCACAAACTATTAATTGTGCAAACTACGTTTACTTTTTGGCTTTGAAAGAAATTGCTAAGTTAAATAAACCAAATATGATTACTATTTACACTGATGAATTGATAAATTTGCATAGAGGTCAAGGTATGGAATTGTTCTGGAGGGATACATTGACATGTCCAACAGAAAAAGAATTTTTGGATATGGTTAATGATAAGACTGGAGGTTTGTTGAGATTAGCTGTTAAATTAATGCAAGAAGCATCTCAATCAGGTACTGATTATACTGGTTTAGTTTCAAAAATTGGTATACACTTTCAAGTTAGAGATGATTATATGAATTTGCAGTCTAAAAATTATGCTGATAATAAAGGTTTTTGTGAGGATTTAACAGAAGGTAAATTCTCTTTCCCAATTATACATTCTATTAGATCTGATCCATCTAATAGACAATTGTTGAACATTTTGAAACAAAGATCTTCTTCTATTGAATTGAAACAATTTGCTTTGCAATTATTGGAAAATACTAATACTTTCCAATATTGTAGAGATTTTTTGAGAGTTTTGGAAAAAGAAGCTAGAGAAGAAATTAAATTGTTGGGTGGTAACATTATGTTGGAAAAGATTATGGATGTTTTGTCTGTTAATGAATAA(SEQ ID NO：12)。

更进一步，发明人通过实验验证，结果如图5所示，在摇瓶条件下，J1011-5，6，7和J1011-33～36具有比J1011-3更高产番茄红素的性能。

实施例4 沉默基因的工程菌株的构建

在本实施例中，发明人详细介绍了在上述工程菌的基础上敲除另外一些基因获得沉默基因工程菌株的实验过程。

在酿酒酵母中，有很多潜在的基因在敲除后对细胞积累番茄红素化合物有明显的影响，因此构建一系列背景菌株用于增加番茄红素产量。构建方法为在需要灭活的基因中以潮霉素抗性基因为标记构建相应的敲除盒片段，敲除盒片段见图4。将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到上述工程菌中，最后用含有潮霉素抗性的平板进行筛选得到疑似带有抗性的菌株，用PCR进行验证，得到的第四代工程菌株见表2。其中，敲除盒片段中的灭活基因序列可从NCBI上下载，从而可以设计得到图6的敲除框。

表2：沉默工程菌株特性

更进一步，发明人通过实验验证，J1011-9,10,11,13,15,19都具有比J1011-3更高产番茄红素的性能。

实施例5 过表达基因的工程菌株的构建

在本实施例中，发明人详细介绍了在上述工程菌株上过表达相关的实验过程。

选择合适的启动子和终止子构建表3中相关基因的表达框，在实施例4的基础上选择合适的基因作为插入位点，通过设计上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到即可实现沉默基因又能过表达基因的基因片段。利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到上述工程菌株基因组上，转化后采用筛选平板进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株详见表3。

更进一步，发明人通过实验验证，J1011-4和J1011-20～32都具有高产番茄红素的性能。

表3：过表达基因的工程菌株

其中，INO2基因具有如SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列，gapN基因具有如SEQ IDNO：14所示的核苷酸序列，PYC2基因具有如SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列，SMAE1基因具有如SEQ ID NO：16所示的核苷酸序列，MDH2基因具有如SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列，POS5基因具有如SEQ ID NO：18所示的核苷酸序列，pntA基因具有如SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列，pntB基因具有如SEQ ID NO：20所示的核苷酸序列，ADH2基因具有如SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列，ACS6基因具有如SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列，ALD6基因具有如SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列，EUTE基因具有如SEQ ID NO：24所示的核苷酸序列，ERG12基因具有如SEQ ID NO：25所示的核苷酸序列，IDI1基因具有如SEQ ID NO：26所示的核苷酸序列，ERG10基因具有如SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列，MVD1基因具有如SEQ ID NO：28所示的核苷酸序列，ERG13基因具有如SEQ ID NO：29所示的核苷酸序列，tHMG1基因具有如SEQID NO：30所示的核苷酸序列，ERG8基因具有如SEQ ID NO：31所示的核苷酸序列，yap1基因具有如SEQ ID NO：32所示的核苷酸序列。spt15-5基因具有如SEQ ID NO：51所示的核苷酸序列。taf25-3基因具有如SEQ ID NO：52所示的核苷酸序列。

ATGTCCCAAGCAACTGGGAACGAATTACTGGGTATCCTAGATCTGGATAACGATATAGACTTTGAAACTGCTTACCAAATGCTCAGCAGTAACTTCGACGACCAAATGTCTGCGCACATACATGAAAACACGTTTAGTGCAACTTCCCCTCCTCTGTTAACACACGAGCTCGGCATAATTCCTAACGTGGCAACCGTGCAACCCTCTCACGTAGAAACTATACCTGCCGATAACCAAACTCATCATGCTCCTTTGCATACTCATGCTCACTATCTAAATCACAACCCTCATCAACCAAGCATGGGTTTTGATCAAACGCTTGGTCTCAAGTTGTCTCCTTCCAGTTCGGGGTTGTTGAGCACGAATGAATCGAATGCCATTGAACAGTTTTTAGACAATCTAATATCACAGGATATGATGTCTTCCAACGCTTCCATGAACTCCGATTCACATCTACATATAAGATCACCAAAAAAGCAGCATAGGTATACCGAATTAAATCAAAGATATCCTGAAACACATCCACACAGTAACACAGGGGAGTTACCCACAAACACAGCAGATGTGCCAACTGAGTTCACCACGAGGGAAGGACCTCATCAGCCTATCGGCAATGACCACTACAACCCGCCACCGTTTTCAGTACCTGAGATACGAATCCCAGACTCTGATATTCCAGCCAATATCGAGGACGACCCTGTGAAGGTACGGAAATGGAAACACGTTCAAATGGAGAAGATACGAAGAATAAACACCAAAGAAGCCTTTGAAAGGCTCATTAAATCAGTAAGGACCCCACCAAAGGAAAACGGGAAAAGAATTCCCAAGCATATTCTTTTAACTTGTGTAATGAACGATATCAAGTCCATTAGAAGCGCAAATGAAGCACTACAGCACATACTGGATGATTCCTGA(SEQ ID NO：13)。

ATGACTAAGCAATACAAGAACTACGTTAACGGTGAATGGAAGTTGTCTGAAAACGAAATTAAAATCTATGAACCTGCTTCAGGTGCAGAATTAGGTTCCGTTCCAGCTATGAGTACAGAAGAAGTAGATTACGTTTACGCTTCTGCTAAGAAAGCCCAACCTGCTTGGAGAGCATTGTCATATATCGAAAGAGCTGCATACTTACATAAGGTTGCTGATATATTGATGAGAGACAAGGAAAAGATTGGTGCAATCTTATCTAAAGAAGTAGCCAAGGGTTATAAATCCGCTGTTAGTGAAGTTGTCAGAACCGCTGAAATTATAAACTACGCCGCTGAAGAAGGTTTAAGAATGGAAGGTGAAGTTTTGGAAGGTGGTTCTTTCGAAGCAGCCTCTAAAAAGAAAATTGCAGTAGTTAGAAGAGAACCTGTCGGTTTAGTATTGGCCATTTCCCCTTTCAATTATCCAGTAAACTTAGCTGGTAGTAAGATCGCCCCAGCTTTGATTGCTGGTAATGTTATAGCCTTTAAACCACCTACACAAGGTTCTATTTCAGGTTTGTTATTGGCAGAAGCCTTCGCTGAAGCAGGTTTGCCTGCTGGTGTTTTTAACACAATTACCGGTAGAGGTTCCGAAATCGGTGACTACATTGTCGAACACCAAGCTGTAAACTTCATCAACTTCACTGGTTCTACAGGTATAGGTGAAAGAATCGGTAAAATGGCTGGTATGAGACCAATTATGTTAGAATTGGGTGGTAAAGATTCTGCAATAGTTTTAGAAGATGCCGACTTAGAATTGACCGCTAAGAATATCATTGCCGGTGCTTTTGGTTATTCCGGTCAAAGATGTACTGCAGTCAAAAGAGTTTTAGTCATGGAAAGTGTTGCCGATGAATTGGTCGAAAAGATAAGAGAAAAGGTTTTGGCATTGACTATCGGTAATCCTGAAGATGACGCCGACATCACTCCATTGATCGATACAAAGTCAGCTGACTACGTTGAAGGTTTGATTAATGATGCAAACGACAAGGGTGCAACCGCCTTGACTGAAATTAAAAGAGAGGGTAACTTAATCTGCCCAATCTTGTTCGATAAGGTTACTACAGACATGAGATTAGCTTGGGAAGAACCATTTGGTCCTGTCTTGCCAATAATCAGAGTTACATCTGTCGAAGAAGCTATCGAAATATCTAATAAGTCAGAATATGGTTTGCAAGCATCAATCTTTACAAACGATTTCCCTAGAGCCTTTGGTATTGCTGAACAATTGGAAGTAGGTACCGTTCATATCAACAACAAGACACAAAGAGGTACCGATAATTTTCCATTCTTGGGTGCTAAGAAATCTGGTGCAGGTATCCAAGGTGTCAAATACTCCATTGAAGCTATGACCACTGTAAAGAGTGTCGTATTTGATATTAAATAA(SEQ IDNO：14)。

ATGTATCCAAGGGTCTATGAAGATTTCCAAAAGATCAGAGAAACATACGGTGATTTATCAGTTCTACCAACCAAAAATTTCCTAGCACCAGCAGAACCTGATGAAGAAATCGAAGTCACCATCGAACAAGGTAAGACTTTGATTATCAAATTGCAAGCTGTTGGTGACTTAAATAAGAAAACTGGGCAAAGAGAAGTGTATTTTGAATTGAACGGTGAATTAAGAAAGATCAGAGTTGCAGACAAGTCACAAAACATACAATCTGTTGCTAAACCAAAGGCTGATGTCCACGATACTCACCAAATCGGTGCACCAATGGCTGGTGTTATCATAGAAGTTAAAGTACATAAAGGGTCTTTGGTGAAAAAGGGCGAATCGATTGCTGTTTTGAGTGCCATGAAAATGGAAATGGTTGTCTCTTCACCAGCAGATGGTCAAGTTAAAGATGTTTTCATTAGGGATGGTGAAAGTGTTGACGCATCAGATTTGTTGGTTGTCCTAGAAGAAGAAACCCTACCCCCATCCCAAAAAAAGTAA(SEQ ID NO：15)。

ATGTGGCCTATTCAGCAATCGCGTTTATATTCTTCTAACACTAGATCGCATAAAGCTACCACAACAAGAGAAAATACTTTCCAAAAGCCATACAGCGACGAGGAGGTCACTAAAACACCCGTCGGTTCTCGCGCCAGAAAGATCTTCGAAGCTCCTCACCCACATGCCACTCGTTTGACTGTAGAAGGTGCCATAGAATGTCCCTTGGAGAGCTTTCAACTTTTAAACTCTCCTTTATTTAACAAGGGTTCTGCATTTACACAAGAAGAAAGGGAAGCGTTTAATTTAGAAGCATTGCTACCACCACAAGTGAACACTTTGGACGAACAACTGGAAAGAAGCTACAAGCAGTTATGCTATTTGAAGACGCCCTTGGCCAAAAACGACTTCATGACGTCTTTGAGAGTACAGAACAAAGTCCTATATTTTGCATTAATAAGGAAACATATCAAGGAATTAGTTCCTATCATTTACACCCCAACCGAAGGTGATGCTATTGCTGCCTATTCCCACAGGTTCAGAAAGCCAGAAGGTGTGTTTTTAGACATTACCGAACCTGATTCCATCGAACGTAGATTGGCTACATACGGTGGAGACAAAGATGTAGACTACATCGTTGTGTCGGATTCGGAAGGTATTCTGGGAATTGGTGACCAAGGTATCGGTGGTGTACGTATTGCTATCTCCAAATTGGCATTGATGACGCTGTGCGGTGGTATTCATCCCGGCCGTGTGCTACCTGTGTGTTTGGACGTCGGTACTAACAACAAGAAACTAGCCCGTGACGAATTGTACATGGGTAACAAGTTCTCCAGAATCAGGGGTAAGCAATATGACGACTTCTTGGAAAAATTCATCAAGGCCGTTAAGAAAGTGTATCCAAGCGCCGTTCTGCATTTCGAAGATTTCGGTGTTAAGAACGCTAGAAGATTGCTAGAAAAGTACAGGTACGAATTGCCATCATTCAACGATGACATTCAGGGCACCGGTGCCGTCGTGATGGCCTCGTTGATTGCTGCTTTGAAACATACCAACAGAGACTTGAAAGACACCAGAGTGCTTATTTACGGTGCCGGGTCTGCGGGCCTCGGTATCGCAGACCAAATTGTGAATCATATGGTCACGCACGGCGTTGACAAGGAAGAAGCGCGCAAGAAAATCTTCTTGATGGACAGACGTGGGTTAATTCTACAATCTTACGAGGCTAACTCCACTCCCGCCCAACACGTATACGCTAAGAGTGATGCGGAATGGGCTGGTATCAACACCCGCTCTTTACATGATGTGGTGGAGAACGTCAAACCAACGTGTTTGGTTGGCTGCTCCACACAAGCAGGCGCATTCACTCAAGATGTCGTAGAAGAAATGCACAAGCACAATCCTAGACCGATCATTTTCCCATTATCCAACCCTACTAGACTACACGAAGCCGTTCCTGCCGATTTAATGAAGTGGACCAACAACAACGCTCTTGTAGCTACCGGATCTCCTTTCCCACCTGTTGACGGTTACCGTATCTCGGAGAACAACAATTGTTACTCTTTCCCAGGTATCGGTTTAGGTGCCGTACTATCGCGTGCCACCACTATCACAGACAAGATGATCTCCGCTGCAGTGGACCAACTAGCCGAATTGTCGCCACTAAGAGAGGGCGACTCGAGACCTGGGTTGCTACCCGGCCTGGACACCATCACCAACACCTCTGCGCGTCTAGCTACCGCTGTGATCTTGCAAGCACTCGAGGAGGGAACCGCCCGTATCGAGCAAGAACAAGTACCGGGAGGAGCTCCCGGCGAAACTGTCAAGGTTCCTCGTGACTTTGACGAATGTTTACAGTGGGTCAAAGCCCAAATGTGGGAGCCTGTGTACAGACCTATGATCAAGGTCCAACATGACCCATCGGTGCACACCAACCAATTGTAG(SEQ ID NO：16)。

ATGCCTCACTCAGTTACACCATCCATAGAACAAGATTCGTTAAAAATTGCCATTTTAGGTGCTGCCGGTGGTATCGGGCAGTCGTTATCGCTGCTTTTGAAAGCTCAGTTGCAATACCAGTTAAAGGAGAGCAACCGGAGCGTTACCCACATTCATCTGGCTCTTTACGATGTCAACCAAGAAGCCATCAACGGTGTTACCGCCGACTTGTCTCATATAGACACCCCCATTTCCGTGTCGAGCCACTCTCCTGCAGGTGGCATTGAGAACTGTTTGCATAACGCTTCTATTGTTGTCATTCCTGCAGGTGTTCCAAGAAAACCTGGCATGACTCGTGATGACTTATTTAACGTGAATGCTGGTATCATTAGCCAGCTCGGTGATTCTATTGCAGAATGTTGTGATCTTTCCAAGGTCTTCGTTCTTGTCATTTCCAACCCTGTTAATTCTTTAGTCCCAGTGATGGTTTCTAACATTCTTAAGAACCATCCTCAGTCTAGAAATTCCGGCATTGAAAGAAGGATCATGGGTGTCACCAAGCTCGACATTGTCAGAGCGTCCACTTTTCTACGTGAGATAAACATTGAGTCAGGGCTAACTCCTCGTGTTAACTCCATGCCTGACGTCCCTGTAATTGGCGGGCATTCTGGCGAGACTATTATTCCGTTGTTTTCACAGTCAAACTTCCTATCGAGATTAAATGAGGATCAATTGAAATATTTAATACATAGAGTCCAATACGGTGGTGATGAAGTGGTCAAGGCCAAGAACGGTAAAGGTAGTGCTACCTTATCGATGGCCCATGCCGGTTATAAGTGTGTTGTCCAATTTGTTTCTTTGTTATTGGGTAACATTGAGCAGATCCATGGAACCTACTATGTGCCATTAAAAGATGCGAACAACTTCCCCATTGCTCCTGGGGCAGATCAATTATTGCCTCTGGTGGACGGTGCAGACTACTTTGCCATACCATTAACTATTACTACAAAGGGTGTTTCCTATGTGGATTATGACATCGTTAATAGGATGAACGACATGGAACGCAACCAAATGTTGCCAATTTGCGTCTCCCAGTTAAAGAAAAATATCGATAAGGGCTTGGAATTCGTTGCATCGAGATCTGCATCATCTTAA(SEQ ID NO：17)。

ATGTTTGTCAGGGTTAAATTGAATAAACCAGTAAAATGGTATAGGTTCTATAGTACGTTGGATTCACATTCCCTAAAGTTACAGAGCGGCTCGAAGTTTGTAAAAATAAAGCCAGTAAATAACTTGAGGAGTAGTTCATCAGCAGATTTCGTGTCCCCACCAAATTCCAAATTACAATCTTTAATCTGGCAGAACCCTTTACAAAATGTTTATATAACTAAAAAACCATGGACTCCATCCACAAGAGAAGCGATGGTTGAATTCATAACTCATTTACATGAGTCATACCCCGAGGTGAACGTCATTGTTCAACCCGATGTGGCAGAAGAAATTTCCCAGGATTTCAAATCTCCTTTGGAGAATGATCCCAACCGACCTCATATACTTTATACTGGTCCTGAACAAGATATCGTAAACAGAACAGACTTATTGGTGACATTGGGAGGTGATGGGACTATTTTACACGGCGTATCAATGTTCGGAAATACGCAAGTTCCTCCGGTTTTAGCATTTGCTCTGGGCACTCTGGGCTTTCTATTACCGTTTGATTTTAAGGAGCATAAAAAGGTCTTTCAGGAAGTAATCAGCTCTAGAGCCAAATGTTTGCATAGAACACGGCTAGAATGTCATTTGAAAAAAAAGGATAGCAACTCATCTATTGTGACCCATGCTATGAATGACATATTCTTACATAGGGGTAATTCCCCTCATCTCACTAACCTGGACATTTTCATTGATGGGGAATTTTTGACAAGAACGACAGCAGATGGTGTTGCATTGGCCACTCCAACGGGTTCCACAGCATATTCATTATCAGCAGGTGGATCTATTGTTTCCCCATTAGTCCCTGCTATTTTAATGACACCAATTTGTCCTCGCTCTTTGTCATTCCGACCACTGATTTTGCCTCATTCATCCCACATTAGGATAAAGATAGGTTCCAAATTGAACCAAAAACCAGTCAACAGTGTGGTAAAACTTTCTGTTGATGGTATTCCTCAACAGGATTTAGATGTTGGTGATGAAATTTATGTTATAAATGAGGTCGGCACTATATACATAGATGGTACTCAGCTTCCGACGACAAGAAAAACTGAAAATGACTTTAATAATTCAAAAAAGCCTAAAAGGTCAGGGATTTATTGTGTCGCCAAGACCGAGAATGACTGGATTAGAGGAATCAATGAACTTTTAGGATTCAATTCTAGCTTTAGGCTGACCAAGAGACAGACTGATAATGATTAA(SEQ ID NO：18)。

ATGCGAATTGGCATACCAAGAGAACGGTTAACCAATGAAACCCGTGTTGCAGCAACGCCAAAAACAGTGGAACAGCTGCTGAAACTGGGTTTTACCGTCGCGGTAGAGAGCGGCGCGGGTCAACTGGCAAGTTTTGACGATAAAGCGTTTGTGCAAGCGGGCGCTGAAATTGTAGAAGGGAATAGCGTCTGGCAGTCAGAGATCATTCTGAAGGTCAATGCGCCGTTAGATGATGAAATTGCGTTACTGAATCCTGGGACAACGCTGGTGAGTTTTATCTGGCCTGCGCAGAATCCGGAATTAATGCAAAAACTTGCGGAACGTAACGTGACCGTGATGGCGATGGACTCTGTGCCGCGTATCTCACGCGCACAATCGCTGGACGCACTAAGCTCGATGGCGAACATCGCCGGTTATCGCGCCATTGTTGAAGCGGCACATGAATTTGGGCGCTTCTTTACCGGGCAAATTACTGCGGCCGGGAAAGTGCCACCGGCAAAAGTGATGGTGATTGGTGCGGGTGTTGCAGGTCTGGCCGCCATTGGCGCAGCAAACAGTCTCGGCGCGATTGTGCGTGCATTCGACACCCGCCCGGAAGTGAAAGAACAAGTTCAAAGTATGGGCGCGGAATTCCTCGAGCTGGATTTTAAAGAGGAAGCTGGCAGCGGCGATGGCTATGCCAAAGTGATGTCGGACGCGTTCATCAAAGCGGAAATGGAACTCTTTGCCGCCCAGGCAAAAGAGGTCGATATCATTGTCACCACCGCGCTTATTCCAGGCAAACCAGCGCCGAAGCTAATTACCCGTGAAATGGTTGACTCCATGAAGGCGGGCAGTGTGATTGTCGACCTGGCAGCCCAAAACGGCGGCAACTGTGAATACACCGTGCCGGGTGAAATCTTCACTACGGAAAATGGTGTCAAAGTGATTGGTTATACCGATCTTCCGGGCCGTCTGCCGACGCAATCCTCACAGCTTTACGGCACAAACCTCGTTAATCTGCTGAAACTGTTGTGCAAAGAGAAAGACGGCAATATCACTGTTGATTTTGATGATGTGGTGATTCGCGGCGTGACCGTGATCCGTGCGGGCGAAATTACCTGGCCGGCACCGCCGATTCAGGTATCAGCTCAGCCGCAGGCGGCACAAAAAGCGGCACCGGAAGTGAAAACTGAGGAAAAATGTACCTGCTCACCGTGGCGTAAATACGCGTTGATGGCGCTGGCAATCATTCTTTTTGGCTGGATGGCAAGCGTTGCGCCGAAAGAATTCCTTGGGCACTTCACCGTTTTCGCGCTGGCCTGCGTTGTCGGTTATTACGTGGTGTGGAATGTATCGCACGCGCTGCATACACCGTTGATGTCGGTCACCAACGCGATTTCAGGGATTATTGTTGTCGGAGCACTGTTGCAGATTGGCCAGGGCGGCTGGGTTAGCTTCCTTAGTTTTATCGCGGTGCTTATAGCCAGCATTAATATTTTCGGTGGCTTCACCGTGACTCAGCGCATGCTGAAAATGTTCCGCAAAAATTAA(SEQ ID NO：19)

ATGTCTGGAGGATTAGTTACAGCTGCATACATTGTTGCCGCGATCCTGTTTATCTTCAGTCTGGCCGGTCTTTCGAAACATGAAACGTCTCGCCAGGGTAACAACTTCGGTATCGCCGGGATGGCGATTGCGTTAATCGCAACCATTTTTGGACCGGATACGGGTAATGTTGGCTGGATCTTGCTGGCGATGGTCATTGGTGGGGCAATTGGTATCCGTCTGGCGAAGAAAGTTGAAATGACCGAAATGCCAGAACTGGTGGCGATCCTGCATAGCTTCGTGGGTCTGGCGGCAGTGCTGGTTGGCTTTAACAGCTATCTGCATCATGACGCGGGAATGGCACCGATTCTGGTCAATATTCACCTGACGGAAGTGTTCCTCGGTATCTTCATCGGGGCGGTAACGTTCACGGGTTCGGTGGTGGCGTTCGGCAAACTGTGTGGCAAGATTTCGTCTAAACCATTGATGCTGCCAAACCGTCACAAAATGAACCTGGCGGCTCTGGTCGTTTCCTTCCTGCTGCTGATTGTATTTGTTCGCACGGACAGCGTCGGCCTGCAAGTGCTGGCATTGCTGATAATGACCGCAATTGCGCTGGTATTCGGCTGGCATTTAGTCGCCTCCATCGGTGGTGCAGATATGCCAGTGGTGGTGTCGATGCTGAACTCGTACTCCGGCTGGGCGGCTGCGGCTGCGGGCTTTATGCTCAGCAACGACCTGCTGATTGTGACCGGTGCGCTGGTCGGTTCTTCGGGGGCTATCCTTTCTTACATTATGTGTAAGGCGATGAACCGTTCCTTTATCAGCGTTATTGCGGGTGGTTTCGGCACCGACGGCTCTTCTACTGGCGATGATCAGGAAGTGGGTGAGCACCGCGAAATCACCGCAGAAGAGACAGCGGAACTGCTGAAAAACTCCCATTCAGTGATCATTACTCCGGGGTACGGCATGGCAGTCGCGCAGGCGCAATATCCTGTCGCTGAAATTACTGAGAAATTGCGCGCTCGTGGTATTAATGTGCGTTTCGGTATCCACCCGGTCGCGGGGCGTTTGCCTGGACATATGAACGTATTGCTGGCTGAAGCAAAAGTACCGTATGACATCGTGCTGGAAATGGACGAGATCAATGATGACTTTGCTGATACCGATACCGTACTGGTGATTGGTGCTAACGATACGGTTAACCCGGCGGCGCAGGATGATCCGAAGAGTCCGATTGCTGGTATGCCTGTGCTGGAAGTGTGGAAAGCGCAGAACGTGATTGTCTTTAAACGTTCGATGAACACTGGCTATGCTGGTGTGCAAAACCCGCTGTTCTTCAAGGAAAACACCCACATGCTGTTTGGTGACGCCAAAGCCAGCGTGGATGCAATCCTGAAAGCTCTGTAA(SEQ ID NO：20)

ATGTCTATTCCAGAAACTCAAAAAGCCATTATCTTCTACGAATCCAACGGCAAGTTGGAGCATAAGGATATCCCAGTTCCAAAGCCAAAGCCCAACGAATTGTTAATCAACGTCAAGTACTCTGGTGTCTGCCACACCGATTTGCACGCTTGGCATGGTGACTGGCCATTGCCAACTAAGTTACCATTAGTTGGTGGTCACGAAGGTGCCGGTGTCGTTGTCGGCATGGGTGAAAACGTTAAGGGCTGGAAGATCGGTGACTACGCCGGTATCAAATGGTTGAACGGTTCTTGTATGGCCTGTGAATACTGTGAATTGGGTAACGAATCCAACTGTCCTCACGCTGACTTGTCTGGTTACACCCACGACGGTTCTTTCCAAGAATACGCTACCGCTGACGCTGTTCAAGCCGCTCACATTCCTCAAGGTACTGACTTGGCTGAAGTCGCGCCAATCTTGTGTGCTGGTATCACCGTATACAAGGCTTTGAAGTCTGCCAACTTGAGAGCAGGCCACTGGGCGGCCATTTCTGGTGCTGCTGGTGGTCTAGGTTCTTTGGCTGTTCAATATGCTAAGGCGATGGGTTACAGAGTCTTAGGTATTGATGGTGGTCCAGGAAAGGAAGAATTGTTTACCTCGCTCGGTGGTGAAGTATTCATCGACTTCACCAAAGAGAAGGACATTGTTAGCGCAGTCGTTAAGGCTACCAACGGCGGTGCCCACGGTATCATCAATGTTTCCGTTTCCGAAGCCGCTATCGAAGCTTCTACCAGATACTGTAGGGCGAACGGTACTGTTGTCTTGGTTGGTTTGCCAGCCGGTGCAAAGTGCTCCTCTGATGTCTTCAACCACGTTGTCAAGTCTATCTCCATTGTCGGCTCTTACGTGGGGAACAGAGCTGATACCAGAGAAGCCTTAGATTTCTTTGCCAGAGGTCTAGTCAAGTCTCCAATAAAGGTAGTTGGCTTATCCAGTTTACCAGAAATTTACGAAAAGATGGAGAAGGGCCAAATTGCTGGTAGATACGTTGTTGACACTTCTAAATAA(SEQ IDNO：21)。

ATGTCTCAGACTCACAAGCATGCTATTCCTGCTAACATAGCTGACAGATGCTTAATAAATCCAGAACAGTATGAAACTAAATACAAGCAATCTATAAACGATCCTGACACTTTCTGGGGAGAGCAGGGTAAGATATTGGACTGGATTACACCATACCAAAAGGTCAAGAACACTTCATTTGCTCCTGGTAATGTTTCTATTAAATGGTACGAGGACGGTACATTAAACTTAGCAGCAAACTGCTTGGACAGGCACTTGCAAGAGAACGGAGACAGAACTGCAATAATTTGGGAGGGTGACGACGCATCTCAATCTAAGCACATATCATACAGAGAGTTACACAGAGACGTTTGCAGATTCGCTAACACATTGTTGGATTTGGGAATAAAGAAAGGTGACGTTGTTGCAATTTATATGCCTATGGTTCCTGAGGCTGCTGTCGCTATGTTGGCTTGCGCAAGGATAGGAGCTGTCCATTCTGTCATTTTTGGTGGTTTTTCACCTGAGGCAATAGCAGGTAGGATAATTGATTCATCTTCAAGGTTGGTCATAACTGCAGATGAGGGAGTCAGGGCAGGAAGATCTATTCCATTGAAGAAGAACGTTGACGATGCATTGAAGAACCCAAACGTTACTTCTGTCGAGCACGTCATTGTCTTAAAAAGAACTGGAAACGACATAGACTGGCAAGAGGGTAGGGACTTATGGTGGAGGGACTTGATTGAGAAGGCTTCACCTGAACACCAGCCAGAGGCAATGAATGCAGAAGACCCATTGTTTATTTTATATACATCTGGATCTACAGGAAAGCCAAAGGGAGTCTTGCATACTACAGGTGGTTACTTGGTCTATGCAGCAACAACTTTTAAGTATGTCTTCGACTACCACCCTGGTGACATTTACTGGTGCACAGCTGACGTTGGATGGGTCACAGGTCACTCTTACTTGTTGTACGGACCTTTGGCATGCGGTGCTACTACATTGATGTTCGAGGGAGTCCCTAACTGGCCTACACCTGCTAGGATGTGCCAGGTTGTCGACAAGCACCAGGTCAACATACTGTACACAGCACCAACAGCTATTAGGGCATTGATGGCAGAGGGTGACAAGGCAATTGAGGGAACAGACAGGTCTTCTTTGAGAATATTGGGATCTGTCGGTGAGCCAATAAACCCAGAGGCATGGGAGTGGTACTGGAAGAAGATAGGAAAGGAGAAATGTCCAGTCGTCGACACATGGTGGCAGACAGAGACAGGTGGATTTATGATAACTCCTTTGCCAGGAGCTATAGAGTTGAAGGCTGGTTCAGCAACAAGGCCATTCTTCGGAGTCCAGCCTGCATTGGTCGACAACGAGGGTCATCCACAGGAAGGTGCTACAGAGGGTAACTTAGTCATTACTGACTCTTGGCCTGGTCAGGCTAGGACATTGTTCGGTGACCATGAGAGGTTCGAGCAGACTTACTTTTCTACATTTAAAAATATGTACTTTTCTGGAGACGGTGCTAGAAGGGATGAAGATGGTTACTATTGGATAACTGGTAGGGTCGATGATGTCTTAAACGTCTCAGGACACAGGTTGGGAACTGCTGAAATTGAATCAGCATTGGTCGCTCACCCTAAGATAGCTGAGGCAGCTGTCGTCGGAATTCCTCACGCAATTAAGGGACAGGCAATTTACGCATACGTCACTTTGAACCACGGTGAAGAGCCATCACCAGAGTTGTACGCAGAGGTTAGGAACTGGGTCAGGAAGGAGATTGGACCTTTGGCAACTCCAGACGTCTTGCACTGGACAGACTCATTGCCTAAGACAAGGTCTGGAAAAATAATGAGGAGAATATTGAGGAAAATTGCTGCTGGAGATACTTCAAACTTGGGTGACACTTCTACATTGGCTGACCCAGGTGTTGTCGAGAAACCATTGGAGGAAAAACAGGCAATAGCTATGCCATCTTAA(SEQID NO：22)。

ATGACTAAGCTACACTTTGACACTGCTGAACCAGTCAAGATCACACTTCCAAATGGTTTGACATACGAGCAACCAACCGGTCTATTCATTAACAACAAGTTTATGAAAGCTCAAGACGGTAAGACCTATCCCGTCGAAGATCCTTCCACTGAAAACACCGTTTGTGAGGTCTCTTCTGCCACCACTGAAGATGTTGAATATGCTATCGAATGTGCCGACCGTGCTTTCCACGACACTGAATGGGCTACCCAAGACCCAAGAGAAAGAGGCCGTCTACTAAGTAAGTTGGCTGACGAATTGGAAAGCCAAATTGACTTGGTTTCTTCCATTGAAGCTTTGGACAATGGTAAAACTTTGGCCTTAGCCCGTGGGGATGTTACCATTGCAATCAACTGTCTAAGAGATGCTGCTGCCTATGCCGACAAAGTCAACGGTAGAACAATCAACACCGGTGACGGCTACATGAACTTCACCACCTTAGAGCCAATCGGTGTCTGTGGTCAAATTATTCCATGGAACTTTCCAATAATGATGTTGGCTTGGAAGATCGCCCCAGCATTGGCCATGGGTAACGTCTGTATCTTGAAACCCGCTGCTGTCACACCTTTAAATGCCCTATACTTTGCTTCTTTATGTAAGAAGGTTGGTATTCCAGCTGGTGTCGTCAACATCGTTCCAGGTCCTGGTAGAACTGTTGGTGCTGCTTTGACCAACGACCCAAGAATCAGAAAGCTGGCTTTTACCGGTTCTACAGAAGTCGGTAAGAGTGTTGCTGTCGACTCTTCTGAATCTAACTTGAAGAAAATCACTTTGGAACTAGGTGGTAAGTCCGCCCATTTGGTCTTTGACGATGCTAACATTAAGAAGACTTTACCAAATCTAGTAAACGGTATTTTCAAGAACGCTGGTCAAATTTGTTCCTCTGGTTCTAGAATTTACGTTCAAGAAGGTATTTACGACGAACTATTGGCTGCTTTCAAGGCTTACTTGGAAACCGAAATCAAAGTTGGTAATCCATTTGACAAGGCTAACTTCCAAGGTGCTATCACTAACCGTCAACAATTCGACACAATTATGAACTACATCGATATCGGTAAGAAAGAAGGCGCCAAGATCTTAACTGGTGGCGAAAAAGTTGGTGACAAGGGTTACTTCATCAGACCAACCGTTTTCTACGATGTTAATGAAGACATGAGAATTGTTAAGGAAGAAATTTTTGGACCAGTTGTCACTGTCGCAAAGTTCAAGACTTTAGAAGAAGGTGTCGAAATGGCTAACAGCTCTGAATTCGGTCTAGGTTCTGGTATCGAAACAGAATCTTTGAGCACAGGTTTGAAGGTGGCCAAGATGTTGAAGGCCGGTACCGTCTGGATCAACACATACAACGATTTTGACTCCAGAGTTCCATTCGGTGGTGTTAAGCAATCTGGTTACGGTAGAGAAATGGGTGAAGAAGTCTACCATGCATACACTGAAGTAAAAGCTGTCAGAATTAAGTTGTAA(SEQID NO：23)。

ATGAATCAACAGGATATTGAACAGGTGGTGAAAGCGGTACTGCTGAAAATGCAAAGCAGTGACACGCCGTCCGCCGCCGTTCATGAGATGGGCGTTTTCGCGTCCCTGGATGACGCCGTTGCGGCAGCCAAAGTCGCCCAGCAAGGGTTAAAAAGCGTGGCAATGCGCCAGTTAGCCATTGCTGCCATTCGTGAAGCAGGCGAAAAACACGCCAGAGATTTAGCGGAACTTGCCGTCAGTGAAACCGGCATGGGGCGCGTTGAAGATAAATTTGCAAAAAACGTCGCTCAGGCGCGCGGCACACCAGGCGTTGAGTGCCTCTCTCCGCAAGTGCTGACTGGCGACAACGGCCTGACCCTAATTGAAAACGCACCCTGGGGCGTGGTGGCTTCGGTGACGCCTTCCACTAACCCGGCGGCAACCGTAATTAACAACGCCATCAGCCTGATTGCCGCGGGCAACAGCGTCATTTTTGCCCCGCATCCGGCGGCGAAAAAAGTCTCCCAGCGGGCGATTACGCTGCTCAACCAGGCGATTGTTGCCGCAGGTGGGCCGGAAAACTTACTGGTTACTGTGGCAAATCCGGATATCGAAACCGCGCAACGCTTGTTCAAGTTTCCGGGTATCGGCCTGCTGGTGGTAACCGGCGGCGAAGCGGTAGTAGAAGCGGCGCGTAAACACACCAATAAACGTCTGATTGCCGCAGGCGCTGGCAACCCGCCGGTAGTGGTGGATGAAACCGCCGACCTCGCCCGTGCCGCTCAGTCCATCGTCAAAGGCGCTTCTTTCGATAACAACATCATTTGTGCCGACGAAAAGGTACTGATTGTTGTTGATAGCGTAGCCGATGAACTGATGCGTCTGATGGAAGGCCAGCACGCGGTGAAACTGACCGCAGAACAGGCGCAGCAGCTGCAACCGGTGTTGCTGAAAAATATCGACGAGCGCGGAAAAGGCACCGTCAGCCGTGACTGGGTTGGTCGCGACGCAGGCAAAATCGCGGCGGCAATCGGCCTTAAAGTTCCGCAAGAAACGCGCCTGCTGTTTGTGGAAACCACCGCAGAACATCCGTTTGCCGTGACTGAACTGATGATGCCGGTGTTGCCCGTCGTGCGCGTCGCCAACGTGGCGGATGCCATTGCGCTAGCGGTGAAACTGGAAGGCGGTTGCCACCACACGGCGGCAATGCACTCGCGCAACATCGAAAACATGAACCAGATGGCGAATGCTATTGATACCAGCATTTTCGTTAAGAACGGACCGTGCATTGCCGGGCTGGGGCTGGGCGGGGAAGGCTGGACCACCATGACCATCACCACGCCAACCGGTGAAGGGGTAACCAGCGCGCGTACGTTTGTCCGTCTGCGTCGCTGTGTATTAGTCGATGCGTTTCGCATTGTTTAA(SEQ ID NO：24)。

ATGTCATTACCGTTCTTAACTTCTGCACCGGGAAAGGTTATTATTTTTGGTGAACACTCTGCTGTGTACAACAAGCCTGCCGTCGCTGCTAGTGTGTCTGCGTTGAGAACCTACCTGCTAATAAGCGAGTCATCTGCACCAGATACTATTGAATTGGACTTCCCGGACATTAGCTTTAATCATAAGTGGTCCATCAATGATTTCAATGCCATCACCGAGGATCAAGTAAACTCCCAAAAATTGGCCAAGGCTCAACAAGCCACCGATGGCTTGTCTCAGGAACTCGTTAGTCTTTTGGATCCGTTGTTAGCTCAACTATCCGAATCCTTCCACTACCATGCAGCGTTTTGTTTCCTGTATATGTTTGTTTGCCTATGCCCCCATGCCAAGAATATTAAGTTTTCTTTAAAGTCTACTTTACCCATCGGTGCTGGGTTGGGCTCAAGCGCCTCTATTTCTGTATCACTGGCCTTAGCTATGGCCTACTTGGGGGGGTTAATAGGATCTAATGACTTGGAAAAGCTGTCAGAAAACGATAAGCATATAGTGAATCAATGGGCCTTCATAGGTGAAAAGTGTATTCACGGTACCCCTTCAGGAATAGATAACGCTGTGGCCACTTATGGTAATGCCCTGCTATTTGAAAAAGACTCACATAATGGAACAATAAATACAAACAATTTTAAGTTCTTAGATGATTTCCCAGCCATTCCAATGATCCTAACCTATACTAGAATTCCAAGGTCTACAAAAGATCTTGTTGCTCGCGTTCGTGTGTTGGTCACCGAGAAATTTCCTGAAGTTATGAAGCCAATTCTAGATGCCATGGGTGAATGTGCCCTACAAGGCTTAGAGATCATGACAAAGTTAAGTAAATGTAAAGGCACCGATGACGAGGCCGTAGAAACTAATAATGAACTGTATGAACAACTATTGGAATTGATAAGAATAAATCATGGACTGCTTGTCTCAATCGGTGTTTCTCATCCTGGATTAGAACTTATTAAAAATCTGAGCGATGATTTGAGAATTGGCTCCACAAAACTTACCGGTGCTGGTGGCGGCGGTTGCTCTTTGACTTTGTTACGAAGAGACATTACTCAAGAGCAAATTGACAGTTTCAAAAAGAAATTGCAAGATGATTTTAGTTACGAGACATTTGAAACAGACTTGGGTGGGACTGGCTGCTGTTTGTTAAGCGCAAAAAATTTGAATAAAGATCCTAAAATCAAATCCCTAGTATTCCAATTATTTGAAAATAAAACTACCACAAAGCAACAAATTGACGATCTATTATTGCCAGGAAACACGAATTTACCATGGACTTCATAA(SEQ ID NO：25)。

ATGACTGCCGACAACAATAGTATGCCCCATGGTGCAGTATCTAGTTACGCCAAATTAGTGCAAAACCAAACACCTGAAGACATTTTGGAAGAGTTTCCTGAAATTATTCCATTACAACAAAGACCTAATACCCGATCTAGTGAGACGTCAAATGACGAAAGCGGAGAAACATGTTTTTCTGGTCATGATGAGGAGCAAATTAAGTTAATGAATGAAAATTGTATTGTTTTGGATTGGGACGATAATGCTATTGGTGCCGGTACCAAGAAAGTTTGTCATTTAATGGAAAATATTGAAAAGGGTTTACTACATCGTGCATTCTCCGTCTTTATTTTCAATGAACAAGGTGAATTACTTTTACAACAAAGAGCCACTGAAAAAATAACTTTCCCTGATCTTTGGACTAACACATGCTGCTCTCATCCACTATGTATTGATGACGAATTAGGTTTGAAGGGTAAGCTAGACGATAAGATTAAGGGCGCTATTACTGCGGCGGTGAGAAAACTAGATCATGAATTAGGTATTCCAGAAGATGAAACTAAGACAAGGGGTAAGTTTCACTTTTTAAACAGAATCCATTACATGGCACCAAGCAATGAACCATGGGGTGAACATGAAATTGATTACATCCTATTTTATAAGATCAACGCTAAAGAAAACTTGACTGTCAACCCAAACGTCAATGAAGTTAGAGACTTCAAATGGGTTTCACCAAATGATTTGAAAACTATGTTTGCTGACCCAAGTTACAAGTTTACGCCTTGGTTTAAGATTATTTGCGAGAATTACTTATTCAACTGGTGGGAGCAATTAGATGACCTTTCTGAAGTGGAAAATGACAGGCAAATTCATAGAATGCTATAA(SEQ ID NO：26)。

ATGTCTCAGAACGTTTACATTGTATCGACTGCCAGAACCCCAATTGGTTCATTCCAGGGTTCTCTATCCTCCAAGACAGCAGTGGAATTGGGTGCTGTTGCTTTAAAAGGCGCCTTGGCTAAGGTTCCAGAATTGGATGCATCCAAGGATTTTGACGAAATTATTTTTGGTAACGTTCTTTCTGCCAATTTGGGCCAAGCTCCGGCCAGACAAGTTGCTTTGGCTGCCGGTTTGAGTAATCATATCGTTGCAAGCACAGTTAACAAGGTCTGTGCATCCGCTATGAAGGCAATCATTTTGGGTGCTCAATCCATCAAATGTGGTAATGCTGATGTTGTCGTAGCTGGTGGTTGTGAATCTATGACTAACGCACCATACTACATGCCAGCAGCCCGTGCGGGTGCCAAATTTGGCCAAACTGTTCTTGTTGATGGTGTCGAAAGAGATGGGTTGAACGATGCGTACGATGGTCTAGCCATGGGTGTACACGCAGAAAAGTGTGCCCGTGATTGGGATATTACTAGAGAACAACAAGACAATTTTGCCATCGAATCCTACCAAAAATCTCAAAAATCTCAAAAGGAAGGTAAATTCGACAATGAAATTGTACCTGTTACCATTAAGGGATTTAGAGGTAAGCCTGATACTCAAGTCACGAAGGACGAGGAACCTGCTAGATTACACGTTGAAAAATTGAGATCTGCAAGGACTGTTTTCCAAAAAGAAAACGGTACTGTTACTGCCGCTAACGCTTCTCCAATCAACGATGGTGCTGCAGCCGTCATCTTGGTTTCCGAAAAAGTTTTGAAGGAAAAGAATTTGAAGCCTTTGGCTATTATCAAAGGTTGGGGTGAGGCCGCTCATCAACCAGCTGATTTTACATGGGCTCCATCTCTTGCAGTTCCAAAGGCTTTGAAACATGCTGGCATCGAAGACATCAATTCTGTTGATTACTTTGAATTCAATGAAGCCTTTTCGGTTGTCGGTTTGGTGAACACTAAGATTTTGAAGCTAGACCCATCTAAGGTTAATGTATATGGTGGTGCTGTTGCTCTAGGTCACCCATTGGGTTGTTCTGGTGCTAGAGTGGTTGTTACACTGCTATCCATCTTACAGCAAGAAGGAGGTAAGATCGGTGTTGCCGCCATTTGTAATGGTGGTGGTGGTGCTTCCTCTATTGTCATTGAAAAGATATGA(SEQ ID NO：27)。

ATGACCGTTTACACAGCATCCGTTACCGCACCCGTCAACATCGCAACCCTTAAGTATTGGGGGAAAAGGGACACGAAGTTGAATCTGCCCACCAATTCGTCCATATCAGTGACTTTATCGCAAGATGACCTCAGAACGTTGACCTCTGCGGCTACTGCACCTGAGTTTGAACGCGACACTTTGTGGTTAAATGGAGAACCACACAGCATCGACAATGAAAGAACTCAAAATTGTCTGCGCGACCTACGCCAATTAAGAAAGGAAATGGAATCGAAGGACGCCTCATTGCCCACATTATCTCAATGGAAACTCCACATTGTCTCCGAAAATAACTTTCCTACAGCAGCTGGTTTAGCTTCCTCCGCTGCTGGCTTTGCTGCATTGGTCTCTGCAATTGCTAAGTTATACCAATTACCACAGTCAACTTCAGAAATATCTAGAATAGCAAGAAAGGGGTCTGGTTCAGCTTGTAGATCGTTGTTTGGCGGATACGTGGCCTGGGAAATGGGAAAAGCTGAAGATGGTCATGATTCCATGGCAGTACAAATCGCAGACAGCTCTGACTGGCCTCAGATGAAAGCTTGTGTCCTAGTTGTCAGCGATATTAAAAAGGATGTGAGTTCCACTCAGGGTATGCAATTGACCGTGGCAACCTCCGAACTATTTAAAGAAAGAATTGAACATGTCGTACCAAAGAGATTTGAAGTCATGCGTAAAGCCATTGTTGAAAAAGATTTCGCCACCTTTGCAAAGGAAACAATGATGGATTCCAACTCTTTCCATGCCACATGTTTGGACTCTTTCCCTCCAATATTCTACATGAATGACACTTCCAAGCGTATCATCAGTTGGTGCCACACCATTAATCAGTTTTACGGAGAAACAATCGTTGCATACACGTTTGATGCAGGTCCAAATGCTGTGTTGTACTACTTAGCTGAAAATGAGTCGAAACTCTTTGCATTTATCTATAAATTGTTTGGCTCTGTTCCTGGATGGGACAAGAAATTTACTACTGAGCAGCTTGAGGCTTTCAACCATCAATTTGAATCATCTAACTTTACTGCACGTGAATTGGATCTTGAGTTGCAAAAGGATGTTGCCAGAGTGATTTTAACTCAAGTCGGTTCAGGCCCACAAGAAACAAACGAATCTTTGATTGACGCAAAGACTGGTCTACCAAAGGAATAA(SEQ ID NO：28)。

ATGAAACTCTCAACTAAACTTTGTTGGTGTGGTATTAAAGGAAGACTTAGGCCGCAAAAGCAACAACAATTACACAATACAAACTTGCAAATGACTGAACTAAAAAAACAAAAGACCGCTGAACAAAAAACCAGACCTCAAAATGTCGGTATTAAAGGTATCCAAATTTACATCCCAACTCAATGTGTCAACCAATCTGAGCTAGAGAAATTTGATGGCGTTTCTCAAGGTAAATACACAATTGGTCTGGGCCAAACCAACATGTCTTTTGTCAATGACAGAGAAGATATCTACTCGATGTCCCTAACTGTTTTGTCTAAGTTGATCAAGAGTTACAACATCGACACCAACAAAATTGGTAGATTAGAAGTCGGTACTGAAACTCTGATTGACAAGTCCAAGTCTGTCAAGTCTGTCTTGATGCAATTGTTTGGTGAAAACACTGACGTCGAAGGTATTGACACGCTTAATGCCTGTTACGGTGGTACCAACGCGTTGTTCAACTCTTTGAACTGGATTGAATCTAACGCATGGGATGGTAGAGACGCCATTGTAGTTTGCGGTGATATTGCCATCTACGATAAGGGTGCCGCAAGACCAACCGGTGGTGCCGGTACTGTTGCTATGTGGATCGGTCCTGATGCTCCAATTGTATTTGACTCTGTAAGAGCTTCTTACATGGAACACGCCTACGATTTTTACAAGCCAGATTTCACCAGCGAATATCCTTACGTCGATGGTCATTTTTCATTAACTTGTTACGTCAAGGCTCTTGATCAAGTTTACAAGAGTTATTCCAAGAAGGCTATTTCTAAAGGGTTGGTTAGCGATCCCGCTGGTTCGGATGCTTTGAACGTTTTGAAATATTTCGACTACAACGTTTTCCATGTTCCAACCTGTAAATTGGTCACAAAATCATACGGTAGATTACTATATAACGATTTCAGAGCCAATCCTCAATTGTTCCCAGAAGTTGACGCCGAATTAGCTACTCGCGATTATGACGAATCTTTAACCGATAAGAACATTGAAAAAACTTTTGTTAATGTTGCTAAGCCATTCCACAAAGAGAGAGTTGCCCAATCTTTGATTGTTCCAACAAACACAGGTAACATGTACACCGCATCTGTTTATGCCGCCTTTGCATCTCTATTAAACTATGTTGGATCTGACGACTTACAAGGCAAGCGTGTTGGTTTATTTTCTTACGGTTCCGGTTTAGCTGCATCTCTATATTCTTGCAAAATTGTTGGTGACGTCCAACATATTATCAAGGAATTAGATATTACTAACAAATTAGCCAAGAGAATCACCGAAACTCCAAAGGATTACGAAGCTGCCATCGAATTGAGAGAAAATGCCCATTTGAAGAAGAACTTCAAACCTCAAGGTTCCATTGAGCATTTGCAAAGTGGTGTTTACTACTTGACCAACATCGATGACAAATTTAGAAGATCTTACGATGTTAAAAAATAA(SEQ ID NO：29)。

ATGGTTTTAACCAATAAAACAGTCATTTCTGGATCGAAAGTCAAAAGTTTATCATCTGCGCAATCGAGCTCATCAGGACCTTCATCATCTAGTGAGGAAGATGATTCCCGCGATATTGAAAGCTTGGATAAGAAAATACGTCCTTTAGAAGAATTAGAAGCATTATTAAGTAGTGGAAATACAAAACAATTGAAGAACAAAGAGGTCGCTGCCTTGGTTATTCACGGTAAGTTACCTTTGTACGCTTTGGAGAAAAAATTAGGTGATACTACGAGAGCGGTTGCGGTACGTAGGAAGGCTCTTTCAATTTTGGCAGAAGCTCCTGTATTAGCATCTGATCGTTTACCATATAAAAATTATGACTACGACCGCGTATTTGGCGCTTGTTGTGAAAATGTTATAGGTTACATGCCTTTGCCCGTTGGTGTTATAGGCCCCTTGGTTATCGATGGTACATCTTATCATATACCAATGGCAACTACAGAGGGTTGTTTGGTAGCTTCTGCCATGCGTGGCTGTAAGGCAATCAATGCTGGCGGTGGTGCAACAACTGTTTTAACTAAGGATGGTATGACAAGAGGCCCAGTAGTCCGTTTCCCAACTTTGAAAAGATCTGGTGCCTGTAAGATATGGTTAGACTCAGAAGAGGGACAAAACGCAATTAAAAAAGCTTTTAACTCTACATCAAGATTTGCACGTCTGCAACATATTCAAACTTGTCTAGCAGGAGATTTACTCTTCATGAGATTTAGAACAACTACTGGTGACGCAATGGGTATGAATATGATTTCTAAAGGTGTCGAATACTCATTAAAGCAAATGGTAGAAGAGTATGGCTGGGAAGATATGGAGGTTGTCTCCGTTTCTGGTAACTACTGTACCGACAAAAAACCAGCTGCCATCAACTGGATCGAAGGTCGTGGTAAGAGTGTCGTCGCAGAAGCTACTATTCCTGGTGATGTTGTCAGAAAAGTGTTAAAAAGTGATGTTTCCGCATTGGTTGAGTTGAACATTGCTAAGAATTTGGTTGGATCTGCAATGGCTGGGTCTGTTGGTGGATTTAACGCACATGCAGCTAATTTAGTGACAGCTGTTTTCTTGGCATTAGGACAAGATCCTGCACAAAATGTTGAAAGTTCCAACTGTATAACATTGATGAAAGAAGTGGACGGTGATTTGAGAATTTCCGTATCCATGCCATCCATCGAAGTAGGTACCATCGGTGGTGGTACTGTTCTAGAACCACAAGGTGCCATGTTGGACTTATTAGGTGTAAGAGGCCCGCATGCTACCGCTCCTGGTACCAACGCACGTCAATTAGCAAGAATAGTTGCCTGTGCCGTCTTGGCAGGTGAATTATCCTTATGTGCTGCCCTAGCAGCCGGCCATTTGGTTCAAAGTCATATGACCCACAACAGGAAACCTGCTGAACCAACAAAACCTAACAATTTGGACGCCACTGATATAAATCGTTTGAAAGATGGGTCCGTCACCTGCATTAAATCCTAA(SEQID NO：30)

ATGTCAGAGTTGAGAGCCTTCAGTGCCCCAGGGAAAGCGTTACTAGCTGGTGGATATTTAGTTTTAGATACAAAATATGAAGCATTTGTAGTCGGATTATCGGCAAGAATGCATGCTGTAGCCCATCCTTACGGTTCATTGCAAGGGTCTGATAAGTTTGAAGTGCGTGTGAAAAGTAAACAATTTAAAGATGGGGAGTGGCTGTACCATATAAGTCCTAAAAGTGGCTTCATTCCTGTTTCGATAGGCGGATCTAAGAACCCTTTCATTGAAAAAGTTATCGCTAACGTATTTAGCTACTTTAAACCTAACATGGACGACTACTGCAATAGAAACTTGTTCGTTATTGATATTTTCTCTGATGATGCCTACCATTCTCAGGAGGATAGCGTTACCGAACATCGTGGCAACAGAAGATTGAGTTTTCATTCGCACAGAATTGAAGAAGTTCCCAAAACAGGGCTGGGCTCCTCGGCAGGTTTAGTCACAGTTTTAACTACAGCTTTGGCCTCCTTTTTTGTATCGGACCTGGAAAATAATGTAGACAAATATAGAGAAGTTATTCATAATTTAGCACAAGTTGCTCATTGTCAAGCTCAGGGTAAAATTGGAAGCGGGTTTGATGTAGCGGCGGCAGCATATGGATCTATCAGATATAGAAGATTCCCACCCGCATTAATCTCTAATTTGCCAGATATTGGAAGTGCTACTTACGGCAGTAAACTGGCGCATTTGGTTGATGAAGAAGACTGGAATATTACGATTAAAAGTAACCATTTACCTTCGGGATTAACTTTATGGATGGGCGATATTAAGAATGGTTCAGAAACAGTAAAACTGGTCCAGAAGGTAAAAAATTGGTATGATTCGCATATGCCAGAAAGCTTGAAAATATATACAGAACTCGATCATGCAAATTCTAGATTTATGGATGGACTATCTAAACTAGATCGCTTACACGAGACTCATGACGATTACAGCGATCAGATATTTGAGTCTCTTGAGAGGAATGACTGTACCTGTCAAAAGTATCCTGAAATCACAGAAGTTAGAGATGCAGTTGCCACAATTAGACGTTCCTTTAGAAAAATAACTAAAGAATCTGGTGCCGATATCGAACCTCCCGTACAAACTAGCTTATTGGATGATTGCCAGACCTTAAAAGGAGTTCTTACTTGCTTAATACCTGGTGCTGGTGGTTATGACGCCATTGCAGTGATTACTAAGCAAGATGTTGATCTTAGGGCTCAAACCGCTAATGACAAAAGATTTTCTAAGGTTCAATGGCTGGATGTAACTCAGGCTGACTGGGGTGTTAGGAAAGAAAAAGATCCGGAAACTTATCTTGATAAATAG(SEQID NO：31)。

ATGAGTGTGTCTACCGCCAAGAGGTCGCTGGATGTCGTTTCTCCGGGTTCATTAGCGGAGTTTGAGGGTTCAAAATCTCGTCACGATGAAATAGAAAATGAACATAGACGTACTGGTACACGTGATGGCGAGGATAGCGAGCAACCGAAGAAGAAGGGTAGCAAAACTAGCAAAAAGCAAGATTTGGATCCTGAAACTAAGCAGAAGAGGACTGCCCAAAATCGGGCCGCTCAAAGAGCTTTTAGGGAACGTAAGGAGAGGAAGATGAAGGAATTGGAGAAGAAGGTACAAAGTTTAGAGAGTATTCAGCAGCAAAATGAAGTGGAAGCTACTTTTTTGAGGGACCAGTTAATCACTCTGGTGAATGAGTTAAAAAAATATAGACCAGAGACAAGAAATGACTCAAAAGTGCTGGAATATTTAGCAAGGCGAGATCCTAATTTGCATTTTTCAAAAAATAACGTTAACCACAGCAATAGCGAGCCAATTGACACACCCAATGATGACATACAAGAAAATGTTAAACAAAAGATGAATTTCACGTTTCAATATCCGCTTGATAACGACAACGACAACGACAACAGTAAAAATGTGGGGAAACAATTACCTTCACCAAATGATCCAAGTCATTCGGCTCCTATGCCTATAAATCAGACACAAAAGAAATTAAGTGACGCTACAGATTCCTCCAGCGCTACTTTGGATTCCCTTTCAAATAGTAACGATGTTCTTAATAACACACCAAACTCCTCCACTTCGATGGATTGGTTAGATAATGTAATATATACTAACAGGTTTGTGTCAGGTGATGATGGCAGCAATAGTAAAACTAAGAATTTAGACAGTAATATGTTTTCTAATGACTTTAATTTTGAAAACCAATTTGATGAACAAGTTTCGGAGTTTTGTTCGAAAATGAACCAGGTATGTGGAACAAGGCAATGTCCCATTCCCAAGAAACCCATCTCGGCTCTTGATAAAGAAGTTTTCGCGTCATCTTCTATACTAAGTTCAAATTCTCCTGCTTTAACAAATACTTGGGAATCACATTCTAATATTACAGATAATACTCCTGCTAATGTCATTGCTACTGATGCTACTAAATATGAAAATTCCTTCTCCGGTTTTGGCCGACTTGGTTTCGATATGAGTGCCAATCATTACGTCGTGAATGATAATAGCACTGGTAGCACTGATAGCACTGGTAGCACTGGCAATAAGAACAAAAAGAACAATAATAATAGCGATGATGTACTCCCATTCATATCCGAGTCACCGTTTGATATGAACCAAGTTACTAATTTTTTTAGTCCGGGATCTACCGGCATCGGCAATAATGCTGCCTCTAACACCAATCCCAGCCTACTGCAAAGCAGCAAAGAGGATATACCTTTTATCAACGCAAATCTGGCTTTCCCAGACGACAATTCAACTAATATTCAATTACAACCTTTCTCTGAATCTCAATCTCAAAATAAGTTTGACTACGACATGTTTTTTAGAGATTCATCGAAGGAAGGTAACAATTTATTTGGAGAGTTTTTAGAGGATGACGATGATGACAAAAAAGCCGCTAATATGTCAGACGATGAGTCAAGTTTAATCAAGAACCAGTTAATTAACGAAGAACCAGAGCTTCCGAAACAATATCTACAATCGGTACCAGGAAATGAAAGCGAAATCTCACAAAAAAATGGCAGTAGTTTACAGAATGCTGACAAAATCAATAATGGCAATGATAACGATAATGATAATGATGTCGTTCCATCTAAGGAAGGCTCTTTACTAAGGTGTTCGGAAATTTGGGATAGAATAACAACACATCCGAAATACTCAGATATTGATGTCGATGGTTTATGTTCCGAGCTAATGGCAAAGGCAAAATGTTCAGAAAGAGGGGTTGTCATCAATGCAGAAGACGTTCAATTAGCTTTGAATAAGCATATGAACTAA(SEQ ID NO：32)。

ATGGCCGATGAGGAACGTTTAAAGGAGTTTAAAGGGGCAAACAAGATAGTGTTTGATCCAAATACCAGACAAGTATGGGAAAACCAGAATCGAGATGGAACAAAACCAGCAACTACTTTCCAGAGTGAAGAGGTCATAAAAAGAGCTGCCCCAGAATCTGAAAAAGACACCTCCGCCACATCAAGTATTGTTCCAGAGCTATAGAACATTGTGGCAACTGTGACTTTGGGGAGCAGGTTAGATCTGAAAACAGTTGCGCTACATGCCCGTATGCAGAATATAACCCCTAGCGTTTTGCTGCTGTCATCATGCGTATAGAGAGCCAAAAACTACAGCTTTAATTTTTGCCTCAGGGAAAATGGTTGTTACCGGTGCAAAAAGTGAGGATGACTCAAAGCTGGCCAGAAGAATATATGCAGGAATTATCCAAAAAATCAGGTTTGCAGCTAAATTCACAGACTTCAAAATACAAAATATTGTCGGTTCGTGTGACGTTAATTTCCCTATACGTCTAGAAGGGTTAGCATTCAGTCATGGTACTTTCTCCTCCTATGAGCCAGAATTGTTTCCTGGTTTGATCTATAGAATGGTGAAGCCGAAAATTGTGTTGTTAATTTTTGTTTCAGGAAAGATTGTTCTTCTGGAGCAAAGCAAAGGGAGGAAATTTACCAAGCTTTTGAAGCTATATACCCAGTTCTAAGTGAATTTAGAAAAATGTGA(SEQ ID NO：51)

ATGGATTTTGAGGAAGATTACGATGCGGAGTTTGATGATAATCAAGAAGGACAATTAGAAACACCTTTTCCATCGGTTGCGGGAGCCGATGATGGGGACAATGATAATGATGACTCTGTCGCAGAAAACATGAAGAAGAAGCAAAAGAGAGAGGCTGTAGTGGATGATGGGAGTGAAAATGCATTTGGTATACCCGAATTTACAAGAAAAGATAAGACTCTGGAGGAGATTTTAGAGATGATGGACAGTACTCCTCCTATCATTCCCGATGCAGTAATAGACTACTATTTAACCAAAAACGGGTTTAACGTAGCATATGTACAAGTGAAACGACTTTTAGCACTTGCTACTCAGAAATTTGTTAGTGATATAGCTAAGGATGCCTACGAATATTCCAGGATCAGGTCTTCCGTAGCGGTATCTAATGCTAACAACAGTCAGGCGAGAGCTAGGCAGCTATTGCAAGGACAGCGACAGACTGGCGTGCAGCAGATTTCACAACAACAACATCAACAGAATGAGAAGACTACAGCAAGCATAGTTGTTCTGACGGTGAACGATCCCAGTAGCGCTGTTGCTGAATACGGGCTCAATATAGGTCGCCCAGACTTTTATCGTTAG(SEQ ID NO：52)

实施例8 新一代工程菌株的构建

根据实施例1～7，将有效果的改造进行叠加组合，如将有效果的敲除基因Ypl062W,Yer130C,Yer134c,Exg1等两两组合进行敲除，结果显示双基因敲除会得到产量更高的菌株。

在此基础上，我们将有效果的改造进行叠加组合，形成新一代的工程菌株，菌株特性如下表4.

表4.新一代工程菌株的特征

注：“√”代表该基因被敲除，"+"代表该基因过表达一个拷贝，"*"代表该基因过表达至少2个拷贝，“-”代表该基因不被操作(即不被敲除或不过表达)

更进一步，发明人通过研究证明，新一代工程菌株J1011-37～84具有高产番茄红素的性能。

实施例9 新二代工程菌株的构建

在上一代工程菌株的基础上，我们挑选了18个优势菌株，在此基础上构建了新二代的工程菌株探究gapN和EUTE基因对番茄红素产量的影响，菌株特性如下表5.

表5.新二代工程菌株的特征

注：“√”代表该基因被过表达，“-”代表该基因不被过表达

更进一步，发明人通过研究证明，新一代工程菌株J1011-85～138具有高产番茄红素的性能。

实施例10 工程菌摇瓶培养发酵过程

在本实施例中，发明人详细介绍了实施例1～9所获得的工程菌株的发酵培养过程。

摇瓶发酵采用两级种子培养，将平板上的重组菌株挑到含有5mL YPD培养基的PA瓶中，30度摇床摇起一级种子液，过夜培养(一般14-18h)后，菌体长到对数生长期(OD在5-8左右)，再以1％的接种量将菌株转移到含有50mL YPD培养基的250mL摇瓶中，摇瓶培养得到二级种子液。约14-18h后，测二级种子的OD₆₀₀值，然后计算接种到含有200mL发酵培养基YPDG的500mL摇瓶中，使菌体终浓度OD600＝0.5，需要多少的二级种子液，然后取出算出的体积并离心，去掉上清，再用对应的发酵培养基将菌体悬浮并加入相应的500mL摇瓶中，置于30度摇床开始摇瓶发酵。每隔一段时间(约4h)取样测定细胞浓度，并在8h后将摇瓶上的报纸去掉，约48h后开始取样存于-80度冰箱留待测定番茄红素的产生情况。

实施例11 产物萃取方式比较

在本实施例中，发明人对发酵处理后所获得的产物进行萃取的方式进行了筛选，筛选过程如下所述。

方法一：从冰箱中取出样品解冻，取500μL发酵液于15mL离心管(冰上预冷)中，5000g 4度离心2min来收集菌体，去上清后再用1mL纯水重悬洗涤菌体，再加入1mL 3N的HCl并沸水浴3min来破碎细胞，离心去掉HCl后用水洗涤一次。再向其中加入1mL的丙酮(HPLC级别)，0.2g玻璃珠，1％的抗氧化剂，震荡5min，然后5000g 4度离心2min，转移上清到50mL的离心管中；再次重复加入上述提取液，并震荡，然后收集萃取液，直至菌体无明显黄色；混匀收集到的丙酮萃取液，取出2mL，12000rpm离心10分钟，再取上清1.2mL至棕色的HPLC进样瓶中，进行HPLC分析。

方法二：从冰箱中取出样品解冻，取500μL发酵液于15mL离心管(冰上预冷)中，5000g 4度离心2min来收集菌体，去上清后再用1mL纯水重悬并洗涤菌体。再向其中加入4mL的丙酮(HPLC级别)，0.2g玻璃珠，1％的抗氧化剂，震荡5min，然后冰浴超声5-10min，然后5000g 4度离心2min，转移上清到50mL的离心管中；再次重复加入上述提取液，并震荡，然后收集萃取液，直至菌体无明显黄色；混匀收集到的丙酮萃取液，取出2mL，12000rpm离心10分钟，再取上清1.2mL至棕色的HPLC进样瓶中，进行HPLC分析。

检测方法：番茄红素的检测使用四元HPLC进行的，检测器是紫外检测器，番茄红素的吸收波长是474nm，色谱柱Agilent Zorbax C18(150mm*4.6mm*5μm)，流动相A(乙腈：水＝9：1)和流动相B(甲醇：异丙醇＝3：2)按如下条件分析：0-90％B(0-15min)，90％B(15-30min)，90％-0B(30-35min)，流速1mL/min。

结果显示：方法一中产物经盐酸煮过后，番茄红素会降解，产量检测不稳定，且该方法得到的样品间隔一段时间再检测，甚至能从100mg/L降解到10mg/L，方法二得到的样品比较稳定，间隔一段时间再检测，只从100mg/L到90mg/L。说明方法二的提取方案比方法一更稳定更好。

实施例12 工程菌发酵罐培养发酵方法比较

在本实施例中，发明人对发酵培养基的条件进行了优化筛选，实验过程如下所述：

本实施例中的菌种采用J1011-3，种子培养基采用YPD培养基，发酵培养基采用摇瓶优化过的4种培养基进一步探索发酵罐水平的最优培养基，各种培养基配方如下：

①培养基1号：YPD培养基

2.5L分批培养基：2％蛋白胨，1％酵母提取物和2％葡萄糖；

1L葡萄糖补料培养基：500g/L葡萄糖；400g/L酵母浸粉

500mL乙醇补料培养基:100％纯乙醇。

②培养基2号:YPD含盐培养基

2.5L分批培养基：2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.8％KH₂PO₄和2％葡萄糖；

1L葡萄糖补料培养基：500g/L葡萄糖，5g/L MgSO₄，3.5g/L K₂SO₄，0.28g/L Na₂SO₄，10g/L酵母提取物。

1L乙醇补料培养基:100％乙醇。

③培养基3号：MMG培养基

2.5L分批培养基：2％葡萄糖，15g/L(NH₄)₂SO₄，8g/L KH₂PO₄，3g/L MgSO₄，0.72g/LZnSO₄.7H₂O，10mL/L金属溶液母液和12mL/L维生素溶液母液；

1L葡萄糖补料培养基：500g/L葡萄糖，9g/L KH₂PO₄，2.5g/L MgSO₄，3.5g/L K₂SO₄，0.28g/L Na₂SO₄，10mL/L金属溶液母液和12mL/L维生素溶液母液，10g/L酵母提取物。

④培养基4号：MME培养基

2.5L分批培养基：2％葡萄糖，15g/L(NH₄)₂SO₄，8g/L KH₂PO₄，3g/L MgSO₄，0.72g/LZnSO₄.7H₂O，10mL/L金属溶液母液和12mL/L维生素溶液母液；

1L葡萄糖补料培养基：500g/L葡萄糖，9g/L KH₂PO₄，2.5g/L MgSO₄，3.5g/L K₂SO₄，0.28g/L Na₂SO₄，10mL/L金属溶液母液和12mL/L维生素溶液母液，10g/L酵母提取物。

金属盐母液：15g/L EDTA，5.75g/L ZnSO₄，0.32g/L MnCl₂，0.50g/L CuSO₄，0.47gCoCl₂，0.48g Na₂MoO₄，2.9g/L CaCl₂，2.8g/L FeSO₄。121度灭菌20分钟。

维生素母液：0.05g/L biotin，1.0g/L calcium pantothenate，1.0g/Lnicotinic acid，25.0g/L myoinositol，1g/L thiamine hydrochloride，1g/L pyridoxolhydrochloride，0.2g/L p-aminobenzoic acid。过滤除菌。

上罐培养采用fed-batch方式，首先是分批培养，待碳源葡萄糖基本消耗完后开始补料，补料采用两级补料方式，分别为葡萄糖补料阶段(用于合成菌株)和乙醇(甘油)补料阶段(用于产物合成)。具体方法如下：

将保种管从-80度冰箱中取出放置冰上解冻，然后划YPD平板，于30度培养箱中培养，然后挑取单克隆至含5mL YPD培养基的PA瓶中，30度摇床中培养，转速为220rmp。待种子液变浑浊后(一般为指数期，OD＝5-8，14-18小时)转接至50mL新鲜的YPD培养基中(250mL三角瓶)，转接量为1％左右。放于30度摇床中培养，转速为220rmp。待种子液长至对数期时(一般14-18小时)转接至200mL新鲜的YPD培养基中(500mL三角瓶)，转接量为1％左右。放于30度摇床中培养，转速为220rmp。长至对数期的种子液作为上罐种子液。初始接种OD调至0.5，所需种子液体积根据公式进行计算。(如发酵液体积为2500mL，种子液OD值为n，则接种种子液体积为25000﹡0.5/n mL)。开始发酵后，控制pH值为5.5，通气量为1.5vvm，初始搅拌速率设置为300rpm，溶氧维持在30％以上(300-600rpm)。

当分批培养时葡萄糖浓度降至2g/L左右时开始补料葡萄糖，初始补料速率为10mL/L发酵液/h，以维持发酵液中葡萄糖的残留浓度在1g/L左右，每两个小时取样测量一次OD600值和检测一次葡萄糖含量，当葡萄糖浓度低于1g/L时增加补料速率。其中，在发酵培养基1的葡萄糖补料阶段每2小时补料一次酵母提取物(400g/L，每次补加20mL)。当OD值增加缓慢时(开始进入稳定期)停止补料葡萄糖，此时开始监测乙醇残留量，当乙醇浓度降至5g/L时开始补料乙醇或者是甘油，初始补料速率为10mL/L发酵液/h。随后每4h取样检测一次乙醇或甘油含量，当乙醇或甘油浓度低于5g/L时调整补料速率。颜色有变化后开始提取产物检测产物变化，当番茄红素浓度不再增加时结束发酵。

产物检测方式与实施例9中方法二相同。

结果如图7所示，结果显示:尽管培养基3号(MMG培养基)的细胞量最大，但是培养基2号(YPD加盐培养基)产量最高，番茄红素产量达到了1950mg/L，所以该培养基为最优培养基，发酵策略是优化的两步补料发酵，先补葡萄糖长菌体，在生长的稳定期补乙醇来提高产量。

实施例13 菌株的上罐发酵培养

在本实施例中，发明人按照实施例12中得到的最佳发酵培养方式对构建的部分工程菌株进行了发酵，结果如表6所示。

表6：

可以看出，根据本发明实施例构建的工程菌株具有高产番茄红素的性能

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

SEQUENCE LISTING

<110> 武汉臻智生物科技有限公司

<120> 微生物及其用途

<130> PIDC3171214

<160> 52

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 4917

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 敲除盒片段1的核苷酸序列

<400> 1

ataacgagaa cacacagggg cgctatcgca cagaatcaaa ttcgatgact ggaaattttt 60

tgttaatttc agaggtcgcc tgacgcatat acctttttca actgaaaaat tgggagaaaa 120

aggaaaggtg agagcgccgg aaccggcttt tcatatagaa tagagaagcg ttcatgacta 180

aatgcttgca tcacaatact tgaagttgac aatattattt aaggacctat tgttttttcc 240

aataggtggt tagcaatcgt cttactttct aacttttctt accttttaca tttcagcaat 300

atatatatat atatttcaag gatataccat tctaatgtct gcccctaaga agatcgtcgt 360

tttgccaggt gaccacgttg gtcaagaaat cacagccgaa gccattaagg ttcttaaagc 420

tatttctgat gttcgttcca atgtcaagtt cgatttcgaa aatcatttaa ttggtggtgc 480

tgctatcgat gctacaggtg ttccacttcc agatgaggcg ctggaagcct ccaagaaggc 540

tgatgccgtt ttgttaggtg ctgtgggtgg tcctaaatgg ggtaccggta gtgttagacc 600

tgaacaaggt ttactaaaaa tccgtaaaga acttcaattg tacgccaact taagaccatg 660

taactttgca tccgactctc ttttagactt atctccaatc aagccacaat ttgctaaagg 720

tactgacttc gttgttgtca gagaattagt gggaggtatt tactttggta agagaaagga 780

agacgatggt gatggtgtcg cttgggatag tgaacaatac accgttccag aagtgcaaag 840

aatcacaaga atggccgctt tcatggccct acaacatgag ccaccattgc ctatttggtc 900

cttggataaa gctaatgttt tggcctcttc aagattatgg agaaaaactg tggaggaaac 960

catcaagaac gaattcccta cattgaaggt tcaacatcaa ttgattgatt ctgccgccat 1020

gatcctagtt aagaacccaa cccacctaaa tggtattata atcaccagca acatgtttgg 1080

tgatatcatc tccgatgaag cctccgttat cccaggttcc ttgggtttgt tgccatctgc 1140

gtccttggcc tctttgccag acaagaacac cgcatttggt ttgtacgaac catgccacgg 1200

ttctgctcca gatttgccaa agaataaggt caaccctatc gccactatct tgtctgctgc 1260

aatgatgttg aaattgtcat tgaacttgcc tgaagaaggt aaggccattg aagatgcagt 1320

taaaaaggtt ttggatgcag gtatcagaac tggtgattta ggtggttcca acagtaccac 1380

cgaagtcggt gatgctgtcg ccgaagaagt taagaaaatc cttgcttaaa tttaactcct 1440

taagttactt taatgattta gtttttatta ttaataattc atgctcatga catctcatat 1500

acacgtttat aaaacttaaa tagattgaaa atgtattaaa gattcctcag ggattcgatt 1560

tttttggaag tttttgtttt tttttccttg agatgctgta gtatttggga acaattatac 1620

aatcgaaaga tatatgctta cattcgaccg ttttagccgt gatcattatc ctatagtaac 1680

ataacctgaa gcataactga cactactatc atcaatactt gtcacatgag aactctgtga 1740

ataattaggc cactgaaatt tgatgcctga aggaccggca tcacggattt tcgataaagc 1800

acttagtatc acactaattg gcttttcgcg caaattaaag ccttcgagcg tcccaaaacc 1860

ttctcaagca aggttttcag tataatgtta catgcgtaca cgcgtttgta cagaaaaaaa 1920

agaaaaattt gaaatataaa taacgttctt aatactaaca taactataaa aaaataaata 1980

gggacctaga cttcaggttg tctaactcct tccttttcgg ttagagcgga tgtgggggga 2040

gggcgtgaat gtaagcgtga cataactaat tacatgatat cgacaaagga aaaggggcct 2100

gtttatattg aattttcaaa aattcttact ttttttttgg atggacgcaa agaagtttaa 2160

taatcatatt acatggcaat accaccatat acatatccat atctaatctt acttatatgt 2220

tgtggaaatg taaagagccc cattatctta gcctaaaaaa accttctctt tggaactttc 2280

agtaatacgc ttaactgctc attgctatat tgaagtacgg attagaagcc gccgagcggg 2340

cgacagccct ccgacggaag actctcctcc gtgcgtcctg gtcttcaccg gtcgcgttcc 2400

tgaaacgcag atgtgcctcg cgccgcactg ctccgaacaa taaagattct acaatactag 2460

cttttatggt tatgaagagg aaaaattggc agtaacctgg ccccacaaac cttcaaatca 2520

acgaatcaaa ttaacaacca taggataata atgcgattag ttttttagcc ttatttctgg 2580

ggtaattaat cagcgaagcg atgatttttg atctattaac agatatataa atgcaaaagc 2640

tgcataacca ctttaactaa tactttcaac attttcggtt tgtattactt cttattcaaa 2700

tgtcataaaa gtatcaacaa aaaattgtta atatacctct atactttaac gtcaaggaga 2760

aaaaactata atgttgacat cttcaaaatc tattgagtct tttccaaaaa atgttcaacc 2820

atatggtaag cactaccaga atggtttgga gccagtcggt aagtctcaag aagacatttt 2880

attggaacca ttccattact tatgttcaaa cccaggtaaa gatgtcagaa ctaaaatgat 2940

tgaagctttc aacgcttggt tgaaggtccc taaggacgat ttaattgtta ttactagagt 3000

tattgaaatg ttacattctg cttctttgtt aattgacgat gttgaagatg attctgtttt 3060

gagaaggggt gtcccagctg cacatcacat ttatggtaca ccacaaacta ttaattgtgc 3120

aaactacgtt tactttttgg ctttgaaaga aattgctaag ttaaataaac caaatatgat 3180

tactatttac actgatgaat tgataaattt gcatagaggt caaggtatgg aattgttctg 3240

gagggataca ttgacatgtc caacagaaaa agaatttttg gatatggtta atgataagac 3300

tggaggtttg ttgagattag ctgttaaatt aatgcaagaa gcatctcaat caggtactga 3360

ttatactggt ttagtttcaa aaattggtat acactttcaa gttagagatg attatatgaa 3420

tttgcagtct aaaaattatg ctgataataa aggtttttgt gaggatttaa cagaaggtaa 3480

attctctttc ccaattatac attctattag atctgatcca tctaatagac aattgttgaa 3540

cattttgaaa caaagatctt cttctattga attgaaacaa tttgctttgc aattattgga 3600

aaatactaat actttccaat attgtagaga ttttttgaga gttttggaaa aagaagctag 3660

agaagaaatt aaattgttgg gtggtaacat tatgttggaa aagattatgg atgttttgtc 3720

tgttaatgaa taagtctgaa gaatgaatga tttgatgatt tctttttccc tccatttttc 3780

ttactgaata tatcaatgat atagacttgt atagtttatt atttcaaatt aagtagctat 3840

atatagtcaa gataacgttt gtttgacacg attacattat tcgtcgacat cttttttcag 3900

cctgtcgtgg tagcaatttg aggagtatta ttaattgaat aggttcattt tgcgctcgca 3960

taaacagttt tcgtcaggga cagtatgttg gaatgagtgg taattaatgg tgacatgaca 4020

tgttatagca ataaccttga tgtttacatc gtagtttaat gtacaccccg cgaattcgtt 4080

caagtaggag tgcaccaatt gcaaagggaa aagctgaatg ggcagttcga ataaaagatt 4140

ctcttttttt atgatatttg tacataaact ttataaatga aattcataat agaaacgaca 4200

cgaaattaca aaatggaata tgttcatagg gtagacgaaa ctatatacgc aatctacata 4260

catttatcaa gaaggagaaa aaggaggatg taaaggaata caggtaagca aattgatact 4320

aatggctcaa cgtgataagg aaaaagaatt gcactttaac attaatattg acaaggagga 4380

gggcaccaca caaaaagtta ggtgtaacag aaaatcatga aactatgatt cctaatttat 4440

atattggagg attttctcta aaaaaaaaaa aatacaacaa ataaaaaaca ctcaatgacc 4500

tgaccatttg atggagttta agtcaatacc ttcttgaacc atttcccata atggtgaaag 4560

ttccctcaag aattttactc tgtcagaaac ggccttaacg acgtagtcga cctcctcttc 4620

agtactaaat ctaccaatac caaatctgat ggaagaatgg gctaatgcat catccttacc 4680

cagcgcatgt aaaacataag aaggttctag ggaagcagat gtacaggctg aacccgagga 4740

taatgcgata tcccttagtg ccatcaataa agattctcct tccacgtagg cgaaagaaac 4800

gttaacacac cctggataac gatgatctgg agatccgttc aacgtggtat gttcagcgga 4860

taatagacct ttgactaatt tatcggatag tcttttgatg tgagcttggt cgttgtc 4917

<210> 2

<211> 9008

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 敲除盒片段2的核苷酸序列

<400> 2

acgcagataa ttccaggtat tttgaagcag aacttttatt tatcatcgaa ttgactattg 60

cattatttct attttgcaaa gaggagaaag aattaggaaa gttcatactt caaaaagttt 120

tccaactttc tcacacgaaa ggcctcacga aaaggactgt tcgtagaatg ctaacataca 180

aaattttgtt aatttcgtta tgtgcggatc agacggagta cttgtccaaa ttaataaacg 240

atgagctgtt aaaaaagggg gatattttta cccaaaaatt ttttgcaact aatcaaggta 300

aggaattttt gaagagacta ttttcattga ccgaatcaga gttttataga ggatttttac 360

taggaaatga gaatttttgg aaatttttaa gaaaagttac agcaatgaaa gagcagagcg 420

agagcatttt tgaatattta aatgaatcga tcaagacaga cagcaatatt ttgacaaatg 480

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atcactggga aatagaatac aagaaattga cagaaagtgg tcataaaatt gataaggaga 600

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atcaatgcat caatccgtgt aagcagataa gtgaatttgc agtggtaacg ctagagcaga 780

cgctcatcaa taaaatcgaa attccaacta atgagatgga atcggtagaa gaattaattg 840

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tttcatccat attaacaata atttcaaatg tttatttgca ttatttgaaa ctagggaaga 960

caagcaacga aacgtttttg aaaattttga gtattttcaa taaatttgta gaggactcag 1020

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gttcatcatc tcatggatct gcacatgaac aaacaccaga gtcaaacgac gttgaaattg 1140

aggctactgc gccaattgat gacaatacag acgatgataa caaaccgaag ttatctgatg 1200

tagaaaagga ttaaagatgc taagagatag tgatgatatt tcataaataa tgtaattcta 1260

tatatgttaa ttaccttttt tgcgaggcat atttatggtg aaggataagt tttgaccatc 1320

aaagaaggtt aatgtggctg tggtttcagg gtccataaag cttttcaatt catcattttt 1380

tttttattct tttttttgat ttcggtttcc ttgaaatttt tttgattcgg taatctccga 1440

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gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc 1740

caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg cgcgacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc 1800

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gccagagcat gtatcatatg gtccagaaac cctatacctg tgtggacgtt aatcacttgc 3000

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ctaacataac tataaaaaaa taaataggga cctagacttc aggttgtcta actccttcct 3780

tttcggttag agcggatgtg gggggagggc gtgaatgtaa gcgtgacata actaattaca 3840

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cttctggcaa caaattgtta ataaaagaag ctggagtttg accgtttgat tgtggaaaga 3960

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gctttggtgt tttaccgaaa gacttaacaa cttgatcaga agtcaacttt gaacctgcca 4140

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atctacctgt agaatcctta gttgatggtc tgaaccacaa aacttgcaaa acatcatgag 4260

acaaacccaa gattgaacct ctccacaaat taaacttaga ttgccaaact gctggatcgt 4320

taacttgttc atgttcgatc aaatcagcga agtttgacat gcccaatctt ctttcaataa 4380

ctgccaaaac catctttctt gccttatcaa ccatagctgg ataattttct gtagatgcgt 4440

caccagtttt tgacttcata tgaccgattg gaaccaaaac aataacagaa tctttaccat 4500

ctggtgcagc agatggatcg attcttgatg gaacgttaac gtagaaagaa gcttctgatg 4560

gcaaaccgaa atccttaaaa atttcatcga atgattcttg gtatgcttca gccaagaaaa 4620

tgttatgaac atccaattgt ggaaccttag tagacattga ccagtagaaa gagatagatg 4680

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cgatgataac gatatgtttc ttagacattt atattgaatt ttcaaaaatt cttacttttt 5640

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gaacaataaa gattctacaa tactagcttt tatggttatg aagaggaaaa attggcagta 6000

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gattagtttt ttagccttat ttctggggta attaatcagc gaagcgatga tttttgatct 6120

attaacagat atataaatgc aaaagctgca taaccacttt aactaatact ttcaacattt 6180

tcggtttgta ttacttctta ttcaaatgtc ataaaagtat caacaaaaaa ttgttaatat 6240

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gctttggatc acttagacgg ttttgcaatg gatgtcgccc aaacaagata cgtaaccttc 6660

gaagacactt taagatattg ttaccatgtc gccggtgttg tcggtttgat gatggctaga 6720

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agatctgttt acagagaaat cggtattaaa gtcaaggctg caggtggttc cgcatgggat 7080

agaagacaac acacttctaa aggtgaaaag atcgctatgt tgatggccgc tcctggtcaa 7140

gttattagag caaagaccac cagagtcacc ccaagaccag ccggtttatg gcaaagacct 7200

gtttaaattg aattgaattg aaatcgatag atcaattttt ttcttttctc tttccccatc 7260

ctttacgcta aaataatagt ttattttatt ttttgaatat tttttattta tatacgtata 7320

tatagactat tatttatctt ttaatgatta ttaagatttt tattaaaaaa aattacgctc 7380

ctcttttaat gcctttatgc agtttttttt cccattcgat atttctatgt tcgggttcag 7440

cgtattttaa gtttaataac tcgaaaattc tgcgttcgtt gtaaatgcat gtatactaaa 7500

ctcacaaatt agagcttcaa tttaattata tcagttatta cccgggaatc tcggtcgtaa 7560

tgatttctat aatgacgaaa aaaaaaaaat tggaaagaaa aagcttcatg gcctttataa 7620

aaaggaacta tccaatacct cgccagaacc aagtaacagt attttacggg gcacaaatca 7680

agaacaataa gacaggactg taaagatgga cgcattgaac tccaaagaac aacaagagtt 7740

ccaaaaagta gtggaacaaa agcaaatgaa ggatttcatg cgtttgtact ctaatctggt 7800

agaaagatgt ttcacagact gtgtcaatga cttcacaaca tcaaagctaa ccaataagga 7860

acaaacatgc atcatgaagt gctcagaaaa gttcttgaag catagcgaac gtgtagggca 7920

gcgtttccaa gaacaaaacg ctgccttggg acaaggcttg ggccgataag gtgtactggc 7980

gtatatatat ctaattatgt atctctggtg tagcccattt ttagcatgta aatataaaga 8040

gaaaccatat ctaatctaac caaatccaaa caaaattcaa tagttactat cgcttttttc 8100

tttctgtatc gcaaataagt gaaaattaaa aaagaaagat taaattggaa gttggatatg 8160

ggctggaaca gcagcagtaa tcggtatcgg gttcgccact aatgacgtcc tacgattgca 8220

ctcaacagac cttgacgctc acgccgtagc gggcgacaag tcaaacggaa caaccgttgc 8280

cgttcccatc ggagtccgac ctaggccgaa ctccgtgaat ttctgataac aacggtcggt 8340

aaagactggt tccccagtat atttcttctc tcaggagcag gggccaatgc caaaagcgac 8400

attaacccgg aggacaaggc tccactgtgt tccaccgaat ttcccacctg ataatatctg 8460

ataacccgcc cataggtggg gatccttctg taaacaggtt tcttaatcgt aggaattacc 8520

actgttccac tgccaatcgc agctcccaga gtttcgttcc cagccgcgag caccacagcg 8580

taccatgtgc gccacgaggc ctcaaacgta aaacaatcga aacgaaaaga aacagactat 8640

aggggagtat agagacagcc ggccaataag aagaggaaaa agaaatacta gcgtttatca 8700

atgtgggtcg ttaacatatc ctgttgacaa tgattacagg ttaaaaggta gcgtaagtga 8760

atattaacta tggatattct tatacttaga taagagacat ataaaacaca cgatgattga 8820

ttgattttta tgaccaatat atgtaattcg taattcagat agtttttata cttttaatgt 8880

gtgccgaacc atattactag tatatgtaac taccatgtta tgttcaattg gcagatcttt 8940

aactcggctt tagttatcca agttacttgc aatatttcct tctgcgagag tacatttgcc 9000

cttaaacg 9008

<210> 3

<211> 7319

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 敲除盒片段3的核苷酸序列

<400> 3

ttcaccgatt ctgagcgaat cacaggtgag aaatttggat tcgaaataaa cctaaaaaaa 60

ctatccaata aggcttccat aggcttcgta tttcccgacc attccaattg gaaaaattga 120

gcgctgtctt ccatgatctt agataaagcc ttaatacttg gctcatttcc atttgaggtt 180

agctctagca actggtaaag catttgaaga ccagttggat catctctatg ctgcctatag 240

taagtggaaa ataaagtagt aataacgata cctgtcacgt tcgaaacgag attattgttc 300

gaattataaa ggccatgtat aatgtttgat ttgacgtatc ctaagtcgtg gctattgctc 360

ttaattaaat tgtttccccc tagcattgaa tttttcaaca gcataccggc ggtagctcta 420

ttgttctgaa gatcctgtag ggagtagtgt tgcttcaata catcatcaga ttcgccttca 480

attaaaatat aacacaaata attgagaaat tcaggttgca gctggaagtt ctccatagct 540

tccattgcgt tattacgaat ctctggattt ggtgacatac agttctgtaa aagagttgct 600

agttgcaaca catagtcttc ggcgggcttc catgtcgatg ccatctttat tcacttaact 660

actgctaaca attctggaaa ccaaagactg cggaatattc tgatatgtat tactactatt 720

cgctgctctt ctgcataatt aatactgaaa agtttttcat acttttaaac ataacctttt 780

tttaagcaaa actctatgac ccggattaga aaactacgaa aagagggtaa taacataggt 840

gcaggatttc catcgataac gacgccgaca atgagccttg ctgcaacatc caattaggac 900

taataactat cgtaggaatt tctacgtaat aaacttcaac agagcctaaa atttgaaaat 960

aaataatcta gaggggaaac ttaaagaaat tctattcttg tcaataaagt ggaaatctgt 1020

cagatgtcac agtttcttta tttgtgacac atattttcaa cataaattca ggcattagtg 1080

ctgtaagcac aaaaagttgt ggcgatatga atattccaga ttttacttac aagctgcatt 1140

gtagtcttac aattcttttt ttcttttttt ttttttatgg aaaggaccac tcttacataa 1200

ctagaatagc attaagaatc agatttacag ataaagatga cattatttta tatatatatt 1260

gtcactccgt tcaagtcgac aaccaataaa aaatttaaaa aaagccaggc agttaataga 1320

aaaaatatga tatgaatgaa tattccactt tcttttcaca gcttgtctgt aagcggatgc 1380

cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggctggct 1440

taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac cataaacgac attactatat 1500

atataatata ggaagcattt aatagacagc atcgtaatat atgtgtactt tgcagttatg 1560

acgccagatg gcagtagtgg aagatattct ttattgaaaa atagcttgtc accttacgta 1620

caatcttgat ccggagcttt tctttttttg ccgattaaga attaattcgg tcgaaaaaag 1680

aaaaggagag ggccaagagg gagggcattg gtgactattg agcacgtgag tatacgtgat 1740

taagcacaca aaggcagctt ggagtatgtc tgttattaat ttcacaggta gttctggtcc 1800

attggtgaaa gtttgcggct tgcagagcac agaggccgca gaatgtgctc tagattccga 1860

tgctgacttg ctgggtatta tatgtgtgcc caatagaaag agaacaattg acccggttat 1920

tgcaaggaaa atttcaagtc ttgtaaaagc atataaaaat agttcaggca ctccgaaata 1980

cttggttggc gtgtttcgta atcaacctaa ggaggatgtt ttggctctgg tcaatgatta 2040

cggcattgat atcgtccaac tgcatggaga tgagtcgtgg caagaatacc aagagttcct 2100

cggtttgcca gttattaaaa gactcgtatt tccaaaagac tgcaacatac tactcagtgc 2160

agcttcacag aaacctcatt cgtttattcc cttgtttgat tcagaagcag gtgggacagg 2220

tgaacttttg gattggaact cgatttctga ctgggttgga aggcaagaga gccccgaaag 2280

cttacatttt atgttagctg gtggactgac gccagaaaat gttggtgatg cgcttagatt 2340

aaatggcgtt attggtgttg atgtaagcgg aggtgtggag acaaatggtg taaaagactc 2400

taacaaaata gcaaatttcg tcaaaaatgc taagaaatag gttattactg agtagtattt 2460

atttaagtat tgtttgtgca cttgcctatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg 2520

agaaaatacc gcatcaggaa attgtaaacg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt 2580

tttgttaaat cagctcattt tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat 2640

caaaagaata gaccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat 2700

taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac 2760

tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc 2820

ggaaccctaa agggagcccc cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga 2880

gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca 2940

cgctgcgcgt aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtcgcgcc 3000

attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 3060

tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 3120

tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgagcg cgcgtaatac gactcactat 3180

agggcgaatt gggtactaca cggtccaatg gataaacatt ttttatcaac actatgatat 3240

ataaatataa tagtttttcg tatatatatt cctttttttg gtcaattttt gaaattttcg 3300

tagaaaaggg agagacaaaa cacattatat caatgaaaac gtacaaaaag tagataaagt 3360

cagtgcttaa acacgtcttt tccttaaaaa tactttatta tttttatttt attgagaggg 3420

tggtttaaaa atagaaatag agagagaggt acatacataa acatacgcgc acaaaagcag 3480

agattaggat ttaatgcagg tgacggaccc atctttcaaa cgatttatat cagtggcgtc 3540

caaattgtta ggttttgttg gttcagcagg tttcctgttg tgggtcatat gactttgaac 3600

caaatggccg gctgctaggg cagcacataa ggataattca cctgccaaga cggcacaggc 3660

aactattctt gctaattgac gtgcgttggt accaggagcg gtagcatgcg ggcctcttac 3720

acctaataag tccaacatgg caccttgtgg ttctagaaca gtaccaccac cgatggtacc 3780

tacttcgatg gatggcatgg atacggaaat tctcaaatca ccgtccactt ctttcatcaa 3840

tgttatacag ttggaacttt caacattttg tgcaggatct tgtcctaatg ccaagaaaac 3900

agctgtcact aaattagctg catgtgcgtt aaatccacca acagacccag ccattgcaga 3960

tccaaccaaa ttcttagcaa tgttcaactc aaccaatgcg gaaacatcac tttttaacac 4020

ttttctgaca acatcaccag gaatagtagc ttctgcgacg acactcttac cacgaccttc 4080

gatccagttg atggcagctg gttttttgtc ggtacagtag ttaccagaaa cggagacaac 4140

ctccatatct tcccagccat actcttctac catttgcttt aatgagtatt cgacaccttt 4200

agaaatcata ttcataccca ttgcgtcacc agtagttgtt ctaaatctca tgaagagtaa 4260

atctcctgct agacaagttt gaatatgttg cagacgtgca aatcttgatg tagagttaaa 4320

agctttttta attgcgtttt gtccctcttc tgagtctaac catatcttac aggcaccaga 4380

tcttttcaaa gttgggaaac ggactactgg gcctcttgtc ataccatcct tagttaaaac 4440

agttgttgca ccaccgccag cattgattgc cttacagcca cgcatggcag aagctaccaa 4500

acaaccctct gtagttgcca ttggtatatg ataagatgta ccatcgataa ccaaggggcc 4560

tataacacca acgggcaaag gcatgtaacc tataacattt tcacaacaag cgccaaatac 4620

gcggtcgtag tcataatttt tatatggtaa acgatcagat gctaatacag gagcttctgc 4680

caaaattgaa agagccttcc tacgtaccgc aaccgctctc gtagtatcac ctaatttttt 4740

ctccaaagcg tacaaaggta acttaccgtg aataaccaag gcagcgacct ctttgttctt 4800

caattgtttt gtatttccac tacttaataa tgcttctaat tcttctaaag gacgtatttt 4860

cttatccaag ctttcaatat cgcgggaatc atcttcctca ctagatgatg aaggtcctga 4920

tgagctcgat tgcgcagatg ataaactttt gactttcgat ccagaaatga ctgttttatt 4980

ggttaaaacc atttatattg aattttcaaa aattcttact ttttttttgg atggacgcaa 5040

agaagtttaa taatcatatt acatggcaat accaccatat acatatccat atctaatctt 5100

acttatatgt tgtggaaatg taaagagccc cattatctta gcctaaaaaa accttctctt 5160

tggaactttc agtaatacgc ttaactgctc attgctatat tgaagtacgg attagaagcc 5220

gccgagcggg cgacagccct ccgacggaag actctcctcc gtgcgtcctg gtcttcaccg 5280

gtcgcgttcc tgaaacgcag atgtgcctcg cgccgcactg ctccgaacaa taaagattct 5340

acaatactag cttttatggt tatgaagagg aaaaattggc agtaacctgg ccccacaaac 5400

cttcaaatca acgaatcaaa ttaacaacca taggataata atgcgattag ttttttagcc 5460

ttatttctgg ggtaattaat cagcgaagcg atgatttttg atctattaac agatatataa 5520

atgcaaaagc tgcataacca ctttaactaa tactttcaac attttcggtt tgtattactt 5580

cttattcaaa tgtcataaaa gtatcaacaa aaaattgtta atatacctct atactttaac 5640

gtcaaggaga aaaaactata gcgcaatgat tgaatagtca aagatttttt ttttttaatt 5700

tttttttttt catagaactt tttatttaaa taaatcacgt ctatatatgt atcagtataa 5760

cgtaaaaaaa aaaacaccgt cagttaaaca aaacataaat aaaaaaaaaa agaagtgtca 5820

aatcaagtgt caaatgtata cttctttttt ttactttgtt cagaacaact tctcattttt 5880

ttctactcat aactttagca tcacaaagta cacaataata acgagtagta acacttttat 5940

agttcataca tgcttcaact acttaataaa tgattgtatg ataatgtttt caatgtaaga 6000

gatttcgatt atccacaaac tttgaaacac agggacacaa ttcttgatat gctttcaacc 6060

gctgcgtttt ggatacctat tcttgacata atatgactac cattttgtta ttgtacgtgg 6120

ggcagttgac gtcttatcat atgtcaaagt catttgcgaa gttcttggca agttgccaac 6180

tgacgagatg cagtaaaaag agattgccgt cttgaaactt tttgtccttt tttttttccg 6240

gggactctac gagaaccctt tgtcctactg attaattttg tactgaattt ggacaattca 6300

gattttagta gacaagcgcg aggaggaaaa gaaatgacag aaaaattccg atggacaaga 6360

agataggaaa aaaaaaaagc tttcaccgat ttcctagacc ggaaaaaagt cgtatgacat 6420

cagaatgaaa aattttcaag ttagacaagg acaaaatcag gacaaattgt aaagatatga 6480

taaatcattt gattcagcgc caatttgccc ttttccattt tccattaaat ctctgttctc 6540

tcttacttat atgatgatta ggtatcatct gtataaaact cctttcttaa tttcactcta 6600

aagcataccc catagagaag atctttcggt tcgaagacat tcctacgcat aataagaata 6660

ggagggaata atgccagaca atctatcatt acatttaagc ggctcttcaa aaagattgaa 6720

ctctcgccaa cttatggaat cttccaatga gacctttgcg ccaaataatg tggatttgga 6780

aaaagagtat aagtcatctc agagtaatat aactaccgaa gtttatgagg catcgagctt 6840

tgaagaaaaa gtaagctcag aaaaacctca atacagctca ttctggaaga aaatctatta 6900

tgaatatgtg gtcgttgaca aatcaatctt gggtgtttct attctggatt catttatgta 6960

caaccaggac ttgaagcccg tcgaaaaaga aaggcgggtt tggtcctggt acaattattg 7020

ttacttctgg cttgctgaat gtttcaatat caacacttgg caaattgcag ctacaggtct 7080

acaactgggt ctaaattggt ggcagtgttg gataacaatt tggattgggt acggtttcgt 7140

tggtgctttt gttgttttgg cctctagagt tggatctgct tatcatttgt cattccctat 7200

atcatctaga gcatcattcg gtattttctt ctctttatgg cctgttatta atagagtcgt 7260

catggccatc gtttggtata gtgtccaagc ttatattgcg gcaactcccg tatcattaa 7319

<210> 4

<211> 457

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 启动子PGAL1的核苷酸序列

<400> 4

agtacggatt agaagccgcc gagcgggcga cagccctccg acggaagact ctcctccgtg 60

cgtcctggtc ttcaccggtc gcgttcctga aacgcagatg tgcctcgcgc cgcactgctc 120

cgaacaataa agattctaca atactagctt ttatggttat gaagaggaaa aattggcagt 180

aacctggccc cacaaacctt caaatcaacg aatcaaatta acaaccatag gataataatg 240

cgattagttt tttagcctta tttctggggt aattaatcag cgaagcgatg atttttgatc 300

tattaacaga tatataaatg caaaagctgc ataaccactt taactaatac tttcaacatt 360

ttcggtttgt attacttctt attcaaatgt cataaaagta tcaacaaaaa attgttaata 420

tacctctata ctttaacgtc aaggagaaaa aactata 457

<210> 5

<211> 500

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 启动子PGAL7的核苷酸序列

<400> 5

gacggtagca acaagaatat agcacgagcc gcgaagttca tttcgttact tttgatatcg 60

ctcacaacta ttgcgaagcg cttcagtgaa aaaatcataa ggaaaagttg taaatattat 120

tggtagtatt cgtttggtaa agtagagggg gtaatttttc ccctttattt tgttcataca 180

ttcttaaatt gctttgcctc tccttttgga aagctatact tcggagcact gttgagcgaa 240

ggctcattag atatattttc tgtcattttc cttaacccaa aaataaggga aagggtccaa 300

aaagcgctcg gacaactgtt gaccgtgatc cgaaggactg gctatacagt gttcacaaaa 360

tagccaagct gaaaataatg tgtagctatg ttcagttagt ttggctagca aagatataaa 420

agcaggtcgg aaatatttat gggcattatt atgcagagca tcaacatgat aaaaaaaaac 480

agttgaatat tccctcaaaa 500

<210> 6

<211> 215

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 启动子PGAL10的核苷酸序列

<400> 6

tacttcaata tagcaatgag cagttaagcg tattactgaa agttccaaag agaaggtttt 60

tttaggctaa gataatgggg ctctttacat ttccacaaca tataagtaag attagatatg 120

gatatgtata tggtggtatt gccatgtaat atgattatta aacttctttg cgtccatcca 180

aaaaaaaagt aagaattttt gaaaattcaa tataa 215

<210> 7

<211> 668

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 启动子PGAL1-10的核苷酸序列

<400> 7

tatagttttt tctccttgac gttaaagtat agaggtatat taacaatttt ttgttgatac 60

ttttatgaca tttgaataag aagtaataca aaccgaaaat gttgaaagta ttagttaaag 120

tggttatgca gcttttgcat ttatatatct gttaatagat caaaaatcat cgcttcgctg 180

attaattacc ccagaaataa ggctaaaaaa ctaatcgcat tattatccta tggttgttaa 240

tttgattcgt tgatttgaag gtttgtgggg ccaggttact gccaattttt cctcttcata 300

accataaaag ctagtattgt agaatcttta ttgttcggag cagtgcggcg cgaggcacat 360

ctgcgtttca ggaacgcgac cggtgaagac caggacgcac ggaggagagt cttccgtcgg 420

agggctgtcg cccgctcggc ggcttctaat ccgtacttca atatagcaat gagcagttaa 480

gcgtattact gaaagttcca aagagaaggt ttttttaggc taagataatg gggctcttta 540

catttccaca acatataagt aagattagat atggatatgt atatggtggt attgccatgt 600

aatatgatta ttaaacttct ttgcgtccat ccaaaaaaaa agtaagaatt tttgaaaatt 660

caatataa 668

<210> 8

<211> 668

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 启动子PGAL10-1的核苷酸序列

<400> 8

ttatattgaa ttttcaaaaa ttcttacttt ttttttggat ggacgcaaag aagtttaata 60

atcatattac atggcaatac caccatatac atatccatat ctaatcttac ttatatgttg 120

tggaaatgta aagagcccca ttatcttagc ctaaaaaaac cttctctttg gaactttcag 180

taatacgctt aactgctcat tgctatattg aagtacggat tagaagccgc cgagcgggcg 240

acagccctcc gacggaagac tctcctccgt gcgtcctggt cttcaccggt cgcgttcctg 300

aaacgcagat gtgcctcgcg ccgcactgct ccgaacaata aagattctac aatactagct 360

tttatggtta tgaagaggaa aaattggcag taacctggcc ccacaaacct tcaaatcaac 420

gaatcaaatt aacaaccata ggataataat gcgattagtt ttttagcctt atttctgggg 480

taattaatca gcgaagcgat gatttttgat ctattaacag atatataaat gcaaaagctg 540

cataaccact ttaactaata ctttcaacat tttcggtttg tattacttct tattcaaatg 600

tcataaaagt atcaacaaaa aattgttaat atacctctat actttaacgt caaggagaaa 660

aaactata 668

<210> 9

<211> 1123

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 启动子PHXT1的核苷酸序列

<400> 9

gattttacgt atatcaacta gttgacgatt atgatatctt tatagatttt aaggtgggga 60

aagaacatga gaccccagat ggaattgatt atggggacat tgttgccttt atatataatt 120

tcaatatact aattcaaatg attaaaaacg tgagggggac acgcaacttc gggtgttaag 180

aaatattttg ctacattaga taatggtgga gtttcctggc ttgtcggata aaagccatca 240

aatgtcgcag cagctcatgt ttacgtttgc tgtcttctgc ccacgtcata tgagtggtat 300

tcttctatca gcacttgatg aatattcttt ttctcatata tctgaaagac aaaagatcgg 360

cacggcaatg ccctgcagca tttcttccta gtttttccga atttccatta cgtattggat 420

cttgtgcgca tatttgtcag tccttcacgg aaaaaaaaaa agagcactgg gtcacttcgg 480

aaaaactttt gactcaatgc aacagtgtca taatcctttg cgctgtctct ttgaagaaaa 540

atcaggagtg caagatatcg attaattcct tggaagttat gatggttagt cttagtttaa 600

ctctcttgaa gaagggtttt ttcagttggt caacactctt tagaggtaaa aaaaaaaaaa 660

aaaaaaaaaa aaagagaatt cttcatgtaa tttaccatga ttctacgttt ttgcaagcaa 720

aaatgaagat aatccgagcg catgcgcaag tagtccctgc catgccgctt cggaaaaact 780

ttcgaaacca atactcctta catccgcctt gaatttagga cctacaattg ttgtctcttc 840

tgcttgaacc aataagccct agaaacctta caccctaatt tgcacaagaa aactacgaaa 900

aaattttttc ctcttttttc cgcagctcca atctcgccct gctatttttt tggttcggag 960

aaaaatagtc ggtcgatatg aattgaagtt tcattgtggc cactcgttta ggaatggaat 1020

aacctccgcg aatggaaaaa aagaactcgg aatatcaaaa attccggctc aaaggaaaaa 1080

tttgcttcag gaggggggaa ttatattcca gatgagacct gca 1123

<210> 10

<211> 1740

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> McCrtI的核苷酸序列

<400> 10

atgtctaaga aacatatcgt tatcatcggt gctggtgttg gtggtactgc aacagctgca 60

agattggcta gagaaggttt taaagttaca gttgttgaaa agaatgattt tggtggtggt 120

agatgttcat tgatccatca tcaaggtcat agattcgatc aaggtccatc tttgtatttg 180

atgccaaagt acttcgaaga tgctttcgca gatttggatg aaagaatcca agatcatttg 240

gaattgttga gatgtgataa caactacaag gttcatttcg atgatggtga atctatccaa 300

ttgtcttcag atttgactag aatgaaagct gaattggata gagttgaagg tccattgggt 360

ttcggtagat ttttagattt catgaaggaa actcatatcc attacgaatc aggtacattg 420

atcgctttga agaaaaattt cgaatctatc tgggatttga tcagaattaa atacgcacca 480

gaaattttta gattgcattt gttcggtaaa atctatgata gagcatctaa gtacttcaag 540

actaagaaaa tgagaatggc ttttactttc caaacaatgt acatgggcat gtcaccatac 600

gatgctccag cagtttactc tttgttgcaa tacactgaat ttgctgaagg tatttggtat 660

ccaagaggtg gttttaatat ggttgttcaa aagttggaag ctatcgcaaa gcaaaagtac 720

gatgctgaat tcatatataa cgctccagtt gcaaagatta atactgatga tgcaacaaag 780

caagttactg gtgttacatt ggaaaacggt catatcatcg atgctgatgc agttgtttgt 840

aatgctgatt tggtttacgc ataccataat ttgttaccac catgtagatg gactcaaaac 900

acattggctt ctaagaaatt gacatcttca tctatctctt tctactggtc aatgtctact 960

aaggttccac aattggatgt tcataacatt ttcttggctg aagcatacca agaatcattc 1020

gatgaaattt ttaaggattt cggtttgcca tcagaagctt ctttctacgt taacgttcca 1080

tcaagaatcg atccatctgc tgcaccagat ggtaaagatt ctgttattgt tttggttcca 1140

atcggtcata tgaagtcaaa aactggtgac gcatctacag aaaattatcc agctatggtt 1200

gataaggcaa gaaagatggt tttggcagtt attgaaagaa gattgggcat gtcaaacttc 1260

gctgatttga tcgaacatga acaagttaac gatccagcag tttggcaatc taagtttaat 1320

ttgtggagag gttcaatctt gggtttgtct catgatgttt tgcaagtttt gtggttcaga 1380

ccatcaacta aggattctac aggtagatac gataatttgt ttttcgttgg tgcttcaact 1440

catccaggta caggtgttcc aattgttttg gcaggttcaa agttgacttc tgatcaagtt 1500

gttaagtctt tcggtaaaac accaaagcca agaaagatcg aaatggaaaa cactcaagca 1560

ccattggaag aaccagatgc tgaatcaaca tttccagttt ggttttggtt aagagctgca 1620

ttctgggtta tgttcatgtt tttctatttc tttccacaat caaacggtca aactccagct 1680

tcttttatta acaatttgtt gccagaagtt tttagagttc ataattctaa tgttatttga 1740

<210> 11

<211> 930

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> PaCrtB的核苷酸序列

<400> 11

atgtcacaac caccattatt ggaccacgct acacaaacta tggcaaacgg ttctaaatct 60

ttcgctactg ctgctaaatt attcgaccca gcaacaagaa gatctgtatt gatgttgtac 120

acctggtgta gacattgcga tgacgttata gatgaccaaa ctcacggttt tgcttcagaa 180

gctgcagccg aagaagaagc tacacaaaga ttggcaagat taagaacttt gacattagct 240

gcattcgaag gtgccgaaat gcaagatcca gcttttgccg ctttccaaga agttgcatta 300

acccatggta ttactcctag aatggctttg gatcacttag acggttttgc aatggatgtc 360

gcccaaacaa gatacgtaac cttcgaagac actttaagat attgttacca tgtcgccggt 420

gttgtcggtt tgatgatggc tagagtaatg ggtgttagag atgaaagagt tttagataga 480

gcatgtgact tgggtttagc cttccaattg acaaacatag ctagagatat aatagatgac 540

gcagccatag acagatgcta tttgccagct gaatggttac aagatgcagg tttgactcct 600

gaaaattacg ctgcaagaga aaacagagcc gctttagcca gagttgctga aagattgata 660

gatgcagccg aaccatatta catctcttca caagctggtt tgcatgattt gccacctaga 720

tgcgcatggg ccattgctac cgcaagatct gtttacagag aaatcggtat taaagtcaag 780

gctgcaggtg gttccgcatg ggatagaaga caacacactt ctaaaggtga aaagatcgct 840

atgttgatgg ccgctcctgg tcaagttatt agagcaaaga ccaccagagt caccccaaga 900

ccagccggtt tatggcaaag acctgtttaa 930

<210> 12

<211> 963

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> BtCarG的核苷酸序列

<400> 12

atgttgacat cttcaaaatc tattgagtct tttccaaaaa atgttcaacc atatggtaag 60

cactaccaga atggtttgga gccagtcggt aagtctcaag aagacatttt attggaacca 120

ttccattact tatgttcaaa cccaggtaaa gatgtcagaa ctaaaatgat tgaagctttc 180

aacgcttggt tgaaggtccc taaggacgat ttaattgtta ttactagagt tattgaaatg 240

ttacattctg cttctttgtt aattgacgat gttgaagatg attctgtttt gagaaggggt 300

gtcccagctg cacatcacat ttatggtaca ccacaaacta ttaattgtgc aaactacgtt 360

tactttttgg ctttgaaaga aattgctaag ttaaataaac caaatatgat tactatttac 420

actgatgaat tgataaattt gcatagaggt caaggtatgg aattgttctg gagggataca 480

ttgacatgtc caacagaaaa agaatttttg gatatggtta atgataagac tggaggtttg 540

ttgagattag ctgttaaatt aatgcaagaa gcatctcaat caggtactga ttatactggt 600

ttagtttcaa aaattggtat acactttcaa gttagagatg attatatgaa tttgcagtct 660

aaaaattatg ctgataataa aggtttttgt gaggatttaa cagaaggtaa attctctttc 720

ccaattatac attctattag atctgatcca tctaatagac aattgttgaa cattttgaaa 780

caaagatctt cttctattga attgaaacaa tttgctttgc aattattgga aaatactaat 840

actttccaat attgtagaga ttttttgaga gttttggaaa aagaagctag agaagaaatt 900

aaattgttgg gtggtaacat tatgttggaa aagattatgg atgttttgtc tgttaatgaa 960

taa 963

<210> 13

<211> 915

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> INO2基因的核苷酸序列

<400> 13

atgtcccaag caactgggaa cgaattactg ggtatcctag atctggataa cgatatagac 60

tttgaaactg cttaccaaat gctcagcagt aacttcgacg accaaatgtc tgcgcacata 120

catgaaaaca cgtttagtgc aacttcccct cctctgttaa cacacgagct cggcataatt 180

cctaacgtgg caaccgtgca accctctcac gtagaaacta tacctgccga taaccaaact 240

catcatgctc ctttgcatac tcatgctcac tatctaaatc acaaccctca tcaaccaagc 300

atgggttttg atcaaacgct tggtctcaag ttgtctcctt ccagttcggg gttgttgagc 360

acgaatgaat cgaatgccat tgaacagttt ttagacaatc taatatcaca ggatatgatg 420

tcttccaacg cttccatgaa ctccgattca catctacata taagatcacc aaaaaagcag 480

cataggtata ccgaattaaa tcaaagatat cctgaaacac atccacacag taacacaggg 540

gagttaccca caaacacagc agatgtgcca actgagttca ccacgaggga aggacctcat 600

cagcctatcg gcaatgacca ctacaacccg ccaccgtttt cagtacctga gatacgaatc 660

ccagactctg atattccagc caatatcgag gacgaccctg tgaaggtacg gaaatggaaa 720

cacgttcaaa tggagaagat acgaagaata aacaccaaag aagcctttga aaggctcatt 780

aaatcagtaa ggaccccacc aaaggaaaac gggaaaagaa ttcccaagca tattctttta 840

acttgtgtaa tgaacgatat caagtccatt agaagcgcaa atgaagcact acagcacata 900

ctggatgatt cctga 915

<210> 14

<211> 1428

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> gapN基因的核苷酸序列

<400> 14

atgactaagc aatacaagaa ctacgttaac ggtgaatgga agttgtctga aaacgaaatt 60

aaaatctatg aacctgcttc aggtgcagaa ttaggttccg ttccagctat gagtacagaa 120

gaagtagatt acgtttacgc ttctgctaag aaagcccaac ctgcttggag agcattgtca 180

tatatcgaaa gagctgcata cttacataag gttgctgata tattgatgag agacaaggaa 240

aagattggtg caatcttatc taaagaagta gccaagggtt ataaatccgc tgttagtgaa 300

gttgtcagaa ccgctgaaat tataaactac gccgctgaag aaggtttaag aatggaaggt 360

gaagttttgg aaggtggttc tttcgaagca gcctctaaaa agaaaattgc agtagttaga 420

agagaacctg tcggtttagt attggccatt tcccctttca attatccagt aaacttagct 480

ggtagtaaga tcgccccagc tttgattgct ggtaatgtta tagcctttaa accacctaca 540

caaggttcta tttcaggttt gttattggca gaagccttcg ctgaagcagg tttgcctgct 600

ggtgttttta acacaattac cggtagaggt tccgaaatcg gtgactacat tgtcgaacac 660

caagctgtaa acttcatcaa cttcactggt tctacaggta taggtgaaag aatcggtaaa 720

atggctggta tgagaccaat tatgttagaa ttgggtggta aagattctgc aatagtttta 780

gaagatgccg acttagaatt gaccgctaag aatatcattg ccggtgcttt tggttattcc 840

ggtcaaagat gtactgcagt caaaagagtt ttagtcatgg aaagtgttgc cgatgaattg 900

gtcgaaaaga taagagaaaa ggttttggca ttgactatcg gtaatcctga agatgacgcc 960

gacatcactc cattgatcga tacaaagtca gctgactacg ttgaaggttt gattaatgat 1020

gcaaacgaca agggtgcaac cgccttgact gaaattaaaa gagagggtaa cttaatctgc 1080

ccaatcttgt tcgataaggt tactacagac atgagattag cttgggaaga accatttggt 1140

cctgtcttgc caataatcag agttacatct gtcgaagaag ctatcgaaat atctaataag 1200

tcagaatatg gtttgcaagc atcaatcttt acaaacgatt tccctagagc ctttggtatt 1260

gctgaacaat tggaagtagg taccgttcat atcaacaaca agacacaaag aggtaccgat 1320

aattttccat tcttgggtgc taagaaatct ggtgcaggta tccaaggtgt caaatactcc 1380

attgaagcta tgaccactgt aaagagtgtc gtatttgata ttaaataa 1428

<210> 15

<211> 537

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> PYC2基因的核苷酸序列

<400> 15

atgtatccaa gggtctatga agatttccaa aagatcagag aaacatacgg tgatttatca 60

gttctaccaa ccaaaaattt cctagcacca gcagaacctg atgaagaaat cgaagtcacc 120

atcgaacaag gtaagacttt gattatcaaa ttgcaagctg ttggtgactt aaataagaaa 180

actgggcaaa gagaagtgta ttttgaattg aacggtgaat taagaaagat cagagttgca 240

gacaagtcac aaaacataca atctgttgct aaaccaaagg ctgatgtcca cgatactcac 300

caaatcggtg caccaatggc tggtgttatc atagaagtta aagtacataa agggtctttg 360

gtgaaaaagg gcgaatcgat tgctgttttg agtgccatga aaatggaaat ggttgtctct 420

tcaccagcag atggtcaagt taaagatgtt ttcattaggg atggtgaaag tgttgacgca 480

tcagatttgt tggttgtcct agaagaagaa accctacccc catcccaaaa aaagtaa 537

<210> 16

<211> 1923

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> SMAE1基因的核苷酸序列

<400> 16

atgtggccta ttcagcaatc gcgtttatat tcttctaaca ctagatcgca taaagctacc 60

acaacaagag aaaatacttt ccaaaagcca tacagcgacg aggaggtcac taaaacaccc 120

gtcggttctc gcgccagaaa gatcttcgaa gctcctcacc cacatgccac tcgtttgact 180

gtagaaggtg ccatagaatg tcccttggag agctttcaac ttttaaactc tcctttattt 240

aacaagggtt ctgcatttac acaagaagaa agggaagcgt ttaatttaga agcattgcta 300

ccaccacaag tgaacacttt ggacgaacaa ctggaaagaa gctacaagca gttatgctat 360

ttgaagacgc ccttggccaa aaacgacttc atgacgtctt tgagagtaca gaacaaagtc 420

ctatattttg cattaataag gaaacatatc aaggaattag ttcctatcat ttacacccca 480

accgaaggtg atgctattgc tgcctattcc cacaggttca gaaagccaga aggtgtgttt 540

ttagacatta ccgaacctga ttccatcgaa cgtagattgg ctacatacgg tggagacaaa 600

gatgtagact acatcgttgt gtcggattcg gaaggtattc tgggaattgg tgaccaaggt 660

atcggtggtg tacgtattgc tatctccaaa ttggcattga tgacgctgtg cggtggtatt 720

catcccggcc gtgtgctacc tgtgtgtttg gacgtcggta ctaacaacaa gaaactagcc 780

cgtgacgaat tgtacatggg taacaagttc tccagaatca ggggtaagca atatgacgac 840

ttcttggaaa aattcatcaa ggccgttaag aaagtgtatc caagcgccgt tctgcatttc 900

gaagatttcg gtgttaagaa cgctagaaga ttgctagaaa agtacaggta cgaattgcca 960

tcattcaacg atgacattca gggcaccggt gccgtcgtga tggcctcgtt gattgctgct 1020

ttgaaacata ccaacagaga cttgaaagac accagagtgc ttatttacgg tgccgggtct 1080

gcgggcctcg gtatcgcaga ccaaattgtg aatcatatgg tcacgcacgg cgttgacaag 1140

gaagaagcgc gcaagaaaat cttcttgatg gacagacgtg ggttaattct acaatcttac 1200

gaggctaact ccactcccgc ccaacacgta tacgctaaga gtgatgcgga atgggctggt 1260

atcaacaccc gctctttaca tgatgtggtg gagaacgtca aaccaacgtg tttggttggc 1320

tgctccacac aagcaggcgc attcactcaa gatgtcgtag aagaaatgca caagcacaat 1380

cctagaccga tcattttccc attatccaac cctactagac tacacgaagc cgttcctgcc 1440

gatttaatga agtggaccaa caacaacgct cttgtagcta ccggatctcc tttcccacct 1500

gttgacggtt accgtatctc ggagaacaac aattgttact ctttcccagg tatcggttta 1560

ggtgccgtac tatcgcgtgc caccactatc acagacaaga tgatctccgc tgcagtggac 1620

caactagccg aattgtcgcc actaagagag ggcgactcga gacctgggtt gctacccggc 1680

ctggacacca tcaccaacac ctctgcgcgt ctagctaccg ctgtgatctt gcaagcactc 1740

gaggagggaa ccgcccgtat cgagcaagaa caagtaccgg gaggagctcc cggcgaaact 1800

gtcaaggttc ctcgtgactt tgacgaatgt ttacagtggg tcaaagccca aatgtgggag 1860

cctgtgtaca gacctatgat caaggtccaa catgacccat cggtgcacac caaccaattg 1920

tag 1923

<210> 17

<211> 1134

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> MDH2基因的核苷酸序列

<400> 17

atgcctcact cagttacacc atccatagaa caagattcgt taaaaattgc cattttaggt 60

gctgccggtg gtatcgggca gtcgttatcg ctgcttttga aagctcagtt gcaataccag 120

ttaaaggaga gcaaccggag cgttacccac attcatctgg ctctttacga tgtcaaccaa 180

gaagccatca acggtgttac cgccgacttg tctcatatag acacccccat ttccgtgtcg 240

agccactctc ctgcaggtgg cattgagaac tgtttgcata acgcttctat tgttgtcatt 300

cctgcaggtg ttccaagaaa acctggcatg actcgtgatg acttatttaa cgtgaatgct 360

ggtatcatta gccagctcgg tgattctatt gcagaatgtt gtgatctttc caaggtcttc 420

gttcttgtca tttccaaccc tgttaattct ttagtcccag tgatggtttc taacattctt 480

aagaaccatc ctcagtctag aaattccggc attgaaagaa ggatcatggg tgtcaccaag 540

ctcgacattg tcagagcgtc cacttttcta cgtgagataa acattgagtc agggctaact 600

cctcgtgtta actccatgcc tgacgtccct gtaattggcg ggcattctgg cgagactatt 660

attccgttgt tttcacagtc aaacttccta tcgagattaa atgaggatca attgaaatat 720

ttaatacata gagtccaata cggtggtgat gaagtggtca aggccaagaa cggtaaaggt 780

agtgctacct tatcgatggc ccatgccggt tataagtgtg ttgtccaatt tgtttctttg 840

ttattgggta acattgagca gatccatgga acctactatg tgccattaaa agatgcgaac 900

aacttcccca ttgctcctgg ggcagatcaa ttattgcctc tggtggacgg tgcagactac 960

tttgccatac cattaactat tactacaaag ggtgtttcct atgtggatta tgacatcgtt 1020

aataggatga acgacatgga acgcaaccaa atgttgccaa tttgcgtctc ccagttaaag 1080

aaaaatatcg ataagggctt ggaattcgtt gcatcgagat ctgcatcatc ttaa 1134

<210> 18

<211> 1245

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> POS5基因的核苷酸序列

<400> 18

atgtttgtca gggttaaatt gaataaacca gtaaaatggt ataggttcta tagtacgttg 60

gattcacatt ccctaaagtt acagagcggc tcgaagtttg taaaaataaa gccagtaaat 120

aacttgagga gtagttcatc agcagatttc gtgtccccac caaattccaa attacaatct 180

ttaatctggc agaacccttt acaaaatgtt tatataacta aaaaaccatg gactccatcc 240

acaagagaag cgatggttga attcataact catttacatg agtcataccc cgaggtgaac 300

gtcattgttc aacccgatgt ggcagaagaa atttcccagg atttcaaatc tcctttggag 360

aatgatccca accgacctca tatactttat actggtcctg aacaagatat cgtaaacaga 420

acagacttat tggtgacatt gggaggtgat gggactattt tacacggcgt atcaatgttc 480

ggaaatacgc aagttcctcc ggttttagca tttgctctgg gcactctggg ctttctatta 540

ccgtttgatt ttaaggagca taaaaaggtc tttcaggaag taatcagctc tagagccaaa 600

tgtttgcata gaacacggct agaatgtcat ttgaaaaaaa aggatagcaa ctcatctatt 660

gtgacccatg ctatgaatga catattctta cataggggta attcccctca tctcactaac 720

ctggacattt tcattgatgg ggaatttttg acaagaacga cagcagatgg tgttgcattg 780

gccactccaa cgggttccac agcatattca ttatcagcag gtggatctat tgtttcccca 840

ttagtccctg ctattttaat gacaccaatt tgtcctcgct ctttgtcatt ccgaccactg 900

attttgcctc attcatccca cattaggata aagataggtt ccaaattgaa ccaaaaacca 960

gtcaacagtg tggtaaaact ttctgttgat ggtattcctc aacaggattt agatgttggt 1020

gatgaaattt atgttataaa tgaggtcggc actatataca tagatggtac tcagcttccg 1080

acgacaagaa aaactgaaaa tgactttaat aattcaaaaa agcctaaaag gtcagggatt 1140

tattgtgtcg ccaagaccga gaatgactgg attagaggaa tcaatgaact tttaggattc 1200

aattctagct ttaggctgac caagagacag actgataatg attaa 1245

<210> 19

<211> 1533

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> pntA基因的核苷酸序列

<400> 19

atgcgaattg gcataccaag agaacggtta accaatgaaa cccgtgttgc agcaacgcca 60

aaaacagtgg aacagctgct gaaactgggt tttaccgtcg cggtagagag cggcgcgggt 120

caactggcaa gttttgacga taaagcgttt gtgcaagcgg gcgctgaaat tgtagaaggg 180

aatagcgtct ggcagtcaga gatcattctg aaggtcaatg cgccgttaga tgatgaaatt 240

gcgttactga atcctgggac aacgctggtg agttttatct ggcctgcgca gaatccggaa 300

ttaatgcaaa aacttgcgga acgtaacgtg accgtgatgg cgatggactc tgtgccgcgt 360

atctcacgcg cacaatcgct ggacgcacta agctcgatgg cgaacatcgc cggttatcgc 420

gccattgttg aagcggcaca tgaatttggg cgcttcttta ccgggcaaat tactgcggcc 480

gggaaagtgc caccggcaaa agtgatggtg attggtgcgg gtgttgcagg tctggccgcc 540

attggcgcag caaacagtct cggcgcgatt gtgcgtgcat tcgacacccg cccggaagtg 600

aaagaacaag ttcaaagtat gggcgcggaa ttcctcgagc tggattttaa agaggaagct 660

ggcagcggcg atggctatgc caaagtgatg tcggacgcgt tcatcaaagc ggaaatggaa 720

ctctttgccg cccaggcaaa agaggtcgat atcattgtca ccaccgcgct tattccaggc 780

aaaccagcgc cgaagctaat tacccgtgaa atggttgact ccatgaaggc gggcagtgtg 840

attgtcgacc tggcagccca aaacggcggc aactgtgaat acaccgtgcc gggtgaaatc 900

ttcactacgg aaaatggtgt caaagtgatt ggttataccg atcttccggg ccgtctgccg 960

acgcaatcct cacagcttta cggcacaaac ctcgttaatc tgctgaaact gttgtgcaaa 1020

gagaaagacg gcaatatcac tgttgatttt gatgatgtgg tgattcgcgg cgtgaccgtg 1080

atccgtgcgg gcgaaattac ctggccggca ccgccgattc aggtatcagc tcagccgcag 1140

gcggcacaaa aagcggcacc ggaagtgaaa actgaggaaa aatgtacctg ctcaccgtgg 1200

cgtaaatacg cgttgatggc gctggcaatc attctttttg gctggatggc aagcgttgcg 1260

ccgaaagaat tccttgggca cttcaccgtt ttcgcgctgg cctgcgttgt cggttattac 1320

gtggtgtgga atgtatcgca cgcgctgcat acaccgttga tgtcggtcac caacgcgatt 1380

tcagggatta ttgttgtcgg agcactgttg cagattggcc agggcggctg ggttagcttc 1440

cttagtttta tcgcggtgct tatagccagc attaatattt tcggtggctt caccgtgact 1500

cagcgcatgc tgaaaatgtt ccgcaaaaat taa 1533

<210> 20

<211> 1389

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> pntB基因的核苷酸序列

<400> 20

atgtctggag gattagttac agctgcatac attgttgccg cgatcctgtt tatcttcagt 60

ctggccggtc tttcgaaaca tgaaacgtct cgccagggta acaacttcgg tatcgccggg 120

atggcgattg cgttaatcgc aaccattttt ggaccggata cgggtaatgt tggctggatc 180

ttgctggcga tggtcattgg tggggcaatt ggtatccgtc tggcgaagaa agttgaaatg 240

accgaaatgc cagaactggt ggcgatcctg catagcttcg tgggtctggc ggcagtgctg 300

gttggcttta acagctatct gcatcatgac gcgggaatgg caccgattct ggtcaatatt 360

cacctgacgg aagtgttcct cggtatcttc atcggggcgg taacgttcac gggttcggtg 420

gtggcgttcg gcaaactgtg tggcaagatt tcgtctaaac cattgatgct gccaaaccgt 480

cacaaaatga acctggcggc tctggtcgtt tccttcctgc tgctgattgt atttgttcgc 540

acggacagcg tcggcctgca agtgctggca ttgctgataa tgaccgcaat tgcgctggta 600

ttcggctggc atttagtcgc ctccatcggt ggtgcagata tgccagtggt ggtgtcgatg 660

ctgaactcgt actccggctg ggcggctgcg gctgcgggct ttatgctcag caacgacctg 720

ctgattgtga ccggtgcgct ggtcggttct tcgggggcta tcctttctta cattatgtgt 780

aaggcgatga accgttcctt tatcagcgtt attgcgggtg gtttcggcac cgacggctct 840

tctactggcg atgatcagga agtgggtgag caccgcgaaa tcaccgcaga agagacagcg 900

gaactgctga aaaactccca ttcagtgatc attactccgg ggtacggcat ggcagtcgcg 960

caggcgcaat atcctgtcgc tgaaattact gagaaattgc gcgctcgtgg tattaatgtg 1020

cgtttcggta tccacccggt cgcggggcgt ttgcctggac atatgaacgt attgctggct 1080

gaagcaaaag taccgtatga catcgtgctg gaaatggacg agatcaatga tgactttgct 1140

gataccgata ccgtactggt gattggtgct aacgatacgg ttaacccggc ggcgcaggat 1200

gatccgaaga gtccgattgc tggtatgcct gtgctggaag tgtggaaagc gcagaacgtg 1260

attgtcttta aacgttcgat gaacactggc tatgctggtg tgcaaaaccc gctgttcttc 1320

aaggaaaaca cccacatgct gtttggtgac gccaaagcca gcgtggatgc aatcctgaaa 1380

gctctgtaa 1389

<210> 21

<211> 1047

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> ADH2基因的核苷酸序列

<400> 21

atgtctattc cagaaactca aaaagccatt atcttctacg aatccaacgg caagttggag 60

cataaggata tcccagttcc aaagccaaag cccaacgaat tgttaatcaa cgtcaagtac 120

tctggtgtct gccacaccga tttgcacgct tggcatggtg actggccatt gccaactaag 180

ttaccattag ttggtggtca cgaaggtgcc ggtgtcgttg tcggcatggg tgaaaacgtt 240

aagggctgga agatcggtga ctacgccggt atcaaatggt tgaacggttc ttgtatggcc 300

tgtgaatact gtgaattggg taacgaatcc aactgtcctc acgctgactt gtctggttac 360

acccacgacg gttctttcca agaatacgct accgctgacg ctgttcaagc cgctcacatt 420

cctcaaggta ctgacttggc tgaagtcgcg ccaatcttgt gtgctggtat caccgtatac 480

aaggctttga agtctgccaa cttgagagca ggccactggg cggccatttc tggtgctgct 540

ggtggtctag gttctttggc tgttcaatat gctaaggcga tgggttacag agtcttaggt 600

attgatggtg gtccaggaaa ggaagaattg tttacctcgc tcggtggtga agtattcatc 660

gacttcacca aagagaagga cattgttagc gcagtcgtta aggctaccaa cggcggtgcc 720

cacggtatca tcaatgtttc cgtttccgaa gccgctatcg aagcttctac cagatactgt 780

agggcgaacg gtactgttgt cttggttggt ttgccagccg gtgcaaagtg ctcctctgat 840

gtcttcaacc acgttgtcaa gtctatctcc attgtcggct cttacgtggg gaacagagct 900

gataccagag aagccttaga tttctttgcc agaggtctag tcaagtctcc aataaaggta 960

gttggcttat ccagtttacc agaaatttac gaaaagatgg agaagggcca aattgctggt 1020

agatacgttg ttgacacttc taaataa 1047

<210> 22

<211> 1959

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> ACS6基因的核苷酸序列

<400> 22

atgtctcaga ctcacaagca tgctattcct gctaacatag ctgacagatg cttaataaat 60

ccagaacagt atgaaactaa atacaagcaa tctataaacg atcctgacac tttctgggga 120

gagcagggta agatattgga ctggattaca ccataccaaa aggtcaagaa cacttcattt 180

gctcctggta atgtttctat taaatggtac gaggacggta cattaaactt agcagcaaac 240

tgcttggaca ggcacttgca agagaacgga gacagaactg caataatttg ggagggtgac 300

gacgcatctc aatctaagca catatcatac agagagttac acagagacgt ttgcagattc 360

gctaacacat tgttggattt gggaataaag aaaggtgacg ttgttgcaat ttatatgcct 420

atggttcctg aggctgctgt cgctatgttg gcttgcgcaa ggataggagc tgtccattct 480

gtcatttttg gtggtttttc acctgaggca atagcaggta ggataattga ttcatcttca 540

aggttggtca taactgcaga tgagggagtc agggcaggaa gatctattcc attgaagaag 600

aacgttgacg atgcattgaa gaacccaaac gttacttctg tcgagcacgt cattgtctta 660

aaaagaactg gaaacgacat agactggcaa gagggtaggg acttatggtg gagggacttg 720

attgagaagg cttcacctga acaccagcca gaggcaatga atgcagaaga cccattgttt 780

attttatata catctggatc tacaggaaag ccaaagggag tcttgcatac tacaggtggt 840

tacttggtct atgcagcaac aacttttaag tatgtcttcg actaccaccc tggtgacatt 900

tactggtgca cagctgacgt tggatgggtc acaggtcact cttacttgtt gtacggacct 960

ttggcatgcg gtgctactac attgatgttc gagggagtcc ctaactggcc tacacctgct 1020

aggatgtgcc aggttgtcga caagcaccag gtcaacatac tgtacacagc accaacagct 1080

attagggcat tgatggcaga gggtgacaag gcaattgagg gaacagacag gtcttctttg 1140

agaatattgg gatctgtcgg tgagccaata aacccagagg catgggagtg gtactggaag 1200

aagataggaa aggagaaatg tccagtcgtc gacacatggt ggcagacaga gacaggtgga 1260

tttatgataa ctcctttgcc aggagctata gagttgaagg ctggttcagc aacaaggcca 1320

ttcttcggag tccagcctgc attggtcgac aacgagggtc atccacagga aggtgctaca 1380

gagggtaact tagtcattac tgactcttgg cctggtcagg ctaggacatt gttcggtgac 1440

catgagaggt tcgagcagac ttacttttct acatttaaaa atatgtactt ttctggagac 1500

ggtgctagaa gggatgaaga tggttactat tggataactg gtagggtcga tgatgtctta 1560

aacgtctcag gacacaggtt gggaactgct gaaattgaat cagcattggt cgctcaccct 1620

aagatagctg aggcagctgt cgtcggaatt cctcacgcaa ttaagggaca ggcaatttac 1680

gcatacgtca ctttgaacca cggtgaagag ccatcaccag agttgtacgc agaggttagg 1740

aactgggtca ggaaggagat tggacctttg gcaactccag acgtcttgca ctggacagac 1800

tcattgccta agacaaggtc tggaaaaata atgaggagaa tattgaggaa aattgctgct 1860

ggagatactt caaacttggg tgacacttct acattggctg acccaggtgt tgtcgagaaa 1920

ccattggagg aaaaacaggc aatagctatg ccatcttaa 1959

<210> 23

<211> 1503

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> ALD6基因的核苷酸序列

<400> 23

atgactaagc tacactttga cactgctgaa ccagtcaaga tcacacttcc aaatggtttg 60

acatacgagc aaccaaccgg tctattcatt aacaacaagt ttatgaaagc tcaagacggt 120

aagacctatc ccgtcgaaga tccttccact gaaaacaccg tttgtgaggt ctcttctgcc 180

accactgaag atgttgaata tgctatcgaa tgtgccgacc gtgctttcca cgacactgaa 240

tgggctaccc aagacccaag agaaagaggc cgtctactaa gtaagttggc tgacgaattg 300

gaaagccaaa ttgacttggt ttcttccatt gaagctttgg acaatggtaa aactttggcc 360

ttagcccgtg gggatgttac cattgcaatc aactgtctaa gagatgctgc tgcctatgcc 420

gacaaagtca acggtagaac aatcaacacc ggtgacggct acatgaactt caccacctta 480

gagccaatcg gtgtctgtgg tcaaattatt ccatggaact ttccaataat gatgttggct 540

tggaagatcg ccccagcatt ggccatgggt aacgtctgta tcttgaaacc cgctgctgtc 600

acacctttaa atgccctata ctttgcttct ttatgtaaga aggttggtat tccagctggt 660

gtcgtcaaca tcgttccagg tcctggtaga actgttggtg ctgctttgac caacgaccca 720

agaatcagaa agctggcttt taccggttct acagaagtcg gtaagagtgt tgctgtcgac 780

tcttctgaat ctaacttgaa gaaaatcact ttggaactag gtggtaagtc cgcccatttg 840

gtctttgacg atgctaacat taagaagact ttaccaaatc tagtaaacgg tattttcaag 900

aacgctggtc aaatttgttc ctctggttct agaatttacg ttcaagaagg tatttacgac 960

gaactattgg ctgctttcaa ggcttacttg gaaaccgaaa tcaaagttgg taatccattt 1020

gacaaggcta acttccaagg tgctatcact aaccgtcaac aattcgacac aattatgaac 1080

tacatcgata tcggtaagaa agaaggcgcc aagatcttaa ctggtggcga aaaagttggt 1140

gacaagggtt acttcatcag accaaccgtt ttctacgatg ttaatgaaga catgagaatt 1200

gttaaggaag aaatttttgg accagttgtc actgtcgcaa agttcaagac tttagaagaa 1260

ggtgtcgaaa tggctaacag ctctgaattc ggtctaggtt ctggtatcga aacagaatct 1320

ttgagcacag gtttgaaggt ggccaagatg ttgaaggccg gtaccgtctg gatcaacaca 1380

tacaacgatt ttgactccag agttccattc ggtggtgtta agcaatctgg ttacggtaga 1440

gaaatgggtg aagaagtcta ccatgcatac actgaagtaa aagctgtcag aattaagttg 1500

taa 1503

<210> 24

<211> 1404

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> EUTE基因的核苷酸序列

<400> 24

atgaatcaac aggatattga acaggtggtg aaagcggtac tgctgaaaat gcaaagcagt 60

gacacgccgt ccgccgccgt tcatgagatg ggcgttttcg cgtccctgga tgacgccgtt 120

gcggcagcca aagtcgccca gcaagggtta aaaagcgtgg caatgcgcca gttagccatt 180

gctgccattc gtgaagcagg cgaaaaacac gccagagatt tagcggaact tgccgtcagt 240

gaaaccggca tggggcgcgt tgaagataaa tttgcaaaaa acgtcgctca ggcgcgcggc 300

acaccaggcg ttgagtgcct ctctccgcaa gtgctgactg gcgacaacgg cctgacccta 360

attgaaaacg caccctgggg cgtggtggct tcggtgacgc cttccactaa cccggcggca 420

accgtaatta acaacgccat cagcctgatt gccgcgggca acagcgtcat ttttgccccg 480

catccggcgg cgaaaaaagt ctcccagcgg gcgattacgc tgctcaacca ggcgattgtt 540

gccgcaggtg ggccggaaaa cttactggtt actgtggcaa atccggatat cgaaaccgcg 600

caacgcttgt tcaagtttcc gggtatcggc ctgctggtgg taaccggcgg cgaagcggta 660

gtagaagcgg cgcgtaaaca caccaataaa cgtctgattg ccgcaggcgc tggcaacccg 720

ccggtagtgg tggatgaaac cgccgacctc gcccgtgccg ctcagtccat cgtcaaaggc 780

gcttctttcg ataacaacat catttgtgcc gacgaaaagg tactgattgt tgttgatagc 840

gtagccgatg aactgatgcg tctgatggaa ggccagcacg cggtgaaact gaccgcagaa 900

caggcgcagc agctgcaacc ggtgttgctg aaaaatatcg acgagcgcgg aaaaggcacc 960

gtcagccgtg actgggttgg tcgcgacgca ggcaaaatcg cggcggcaat cggccttaaa 1020

gttccgcaag aaacgcgcct gctgtttgtg gaaaccaccg cagaacatcc gtttgccgtg 1080

actgaactga tgatgccggt gttgcccgtc gtgcgcgtcg ccaacgtggc ggatgccatt 1140

gcgctagcgg tgaaactgga aggcggttgc caccacacgg cggcaatgca ctcgcgcaac 1200

atcgaaaaca tgaaccagat ggcgaatgct attgatacca gcattttcgt taagaacgga 1260

ccgtgcattg ccgggctggg gctgggcggg gaaggctgga ccaccatgac catcaccacg 1320

ccaaccggtg aaggggtaac cagcgcgcgt acgtttgtcc gtctgcgtcg ctgtgtatta 1380

gtcgatgcgt ttcgcattgt ttaa 1404

<210> 25

<211> 1332

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> ERG12基因的核苷酸序列

<400> 25

atgtcattac cgttcttaac ttctgcaccg ggaaaggtta ttatttttgg tgaacactct 60

gctgtgtaca acaagcctgc cgtcgctgct agtgtgtctg cgttgagaac ctacctgcta 120

ataagcgagt catctgcacc agatactatt gaattggact tcccggacat tagctttaat 180

cataagtggt ccatcaatga tttcaatgcc atcaccgagg atcaagtaaa ctcccaaaaa 240

ttggccaagg ctcaacaagc caccgatggc ttgtctcagg aactcgttag tcttttggat 300

ccgttgttag ctcaactatc cgaatccttc cactaccatg cagcgttttg tttcctgtat 360

atgtttgttt gcctatgccc ccatgccaag aatattaagt tttctttaaa gtctacttta 420

cccatcggtg ctgggttggg ctcaagcgcc tctatttctg tatcactggc cttagctatg 480

gcctacttgg gggggttaat aggatctaat gacttggaaa agctgtcaga aaacgataag 540

catatagtga atcaatgggc cttcataggt gaaaagtgta ttcacggtac cccttcagga 600

atagataacg ctgtggccac ttatggtaat gccctgctat ttgaaaaaga ctcacataat 660

ggaacaataa atacaaacaa ttttaagttc ttagatgatt tcccagccat tccaatgatc 720

ctaacctata ctagaattcc aaggtctaca aaagatcttg ttgctcgcgt tcgtgtgttg 780

gtcaccgaga aatttcctga agttatgaag ccaattctag atgccatggg tgaatgtgcc 840

ctacaaggct tagagatcat gacaaagtta agtaaatgta aaggcaccga tgacgaggcc 900

gtagaaacta ataatgaact gtatgaacaa ctattggaat tgataagaat aaatcatgga 960

ctgcttgtct caatcggtgt ttctcatcct ggattagaac ttattaaaaa tctgagcgat 1020

gatttgagaa ttggctccac aaaacttacc ggtgctggtg gcggcggttg ctctttgact 1080

ttgttacgaa gagacattac tcaagagcaa attgacagtt tcaaaaagaa attgcaagat 1140

gattttagtt acgagacatt tgaaacagac ttgggtggga ctggctgctg tttgttaagc 1200

gcaaaaaatt tgaataaaga tcctaaaatc aaatccctag tattccaatt atttgaaaat 1260

aaaactacca caaagcaaca aattgacgat ctattattgc caggaaacac gaatttacca 1320

tggacttcat aa 1332

<210> 26

<211> 867

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> IDI1基因的核苷酸序列

<400> 26

atgactgccg acaacaatag tatgccccat ggtgcagtat ctagttacgc caaattagtg 60

caaaaccaaa cacctgaaga cattttggaa gagtttcctg aaattattcc attacaacaa 120

agacctaata cccgatctag tgagacgtca aatgacgaaa gcggagaaac atgtttttct 180

ggtcatgatg aggagcaaat taagttaatg aatgaaaatt gtattgtttt ggattgggac 240

gataatgcta ttggtgccgg taccaagaaa gtttgtcatt taatggaaaa tattgaaaag 300

ggtttactac atcgtgcatt ctccgtcttt attttcaatg aacaaggtga attactttta 360

caacaaagag ccactgaaaa aataactttc cctgatcttt ggactaacac atgctgctct 420

catccactat gtattgatga cgaattaggt ttgaagggta agctagacga taagattaag 480

ggcgctatta ctgcggcggt gagaaaacta gatcatgaat taggtattcc agaagatgaa 540

actaagacaa ggggtaagtt tcacttttta aacagaatcc attacatggc accaagcaat 600

gaaccatggg gtgaacatga aattgattac atcctatttt ataagatcaa cgctaaagaa 660

aacttgactg tcaacccaaa cgtcaatgaa gttagagact tcaaatgggt ttcaccaaat 720

gatttgaaaa ctatgtttgc tgacccaagt tacaagttta cgccttggtt taagattatt 780

tgcgagaatt acttattcaa ctggtgggag caattagatg acctttctga agtggaaaat 840

gacaggcaaa ttcatagaat gctataa 867

<210> 27

<211> 1197

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> ERG10基因的核苷酸序列

<400> 27

atgtctcaga acgtttacat tgtatcgact gccagaaccc caattggttc attccagggt 60

tctctatcct ccaagacagc agtggaattg ggtgctgttg ctttaaaagg cgccttggct 120

aaggttccag aattggatgc atccaaggat tttgacgaaa ttatttttgg taacgttctt 180

tctgccaatt tgggccaagc tccggccaga caagttgctt tggctgccgg tttgagtaat 240

catatcgttg caagcacagt taacaaggtc tgtgcatccg ctatgaaggc aatcattttg 300

ggtgctcaat ccatcaaatg tggtaatgct gatgttgtcg tagctggtgg ttgtgaatct 360

atgactaacg caccatacta catgccagca gcccgtgcgg gtgccaaatt tggccaaact 420

gttcttgttg atggtgtcga aagagatggg ttgaacgatg cgtacgatgg tctagccatg 480

ggtgtacacg cagaaaagtg tgcccgtgat tgggatatta ctagagaaca acaagacaat 540

tttgccatcg aatcctacca aaaatctcaa aaatctcaaa aggaaggtaa attcgacaat 600

gaaattgtac ctgttaccat taagggattt agaggtaagc ctgatactca agtcacgaag 660

gacgaggaac ctgctagatt acacgttgaa aaattgagat ctgcaaggac tgttttccaa 720

aaagaaaacg gtactgttac tgccgctaac gcttctccaa tcaacgatgg tgctgcagcc 780

gtcatcttgg tttccgaaaa agttttgaag gaaaagaatt tgaagccttt ggctattatc 840

aaaggttggg gtgaggccgc tcatcaacca gctgatttta catgggctcc atctcttgca 900

gttccaaagg ctttgaaaca tgctggcatc gaagacatca attctgttga ttactttgaa 960

ttcaatgaag ccttttcggt tgtcggtttg gtgaacacta agattttgaa gctagaccca 1020

tctaaggtta atgtatatgg tggtgctgtt gctctaggtc acccattggg ttgttctggt 1080

gctagagtgg ttgttacact gctatccatc ttacagcaag aaggaggtaa gatcggtgtt 1140

gccgccattt gtaatggtgg tggtggtgct tcctctattg tcattgaaaa gatatga 1197

<210> 28

<211> 1191

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> MVD1基因的核苷酸序列

<400> 28

atgaccgttt acacagcatc cgttaccgca cccgtcaaca tcgcaaccct taagtattgg 60

gggaaaaggg acacgaagtt gaatctgccc accaattcgt ccatatcagt gactttatcg 120

caagatgacc tcagaacgtt gacctctgcg gctactgcac ctgagtttga acgcgacact 180

ttgtggttaa atggagaacc acacagcatc gacaatgaaa gaactcaaaa ttgtctgcgc 240

gacctacgcc aattaagaaa ggaaatggaa tcgaaggacg cctcattgcc cacattatct 300

caatggaaac tccacattgt ctccgaaaat aactttccta cagcagctgg tttagcttcc 360

tccgctgctg gctttgctgc attggtctct gcaattgcta agttatacca attaccacag 420

tcaacttcag aaatatctag aatagcaaga aaggggtctg gttcagcttg tagatcgttg 480

tttggcggat acgtggcctg ggaaatggga aaagctgaag atggtcatga ttccatggca 540

gtacaaatcg cagacagctc tgactggcct cagatgaaag cttgtgtcct agttgtcagc 600

gatattaaaa aggatgtgag ttccactcag ggtatgcaat tgaccgtggc aacctccgaa 660

ctatttaaag aaagaattga acatgtcgta ccaaagagat ttgaagtcat gcgtaaagcc 720

attgttgaaa aagatttcgc cacctttgca aaggaaacaa tgatggattc caactctttc 780

catgccacat gtttggactc tttccctcca atattctaca tgaatgacac ttccaagcgt 840

atcatcagtt ggtgccacac cattaatcag ttttacggag aaacaatcgt tgcatacacg 900

tttgatgcag gtccaaatgc tgtgttgtac tacttagctg aaaatgagtc gaaactcttt 960

gcatttatct ataaattgtt tggctctgtt cctggatggg acaagaaatt tactactgag 1020

cagcttgagg ctttcaacca tcaatttgaa tcatctaact ttactgcacg tgaattggat 1080

cttgagttgc aaaaggatgt tgccagagtg attttaactc aagtcggttc aggcccacaa 1140

gaaacaaacg aatctttgat tgacgcaaag actggtctac caaaggaata a 1191

<210> 29

<211> 1476

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> ERG13基因的核苷酸序列

<400> 29

atgaaactct caactaaact ttgttggtgt ggtattaaag gaagacttag gccgcaaaag 60

caacaacaat tacacaatac aaacttgcaa atgactgaac taaaaaaaca aaagaccgct 120

gaacaaaaaa ccagacctca aaatgtcggt attaaaggta tccaaattta catcccaact 180

caatgtgtca accaatctga gctagagaaa tttgatggcg tttctcaagg taaatacaca 240

attggtctgg gccaaaccaa catgtctttt gtcaatgaca gagaagatat ctactcgatg 300

tccctaactg ttttgtctaa gttgatcaag agttacaaca tcgacaccaa caaaattggt 360

agattagaag tcggtactga aactctgatt gacaagtcca agtctgtcaa gtctgtcttg 420

atgcaattgt ttggtgaaaa cactgacgtc gaaggtattg acacgcttaa tgcctgttac 480

ggtggtacca acgcgttgtt caactctttg aactggattg aatctaacgc atgggatggt 540

agagacgcca ttgtagtttg cggtgatatt gccatctacg ataagggtgc cgcaagacca 600

accggtggtg ccggtactgt tgctatgtgg atcggtcctg atgctccaat tgtatttgac 660

tctgtaagag cttcttacat ggaacacgcc tacgattttt acaagccaga tttcaccagc 720

gaatatcctt acgtcgatgg tcatttttca ttaacttgtt acgtcaaggc tcttgatcaa 780

gtttacaaga gttattccaa gaaggctatt tctaaagggt tggttagcga tcccgctggt 840

tcggatgctt tgaacgtttt gaaatatttc gactacaacg ttttccatgt tccaacctgt 900

aaattggtca caaaatcata cggtagatta ctatataacg atttcagagc caatcctcaa 960

ttgttcccag aagttgacgc cgaattagct actcgcgatt atgacgaatc tttaaccgat 1020

aagaacattg aaaaaacttt tgttaatgtt gctaagccat tccacaaaga gagagttgcc 1080

caatctttga ttgttccaac aaacacaggt aacatgtaca ccgcatctgt ttatgccgcc 1140

tttgcatctc tattaaacta tgttggatct gacgacttac aaggcaagcg tgttggttta 1200

ttttcttacg gttccggttt agctgcatct ctatattctt gcaaaattgt tggtgacgtc 1260

caacatatta tcaaggaatt agatattact aacaaattag ccaagagaat caccgaaact 1320

ccaaaggatt acgaagctgc catcgaattg agagaaaatg cccatttgaa gaagaacttc 1380

aaacctcaag gttccattga gcatttgcaa agtggtgttt actacttgac caacatcgat 1440

gacaaattta gaagatctta cgatgttaaa aaataa 1476

<210> 30

<211> 1509

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> tHMG1基因的核苷酸序列

<400> 30

atggttttaa ccaataaaac agtcatttct ggatcgaaag tcaaaagttt atcatctgcg 60

caatcgagct catcaggacc ttcatcatct agtgaggaag atgattcccg cgatattgaa 120

agcttggata agaaaatacg tcctttagaa gaattagaag cattattaag tagtggaaat 180

acaaaacaat tgaagaacaa agaggtcgct gccttggtta ttcacggtaa gttacctttg 240

tacgctttgg agaaaaaatt aggtgatact acgagagcgg ttgcggtacg taggaaggct 300

ctttcaattt tggcagaagc tcctgtatta gcatctgatc gtttaccata taaaaattat 360

gactacgacc gcgtatttgg cgcttgttgt gaaaatgtta taggttacat gcctttgccc 420

gttggtgtta taggcccctt ggttatcgat ggtacatctt atcatatacc aatggcaact 480

acagagggtt gtttggtagc ttctgccatg cgtggctgta aggcaatcaa tgctggcggt 540

ggtgcaacaa ctgttttaac taaggatggt atgacaagag gcccagtagt ccgtttccca 600

actttgaaaa gatctggtgc ctgtaagata tggttagact cagaagaggg acaaaacgca 660

attaaaaaag cttttaactc tacatcaaga tttgcacgtc tgcaacatat tcaaacttgt 720

ctagcaggag atttactctt catgagattt agaacaacta ctggtgacgc aatgggtatg 780

aatatgattt ctaaaggtgt cgaatactca ttaaagcaaa tggtagaaga gtatggctgg 840

gaagatatgg aggttgtctc cgtttctggt aactactgta ccgacaaaaa accagctgcc 900

atcaactgga tcgaaggtcg tggtaagagt gtcgtcgcag aagctactat tcctggtgat 960

gttgtcagaa aagtgttaaa aagtgatgtt tccgcattgg ttgagttgaa cattgctaag 1020

aatttggttg gatctgcaat ggctgggtct gttggtggat ttaacgcaca tgcagctaat 1080

ttagtgacag ctgttttctt ggcattagga caagatcctg cacaaaatgt tgaaagttcc 1140

aactgtataa cattgatgaa agaagtggac ggtgatttga gaatttccgt atccatgcca 1200

tccatcgaag taggtaccat cggtggtggt actgttctag aaccacaagg tgccatgttg 1260

gacttattag gtgtaagagg cccgcatgct accgctcctg gtaccaacgc acgtcaatta 1320

gcaagaatag ttgcctgtgc cgtcttggca ggtgaattat ccttatgtgc tgccctagca 1380

gccggccatt tggttcaaag tcatatgacc cacaacagga aacctgctga accaacaaaa 1440

cctaacaatt tggacgccac tgatataaat cgtttgaaag atgggtccgt cacctgcatt 1500

aaatcctaa 1509

<210> 31

<211> 1356

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> ERG8基因的核苷酸序列

<400> 31

atgtcagagt tgagagcctt cagtgcccca gggaaagcgt tactagctgg tggatattta 60

gttttagata caaaatatga agcatttgta gtcggattat cggcaagaat gcatgctgta 120

gcccatcctt acggttcatt gcaagggtct gataagtttg aagtgcgtgt gaaaagtaaa 180

caatttaaag atggggagtg gctgtaccat ataagtccta aaagtggctt cattcctgtt 240

tcgataggcg gatctaagaa ccctttcatt gaaaaagtta tcgctaacgt atttagctac 300

tttaaaccta acatggacga ctactgcaat agaaacttgt tcgttattga tattttctct 360

gatgatgcct accattctca ggaggatagc gttaccgaac atcgtggcaa cagaagattg 420

agttttcatt cgcacagaat tgaagaagtt cccaaaacag ggctgggctc ctcggcaggt 480

ttagtcacag ttttaactac agctttggcc tccttttttg tatcggacct ggaaaataat 540

gtagacaaat atagagaagt tattcataat ttagcacaag ttgctcattg tcaagctcag 600

ggtaaaattg gaagcgggtt tgatgtagcg gcggcagcat atggatctat cagatataga 660

agattcccac ccgcattaat ctctaatttg ccagatattg gaagtgctac ttacggcagt 720

aaactggcgc atttggttga tgaagaagac tggaatatta cgattaaaag taaccattta 780

ccttcgggat taactttatg gatgggcgat attaagaatg gttcagaaac agtaaaactg 840

gtccagaagg taaaaaattg gtatgattcg catatgccag aaagcttgaa aatatataca 900

gaactcgatc atgcaaattc tagatttatg gatggactat ctaaactaga tcgcttacac 960

gagactcatg acgattacag cgatcagata tttgagtctc ttgagaggaa tgactgtacc 1020

tgtcaaaagt atcctgaaat cacagaagtt agagatgcag ttgccacaat tagacgttcc 1080

tttagaaaaa taactaaaga atctggtgcc gatatcgaac ctcccgtaca aactagctta 1140

ttggatgatt gccagacctt aaaaggagtt cttacttgct taatacctgg tgctggtggt 1200

tatgacgcca ttgcagtgat tactaagcaa gatgttgatc ttagggctca aaccgctaat 1260

gacaaaagat tttctaaggt tcaatggctg gatgtaactc aggctgactg gggtgttagg 1320

aaagaaaaag atccggaaac ttatcttgat aaatag 1356

<210> 32

<211> 1953

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> yap1基因的核苷酸序列

<400> 32

atgagtgtgt ctaccgccaa gaggtcgctg gatgtcgttt ctccgggttc attagcggag 60

tttgagggtt caaaatctcg tcacgatgaa atagaaaatg aacatagacg tactggtaca 120

cgtgatggcg aggatagcga gcaaccgaag aagaagggta gcaaaactag caaaaagcaa 180

gatttggatc ctgaaactaa gcagaagagg actgcccaaa atcgggccgc tcaaagagct 240

tttagggaac gtaaggagag gaagatgaag gaattggaga agaaggtaca aagtttagag 300

agtattcagc agcaaaatga agtggaagct acttttttga gggaccagtt aatcactctg 360

gtgaatgagt taaaaaaata tagaccagag acaagaaatg actcaaaagt gctggaatat 420

ttagcaaggc gagatcctaa tttgcatttt tcaaaaaata acgttaacca cagcaatagc 480

gagccaattg acacacccaa tgatgacata caagaaaatg ttaaacaaaa gatgaatttc 540

acgtttcaat atccgcttga taacgacaac gacaacgaca acagtaaaaa tgtggggaaa 600

caattacctt caccaaatga tccaagtcat tcggctccta tgcctataaa tcagacacaa 660

aagaaattaa gtgacgctac agattcctcc agcgctactt tggattccct ttcaaatagt 720

aacgatgttc ttaataacac accaaactcc tccacttcga tggattggtt agataatgta 780

atatatacta acaggtttgt gtcaggtgat gatggcagca atagtaaaac taagaattta 840

gacagtaata tgttttctaa tgactttaat tttgaaaacc aatttgatga acaagtttcg 900

gagttttgtt cgaaaatgaa ccaggtatgt ggaacaaggc aatgtcccat tcccaagaaa 960

cccatctcgg ctcttgataa agaagttttc gcgtcatctt ctatactaag ttcaaattct 1020

cctgctttaa caaatacttg ggaatcacat tctaatatta cagataatac tcctgctaat 1080

gtcattgcta ctgatgctac taaatatgaa aattccttct ccggttttgg ccgacttggt 1140

ttcgatatga gtgccaatca ttacgtcgtg aatgataata gcactggtag cactgatagc 1200

actggtagca ctggcaataa gaacaaaaag aacaataata atagcgatga tgtactccca 1260

ttcatatccg agtcaccgtt tgatatgaac caagttacta atttttttag tccgggatct 1320

accggcatcg gcaataatgc tgcctctaac accaatccca gcctactgca aagcagcaaa 1380

gaggatatac cttttatcaa cgcaaatctg gctttcccag acgacaattc aactaatatt 1440

caattacaac ctttctctga atctcaatct caaaataagt ttgactacga catgtttttt 1500

agagattcat cgaaggaagg taacaattta tttggagagt ttttagagga tgacgatgat 1560

gacaaaaaag ccgctaatat gtcagacgat gagtcaagtt taatcaagaa ccagttaatt 1620

aacgaagaac cagagcttcc gaaacaatat ctacaatcgg taccaggaaa tgaaagcgaa 1680

atctcacaaa aaaatggcag tagtttacag aatgctgaca aaatcaataa tggcaatgat 1740

aacgataatg ataatgatgt cgttccatct aaggaaggct ctttactaag gtgttcggaa 1800

atttgggata gaataacaac acatccgaaa tactcagata ttgatgtcga tggtttatgt 1860

tccgagctaa tggcaaaggc aaaatgttca gaaagagggg ttgtcatcaa tgcagaagac 1920

gttcaattag ctttgaataa gcatatgaac taa 1953

<210> 33

<211> 1149

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> PaCrtY(Pantoea ananatis)基因的核苷酸序列

<400> 33

atgcaaccac attacgattt gatcttggtt ggtgcaggtt tggctaacgg tttgatcgct 60

ttgagattgc aacaacaaca accagatatg agaatcttgt tgattgatgc tgcaccacaa 120

gcaggtggta atcatacatg gtcttttcat catgatgatt tgactgaatc acaacataga 180

tggattgctc cattagttgt tcatcattgg ccagattacc aagttagatt cccaacaaga 240

agaagaaagt tgaactctgg ttacttctgt atcacttcac aaagattcgc tgaagttttg 300

caaagacaat ttggtccaca tttgtggatg gatacagctg ttgcagaagt taatgcagaa 360

tctgttagat tgaagaaagg tcaagttatt ggtgctagag cagttattga tggtagaggt 420

tatgctgcaa attctgcttt atcagttggt tttcaagctt ttattggtca agaatggaga 480

ttgtctcatc cacatggttt atcttcacca attattatgg atgctactgt tgatcaacaa 540

aacggttaca gattcgttta ctctttgcca ttgtcaccaa ctagattgtt gatcgaagat 600

acacattaca tcgataacgc tactttggat ccagaatgtg caagacaaaa catctgtgat 660

tacgctgcac aacaaggttg gcaattgcaa acattgttga gagaagaaca aggtgctttg 720

ccaattactt tatctggtaa tgctgatgca ttttggcaac aaagaccatt ggcttgttca 780

ggtttgagag caggtttatt tcatccaact acaggttact ctttgccatt agctgttgca 840

gttgctgata gattgtcagc tttggatgtt tttacatctg catcaatcca tcatgctatt 900

actcattttg caagagaaag atggcaacaa caaggtttct ttagaatgtt gaacagaatg 960

ttgtttttag caggtccagc tgattctaga tggagagtta tgcaaagatt ttatggtttg 1020

ccagaagatt tgattgcaag attttacgct ggtaaattga ctttgacaga tagattgaga 1080

attttatcag gtaaaccacc agttccagtt ttggctgcat tacaagctat tatgactaca 1140

catagataa 1149

<210> 34

<211> 1809

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> PbCarRA(Phycomyces blakesleeanus)基因的核苷酸序列

<400> 34

atgttgacat acatggaagt tcatttgtac ttcactttgc cagttttggc attgttggca 60

tttttgtaca agccattttt cactacaaaa gatagattca aatacatttt cttgtgtaca 120

gttgctttcg caactgcttc tccatgggat aactacatcg tttaccataa ggcatggtca 180

tattgtccag aatgtgttac agctgttatt ggttacgttc cattggaaga atacatgttt 240

ttcatcatca tgactttgat tactgttact tttacttctt tgacaatgag atggacttta 300

ccatctttct ttattagacc agaaacacca gttttccaat ctgtttgtgt tagatacatt 360

ccaattgttg gtttcttgac tattgctgca aaagcatggg cttcttcaat tccagattca 420

catccatttt atggtgcatg tattttgtgg tatgtttgtc cagttttagc tttgttatgg 480

attggttctg gtgaatatat gttgagaaga tggaaggcag ttttattttc aatcgctgtt 540

ccaacaattt tcttgtgttg ggttgatcaa tacgcaattg ctagaggtac ttgggatatc 600

tctagaagaa catcaactgg tatcatggtt ttgccatctt tgccattgga agaattcttg 660

tttttcttgt tgatcgatac agttttggtt ttcgcatcat gtgctactga tagagcacat 720

gctatcgttc atatctatat cacaccaatg aaccataata aggtttctac ttggtacatg 780

gatttctttt atttgtgttg ggcatttttg caaactgatc aagctttatc tggtgaaaca 840

ttatcagatt tggatgctac ttggagaatt ttgagagaag catctgcttc attctacaca 900

gcatcttcag ttttctcttt tgaagctaga caagatttgg gtgttttgta cggtttttgt 960

agagcaactg atgatttggc tgataacaac gatgtttctg ttccagatag aaagaaacaa 1020

ttggaattag ttagaggttt cgttagacaa atgttcgatt caaagcatgg tcatccagat 1080

attgattgga cacaatactc tggttcaatc ccagattctt ttattgctgc ttttagatct 1140

tttactagat tgagagatgt tttggaaatt aaagctgttg aagaattgtt ggatggttac 1200

acattcgatt tggaacaaag agaagttaaa aatgaagatg atttggttta ctactctgca 1260

tgtgttgctt cttcagttgg tgaaatgtgt actagagttt taatggcttc agaaccaggt 1320

ggtaatagaa caatgttgaa atggactgtt gaaagagcaa gagatatggg tttggctttg 1380

caattgacaa acatcgcaag agatatcgtt actgattcta agcaattggg tagatcatac 1440

gttccaagag attggttgac atctcaagaa tcagctttgt taaaagctgg taaagctaga 1500

gaattaggtg acgaaagatt gagacaaatc gcattgaaga tggtttacac tgctgatgat 1560

ttgaatttga tggcatctag agctattgat tacttaccac catcttcaag atgtggtgtt 1620

agagctgcat gtaacgttta cacagctatc ggtgtttcat tgcataaagc aaatggttac 1680

ccagatagag ctcatttgac aaagttggaa agaatgaagg ttacttttag atgtgtttat 1740

ggttttagaa aaggtcatca aggtgttcaa ggtgaccgtg gtaaatctca agcttttact 1800

gttatttga 1809

<210> 35

<211> 1161

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> PagCrtY (Pantoea agglomerans)基因的核苷酸序列

<400> 35

atgccaagat atgatttgat tttggttggt gcaggtttgg ctaacggttt gatcgctttg 60

agattgagac aacaaagacc atctttgaga atcttgttga tcgatgcaga aagagaacca 120

ggtgctaatc atacttggtc atttcatgct gaagatttga ctgaaacaca acatagatgg 180

attgcaccat tggttgttca tcattggcca ggttatgaag ttagattccc acaaagatct 240

agatcattga actctggtta cttctgtgtt acttcagaaa gattcgttca agttattaga 300

gatagattcg ctccagattt gttgttgaac acaagagttg caggtattgc ttctagaact 360

gttacattag atgatggtag agttttggaa tcagatgctg ttattgatgg tagaggttat 420

caaccagatg ctgcattgtg tatgggtttt caatcttttg ttggtcaaga atggcaatta 480

tcagaaccac atggtttgac tgcaccaatt attatggatg ctacagttga tcaacaagca 540

ggttacagat tcgtttactc tttgccattt tcagctgata ctttgttgat cgaagataca 600

cattacattg ataatgcaac attggaaggt gacagagcta gacaaaatat tagagcatac 660

gctgcacaac aaggttggag attggataga ttgttgagag aagaacaagg tgctttacca 720

attactttga caggtgacgt tgctgcattt tggcaaaaac atgatttgcc atgttctggt 780

ttaagagctg gtttgtttca tccaactaca ggttactcat taccattggc tgttgcatta 840

gctgatagat tggctcaaat gcaaactttt acatctgaaa ctttgcatgc aacaattcaa 900

caatttgcat cacaagcttg gcaacaacaa agatttttca gaatgttgaa cagaatgtta 960

tttttggcag gtccagctga tcaaagatgg caagttatgc aaagatttta tggtttacca 1020

gaaggtttga ttgcaagatt ttacgctggt aaattgactt tgccagatag attgagaatt 1080

ttgtctggta aaccaccagt tccagtttta gctgcattgc aagctattat gacaccacat 1140

agacaacaag caatgcaata a 1161

<210> 36

<211> 1755

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> DsLCY( Dunaliella salina)基因的核苷酸序列

<400> 36

atgttacaaa cattgtcagg tagatctact tcattgttat cttcaccacc acaattgcca 60

tctcaacatg tttactctgt taagtcaaca agaatctgtg gtgctgaatc tttacaatca 120

ccacaagctg cattaggtac tagaacattg aatgtcacaa gatcaactac acatgcaaga 180

gaagcttcta gagcaagaac tagagcacaa gctttgttac aaagaacacc agaaactcca 240

tacttttcac caccaaaacc atctgttgat ggtccagttc aatattacta tagagaacca 300

tcaccatggc caactcaaca agatgttcaa gttgcttatc atgatttgca aagacaacca 360

gctgcagatt tgttagttgt tggttctggt ccatcaggtt tggcagttgc tgaaagagtt 420

gctgcaggtg gtttttctgt ttgtgttatt gatttggatc catacgctcc aatgattcca 480

aattatggtt gttgggttga tgaaatgcaa gctatgggtt tagaagaatg tttggaagtt 540

gtttggccaa aggcaaaggt ttggttggat aacgataagt caggtgaaag atttttgaga 600

agaccatacg gtagaatgga tagaccaatg ttgaagaaat tgttgttgca aaagtgtgct 660

tctaacggtg ttacattttt gacttctaaa gtttcaggtg tttctcatgg tgacggtact 720

tcaacagtta ctttgtctga tggtagaaca atgcaaggta ctatggtttt agatgctaca 780

ggtcatgcaa gaaagttggt taagtacgat caagaattca atccaggtta ccaaggtgct 840

tatggtatta ctgcagaagt tgaatctcat ccattcgaat tggatacaat gttgtttatg 900

gattggagag atgaacatac tcattcaaat ccagttatga gagcttctaa ccaagcattg 960

ccaacatttt tgtacgctat gccatacact aaaaataagg ttttcttgga agaaacatct 1020

ttggttgcta gaccagcagt tggtttcgat actttgaagg aaagattgat ggcaagaatg 1080

gaatggttgg gtattaaagt tacaaaggtt gaagatgaag aatactgttt gattccaatg 1140

ggtggtgctt tgccacaaca tccacaaaga gttttaggta ttggtggtac tgctggtatg 1200

gttcatccat caacaggttt tatgatgact agaatgttag gttctgctcc agttgttgca 1260

gatgctattg ttgatcaatt gtctagacca acagataaag ctactacagc aggtgctgca 1320

agacaattag ttactgaaca aggtgcagaa gaaatggctg cagctgtttg gcaagcagct 1380

tggccagttg aaagaatcag acaaagaatt tttatggaat tcggtatgga agttttgttg 1440

tcattgaatt tgcaacaaac tagagatttc tttgcagctt tcttttcttt gtcagatttt 1500

cattggcaag gtttcttgtc ttcaagattg tcttttacac aattgatcgg ttttggttta 1560

tcattgtttg ttgaagcttc tccagaaact agattgttgt tgttgagatt gggtattcca 1620

ggtgttgttc aaatgttgtt cgttttgttg ccaacagtta ctggttacta caagcaagat 1680

actacagtta aggataagaa attcgctcat gatagagcag ctgcagcttc tatttcagca 1740

gctaaacaac aataa 1755

<210> 37

<211> 1785

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> RdCrtYBR (Rhodosporidium diobovatum)基因的核苷酸序列

<400> 37

atgggtggtt atgattactg gttggttcat gcaagatgga caattccacc atctgttgct 60

ttgtggttgg tttttagaaa gttgagaact tggagagatg tttacaagac atgtttcttg 120

atcactattg cagttactgc tacaatccca tgggattcat atttgatcag aaacagaatc 180

tggtcttacc cagattcttc agttgttggt ccaactttgt tcgctatccc atacgaagaa 240

gttttctttt tctttgttca aacatatttg acttcaacat tgtacgctgt tttaactaga 300

ccaattgttc atccagtttt gttaccaaga acaccatctg aaggtagagc agttagatgg 360

actggtacag ctttgttatg tggtgttttt gctttggcat gggctaaatt agaagaaggt 420

ggtgaaggta cttatttggc attgattgtt ggttgggttg ctccattttt gacattgtta 480

tggtgggttg catcaactca tattattgct atgccaagat ctacattgtt attggcaatt 540

tttgctccaa ctttcttttt gtgggaattg gatgcaagag ctttacaaag aggtacatgg 600

gttattgaaa agggtactaa gttgggttgg gattttagag gtttggaaat cgaagaagct 660

gttttctttt tgttgacaaa cgttatgatc gttttcggta tggctgcatg tgatcattgt 720

ttggctgttc atgatttgag atcatacgat aaaggtactt cttcagtttt tccaccattg 780

catgatttcg gtccaatctt gattaattct ccagatgcaa agcaagctca aagaattgat 840

gatttgagag ctgcaatcga aatcttgtca gttcattcta agtcattttc tacagcttct 900

atggttttcg atggtagatt gagattggat ttgttggcat tgtatgcttg gtgtagagtt 960

tgtgatgatt tggttgataa tgcatcttca gttgctgcag ctgaagctaa catcagaatg 1020

atctcttcat gtttggattt gttgtaccca ccatcaactt ctacaccaac ttcacatcca 1080

gttagaattt ctaatgaagc tattgcagct gcattaccag gtttgtcaga accagaaaga 1140

ggttctttta gattgttggc tttgttgcca attacaagac caccattgga tgaattgttg 1200

gatggtttta gaactgattt gtcatttttg gcatttgctg gtgaaaaagc tgcaggtggt 1260

aaaccatcag gtggttcaac atctatccca tctgaattgc caattaaaac tgatgaagat 1320

ttgttggttt acgctaacaa cgttgcatct tcagttgctg atttgtgtgt tcaattagtt 1380

tgggcacatt gtgctacttc agttccagaa ccagaacaaa gagcaatttt gtctgctgca 1440

agagaaatgg gtcaagcttt gcaattggtt aacatcgcaa gagatgttcc agctgatttg 1500

gaaatccata gaatatattt gccaggtaga ggtttagatg ttccagttgc agatttgtca 1560

ccagatagaa gagaattatt gagaagagct agagaaatgg ctgcacattc tagaggtgca 1620

attgaaagat tgccaagaga agctagaggt ggtattagag ctgcatgtga tgtttactta 1680

tctattggtg gtgcagttga taaagctttg gatgaaggta gagttttaga aagagcaaga 1740

gttgctaaag gtacaagagc atggaaagct tggactgcat tataa 1785

<210> 38

<211> 2022

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> XdCrtYB(Xanthophyllomyces dendrorhous CrtYB)基因的核苷酸序列

<400> 38

atgacagctt tggcttatta tcaaattcac ttgatatata ctttgccaat attgggtttg 60

ttgggtttgt tgacatcacc tattttgaca aaattcgata tttataagat ttctatttta 120

gtttttattg ctttttcagc tacaactcca tgggattctt ggattataag aaacggtgct 180

tggacttacc catcagctga gtctggacag ggtgtcttcg gtacattctt ggatgttcca 240

tatgaagagt atgcgttctt cgttattcaa actgtcataa caggtttggt ttatgttttg 300

gctactaggc atttattacc atcattagca ttgccaaaaa caagatcatc agcattatct 360

ttggcattga aagcattgat acctttgcct ataatttatt tgttcactgc acatccttct 420

ccatctccag atccattggt cacagatcat tacttttata tgagagcatt gtctttgttg 480

attacaccac caactatgtt gttagctgct ttgtcaggtg aatacgcatt tgactggaag 540

tcaggaagag ctaaatctac tattgctgct attatgatac caactgttta tttgatatgg 600

gtcgactacg ttgcagtcgg tcaagattct tggtctatta atgacgaaaa aattgtcggt 660

tggagattgg gaggtgtctt gcctattgaa gaggctatgt ttttcttatt gactaatttg 720

atgatagttt tgggtttatc tgcatgtgac cacacacagg cattgtactt gttgcacggt 780

aggactatat acggaaataa gaaaatgcca tcatctttcc cattgattac accaccagtt 840

ttatctttat tcttttcatc taggccatac tcttctcaac caaaaaggga tttggaattg 900

gctgtcaaat tgttagaaga aaaatctaga tcttttttcg tcgcttctgc aggtttccca 960

tcagaagtca gagagaggtt ggtcggtttg tacgcattct gcagggtcac tgacgacttg 1020

attgattctc cagaagtttc ttcaaatcca cacgctacta tagatatggt ttctgacttt 1080

ttgacattat tgttcggtcc accattgcac ccatctcaac cagataagat tttgtcatca 1140

ccattgttgc caccttcaca cccatcaaga cctactggaa tgtacccatt accaccacct 1200

ccatctttgt cacctgctga gttagttcaa ttcttgacag aaagagttcc agttcaatac 1260

cattttgcat ttagattgtt ggctaaattg caaggtttaa ttcctagata tccattagat 1320

gaattgttga gaggttacac aacagacttg attttcccat tgtctactga agctgtccag 1380

gctaggaaga caccaattga gacaactgct gacttgttgg actacggttt gtgtgtcgct 1440

ggttcagtcg cagagttgtt ggtctacgtc tcttgggctt ctgcaccatc tcaagttcca 1500

gctactattg aagagagaga agctgtcttg gttgcttcta gggagatggg tactgctttg 1560

caattggtca atattgctag ggacataaag ggtgacgcta ctgaaggtag attttattta 1620

cctttatcat ttttcggttt aagggacgaa tctaaattag ctataccaac tgattggact 1680

gaaccaaggc cacaggactt cgataagttg ttgtctttat ctccatcttc aacattacca 1740

tcttctaatg cttctgagtc ttttagattt gagtggaaaa cttactcatt gcctttagtt 1800

gcttatgcag aagatttggc aaaacattct tacaaaggta ttgacaggtt gccaacagag 1860

gttcaggcag gtatgagggc agcttgcgca tcttacttgt tgattggtag agagattaag 1920

gtcgtctgga agggtgacgt tggtgaaagg aggactgttg ctggttggag aagggttagg 1980

aaggtcttgt cagtcgtcat gtctggttgg gaaggtcaat aa 2022

<210> 39

<211> 1236

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> SeLCY (Synechococcus elongatus PCC7942)基因的核苷酸序列

<400> 39

atgtttgatg ctttagttat tggttctggt ccagcaggtt tggctattgc tgcagaatta 60

gcacaaagag gtttgaaagt tcaaggttta tcaccagttg atccatttca tccatgggaa 120

aatacttatg gtatttgggg tccagaattg gattctttgg gtttggaaca tttgtttggt 180

catagatggt caaattgtgt ttcttacttt ggtgaagctc cagttcaaca tcaatacaac 240

tacggtttgt tcgatagagc acaattgcaa caacattggt taagacaatg tgaacaaggt 300

ggtttgcaat ggcaattggg taaagctgca gctattgctc atgattcaca tcattcttgt 360

gttactacag cagctggtca agaattgcaa gcaagattag ttgttgatac tacaggtcat 420

caagcagctt ttattcaaag accacattca gatgcaattg cttatcaagc agcttacggt 480

attattggtc aattttctca accaccaatc gaaccacatc aattcgtttt gatggattac 540

agatcagatc atttgtctcc agaagaaaga caattgccac caacattttt gtatgctatg 600

gatttgggta acgatgttta cttcgttgaa gaaacatcat tagcagcttg tccagctatc 660

ccatacgata gattgaagca aagattatac caaagattgg caactagagg tgttacagtt 720

caagttattc aacatgaaga atactgtttg ttcccaatga atttgccatt accagatttg 780

actcaatctg ttgttggttt tggtggtgca gcttcaatgg ttcatccagc ttctggttac 840

atggttggtg ctttgttaag aagagcacca gatttggcaa atgctattgc agctggtttg 900

aatgcttctt catctttaac tacagcagaa ttggctactc aagcatggag aggtttgtgg 960

ccaacagaaa agattagaaa gcattacatc tatcaatttg gtttggaaaa gttgatgaga 1020

ttttcagaag ctcaattgaa ccatcatttc caaactttct ttggtttgcc aaaggaacaa 1080

tggtacggtt tcttgactaa cacattgtct ttgccagaat tgatccaagc tatgttgaga 1140

ttgtttgcac aagctccaaa tgatgttaga tggggtttga tggaacaaca aggtagagaa 1200

ttgcaattat tttggcaagc tattgcagct agataa 1236

<210> 40

<211> 1845

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> McCarRP (Mucor circinelloides)基因的核苷酸序列

<400> 40

atgttgttga catacatgga agttcatttg tactacactt tgccagtttt aggtgttttg 60

tcttggttat caagaccata ttacactgct acagatgcat tgaagtttaa attcttgact 120

ttggttgctt ttactacagc ttctgcatgg gataactaca tcgtttacca taaggcttgg 180

tcatattgtc caacttgtgt tacagcagtt attggttacg ttccattgga agaatacatg 240

tttttcatca tcatgacttt gttgacagtt gcttttacaa atttggttat gagatggcat 300

ttgcattctt tctttatcag accagaaact ccagttatgc aatcagtttt ggttagattg 360

gttccaatca ctgctttgtt gatcacagct tacaaagcat ggcatttggc agttccaggt 420

aaaccattgt tttatggttc ttgtatcttg tggtacgctt gtccagtttt ggcattgtta 480

tggtttggtg ctggtgaata catgatgaga agaccattgg ctgttttagt ttcaatcgca 540

ttgccaacat tgtttttatg ttgggttgat gttgttgcta ttggtgcagg tacttgggat 600

atctctttgg ctacttcaac tggtaaattt gttgttccac atttgccagt tgaagaattc 660

atgtttttcg cattgattaa tactgttttg gttttcggta catgtgctat cgatagaact 720

atggcaatct tgcatttgtt taaaaataag tctccatacc aaagaccata ccaacattct 780

aagtcatttt tgcatcaaat cttggaaatg acatgggctt tctgtttgcc agatcaagtt 840

ttgcattctg atactttcca tgatttgtct gtttcatggg atatcttgag aaaggcttct 900

aagtcattct acacagcttc agcagttttt ccaggtgacg ttagacaaga attgggtgtt 960

ttatatgctt tttgtagagc aactgatgat ttgtgtgata atgaacaagt tccagttcaa 1020

acaagaaagg aacaattgat cttgactcat caattcgttt ctgatttgtt cggtcaaaag 1080

acttcagctc caacagcaat cgattgggat ttctacaacg atcaattgcc agcttcttgt 1140

atctcagctt ttaaatcttt tacaagattg agacatgttt tagaagctgg tgcaattaaa 1200

gaattgttgg atggttacaa gtgggatttg gaaagaagat ctatcagaga tcaagaagat 1260

ttgagatact actcagcttg tgttgcatct tcagttggtg aaatgtgtac aagaatcatc 1320

ttggctcatg cagataaacc agcttctaga caacaaactc aatggattat tcaaagagca 1380

agagaaatgg gtttggtttt gcaatacaca aacatcgcta gagatatcgt tactgattca 1440

gaagaattgg gtagatgtta cttaccacaa gattggttga ctgaaaagga agttgctttg 1500

atccaaggtg gtttggcaag agaaatcggt gaagaaagat tgttgtcttt gtcacataga 1560

ttgatctatc aagctgatga attgatggtt gttgcaaata agggtattga taaattgcca 1620

tctcattgtc aaggtggtgt tagagctgca tgtaatgttt acgcttctat tggtacaaag 1680

ttgaagtcat acaagcatca ttacccatct agagctcatg ttggtaactc aaagagagtt 1740

gaaatcgcat tgttgtctgt ttacaatttg tacactgctc caattgcaac atcttcaact 1800

acacattgta gacaaggtaa aatgagaaat ttgaatacta tttga 1845

<210> 41

<211> 1827

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> BtCarRA(Blakesle trispora)基因的核苷酸序列

<400> 41

atgtcaattt tgacatactt ggaatttcat ttatactata ctttgccagt cttggctgct 60

ttgtgttggt tgttgaaacc attccattca caacaagata atttgaaata taaattcttg 120

atgttgatgg ctgcttcaac tgcttctata tgggataatt acattgttta tcatagggct 180

tggtggtact gcccaacttg tgttgttgct gttattggtt atgttccatt ggaagaatac 240

atgtttttta ttataatgac tttaatgact gtcgcatttt ctaattttgt catgagatgg 300

cacttgcata cgttcttcat tagaccaaat acttcttgga aacaaacatt gttggttagg 360

ttggttccag tttctgcttt attggctatt acttaccatg cttggcattt aactttgcca 420

aataaatctt ctttttacgg ttcttgtatt ttgtggtacg cttgcccagt cttggcaatt 480

ttgtggttgg gtgcaggtga atacatttta agaagacctg ttgcagtctt gttatcaatt 540

gttattccat ctgtttattt gtgttgggca gatattgttg ctatttctgc tggtacatgg 600

catatatctt tgagaacatc tacaggtaag atggtcgtcc cagacttgcc tgtcgaagaa 660

tgtttgtttt ttactttgat aaacacagtt ttggtttttg ctacatgtgc tattgataga 720

gctcaagcta tattacattt atacaaatct tctgttcaaa atcagaaccc taaacaggct 780

atttctttgt ttcaacacgt caaggagttg gcatgggctt tctgtttgcc tgaccaaatg 840

ttgaataatg aattgtttga cgatttaaca atttcttggg atattttaag aaaagcttca 900

aagtcttttt acactgcttc tgctgtcttc ccatcttacg tcaggcaaga tttgggagtc 960

ttgtacgctt tctgtagggc tacagacgac ttgtgtgacg atgaatcaaa atctgttcaa 1020

gagagaaggg accagttgga cttgacaaga caattcgtta gagatttatt ttctcagaaa 1080

acttcagctc caattgtcat tgattgggaa ttataccaaa atcaattacc tgcatcttgc 1140

atatctgctt tcagagcatt tactagattg aggcatgttt tggaagttga tccagttgaa 1200

gaattattgg acggatacaa gtgggacttg gagaggaggc ctattttgga cgaacaagac 1260

ttggaagctt actctgcttg cgtcgcttct tctgtcggag agatgtgcac tagggtcatt 1320

ttggctcaag atcaaaaaga aaatgatgct tggattattg acagagctag agaaatgggt 1380

ttggttttac aatatgttaa tattgctaga gacattgtca ctgactcaga aacattgggt 1440

aggtgctact tgcctcagca atggttgaga aaggaagaaa ctgaacaaat tcaacaagga 1500

aatgctagat ctttaggtga ccaaagatta ttgggtttgt cattaaaatt ggtcggtaag 1560

gcagatgcta ttatggttag agcaaagaag ggaattgata agttgccagc taattgtcaa 1620

ggtggtgtca gggcagcttg tcaagtctat gctgctatag gttctgtttt gaagcaacaa 1680

aagacaactt acccaacaag ggctcacttg aagggatctg aaagggctaa aattgcttta 1740

ttgtctgttt acaacttgta ccagtctgaa gacaagcctg tcgctttgag gcaggctaga 1800

aaaattaaat cttttttcgt tgattaa 1827

<210> 42

<211> 735

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> BreCrtW (Brevundimonas sp. SD212 )基因的核苷酸序列

<400> 42

atgactgctg cagttgctga accaagaatt gttccaagac aaacttggat tggtttgaca 60

ttagctggta tgattgttgc aggttggggt tctttgcatg tttacggtgt ttacttccat 120

agatggggta cttcttcatt ggttattgtt ccagctattg ttgcagttca aacatggtta 180

tctgttggtt tgtttattgt tgctcatgat gcaatgcatg gttcattagc tccaggtaga 240

ccaagattga atgctgcagt tggtagattg acattaggtt tgtacgcagg ttttagattc 300

gatagattga agactgctca tcatgcacat catgctgcac caggtacagc tgatgatcca 360

gatttttatg ctccagcacc aagagcattt ttaccatggt tcttgaattt ctttagaact 420

tactttggtt ggagagaaat ggctgttttg acagcattgg ttttgatcgc tttgttcggt 480

ttgggtgcta gaccagcaaa tttgttaact ttttgggctg caccagcttt gttgtcagca 540

ttgcaattgt ttactttcgg tacatggtta ccacatagac atacagatca accatttgct 600

gatgcacatc atgctagatc ttcaggttac ggtccagttt tgtctttgtt gacttgtttc 660

catttcggta gacatcatga acatcatttg acaccatgga gaccatggtg gagattgtgg 720

cgtggtgaat cataa 735

<210> 43

<211> 1335

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> CrBKT（Chlamydomonas reinhardtii）基因的核苷酸序列

<400> 43

atgggtccag gtattcaacc aacttctgct agaccatgtt caagaacaaa gcattctaga 60

ttcgcattgt tagctgcagc tttgactgct agaagagtta agcaattcac taagcaattc 120

agatctagaa gaatggctga agatatcttg aagttgtggc aaagacaata tcatttgcca 180

agagaagatt cagataagag aacattgaga gaaagagttc atttgtacag accaccaaga 240

tctgatttgg gtggtattgc tgttgcagtt actgttattg ctttgtgggc aacattgttc 300

gtttacggtt tgtggttcgt taagttgcca tgggctttaa aagttggtga aactgcaaca 360

tcatgggcta ctattgcagc tgttttcttt tctttggaat tcttgtacac aggtttgttt 420

attactacac atgatgcaat gcatggtact attgctttga gaaacagaag attgaacgat 480

ttcttgggtc aattggcaat ttcattgtat gcttggttcg attactctgt tttgcataga 540

aagcattggg aacatcataa ccatacaggt gaaccaagag ttgatccaga ttttcataga 600

ggtaatccaa atttggcagt ttggtttgct caattcatgg tttcttacat gactttgtct 660

caattcttga agatcgcagt ttggtcaaat ttgttattgt tagctggtgc accattagct 720

aatcaattgt tgtttatgac agcagctcca atcttgtctg cttttagatt gttttattac 780

ggtacttacg ttccacatca tccagaaaaa ggtcatactg gtgcaatgcc atggcaagtt 840

tctagaacat cttcagcttc aagattgcaa tcatttttga catgttacca tttcgatttg 900

cattgggaac atcatagatg gccatacgct ccatggtggg aattaccaaa atgtagacaa 960

attgcaagag gtgcagcttt ggctccaggt ccattaccag ttccagcagc tgcagctgca 1020

actgctgcaa cagctgcagc tgcagctgca gctactggtt caccagctcc agcatcaaga 1080

gctggttctg catcttcagc ttcagcagct gcatctggtt ttggttcagg tcattcaggt 1140

tctgttgctg cacaaccatt gtcttcatta ccattgttat ctgaaggtgt taaaggtttg 1200

gttgaaggtg caatggaatt agttgctggt ggttcttcat ctggtggtgg tggtgaaggt 1260

ggtaaaccag gtgctggtga acatggtttg ttacaaagac aaagacaatt agcaccagtt 1320

ggtgttatgg cttaa 1335

<210> 44

<211> 963

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> HpBKT(Haematococcus pluvialis)基因的核苷酸序列

<400> 44

atgcatgttg cttcagcatt gatggttgaa caaaaaggtt ctgaagctgc agcttcttca 60

ccagatgttt taagagcttg ggcaactcaa tatcatatgc catcagaatc ttcagatgca 120

gctagaccag cattgaaaca tgcttacaaa ccaccagctt ctgatgcaaa gggtatcact 180

atggctttga caatcatcgg tacttggaca gcagttttct tgcatgctat cttccaaatc 240

agattgccaa cttcaatgga tcaattgcat tggttaccag tttctgaagc tacagcacaa 300

ttgttaggtg gttcttcatc tttgttgcat atcgcagctg tttttattgt tttggaattc 360

ttgtacactg gtttgtttat tactacacat gatgcaatgc atggtacaat cgctttgaga 420

catagacaat tgaacgattt gttgggtaac atctgtatct cattgtacgc ttggttcgat 480

tactctatgt tgcatagaaa gcattgggaa catcataacc atactggtga agttggtaaa 540

gatccagatt ttcataaagg taatccaggt ttagttccat ggtttgcttc ttttatgtca 600

tcttacatgt ctttgtggca atttgctaga ttagcatggt gggctgttgt tatgcaaatg 660

ttgggtgcac caatggctaa tttgttagtt tttatggcag ctgcaccaat cttgtcagct 720

tttagattgt tttatttcgg tacatactta ccacataagc cagaaccagg tccagctgca 780

ggttcacaag ttatggcatg gtttagagct aaaacttcag aagcatctga tgttatgtca 840

tttttgacat gttaccattt tgatttgcat tgggaacatc atagatggcc atttgctcca 900

tggtggcaat tgccacattg tagaagatta tctggtagag gtttggttcc agctttagca 960

taa 963

<210> 45

<211> 882

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> HpCrtZ(Haematococcus pluvialis)基因的核苷酸序列

<400> 45

atgttgtcta agttgcaatc tatctcagtt aaggctagaa gagttgaatt agcaagagat 60

atcactagac caaaggtttg tttgcatgct caaagatgtt cattggttag attaagagtt 120

gctgcaccac aaactgaaga agctgttggt acacaacaag ctgcaggtgc aggtgacgaa 180

cattctgcag atgttgcttt gcaacaatta gatagagcaa ttgctgaaag aagagctaga 240

agaaagagag aacaattgtc ataccaagct gcagctattg cagcttctat tggtgtttca 300

ggtatcgcaa tcttcgctac ttacttgaga ttcgctatgc atatgacagt tggtggtgct 360

gttccatggg gtgaagttgc aggtactttg ttattggttg ttggtggtgc attgggtatg 420

gaaatgtatg caagatacgc tcataaagca atttggcatg aatctccatt gggttggtta 480

ttgcataaat cacatcatac tccaagaaca ggtccattcg aagctaacga tttgttcgca 540

attattaacg gtttgccagc tatgttgttg tgtacattcg gtttctggtt gccaaatgtt 600

ttaggtactg cttgttttgg tgcaggtttg ggtatcacat tgtacggtat ggcctacatg 660

tttgttcatg atggtttagt tcatagaaga tttccaactg gtccaattgc tggtttgcca 720

tacatgaaga gattgacagt tgcacatcaa ttgcatcatt ctggtaaata cggtggtgct 780

ccatggggca tgtttttggg tccacaagaa ttacaacata ttccaggtgc agctgaagaa 840

gttgaaagat tggttttgga attggattgg tcaaaaagat aa 882

<210> 46

<211> 528

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> PaCrtZ(Pantoea agglomerans)基因的核苷酸序列

<400> 46

atgttgtgga tctggaacgc tttgatcgtt ttggttactg ttattggtat ggaaatcaca 60

gctgcattgg cacatagata tattatgcat ggttggggtt ggggttggca tttgtctcat 120

catgaaccac ataagggttg gttcgaagtt aacgatttgt acgctgttgt tttcgctgca 180

ttgtctatct tgttgatata tttgggttca actggtgttt ggccattgca atggattggt 240

gctggtatga cattgtacgg tttgttgtac ttcatcgttc atgatggttt ggttcatcaa 300

agatggcctt ttagatacgt tccaagaaga ggttatttga gaagattgta catggctcat 360

agaatgcatc atgcagttag aggtaaagaa ggttgtgttt cttttggttt cttgtacgct 420

ccaccattgt caaagttgca agcaactttg agagaaagac atggtgttaa aagaggtgct 480

gcaagagatc aaagatcagt tgaaagagat gctccacctg gtaaataa 528

<210> 47

<211> 894

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> HpCrtZ-V( Haematococcus pluvialis)基因的核苷酸序列

<400> 47

atggcattgt ctaaaatgca accaatgggt gttcaaggta gaagaattgc tttaccaaga 60

gatatttcta gaccacaaat gccatcacaa agacaaccat tggctcaagt tttaagagtt 120

gctgcaccag atactgaagc agttgaatct tcaagagttc aaccatctgt tggtgctggt 180

aatcaacaaa cagcagatga tgctttgcaa caattggata gatcaatcgc tttgagaaga 240

gcacaaagaa agagagaaca attgacttac caagctgcag ctattgcagc ttcagttggt 300

atctcttcat tggcaatctt ggctacttac acaagatttt ctatgcatat cacttcagat 360

ggtgaaatgc catggtctga tttgttaggt acattgtcat tagttgcagg tggtgctttt 420

ggtatggaaa tgtatgcaag atacgctcat aaagcattgt ggcatgaatc tccattaggt 480

tggttgttac ataaatcaca tcatactcca agaacaggtc cattcgaagc taacgatttg 540

ttcgcaatta ttaacggttt accagctatg ttgttatgtt attacggttt ttgggaacct 600

ggtatggttg gtgcttcttg ttttggtgca ggtttgggta tcactttgta cggtatggct 660

tacatgttca tccatgatgg tttggttcat agaagatttc caactggtcc aatctctgat 720

ttgccataca tgaagagatt gacagttgca catcaaatcc atcattctgg taaatacgat 780

ggtgctccat ggggcatgtt tttgggtcca caagaattag aagctatttc tggtgcaaca 840

gaagaattgg atagattagt tgctgatttg gattggtcaa aaagaagagt ttaa 894

<210> 48

<211> 930

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> AaCBFD(Adonis aestivalis CBFD) 基因的核苷酸序列

<400> 48

atgttggcat caatggctgc agctacttct atcacatctt catctagagc ttttagattt 60

catagaggtt tgtttttaaa cactaagcca aacatcagaa acccaccatg tttgttattt 120

tcaccattgt tgatgagaaa tagaaatggt gctggtgcat tgactatctg tttcgttgca 180

gaaagaacaa gaggtagaga aatcccacaa atcgaagaag atgaaaagaa tatggatgaa 240

gttttcgaac aaatgaactc agcttctgtt agagttgcag aaaagttggc tagaaagaaa 300

tctgaaagat tcacttattt gatcgcagct ttgatgtcat ctatgggtat cacatcaatg 360

gctatcttgt ctgtttacta cagattttca tggcaaatgg aaggtggtga cattccagtt 420

actgaaatgt tgggtacatt tgcattatct gttggtgcag ctgttggtat ggaattttgg 480

gctagatggg cacatagagc tttgtggcat gcttcattat ggcatatgca tgaatctcat 540

cataaaccaa gagaaggtcc attcgaattg aacgatgttt tcgcaattat taacgctgtt 600

ccagctatcg cattgttgaa cttcggtttc tttcataaag gtttgattcc aggtttatgt 660

tttggtgcag gtttgggtat tactgttttt ggtatggctt acatgtttgt tcatgatggt 720

ttagttcata gaagatttcc agttggtcca atcgctaacg ttccatactt cagaaaggtt 780

gcagctgcac atcaaatcca tcatactgat aagttccaag gtgttccata cggtttgttt 840

ttaggtccaa aagaattgga agaagttggt ggtaatgaag aattagaaaa agaaattgaa 900

agaagaatta aaagaatgaa tgctttataa 930

<210> 49

<211> 2241

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> XdCrtR( Xanthophyllomyces dendrorhous)基因的核苷酸序列

<400> 49

atggctactt tgtctgattt ggttattttg ttgttgggtg ctttgttggc attgggtttc 60

tacaataagg atagattgtt gggttcttca tcttcatctg catctactac atcaggttca 120

tctgctgcaa ctgctaatgg ttctaaacca acatactcaa acggtaacgg taacgctttt 180

aaaggtgacc caagagattt cgttgcaaga atgaaggatc aaaagaaaag attggctgtt 240

ttctatggtt ctcaaactgg tacagcagaa gaatacgcta caagaatcgc taaggaagca 300

aagtcaagat tcggtgtttc atctttggtt tgtgatatcg aagaatacga tttcgaaaag 360

ttggatcaag ttccagaaga ttgtgctatt gttttctgta tggcaactta cggtgaaggt 420

gaaccaacag ataacgctgt tcaattcatt gaaatgatct ctcaagatga tccagaattt 480

tctgaaggtt caactttgga tggtttgaag tacgttgttt tcggtttggg taataagaca 540

tacgaacaat acaatgttgt tggtagacaa ttggatgcaa gattaactgc tttgggtgca 600

acaagagttg gtgaaagagg tgaaggtgac gatgataagt ctatggaaga agattatttg 660

gcttggaaag atgatatgtt tgctgcatta gctactacat tgtcttttga agaaggtgca 720

tcaggtgaaa ctccagattt tgttgttaca gaagttccaa accatccaat cgaaaaggtt 780

ttccagggtg aattgtcatc tagagcttta ttgggttcta aaggtgttca tgatgctaaa 840

aatccatatg cttcaccagt tttagcatgt agagaattgt ttactggtgg tgacagaaac 900

tgtatccatt tggaattcga tatcacaggt tctggtatca cttaccaaac aggtgaccat 960

gttgcagttt ggccatcaaa cccagatgtt gaagttgaaa gattgttggc tgttttaggt 1020

ttgacttctc cagaaaagag aagaatgatc atccaagttg tttcattgga tccaactttg 1080

gcaaaagttc catttccaac accaactaca tacgatgctg tttttagaca ttacttggat 1140

atctctgctg ttgcatcaag acaaacttta gctgttttgg caaaatatgc tccatctgaa 1200

caagctgcag aattcttgac tagattgggt acagataaac aagcatacca tacagaagtt 1260

gtcggtggtc atttgagatt ggctgaagtt ttacaattgg ctgctggtaa tgatattact 1320

gttatgccaa cagctgaaaa cactacagtt tggaacatcc cattcgatca tgttgtttct 1380

gatgtttcaa gattgcaacc aagattctac tctatctcat cttcaccaaa gttgcatcca 1440

aactcaatcc atgttactgc tgttattttg aagtacgaat ctcaagctac agatagacat 1500

ccagcaagat gggttttcgg tttgggtact aactacttat tgaacgttaa gcaagctgca 1560

aacaacgaaa ctacaccaat gatctctgat ggtcaagatg atgttccaga acatgtttca 1620

gctccaaaat atacattaga aggtccaaga ggttcataca agcatgatga tcaattgttt 1680

aaagttccaa tccatgttag aagatctact tttagattgc caacatcacc aaagatccca 1740

gttattatga ttggtccagg tactggtgtt gctcctttta gaggttttat tcaagaaaga 1800

attgctttgg caagaagatc tattgctaaa aatggtccag atgctttagc agattgggct 1860

ccaatatatt tgttttatgg ttcaagagat gaacaagatt tcttgtatgc agaagaatgg 1920

ccagcatacg aagctgaatt gcagggtaaa ttcaaaatcc atgttgcttt ttctagatca 1980

ggtccaagaa aaccagatgg ttctaagatc tatgttcaag atttgttgtg ggatcaaaag 2040

gaagttatta aatctgctat cgttgaaaag agagcatcag tttacatttg tggtgacggt 2100

agaaacatgt caaaggatgt tgaacaaaag ttggctgcaa tgttggctga atctaaaaat 2160

ggttcagctg cagttgaagg tgctgcagag gttaagtctt tgaaggaaag atcaagattg 2220

ttgatggatg tttggtctta a 2241

<210> 50

<211> 1674

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> XdCrtS(Xanthophyllomyces dendrorhous)基因的核苷酸序列

<400> 50

atgtttattt tggttttgtt aacaggtgca ttgggtttag ctgcattttc ttgggcttca 60

attgctttct tttctttgta tttggctcca agaagatctt cattgtacaa tttgcaaggt 120

ccaaaccata caaactactt cactggtaat ttcttggata tcttgtctgc aagaacaggt 180

gaagaacatg ctaagtacag agaaaagtac ggttctactt tgagatttgc tggtattgct 240

ggtgcaccag ttttgaactc aactgatcca aaggttttta atcatgttat gaaagaagca 300

tatgattacc caaaacctgg tatggctgca agagttttga gaattgctac aggtgacggt 360

gttgttactg ctgaaggtga agcacataag agacatagaa gaatcatgat cccatcttta 420

tcagctcaag ctgttaagtc tatggttcca attttcttgg aaaagggtat ggaattggtt 480

gataagatga tggaagatgc tgcagaaaaa gatatggctg ttggtgaatc agcaggtgaa 540

aagaaagcta caagattgga aactgaaggt gttgatgtta aagattgggt tggtagagca 600

acattggatg ttatggcttt ggcaggtttc gattacaagt ctgattcatt gcaaaataag 660

actaacgaat tgtacgttgc ttttgttggt ttaacagatg gttttgcacc aactttggat 720

tcttttaaag ctatcatgtg ggatttcgtt ccatacttca gaacaatgaa gagaagacat 780

gaaatcccat tgactcaagg tttagcagtt tcaagaagag ttggtattga attgatggaa 840

caaaagaaac aagctgtttt aggttctgct tcagatcaag cagttgataa gaaagatgtt 900

caaggtagag atatcttgtc tttgttagtt agagctaaca ttgctgcaaa tttgccagaa 960

tctcaaaagt tgtcagatga agaagttttg gcacaaatct ctaatttgtt gttcgctggt 1020

tacgaaactt cttcaacagt tttgacttgg atgttccata gattgtcaga agataaggct 1080

gttcaggata agttgagaga agaaatctgt caaatcgata cagatatgcc aactttggat 1140

gaattgaacg cattgccata tttggaagct ttcgttaagg aatctttgag attggatcca 1200

ccatcaccat acgcaaacag agaatgtttg aaggatgaag atttcatccc attggctgaa 1260

ccagttattg gtagagatgg ttctgttatt aatgaagtta gaatcacaaa gggtactatg 1320

gttatgttgc cattgtttaa tatcaacaga tcaaagttta tatatggtga agatgctgaa 1380

gaattcagac cagaaagatg gttggaagat gttacagatt ctttgaactc aatcgaagca 1440

ccatacggtc atcaagcttc ttttatttca ggtccaagag catgttttgg ttggagattt 1500

gctgttgcag aaatgaaggc atttttgttc gttacattga gaagagttca attcgaacca 1560

atcatctctc atccagaata cgaacatatc actttgatca tctcaagacc aagaattgtt 1620

ggtagagaaa aagaaggtta ccaaatgaga ttacaagtta aaccagttga ataa 1674

<210> 51

<211> 720

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> spt15-5基因的核苷酸序列

<400> 51

atggccgatg aggaacgttt aaaggagttt aaaggggcaa acaagatagt gtttgatcca 60

aataccagac aagtatggga aaaccagaat cgagatggaa caaaaccagc aactactttc 120

cagagtgaag aggtcataaa aagagctgcc ccagaatctg aaaaagacac ctccgccaca 180

tcaagtattg ttccagagct atagaacatt gtggcaactg tgactttggg gagcaggtta 240

gatctgaaaa cagttgcgct acatgcccgt atgcagaata taacccctag cgttttgctg 300

ctgtcatcat gcgtatagag agccaaaaac tacagcttta atttttgcct cagggaaaat 360

ggttgttacc ggtgcaaaaa gtgaggatga ctcaaagctg gccagaagaa tatatgcagg 420

aattatccaa aaaatcaggt ttgcagctaa attcacagac ttcaaaatac aaaatattgt 480

cggttcgtgt gacgttaatt tccctatacg tctagaaggg ttagcattca gtcatggtac 540

tttctcctcc tatgagccag aattgtttcc tggtttgatc tatagaatgg tgaagccgaa 600

aattgtgttg ttaatttttg tttcaggaaa gattgttctt ctggagcaaa gcaaagggag 660

gaaatttacc aagcttttga agctatatac ccagttctaa gtgaatttag aaaaatgtga 720

<210> 52

<211> 621

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> taf25-3基因的核苷酸序列

<400> 52

atggattttg aggaagatta cgatgcggag tttgatgata atcaagaagg acaattagaa 60

acaccttttc catcggttgc gggagccgat gatggggaca atgataatga tgactctgtc 120

gcagaaaaca tgaagaagaa gcaaaagaga gaggctgtag tggatgatgg gagtgaaaat 180

gcatttggta tacccgaatt tacaagaaaa gataagactc tggaggagat tttagagatg 240

atggacagta ctcctcctat cattcccgat gcagtaatag actactattt aaccaaaaac 300

gggtttaacg tagcatatgt acaagtgaaa cgacttttag cacttgctac tcagaaattt 360

gttagtgata tagctaagga tgcctacgaa tattccagga tcaggtcttc cgtagcggta 420

tctaatgcta acaacagtca ggcgagagct aggcagctat tgcaaggaca gcgacagact 480

ggcgtgcagc agatttcaca acaacaacat caacagaatg agaagactac agcaagcata 540

gttgttctga cggtgaacga tcccagtagc gctgttgctg aatacgggct caatataggt 600

cgcccagact tttatcgtta g 621

Claims (6)

1.一种酿酒酵母，其特征在于，过表达tHMG1，BtCarG，PaCrtB，McCrtI，POS5，ADH2，ACS6，ALD6基因；以及

沉默GAL1，GAL7，GAL10，Exg1基因。

2.根据权利要求1所述的酿酒酵母，其特征在于，进一步包括替换ERG9的启动子为P_HXT1。

3.一种获得番茄红素的方法，其特征在于，包括：

将权利要求1～2任一项所述的酿酒酵母进行发酵处理；以及

将发酵处理产物进行萃取处理，以便获得所述番茄红素。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵处理是通过如下方式实现的：

将所述酿酒酵母进行基础发酵处理和两级分批补料发酵处理，所述基础发酵处理是在基本发酵培养基中进行的，所述两级分批补料发酵处理是通过在所述基本发酵培养基基础上依次补加第一补料培养基和第二补料培养基实现的，

其中，所述基本发酵培养基为含有2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.8％KH₂PO₄和2％葡萄糖的YPD含盐培养基；

所述第一补料培养基为含有500g/L葡萄糖，5g/L MgSO₄，3.5g/L K₂SO₄，0.28g/L Na₂SO₄和10g/L酵母提取物的YPD含盐培养基；

所述第二补料培养基为乙醇或甘油。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述萃取处理包括：

将所述发酵处理产物进行匀浆破碎或酶解破碎处理以及有机萃取处理。

6.权利要求1～2任一项所述酿酒酵母在制备番茄红素中的用途。

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