CN107121394A - 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置 - Google Patents

禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置 Download PDF

Info

Publication number
CN107121394A
CN107121394A CN201710561645.6A CN201710561645A CN107121394A CN 107121394 A CN107121394 A CN 107121394A CN 201710561645 A CN201710561645 A CN 201710561645A CN 107121394 A CN107121394 A CN 107121394A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
connecting rod
fluorescence spectrum
veterinary drug
detecting device
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710561645.6A
Other languages
English (en)
Inventor
赵进辉
刘木华
袁海超
黄双根
郭红青
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi Agricultural University
Original Assignee
Jiangxi Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangxi Agricultural University filed Critical Jiangxi Agricultural University
Priority to CN201710561645.6A priority Critical patent/CN107121394A/zh
Publication of CN107121394A publication Critical patent/CN107121394A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6402—Atomic fluorescence; Laser induced fluorescence

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，包括样本荧光光谱采集单元和计算机，所述样本荧光光谱采集单元包括依次连接的氙灯电源、氙灯、激发单射器，所述激发单射器通过发射光纤与光纤探头连接，所述光纤探头的下方设有样本，所述光纤探头还与依次与接收光纤、荧光光谱仪、处理计算机连接，被激发出的荧光通过接收光纤传送到荧光光谱仪，得到的荧光光谱被记录到计算机中。本发明整个监测装置结构简单紧凑，设计合理，使用方便；有效的减小荧光光谱散射，提高检测精度。

Description

禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置
技术领域
本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置。
背景技术
禽肉是中国的主要肉类消费品，近年来，禽肉中的兽药残留事件时常发生，使人们逐渐认识到了禽肉中兽药残留的危害性，中国也制定了有关禽肉中兽药残留限量标准。针对禽肉中可能存在的兽药残留隐患，提前检测出存在兽药残留安全隐患的禽肉，防患于未然才是保证禽肉食用安全最有效的措施。目前的常规的高效液相色谱法、气相色谱法等检测方法检测过程复杂，耗时长，工作强度大，仪器设备大，不利于商品化快速处理要求。因此，设计一种操作简便，便携，自动化程度高的禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，有广泛的应用价值和现实研究意义。
发明内容
本发明为了适应现实需要，设计了一种禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置。
为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，包括样本荧光光谱采集单元和计算机，所述样本荧光光谱采集单元包括依次连接的氙灯电源、氙灯、激发单射器，所述激发单射器通过发射光纤与光纤探头连接，所述光纤探头的下方设有样本，所述光纤探头还与依次与接收光纤、荧光光谱仪、处理计算机连接，被激发出的荧光通过接收光纤传送到荧光光谱仪，得到的荧光光谱被记录到计算机中。
所述光纤探头下端与积分球连接，所述积分球底部设有采样孔，所述采样孔对准样本。
还包括自动进样单元，所述样本经由自动进样单元依次传递，所述自动进样单元包括一个样本进样盘，所述样本进样盘的下方设有步进电机，所述样本进样盘的底部设有一个连接台，连接台与电机转轴之间设有第一连杆与第二连杆，所述第一连杆和第二连杆与电机转轴之间均为静连接，第一连杆和第二连杆上端均插入连接台底部的滑动槽中；所述样本进样盘的上方设有电磁铁，通过电路控制电磁铁得电，样本进样盘上升，样本进样盘上的限位触点与电磁铁两侧的第一限位块、第二限位块接触限位，此时样本位于采样孔的正下方开口处；所述连接台与电机转轴之间还设有回位弹簧，电磁铁断电，样本进样盘回位至初始状态。
所述第一连杆和第二连杆与电机转轴之间均为过盈配合连接，与滑动槽采用间隙滑动配合。
所述第一连杆、第二连杆的上端均设有限位卡头，滑动槽的下端设有限位卡口，所述电磁铁得电样本进样盘上升至限位触点与两个限位块接触时，限位卡头与限位卡口接触限位，当电磁铁失电样本进样盘回位时，第一连杆、第二连杆的限位卡头均位于滑动槽的顶部。
所述样本进样盘的盘体四周分布有若干个样本安放位，所述样本进样盘经由步进电机带动间歇转动，使得各样本安放位处设置的样本依次对准采样孔的正下方。
所述步进电机、电磁铁均通过与计算机连接的控制器控制，所述控制器包括微处理器ARM10、固态继电器SSR、步进电机驱动芯片L298N，由ARM10发出指令给SSR控制电磁铁的得失电，由ARM10发出指令经L298N驱动步进电机运动。
本发明的有益效果在于：
1.整个监测装置结构简单紧凑，设计合理，使用方便；
2.采用用积分球结构，有效的减小荧光光谱散射，提高检测精度；
3.操作简单，使用方便快捷，便于携带；
4.采用多样本自动进样，有效的降低了工作强度，其自动化程度高。
附图说明
图1为本发明的结构示意图。
图2为自动进样单元的主要结构的局部剖视示意图；
图3为自动进样单元的另一实施例的主要结构的局部剖视示意图。
图中：1.氙灯电源；2.氙灯；3.激发单射器；4.发射光纤；5.接收光纤；6.荧光光谱仪；7. 计算机； 8.控制器； 9.第一限位块；10.电磁铁；11.第二限位块，12.第一连杆13.步进电机；14.第二连杆；15.回位弹簧；16.样本进样盘；17.积分球；18. 光纤探头，19.采样孔，20.样本，21.连接台，22为电机转轴， 23为限位触点,24为滑动槽，25限位卡头，26为限位卡口。
具体实施方式
现结合附图1——3详细描述本发明的实施例，对本发明进一步详细说明。
一种禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，包括样本荧光光谱采集单元和计算机，所述样本荧光光谱采集单元包括依次连接的氙灯电源1、氙灯2、激发单射器3，所述激发单射器3通过发射光纤4与光纤探头18连接，所述光纤探头18的下方设有样本20，所述光纤探头18还与依次与接收光纤5、荧光光谱仪6、处理计算机7连接，被激发出的荧光通过接收光纤5传送到荧光光谱仪6，得到的荧光光谱被记录到带有检测软件的计算机7中。检测软件即为荧光光谱采集软件，可采用Cary eclipse波长扫描软件。
所述光纤探头18下端通过螺纹与积分球17连接，所述积分球17底部设有采样孔19，所述采样孔19对准样本20。
还包括自动进样单元，所述样本20经由自动进样单元依次传递，所述自动进样单元包括一个样本进样盘16，所述样本进样盘16的下方设有步进电机13，所述样本进样盘16的底部设有一个连接台21，连接台21与电机转轴22之间设有第一连杆12与第二连杆14，所述第一连杆12和第二连杆14与电机转轴22之间均为静连接，第一连杆12和第二连杆14上端均插入连接台21底部的滑动槽24中；所述样本进样盘16的上方设有电磁铁10，通过电路控制电磁铁10得电，样本进样盘16上升，样本进样盘16上的限位触点23与电磁铁10两侧的第一限位块9、第二限位块10接触限位，此时样本20位于采样孔19的正下方开口处；所述连接台21与电机转轴22之间还设有回位弹簧15，电磁铁10断电，样本进样盘16回位至初始状态。
所述第一连杆12和第二连杆14与电机转轴之间均为过盈配合连接，与滑动槽24采用间隙滑动配合。
作为一种优选的实施方式，所述第一连杆12、第二连杆14的上端均设有限位卡头25，滑动槽24的下端设有限位卡口26，所述电磁铁10得电样本进样盘16上升至限位触点23与两个限位块接触时，限位卡头25与限位卡口26接触限位，当电磁铁10失电样本进样盘16回位时，第一连杆12、第二连杆14的限位卡头25均位于滑动槽24的顶部。
所述样本进样盘16的盘体四周分布有若干个样本安放位，所述样本进样盘16经由步进电机13带动间歇转动，使得各样本安放位处设置的样本依次对准采样孔19的正下方。
所述步进电机13、电磁铁10均通过与计算机连接的控制器8控制，所述控制器8包括微处理器ARM10、固态继电器SSR、步进电机驱动芯片L298N，由ARM10发出指令给SSR控制电磁铁10的得失电，由ARM10发出指令经L298N驱动步进电机13运动。
禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置的工作步骤如下：
a，将禽肉样本依次放置于样本进样盘16上的8个样本安放位中；
b，计算机7中的检测控制软件发出校正指令给控制器8，对样本进样盘16进行初始位置校正，使样本进样盘16上某一个样本安放位的中心对准积分球17下端采样孔19的中心；
c，计算机7上的检测控制软件发出自动采样指令给控制器8，使电磁铁铁10得电吸合，样本进样盘16上移，于第一限位块9、第二限位块10位置停止，此时样本20位于采样孔19的正下方开口处；
d，氙灯2发出的光经过激发单射器3由发射光纤4照射到样本上；
e，被激发出的荧光通过接收光纤5传送到荧光光谱仪6，得到的荧光光谱被记录到计算机7中；
f，控制器8控制电磁铁10失电，样本进样盘16在弹簧15的作用力下回位；
g，控制器8控制步进电机13做旋转运动，使样本进样盘16上的下一个样本安放位的中心对准积分球17下端开口的中心；
h，重复步骤c ~ g，对样本进样盘16上的每一个采样附件上的样本依次采集其荧光光谱；
i，在采样过程中，可用待测样本来更换已采集过荧光光谱的样本，实现样本连续采集，提高工作效率。
上述通过附图所描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能解释为对本发明的限制；对于本领域的技术人员而言，可以在不脱离本发明的原理和精神下对本实施例进行变型和参数置换，本发明的范围由所附权利要求及其等同确定。

Claims (7)

1.一种禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，包括样本荧光光谱采集单元和计算机，其特征在于：所述样本荧光光谱采集单元包括依次连接的氙灯电源(1)、氙灯(2)、激发单射器(3)，所述激发单射器(3)通过发射光纤(4)与光纤探头(18)连接，所述光纤探头(18)的下方设有样本(20)，所述光纤探头(18还与依次与接收光纤(5)、荧光光谱仪(6)、处理计算机(7)连接，被激发出的荧光通过接收光纤(5)传送到荧光光谱仪(6)，得到的荧光光谱被记录到计算机(7)中。
2.根据权利要求1所述的禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，其特征在于：所述光纤探头(18)下端与积分球(17)连接，所述积分球(17)底部设有采样孔(19)，所述采样孔(19)对准样本(20)。
3.根据权利要求1所述的禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，其特征在于：还包括自动进样单元，所述样本(20)经由自动进样单元依次传递，所述自动进样单元包括一个样本进样盘(16)，所述样本进样盘(16)的下方设有步进电机(13)，所述样本进样盘(16)的底部设有一个连接台(21)，连接台(21)与电机转轴(22)之间设有第一连杆(12)与第二连杆(14)，所述第一连杆(12)和第二连杆(14)与电机转轴(22)之间均为静连接，第一连杆(12)和第二连杆(14)上端均插入连接台(21)底部的滑动槽(24)中；所述样本进样盘(16)的上方设有电磁铁(10)，通过电路控制电磁铁(10)得电，样本进样盘(16)上升，样本进样盘(16)上的限位触点(23)与电磁铁(10)两侧的第一限位块(9)、第二限位块(10)接触限位，此时样本(20)位于采样孔(19)的正下方开口处；所述连接台(21)与电机转轴(22)之间还设有回位弹簧(15)，电磁铁(10)断电，样本进样盘(16)回位至初始状态。
4.根据权利要求3所述的禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，其特征在于：所述第一连杆(12)和第二连杆(14)与电机转轴之间均为过盈配合连接，与滑动槽(24)采用间隙滑动配合。
5.根据权利要求4所述的禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，其特征在于：所述第一连杆(12)、第二连杆(14)的上端均设有限位卡头(25)，滑动槽(24)的下端设有限位卡口(26)，所述电磁铁(10)得电样本进样盘(16)上升至限位触点(23)与两个限位块接触时，限位卡头(25)与限位卡口(26)接触限位，当电磁铁(10)失电样本进样盘(16)回位时，第一连杆(12)、第二连杆(14)的限位卡头(25)均位于滑动槽(24)的顶部。
6.根据权利要求5所述的禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，其特征在于：所述样本进样盘(16)的盘体四周分布有若干个样本安放位，所述样本进样盘(16)经由步进电机(13)带动间歇转动，使得各样本安放位处设置的样本依次对准采样孔(19)的正下方。
7.根据权利要求6所述的禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置，其特征在于：所述步进电机(13)、电磁铁(10)均通过与计算机连接的控制器(8)控制，所述控制器(8)包括微处理器ARM10、固态继电器SSR、步进电机驱动芯片L298N，由ARM10发出指令给SSR控制电磁铁(10)的得失电，由ARM10发出指令经L298N驱动步进电机(13)运动。
CN201710561645.6A 2017-07-11 2017-07-11 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置 Pending CN107121394A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710561645.6A CN107121394A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710561645.6A CN107121394A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107121394A true CN107121394A (zh) 2017-09-01

Family

ID=59731018

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710561645.6A Pending CN107121394A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107121394A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109342404A (zh) * 2018-12-24 2019-02-15 江西农业大学 基于荧光与拉曼光谱的禽肉中兽药残留检测装置
CN110470643A (zh) * 2018-05-09 2019-11-19 江西农业大学 禽肉中激素残留的拉曼光谱检测装置

Citations (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN200972457Y (zh) * 2006-09-28 2007-11-07 朱安生 一种紫外线透过率测试仪
AU2008100408A4 (en) * 2007-02-26 2008-06-05 Dox-Al Australia Pty Ltd A Feed, Additive and Method of Identifying Same
CN201156043Y (zh) * 2008-02-26 2008-11-26 浙江大学 食品综合品质无损检测装置
US20090189054A1 (en) * 2008-01-30 2009-07-30 Infineon Technologies Ag System and method including a prealigner
CN101762706A (zh) * 2010-01-05 2010-06-30 中国农业大学 一种检测对人体有害的小分子物质残留的方法及其专用试剂盒
US20120282636A1 (en) * 2011-05-04 2012-11-08 Pop Test, Llc Diagnostic Device
CN203053867U (zh) * 2013-01-18 2013-07-10 中国科学院生态环境研究中心 荧光光谱-时间分辨荧光同时检测光纤光谱仪
CN103274089A (zh) * 2013-06-26 2013-09-04 苏州市金翔钛设备有限公司 一种自动封口机
CN103424387A (zh) * 2013-06-20 2013-12-04 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 一种农药残留物荧光光谱检测装置
CN103913435A (zh) * 2014-04-24 2014-07-09 江西农业大学 一种基于多源信息融合的潲水油快速检测方法及装置
CN104374717A (zh) * 2014-08-18 2015-02-25 浙江工商大学 一种雪花牛肉检测系统和方法
CN104458594A (zh) * 2014-12-16 2015-03-25 中国农业大学 一种生鲜肉品质参数多点同时检测的系统及方法
CN104931470A (zh) * 2015-06-02 2015-09-23 江苏大学 一种基于荧光高光谱技术的农药残留检测装置及检测方法
CN105004673A (zh) * 2015-08-24 2015-10-28 北京雪迪龙科技股份有限公司 一种红外光谱采样平台和红外光谱检测系统
CN106932224A (zh) * 2017-01-18 2017-07-07 苏州睿达矩自动化设备有限公司 一种具有换管机构的水样采集装置
CN206862873U (zh) * 2017-07-11 2018-01-09 江西农业大学 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置

Patent Citations (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN200972457Y (zh) * 2006-09-28 2007-11-07 朱安生 一种紫外线透过率测试仪
AU2008100408A4 (en) * 2007-02-26 2008-06-05 Dox-Al Australia Pty Ltd A Feed, Additive and Method of Identifying Same
US20090189054A1 (en) * 2008-01-30 2009-07-30 Infineon Technologies Ag System and method including a prealigner
CN201156043Y (zh) * 2008-02-26 2008-11-26 浙江大学 食品综合品质无损检测装置
CN101762706A (zh) * 2010-01-05 2010-06-30 中国农业大学 一种检测对人体有害的小分子物质残留的方法及其专用试剂盒
US20120282636A1 (en) * 2011-05-04 2012-11-08 Pop Test, Llc Diagnostic Device
CN203053867U (zh) * 2013-01-18 2013-07-10 中国科学院生态环境研究中心 荧光光谱-时间分辨荧光同时检测光纤光谱仪
CN103424387A (zh) * 2013-06-20 2013-12-04 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 一种农药残留物荧光光谱检测装置
CN103274089A (zh) * 2013-06-26 2013-09-04 苏州市金翔钛设备有限公司 一种自动封口机
CN103913435A (zh) * 2014-04-24 2014-07-09 江西农业大学 一种基于多源信息融合的潲水油快速检测方法及装置
CN104374717A (zh) * 2014-08-18 2015-02-25 浙江工商大学 一种雪花牛肉检测系统和方法
CN104458594A (zh) * 2014-12-16 2015-03-25 中国农业大学 一种生鲜肉品质参数多点同时检测的系统及方法
CN104931470A (zh) * 2015-06-02 2015-09-23 江苏大学 一种基于荧光高光谱技术的农药残留检测装置及检测方法
CN105004673A (zh) * 2015-08-24 2015-10-28 北京雪迪龙科技股份有限公司 一种红外光谱采样平台和红外光谱检测系统
CN106932224A (zh) * 2017-01-18 2017-07-07 苏州睿达矩自动化设备有限公司 一种具有换管机构的水样采集装置
CN206862873U (zh) * 2017-07-11 2018-01-09 江西农业大学 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GERBER P J 等: "Environmental impacts of beef production: Review of challenges and perspectives for durability" *
NARSAIAH K 等: "Optical biosensors for food quality and safety assurance—a review" *
徐将 等: "荧光法检测鸭肉中新霉素残留的研究" *
徐将: "基于荧光分析法的鸭肉中氨基糖苷类抗生素残留检测方法研究" *
李政轩 等: "禽肉中兽药残留检测技术研究进展" *
肖海斌: "基于荧光光谱技术的鸭肉中农药残留检测方法研究" *
许慧娟: "基于CCD的农药残留荧光光纤检测系统" *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110470643A (zh) * 2018-05-09 2019-11-19 江西农业大学 禽肉中激素残留的拉曼光谱检测装置
CN109342404A (zh) * 2018-12-24 2019-02-15 江西农业大学 基于荧光与拉曼光谱的禽肉中兽药残留检测装置

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101975908B (zh) 一种连接器电气性能测试治具
CN107121394A (zh) 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置
CN107850637A (zh) 一种电子产品测试治具
CN206862873U (zh) 禽肉中兽药残留的荧光光谱检测装置
CN105486660A (zh) 利用近红外光谱在线检测实木板材性能的装置和方法
CN110196027A (zh) 一种电缆绝缘层厚度测量装置
CN106877817B (zh) 太阳能组件功率测试设备
CN110488141A (zh) 变压器测试装置
CN208239300U (zh) 禽肉中激素残留的拉曼光谱检测装置
KR101539538B1 (ko) 원자로 상부헤드의 관통관 검사 장치
CN205620089U (zh) 一种玻璃防水性测试装置
CN209287756U (zh) 一种用于精密零件的自动测量装置
CN209069863U (zh) 一种活塞喉口电涡流探伤设备
CN207779448U (zh) 马达定子线头品质检测装置
CN107356611A (zh) 一种全方向非接触的内螺纹表面质量检测装置
CN104502828B (zh) 一种倒装led芯片在线检测方法
WO2016155088A1 (zh) 一种立式缸套活塞环摩擦磨损试验装置
CN211740276U (zh) 一种手机屏检测装置
CN109916554A (zh) 一种手持式压力传感性能检测设备
CN201852903U (zh) 一种连接器电气性能测试治具
CN110470643A (zh) 禽肉中激素残留的拉曼光谱检测装置
CN108152618A (zh) 一种电气安全检测设备
CN109959879A (zh) Led灯管自动检测装置
CN209167110U (zh) 一种基于高光谱成像技术的肉品无损检测装置
CN105181663B (zh) 基于量子点荧光标记的便携式生化快速检测系统

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination