CN107114594A - 一种含益生菌的雏鸡保健剂及生产方法 - Google Patents

一种含益生菌的雏鸡保健剂及生产方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种含益生菌的雏鸡保健剂及生产方法：由以下益生菌组份和重量百分数量组成：乳杆菌类：嗜酸乳杆菌LH1F 25~35干酪乳杆菌LC2W 15~25、纤维二糖乳杆菌FHHMB126 10~20；芽孢杆菌类：蜡样芽孢杆菌XHJ‑2‑6 10~20、地衣芽孢杆菌D1 5~15；酵母菌类：产朊假丝酵母BKM‑Y74 5~15；活菌数≥80亿／克。生产步骤为益生菌种子活化；一级益生菌种子培养；二级益生菌种子培养；100升体系培养；包被；干燥。本复合益生菌可促进鸡对饲料的消化吸收，改善鸡的粪便排泄，减少有害气体对动物和环境的毒害；直接投喂到料槽供动物食用或添加到全价料中混合均匀使用；本品经包被和干燥处理，耐胃酸和肠液能力强，有效提高了进入肠道定植的活菌数量，保存期常温在一年以上。

Description

一种含益生菌的雏鸡保健剂及生产方法
技术领域
本发明属于动物保健用品，具体就是一种雏鸡使用的含益生菌的雏鸡保健剂。
背景技术
益生菌(Probiotics)是一种可通过改变肠道菌群平衡而对动物施加有利影响的活微生物饲料添加剂，其产品称为微生态制剂，是根据微生态学基本原理研制，用于调节机体的微生态环境。
益生菌的作用特点是形成生物保护膜防止致病菌入侵；产生乳酸或醋酸、过氧化氢、细菌素和类似抗菌素的物质，并以此来抑制病原菌的生长；调整宿主免疫反应；改善消化道细菌代谢并降低粪中有害酶的活性；减少细菌易位的发生率等，因此益生菌具有加强肠道微生物区系的屏障功能或增进非特异性免疫功能，调节特异性免疫功能，增强抗病力和体质，防止病菌感染，提高饲料利用率和动物生长率的功能。目前，益生菌已广泛应用于婴儿奶粉、儿童食品、果汁饮料和谷类等食品中，医药以及畜牧水产业，创造了巨大的价值；而针对禽类生长特点选取哪些种类益生菌、它们的比例，以及制备与包被技术成为研究热点。
发明内容
本发明的目的是根据雏鸡的生长发育特点，提供一种配比合科学、维持和促进雏鸡消化道内稳态，利于雏鸡的生长发育、提高的雏鸡的免疫能力的含益生菌的雏鸡保健剂及生产方法。
本发明的技术方案是以下述方式实现的：
一种含益生菌的雏鸡保健剂：由以下益生菌组份和重量百分数量组成：
乳杆菌类：嗜酸乳杆菌LH1F 25～35干酪乳杆菌LC2W 15～25、纤维二糖乳杆菌FHHMB126 10～20；
芽孢杆菌类：蜡样芽孢杆菌XHJ-2-6 10～20、地衣芽孢杆菌D1 5～15；
酵母菌类：产朊假丝酵母BKM-Y74 5～15；
活菌数≥80亿/克。
此菌种组合及数量配比为根据雏鸡消化道内环境特点，为维持和促进消化道内稳态，经过实验室实验、中试及万只鸡田间实验获得，效果较理想。本发明人发现，如随意改变菌种或配比会给鸡生产产生严重的后果，如提高芽孢杆菌数量至40％，1日龄雏鸡连续服用3天就会导致腹泻，临床表现为下痢，抗生素治疗效果不佳，其原因主要是雏鸡肠道芽孢杆菌过高会引起菌群紊乱，消化能力降低，从而引起腹泻；如降低嗜酸乳杆菌LH1F的含量至10％，则益生菌制剂的效果明显降低，不能为雏鸡尤其是小鸡阶段提供优势菌群，不能起到促生长和预防疾病的作用。
上述雏鸡使用的含益生菌的雏鸡保健剂的生产方法，包括以下步骤：
A、分别取嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌及酵母菌种子；
B、分别将上述益生菌种子活化；
冷冻益生菌种子活化培养参数：乳杆菌类选用MRS肉汤培养基100mL，PH值调至6.0，37℃厌氧培养乳酸菌16～20小时，芽孢杆菌选用MYP肉汤培养基100m L，PH值调至7.0～7.2，37℃厌氧培养芽孢杆菌16～20小时，酵母菌选用马铃薯葡萄糖培养基100m L，37℃培养酵母菌16～20小时。
C、将活化的益生菌种子培养；
将活化的益生菌进行种子培养，种子培养参数：乳酸菌选用MRS肉汤培养基1L，PH值调至6.0，37℃厌氧培养乳酸菌16～20小时，芽孢杆菌选用MYP肉汤培养基1L，PH值调至7.0～7.2，37℃厌氧培养芽孢杆菌16～20小时，酵母菌选用马铃薯葡萄糖培养基1L，37℃培养酵母菌16～20小时。
D、分别进行100升体系培养；
二级液体扩大培养后，将芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌分别再进行100升体系培养，培养参数：乳酸菌选用MRS肉汤培养基100L，PH值调至6.0，37℃厌氧培养乳酸菌12～16小时，芽孢杆菌选用MYP肉汤培养基1L，PH值调至7.0～7.2，37℃厌氧培养芽孢杆菌12～16小时，酵母菌选用马铃薯葡萄糖培养基1L，37℃培养酵母菌20小时12～16小时。
E、将培养好的益生菌混合；
100升体系扩大培养后，将芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌按以下百分比配比混合：乳酸菌65％，芽孢杆菌25％，酵母菌10％；具体为乳酸菌包括嗜酸乳杆菌30％、干酪乳杆菌20％、纤维二糖乳杆菌15％，芽孢杆菌包括蜡样芽孢杆菌15％、地衣芽孢杆菌10％。
F、将D步骤中按百分比配制的混合益生菌包被；
将1.5％海藻酸钠水溶液与混合益生菌液按体积比为1:5的均匀混合得海藻酸钠菌液混合液：
用玻璃注射器将海藻酸钠菌液混合液注射入1.5％CaCl2溶液中,形成海藻酸钙微球,去掉上清液,分别用0.1％2-环已胺基乙磺酸,1.1％CaCl2溶液洗涤去除未包被的细菌,去掉上清液，剩余混合物再与0.1％壳聚糖溶液按1:5体积比比例充分混合，形成的微囊再次用0.1％2-环已胺基乙磺酸,1.1％CaCl2,0.85％NaCl溶液洗涤再次去除未包被的细菌。
G、将包被好的益生菌干燥。
将包被好的益生菌干燥是指：喷雾干燥，控制进风温度为140-160℃，排风温度65-70℃，得到益生菌微囊。
通过上述方法制得的益生菌微囊制剂是粉剂。由于包被过程，含有微量壳聚糖，活菌数≥80亿/克。
本发明的积极效果是：
本发明制得的益生菌微囊制剂，含有芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌及壳聚糖，各组分按比例配合，好氧型和厌氧型并存，性质稳定，功能广泛。具有如下优点：
1、酵母菌制造厌氧环境：酵母菌作为好氧菌，在进入动物肠道后消耗氧气，制造厌氧环境，促进厌氧微生物(肠道有益微生物)生长发育，抑制好氧微生物(大肠杆菌等有害菌)；提供优势微生物营养：本发明提供的禽用益生菌制剂含有丰富的有益细菌如芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌，以及细菌的有益代谢产物如B族维生素、生物小肽、未知促长因子、壳聚糖、多糖、酵母细胞壁等营养。这些有益物质和活菌能够提高雏鸡存活率，促进免疫系统发育和成熟，促进肠道有益菌群的定植和繁殖、从而加快机体生理代谢、促进生长、增强抗病能力、提高饲料利用率和鸡的生产性能。纯天然发酵而成，无毒无残留，对环境无不良影响，可作为动物保健类制剂，促生长和预防疾病。
2、本发明提供的复合益生菌可促进鸡对饲料的消化吸收，改善鸡的粪便排泄，减少有害气体对动物和环境的毒害。
3、使用方法简便易行：直接投喂到料槽供动物食用或添加到全价料中混合均匀使用。
4、本品经包被和干燥处理，耐胃酸和肠液能力强，有效提高了进入肠道定植的活菌数量，保存期较长，常温在一年以上。
具体实施方式：
下面结实施例对本发明作进一步说明：
实施一
1、取益生菌种子：嗜酸乳杆菌，干酪乳杆菌，纤维二糖乳杆菌，蜡样芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，酵母菌。
2、生产工艺
a益生菌种子活化
b一级益生菌种子培养
c二级益生菌种子培养
d 100升体系培养
e包被
f品质检验
g干燥
3、培养方法
将保存的各菌种先进行一级液体扩大培养及二级液体扩大培养后，将芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌分别再进行100升体系培养乳酸菌选用MRS肉汤培养基，芽孢杆菌选用MYP肉汤培养基，酵母菌选用马铃薯葡萄糖培养基；100升体系扩大培养后，将芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌按以下重量百分比配比混合：乳酸菌65％，芽孢杆菌25％，酵母菌10％。具体各菌百分数量嗜酸乳杆菌30、干酪乳杆菌20、纤维二糖乳杆菌15、蜡样芽孢杆菌15、地衣芽孢杆菌10及酵母菌10。
MRS肉汤增菌培养(1000ml体系)：蛋白胨10克，酵母浸膏5克，牛肉膏10克，葡萄糖20克，醋酸钠5克，磷酸氢二钾2克，枸橼酸三氨2克，硫酸锰0.5克，硫酸镁0.2克，加双蒸水溶解至1000ml，PH值调至6.0，37℃厌氧培养乳酸菌18小时。
MYP肉汤增菌培养(1000ml体系)：蛋白胨10克，牛肉膏1克，氯化钠10克，D-甘露醇10克，酚红0.025克，卵黄液(20％)100ml，多粘菌素100 000IU，加双蒸水溶解至1000ml，PH值调至7.0～7.2，37℃厌氧培养芽孢杆菌20小时。
马铃薯葡萄糖培养(1000ml体系)：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1000ml。先将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min。用纱布滤去马铃薯残渣，保留马铃薯滤液，加入葡萄糖，溶解后，加水定容至1000ml。37℃培养酵母菌20小时。
4、包被技术：
将1.5％海藻酸钠与培养好的菌液按1:5体积比均匀混合，用带4号针头玻璃注射器将海藻酸钠菌液混合液注射入1.5％CaCl2溶液中,形成海藻酸钙微球,去掉上清液,分别用0.1％2-环已胺基乙磺酸、1.1％CaCl2()溶液洗涤去除未包被的细菌,去掉上清液。再与0.1％壳聚糖溶液充分混合,形成的微囊再次用0.1％2-环已胺基乙磺酸,1.1％CaCl2,0.85％NaCl溶液洗涤去除未包被的细菌，去掉上清液。
5、干燥
采用喷雾干燥，控制进风温度为140-160℃，排风温度65-70℃，得到益生菌微囊。
通过上述方法制得的益生菌微囊制剂是粉剂。由于包被过程，含有微量壳聚糖。通过上述方法制备的复合益生菌制剂活菌数≥80亿/克。
本发明制得的含益生菌的雏鸡保健剂在实际雏鸡应用后，血液中T、B细胞数量，IgG、IgM、IgA含量；胸腺、法氏囊和脾脏T细胞，IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量均较未饲喂益生菌的对照雏鸡不同程度增加，其中血清IgM、IgA含量和免疫器官IgM、IgA抗体生成细胞数量于饲喂后7天达到高峰，血清IgG含量和免疫器官IgG抗体生成细胞数量于饲喂后10天达到高峰见表1-表10。表明雏鸡饲喂益生菌后，其外周血液和免疫器官体液免疫和细胞免疫均增强。
表1雏鸡应用益生菌后外周血液B细胞数量变化
Table 1 Change of number of B cells in peripheral blood ofprobiotical chicks(％)
注：字母不同者表示差异显著，大写字母代表p<0.01，小写字母代表p<0.05，无标记或字母相同者表示不显著p>0.05。
表2雏鸡应用益生菌后血清IgG、IgM、IgA含量的变化
Table 2 Change of the content of IgS in serum of probiotical chicks(单位Unit：492nm OD)
表3雏鸡应用益生菌后外周血液T细胞数量变化
Table 3 Change of number of T cells in peripheral blood ofprobiotical chicks(％)
雏鸡应用益生菌后4～10天，其外周血液B细胞数量较相应对照雏鸡明显增加(p<0.05或p<0.01)(表1)。雏鸡应用益生菌后，其血液IgG、IgM、IgA含量均不同程度高于对照雏鸡，其中益生菌组IgG含量较对照雏鸡于7～18天差异明显(p<0.05或p<0.01)；IgM、IgA含量于4～10天差异明显(p<0.05或p<0.01)(表2)。雏鸡应用益生菌后，其血液T细胞数量均不同程度高于对照雏鸡，于4～10天差异明显(p<0.05或p<0.01)(表3)。
表4雏鸡应用益生菌后法氏囊IgG、IgM、IgA生成细胞数量变化
Table 4 Change of number of IgS cells in bursa of Fabricius ofprobiotical chicks(单位Unit：103/mm2)
表5雏鸡应用益生菌后脾脏红髓IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量变化
Table 5 Change of number of IgG、IgM、IgA antibody-producing cells inred pulp of spleen of probiotical chicks(单位Unit：103/mm2)
雏鸡应用益生菌后，其法氏囊淋巴滤泡皮质和髓质IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量均不同程度高于对照雏鸡，其中IgG于7～18天差异明显(p<0.05或p<0.01)，IgM于4～10天差异明显(p<0.05或p<0.01)，皮质和髓质IgA分别于7～10和7天差异明显(p<0.05或p<0.01)(表4)。雏鸡应用益生菌后，其脾脏红髓IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量均不同程度高于对照雏鸡，其中益生菌Ⅰ组IgG抗体生成细胞数量较对照组于7～18天差异明显(p<0.05或p<0.01)；IgM、IgA抗体生成细胞数量于4～10天差异明显(p<0.05或p<0.01)；益生菌Ⅱ组IgG抗体生成细胞数量于第10天较对照组差异显著(p<0.05)，IgM、IgA抗体生成细胞数量于第7天较对照雏鸡明显增加(p<0.05)(表5)。
表6雏鸡应用益生菌后脾脏动脉周围鞘IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量变化
Table 6 Change of number of IgS producing cells in PLS of spleen ofprobiotical chicks(单位Unit：103/mm2)
注PLS：为periarterial lymphatic sheath的缩写,表示动脉周围淋巴鞘
表7雏鸡应用益生菌后脾脏淋巴小结IgG、IgM、IgA生成细胞数量变化
Table 7 Change of the number of IgS producing cells in lympoid noduleof spleen of probiotical chicks(单位Unit：103/mm2)
雏鸡应用益生菌后，其脾脏动脉周围鞘IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量均不同程度高于对照雏鸡(表6)。雏鸡应用益生菌后，其脾脏淋巴小结IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量均不同程度高于对照雏鸡(表7)。
表8雏鸡应用益生菌后胸腺T细胞百分数变化
Table 8 Change of percentage of T cells in thymus of probioticalchicks(％)
表9雏鸡应用益生菌后胸腺T细胞数量变化
Table 9 Change of number of T cells in thymus of the probioticalchicks(单位Unit：103/mm2)
雏鸡应用益生菌后18天内，其胸腺T细胞百分数均不同程度高于对照雏鸡，其中4～10天差异明显(p<0.05或p<0.01)(表8)。雏鸡应用益生菌后，其胸腺皮质和髓质T细胞数量均不同程度高于对照雏鸡，于4～10天差异明显(p<0.05或p<0.01)表9表明益生菌促进雏鸡中枢免疫器官T淋巴细胞的发育，说明益生菌有调节免疫功能的作用。

Claims (5)

1.一种含益生菌的雏鸡保健剂：由以下益生菌组份和重量百分数量组成： 乳杆菌类：嗜酸乳杆菌LH1F 25~35干酪乳杆菌LC2W 15~25、纤维二糖乳杆菌FHHMB126 10~20；
芽孢杆菌类：蜡样芽孢杆菌XHJ-2-6 10~20、地衣芽孢杆菌D1 5~15；
酵母菌类：产朊假丝酵母BKM-Y74 5~15；
活菌数≥80亿／克。
2.一种含益生菌的雏鸡保健剂的生产方法，包括以下步骤：
A、分别取嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 纤维二糖乳杆菌、蜡样芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌及酵母菌种子；
B、分别将上述益生菌种子活化
冷冻益生菌种子活化培养参数：乳杆菌类选用MRS肉汤培养基100mL，PH值调至6.0，37℃厌氧培养乳酸菌16~20小时，芽孢杆菌选用MYP肉汤培养基100m L，PH值调至7.0~7.2，37℃厌氧培养芽孢杆菌16~20小时，酵母菌选用马铃薯葡萄糖培养基100m L，37℃培养酵母菌16~20小时；
C、将活化的益生菌种子培养
将活化的益生菌进行种子培养，种子培养参数：乳酸菌选用MRS肉汤培养基1L，PH值调至6.0，37℃厌氧培养乳酸菌16~20小时，芽孢杆菌选用MYP肉汤培养基1L，PH值调至7.0~7.2，37℃厌氧培养芽孢杆菌16~20小时，酵母菌选用马铃薯葡萄糖培养基1L，37℃培养酵母菌16~20小时；
D、分别进行100升体系培养
二级液体扩大培养后，将芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌分别再进行100升体系培养，培养参数：乳酸菌选用MRS肉汤培养基100L，PH值调至6.0，37℃厌氧培养乳酸菌12~16小时，芽孢杆菌选用MYP肉汤培养基1L，PH值调至7.0~7.2，37℃厌氧培养芽孢杆菌12~16小时，酵母菌选用马铃薯葡萄糖培养基1L，37℃培养酵母菌20小时 12~16小时；
E、将培养好的益生菌混合
100升体系扩大培养后，将芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌按以下百分比配比混合：乳酸菌65%，芽孢杆菌25%，酵母菌10%；具体为乳酸菌包括嗜酸乳杆菌30%、干酪乳杆菌20%、 纤维二糖乳杆菌15%，芽孢杆菌包括蜡样芽孢杆菌15%、 地衣芽孢杆菌10%；
F、将D步骤中按百分比配制的混合益生菌包被
将1.5% 海藻酸钠水溶液与混合益生菌液按体积比为1:5的均匀混合得海藻酸钠菌液混合液：
将海藻酸钠菌液混合液注射入1.5% CaCl2 溶液中, 形成海藻酸钙微球, 去掉上清液,分别用0.1%2-环已胺基乙磺酸 , 1.1%CaCl2 溶液洗涤去除未包被的细菌, 去掉上清液，剩余混合物再与0.1% 壳聚糖溶液按体积比1:5比例充分混合， 形成的微囊再次用0.1% 2-环已胺基乙磺酸, 1.1% CaCl2, 0.85% NaCl 溶液洗涤再次去除未包被的细菌；
G、将包被好的益生菌干燥
将包被好的益生菌干燥是指：喷雾干燥，控制进风温度为140-160℃，排风温度65-70℃，得到益生菌微囊 ，活菌数≥80亿/克。
3.根据权利要求2所述的一种含益生菌的雏鸡保健剂的生产方法，其特征在于：1000mlMRS肉汤增菌培养体系： 蛋白胨 10克，酵母浸膏 5克，牛肉膏 10克，葡萄糖 20克，醋酸钠5克，磷酸氢二钾2克， 枸橼酸三氨2克，硫酸锰 0.5克，硫酸镁 0.2克，加双蒸水溶解至1000ml，PH值调至6.0，37℃厌氧培养乳酸菌18小时。
4.根据权利要求3所述的一种含益生菌的雏鸡保健剂的生产方法，其特征在于：1000mlMYP肉汤增菌培养体系：蛋白胨 10克，牛肉膏 1克，氯化钠10克，D-甘露醇10克，酚红 0.025克，卵黄液（20%）100ml，多粘菌素100 000 IU，加双蒸水溶解至1000ml，PH值调至7.0~7.2，37℃厌氧培养芽孢杆菌20小时。
5.根据权利要求3所述的一种含益生菌的雏鸡保健剂的生产方法，其特征在于：1000ml马铃薯葡萄糖培养体系：去皮马铃薯 200克，葡萄糖 20克，蒸馏水 1000ml；先将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min；用纱布滤去马铃薯残渣，保留马铃薯滤液，加入葡萄糖，溶解后，加水定容至1000ml；37℃培养酵母菌20小时。
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CN112831540A (zh) * 2021-03-23 2021-05-25 贝因美（杭州）食品研究院有限公司 一种奶粉加工中耐热地衣芽孢杆菌的特异培养基及其应用

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CN101199558A (zh) * 2006-12-15 2008-06-18 河南农业大学 一种禽用复合益生菌制剂及其制备方法

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焦喜兰等: "益生素对肉鸡生长性能、肠道菌群和部分免疫性能的影响", 《饲料博览》 *

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