CN107106495A - 缓释包封的纳米粒子 - Google Patents

缓释包封的纳米粒子 Download PDF

Info

Publication number
CN107106495A
CN107106495A CN201580065153.7A CN201580065153A CN107106495A CN 107106495 A CN107106495 A CN 107106495A CN 201580065153 A CN201580065153 A CN 201580065153A CN 107106495 A CN107106495 A CN 107106495A
Authority
CN
China
Prior art keywords
particulate
particle
nano
core
optionally
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201580065153.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107106495B (zh
Inventor
P·威廉姆斯
R·格罗夫斯
D·帕尔默
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mida Technology Pharmaceutical (welsh) Ltd
Midatech Ltd
Original Assignee
Mida Technology Pharmaceutical (welsh) Ltd
Midatech Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mida Technology Pharmaceutical (welsh) Ltd, Midatech Ltd filed Critical Mida Technology Pharmaceutical (welsh) Ltd
Publication of CN107106495A publication Critical patent/CN107106495A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107106495B publication Critical patent/CN107106495B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5115—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/29—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6923—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being an inorganic particle, e.g. ceramic particles, silica particles, ferrite or synsorb
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A61K9/1647—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2004/00—Particle morphology
    • C01P2004/01—Particle morphology depicted by an image
    • C01P2004/03—Particle morphology depicted by an image obtained by SEM
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2004/00—Particle morphology
    • C01P2004/60—Particles characterised by their size
    • C01P2004/61—Micrometer sized, i.e. from 1-100 micrometer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
    • C01P2004/00—Particle morphology
    • C01P2004/60—Particles characterised by their size
    • C01P2004/64—Nanometer sized, i.e. from 1-100 nanometer

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Ceramic Engineering (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明提供一种微粒，其包括至少一种生物相容性聚合物，所述微粒包封至少一种纳米粒子，所述纳米粒子包括：(i)核，其包括金属和/或半导体；和(ii)冠，其包括共价连接至所述核的多个配体，其中所述配体包括至少一种碳水化合物和/或谷胱甘肽。所述纳米粒子可另外包括生物活性剂或可检测的标记物，所述可检测的标记物共价连接至或非共价结合至所述冠和/或所述核。还公开了包含所述微粒的药物组合物，用于其生产的方法和所述微粒在治疗方法中的用途。

Description

缓释包封的纳米粒子
发明领域
本发明涉及包封在聚合物微粒中的纳米粒子，尤其涉及在医药中的用途，并包括用于病症的治疗的方法。还公开了药物组合物、用于所述微粒的生产的方法和它们的应用的方法。
发明背景
本发明涉及组合物和产品，以及制备和施用这类组合物和产品的方法，包括用于哺乳动物且尤其是人的治疗。
药物递送提出了若干重大的挑战，尤其是关于作用的部位和持续时间。在治疗某些肿瘤的情况下，例如，仍然需要能够将抗癌药物靶向到肿瘤部位的递送系统，并且其能够在延长的时期内理想地维持有效的药物浓度，同时最小化频繁地重复施用药物的需要。
WO2012/042273和WO2012/042274描述了用于制备固体珠粒的仪器和方法，所述固体珠粒包封生物活性剂，并且其适合用于缓释中，例如，通过积存注射。
WO2013/042125描述了用于保护和控制疏水性或亲水性的活性剂从具有相反特性的稳定的纳米粒子的释放的双纳米包封物。
WO2011/154711描述了糖化的金纳米粒子，其充当用于递送肽类诸如胰岛素的载体。
WO 2011/156711和WO2012/170828描述了治疗的或生物作用的膜递送系统，在所述膜递送系统中，具有与其结合或缔合的活性物的纳米粒子被引入聚合物膜基质中。
WO2014/125256描述了用于将生物活性剂靶向到中枢神经系统(CNS)的纳米粒子递送系统，例如，用于治疗CNS病症。
对于进一步的纳米粒子递送系统、以及对于在适当的位置和/或适当的持续时间向受试者递送这类生物活性剂的方法仍然未得到满足。本发明解决了这些和其它需要。
发明概述
广泛地，本发明涉及包封在微米级珠粒中的纳米粒子-药物缀合物(conjugate)。本发明人惊奇地发现，可以以高包埋率将金属-(例如金-)核纳米粒子包封在生物相容性聚合物微粒中。
因此，在第一方面，本发明提供微粒，其包含至少一种生物相容性聚合物，所述微粒包封至少一种纳米粒子，所述纳米粒子包括：
(i)核，其包括金属和/或半导体；
(ii)冠，其包括共价连接至所述核的多个配体，其中所述配体包括至少一种碳水化合物和/或谷胱甘肽。
根据本发明的这一方面和其他方面，所述至少一种纳米粒子优选地进一步包括至少一种生物活性剂(例如，作为“有效载荷”的药物活性物)和/或可检测标记物(例如荧光团)。然而，已经发现某些纳米粒子即使在不存在另外的活性剂的情况下也表现出生物活性。因此，在本文中具体考虑，纳米粒子不需要一定具有任何添加的活性剂。当纳米粒子确实包括所述生物活性剂时，该活性剂通常与纳米粒子的核和/或冠相缔合。适宜地，该缔合可以是共价连接的形式，例如通过连接到所述纳米粒子核或连接到一个或多个纳米粒子配体的连接体基团。例如，烷基和/或二醇连接体可以将活性剂诸如化学治疗剂连接到纳米粒子核。在某些情况下，活性剂可以非共价结合至所述冠和/或所述核。例如，活性剂可包括肽或多肽，所述肽或多肽非共价(例如通过静电相互作用或范德华力或其他方式)结合至构成所述纳米粒子的冠的配体。
在某些情况下，所述至少一种生物活性剂可包括化学治疗剂和/或可通过连接体被共价连接至所述核。
在某些情况下，所述至少一种生物活性剂可通过连接体被共价连接至所述核，所述连接体包括C2-C15烷基和/或C2-C15二醇。
在某些情况下，所述生物活性剂包括化学治疗剂或“抗-癌”剂，所述生物活性剂可优选地选自由以下组成的组：替莫唑胺(temozolomide)、伊立替康(irinotecan)、氯毒素(chlorotoxin)、卡莫司汀(carmustine)、铂(IV)、铂(II)、喜树碱、阿霉素(doxorubicin)、多西他赛(docetaxel)、美登素、美登木素生物碱(Maytansinoids)、一甲基澳瑞他汀E(monomethyl auristatin E,MMAE)和组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂，诸如帕比司他(Panobinostat)、伏立诺他(Vorinostat)、罗醚酯肽(Romidepsin)和西达本胺(Chidamide)。
在某些情况下，所述纳米粒子进一步包括细胞、组织或肿瘤靶向部分。由于由纳米粒子呈递的多配体的有利的亲合力效应，已经发现多个靶向部分能够将本文所述的纳米粒子靶向某些目标部位，例如肿瘤或病变的组织部位、器官类型或特定细胞类型。在某些情况下，所述靶向部分可选自由以下组成的组：叶酸、乳糖、白蛋白、谷氨酰胺、结合配体的细胞表面受体(例如EGFR配体，诸如吉非替尼(Gefitinib))和抗体，尤其是选择性地结合肿瘤相关抗原的抗体。
在一些情况下，所述至少一种生物活性剂包括至少一种肽或多肽，所述肽或多肽非共价结合至所述冠。例如，所述肽或多肽可选自由以下组成的组：胰岛素、GLP-1、淀粉不溶素、艾塞那肽(exenatide)、奥曲肽(octreotide)、特立帕肽(teriparatide)、胰高血糖素、细胞因子和抗体。
在一些情况下，所述纳米粒子的冠包括以每纳米粒子核至少5个、至少10个、至少20个或至少50个配体。在某些情况下，所述冠可以是混合的冠。例如所述冠可包括两种或更多种不同的配体(例如，碳水化合物和非碳水化合物，诸如α-半乳糖和PEG胺；谷胱甘肽和碳水化合物；两种不同的糖类诸如葡萄糖和半乳糖或N-乙酰基葡萄糖胺和乳糖)。第一种配体与第二种配体的比例可以在1:100至100:1的范围内，优选地在80:20至20:80的范围内，还更优选地在60:40至40:60的范围内。
在一些情况下，每纳米粒子核的所述生物活性剂的分子的数量选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29和30。
在一些情况下，所述纳米粒子的核的直径在1nm至5nm的范围内。在某些情况下，包括其配体的所述纳米粒子的直径可在2nm至50nm的范围内、或在3nm至30nm的范围内、或在4nm至20nm的范围内、或在5nm至15nm的范围内。
在一些情况下，所述纳米粒子的核包括金属，所述金属选自由以下组成的组：Au、Ag、Cu、Pt、Pd、Fe、Co、Gd、Eu和Zn，或其任何组合。在某些情况下，所述纳米粒子具有包括金原子的核或由金原子组成的核。
本发明的这一方面和其他方面的微粒通常具有超过一个，例如超过10个、超过100个、超过1,000个、超过10,000个、超过100,000个、超过106个、超过107个或超过108个包封在其中的独立的纳米粒子。
在某些情况下，所述微粒包括多个所述纳米粒子，其中在所述微粒中至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的纳米粒子具有缀合至或结合至其的至少一种生物活性剂。
在某些情况下，所述微粒包括至少两种不同种类的生物活性剂。优选地，与单独的任一种物质相比，所述至少两种不同种类的生物活性剂协同地起作用以增强或以其他方式提高生物或治疗活性。本文具体考虑的实施例是胰岛素和GLP-1、两种或更多种化学治疗剂、与抗癌药物抗性的抑制剂组合的化学治疗剂。
在某些情况下，所述至少两种不同种类的生物活性剂包括第一生物活性剂和第二生物活性剂。在一些情况下，所述第一生物活性剂被缀合或结合至第一纳米粒子，且所述至少两种不同种类的生物活性剂的第二种被缀合或结合至第二纳米粒子。所述两个或更多个纳米粒子然后可有利地存在于单个微粒内(即两个不同的纳米粒子)。可替代地或另外，所述至少一种纳米粒子可具有缀合至或结合至其的至少两种不同种类的生物活性剂(即组合有效载荷纳米粒子)。
在一些情况下，所述微粒沿其最长维度的直径在1μm至900μm、5μm至500μm、10μm至100μm或25μm至75μm的范围内。在一些情况下，所述微粒的形态是基本上球形的。不希望被任何特定理论所限，本发明人认为球形提供更大的结构抗性，例如对压差的抗性。在一个特别考虑的形式中，所述微粒是球形的并包括与化学治疗剂诸如替莫唑胺或卡莫司汀缀合的纳米粒子。这类微粒可发现用于治疗脑肿瘤，包括继发性肿瘤，其中微粒在手术切除后或手术切除时被植入，例如以预防或抑制癌症复发。由于其结构上更坚固的形状，球形微粒预计将克服在这种治疗环境中用卡莫司汀植入膜剂(GLIADEL Wafer)已经看到的缺陷。然而，其他非球形的形状在本文中具体考虑。在某些情况下，本发明的微粒可以是相对扁平的或圆盘形的，例如，微粒形态可以是透镜状的。
在某些情况下，本发明的所述微粒的表面孔隙度的特征在于<20nm、<100nm、<1μm或<10μm的平均表面孔隙大小。如在WO2012/042274(通过引用以其整体并入本文)中所述，某些工艺条件诸如第二液体的温度和/或第二液体的pH(例如pH 3至pH 9)。
根据本发明的这一方面和其他方面，所述至少一种生物相容性聚合物可以是在WO2012/042274(通过引用以其整体并入本文——具体见其第9页和第10页)中公开的任何聚合物。在某些情况下，所述聚合物可选自由以下组成的组：聚交酯(polylactide)、聚己内酯、聚酐以及乳酸和乙醇酸的共聚物(“PLGA”)。所述聚合物的平均分子量(MW)可从4kDa(kDaltons)至700kDa、优选地从4kDa至120kDa、更优选地从4kDa至15kDa。在某些情况下，聚合物端基和固有粘度可如WO2012/042274(通过引用以其整体并入本文-具体见其第9页和第10页)中所述。在某些情况下，所述聚合物包括至少一个端基或末端官能团，所述端基或末端官能团选自由以下组成的组：羧基、羟基和酯基。
不希望受任何特定理论的约束，本发明人认为纳米粒子在微粒内的包封率和/或纳米粒子从微粒中释放的速率或程度，例如，在使用中，可由于纳米粒子冠和聚合物基质之间的相互作用而受到影响(增加或减少)，例如通过选择结合至存在于构成所述纳米粒子冠的一个或多个配体上的官能团的聚合物端基而受到影响(增加或减少)。本文中考虑的这样的一个实施例是如下的微粒，其中所述至少一种生物相容性聚合物包括具有羧基端基的乳酸和乙醇酸的共聚物(“PLGA”)，且所述纳米粒子冠包括至少一个胺基。具体地，纳米粒子可包括PEG胺配体的冠和α-半乳糖配体的冠，所述PEG胺配体诸如1-氨基-17-巯基-3,6,9,12,15,-五氧杂-十七烷醇，所述α-半乳糖配体诸如2-硫代-乙基-α-D-半乳糖苷。因此，在本发明的某些情况下，所述聚合物或共聚物包括至少一个端基或末端官能团，其与所述纳米粒子的冠上存在的官能团结合。
在某些情况下，根据本发明，所述至少一种生物相容性聚合物可具有在1:1至1:0的范围内的丙交酯与乙交酯的比例(“L/G比例”)，任选地具有在70:30至90:10的范围内的丙交酯与乙交酯的比例。L/G比例被认为影响体内微粒分解的速率，并因此影响纳米粒子和/或活性物从微粒释放的持续时间。
在某些情况下，所述纳米粒子基本上均匀分布于整个微粒。例如，在某些情况下，依据每单位体积微粒的纳米粒子的数量测量的纳米粒子的密度的变化不超过平均值的50％、不超过20％或不超过10％。纳米粒子在所述微粒内的分布，例如，可由电子显微镜测定。纳米粒子可为可见的和可计数的，并且如果需要，可应用统计学分析来计算纳米粒子分布均匀性的量度。
在某些情况下，所述纳米粒子在所述微粒内的分布偏向所述微粒的表面。例如，超过50％、超过80％或超过90％的所述纳米粒子相比所述微粒的中心更接近位于所述微粒的表面。如上所述，纳米粒子在所述微粒内的分布，例如，可由电子显微镜测定。纳米粒子可为可见的和可计数的，并且如果有必要，可应用统计学分析来计算纳米粒子分布不均匀性的量度。
在某些情况下，以每重量微粒聚合物中的纳米粒子的重量％(w/w)表示的纳米粒子的平均浓度在0.01％至25％w/w的范围内，任选地在0.05％至10％w/w的范围内。
在某些情况下，当存在生物活性剂时，以每重量的微粒聚合物中的生物活性剂的重量％表示的生物活性剂的平均浓度在0.005％至20％w/w，例如，0.01％至10％w/w的范围内。
如本文所述，本发明的微粒有利地提供临床使用中的缓释。在某些情况下，在哺乳动物受试者中积存注射微粒之后，所述微粒的体内释放行为(profile)(即，纳米粒子，特别是具有药物的有效载荷的纳米粒子从微粒的释放)在1周至6个月的范围内，任选地在3周至3个月的范围内。释放行为可以根据本领域技术人员已知的体内实验技术(例如动物模型)和/或可以使用药物释放的一种或多种体外测定进行建模来确定。优选地，释放行为使得纳米粒子释放到体内(例如细胞或细胞外空间)的速率基本上比在不存在包封(例如直接注射的纳米粒子的悬浮液)的情况下纳米粒子的释放速率更慢。在优选的情况下，在本文中基本上更慢是指慢至少10倍、20倍、50倍或100倍。
在第二方面，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包含多个本发明第一方面的微粒和药学上可接受的载体或赋形剂。
在一些情况下，所述药物组合物包含抗凝结剂。所述抗凝结剂可采用施加到微粒的涂层的形式，例如，甘露醇。
在一些情况下，载体是含水的或有机的液体，诸如生物相容性油。在一些情况下，在一些情况下，药物组合物采用适于例如在使用前重构的微粒的冻干粉末形式。
在某些情况下，药物组合物可以被配制成用于通过可注射途径递送，诸如皮下或肌内积存注射，或者被配制成用于在外科手术过程中植入。
在第三方面，本发明提供本发明的第一方面的微粒或本发明的第二方面的药物组合物在医药中的用途。
在第四方面，本发明提供第一方面的微粒或第二方面的药物组合物在哺乳动物受试者中治疗癌症、内分泌病症、中枢神经系统(CNS)病症或眼部病症的方法中的用途。
在一些情况下，所述微粒包含化学治疗剂，且所述微粒或组合物用于治疗癌症，所述癌症选自由以下组成的组：脑癌，诸如成胶质细胞瘤、神经胶质瘤或星形细胞瘤；卵巢癌；肝癌和皮肤癌。在一些情况下，所述化学治疗剂选自由以下组成的组：替莫唑胺、伊立替康、氯毒素、卡莫司汀、铂(IV)、铂(II)、喜树碱、阿霉素、多西他赛、美登素、美登木素生物碱、一甲基澳瑞他汀E(MMAE)和组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂，诸如帕比司他、伏立诺他、罗醚酯肽和西达本胺。
在第五方面，本发明提供在哺乳动物受试者中治疗癌症、内分泌病症或中枢神经系统(CNS)病症或眼部病症的方法，包括向需要所述治疗的受试者施用治疗有效量的本发明的第一方面的微粒或本发明的第二方面的药物组合物。
在一些情况下，所述方法是治疗癌症的方法，所述癌症选自由以下组成的组：脑癌，任选地成胶质细胞瘤、神经胶质瘤或星形细胞瘤；卵巢癌；肝癌和皮肤癌。在一些情况下，所述化学治疗剂选自由以下组成的组：替莫唑胺、伊立替康、氯毒素、卡莫司汀、铂(IV)、铂(II)、喜树碱、阿霉素、多西他赛、美登素、美登木素生物碱、一甲基澳瑞他汀E(MMAE)和组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂，诸如帕比司他、伏立诺他、罗醚酯肽和西达本胺。
根据微粒或药物组合物在本发明的第四方面的用途或本发明的第五方面的方法，剂量的施用之间的时间间隔可为至少一周，诸如至少2周、至少3周或至少4周，并且优选地至少1月、2月、3月、4月、5月或6月。
在第六方面，本发明提供制品，其包括：
本发明的第一方面的微粒或本发明的第二方面的药物组合物；
用于容纳所述微粒或药物组合物的容器；和
插入物和/或标签。
在某些情况下，所述插入物和/或标签提供说明、剂量和/或施用信息，所述说明、剂量和/或施用信息是关于在哺乳动物受试者中所述微粒或药物组合物在癌症、内分泌病症或中枢神经系统(CNS)病症或眼部病症中的使用。
在第七方面，本发明提供用于生产本发明的第一方面的微粒的方法，所述方法包括：
提供第一液体，所述第一液体包含溶质、溶剂和旨在被包封在所述微粒内的多个纳米粒子，所述溶质包含聚合物，在所述第一液体中的聚合物的浓度为至少10％w/v，“w”为所述聚合物的重量，且“v”为所述溶剂的体积，所述纳米粒子包括：(i)核，其包括金属和/或半导体；和(ii)冠，其包括共价连接至所述核的多个配体，其中所述配体包括至少一种碳水化合物和/或谷胱甘肽；
提供液滴发生器，其包括可操作以产生液滴的压电元件，
引起所述液滴发生器形成所述第一液体的液滴；
使所述液滴通过气体，
使所述液滴与第二液体接触，以使所述溶剂离开所述液滴，从而形成固体微粒；
在所述第二液体中的所述溶剂的溶解度为至少5g溶剂/100ml第二液体，所述溶剂与第二液体是基本上可混溶的，
其中所述第二液体作为流提供，并且所述方法包括将所述液滴与第二液体流接触。
在某些情况下，所述纳米粒子提供在有机溶剂:水混合相中，任选地为DMSO:水混合相，且进一步任选地为DMSO:水比例在80:20至95:5的范围内的DMSO:水混合相中。如本文所述的生物相容性纳米粒子通常以水性悬浮液的形式提供。本发明人已经惊奇地发现在DMSO混合水相(例如90:10的DMSO:水)中制备纳米粒子(诸如金核谷胱甘肽或糖化的纳米粒子)是可能的。DMSO:水混合相提供了与微粒生产方法(例如如在WO2012/042274中所述)的一定的有利的相容性。具体地，这解决了诸如PLGA的聚合物不溶于水的问题。因此，使用在混合相中提供的高浓度纳米粒子特别适用于本发明的该方面的方法中。
在某些情况下，所述第一液体包括DMSO、聚-丙交酯-共-乙交酯共聚物(“PLGA”)和纳米粒子，所述纳米粒子如与本发明的第一方面有关所定义的。
在某些情况下，所述第二液体可如WO2012/042274(其内容通过引用明确地并入本文-参见，例如，其第13页至第15页)中所定义的。在某些情况下，所述第二液体包括水。所述第二液体可包括水-醇混合物(例如，具有在95:5至75:25的范围内的水:醇比例)。在特定情况下，所述第二液体可包括水和叔-丁醇的混合物(例如85:15的水:叔-丁醇)。
根据本发明的这一方面，所述第二液体可具有如WO2012/042274(其内容通过引用明确地并入本文)中所述的温度。在某些情况下，所述第二液体的温度可在1℃至10℃，诸如4℃至8℃的范围内。
在一些情况下，在所述第一液体中的聚合物的浓度可为至少20％w/v、至少30％w/v或至少40％w/v。
在一些情况下，本发明的这一方面的方法采用如WO2012/042274(其内容通过引用明确地并入本文-参见，例如，其第17页至第23页)中所述的设备。在一些情况下，本发明的这一方面的方法采用如WO2012/042273(其内容通过引用明确地并入本文-参见，例如，其权利要求1至权利要求47)中所述的设备。
在一些情况下，所述方法进一步包括任选在真空下，通过将所述固体微粒与第二液体分离来收集所述固体微粒。在某些情况下，收集所述微粒的步骤采用如WO2013/014466(其内容通过引用明确地并入本文-参见，例如，其权利要求1至权利要求30)中所述的珠粒收集设备。分离所述固体微粒的方法可如WO2013/014466(其内容通过引用明确地并入本文-参见，例如，其权利要求32至权利要求35)中所述。
在一些情况下，所述方法进一步包括收集所述固体微粒并将所述微粒配制或包装入药物组合物或递送形式。在某些情况下，该方式包括冷冻干燥所述微粒和/或使所述微粒经受灭菌步骤。在一些情况下，所述微粒可被配制成用于通过积存注射递送的液体。
在一些情况下，本发明的这一方面的方法进一步包括其中生产纳米粒子的先前阶段，所述先前阶段包括：
将包含谷胱甘肽和/或硫衍生化的碳水化合物(例如，连接到糖基(诸如单糖、二糖或多糖)的硫代烷基或硫代二醇连接体)的溶液与包含核形成材料(例如金盐)的溶液以及还原剂(例如硼氢化钠)合并，从而引起所述纳米粒子自组装。
在某些情况下，生产纳米粒子的所述先前阶段进一步包括将所述生物活性剂缀合或结合至所述纳米粒子。当缀合涉及将活性物与纳米粒子缀合的共价连接的连接体时，这有利地在自组装工艺过程中实现。具体地，生产纳米粒子的先前阶段可包括提供共价连接到活性剂的硫衍生化的连接体(例如硫代烷基、硫代二醇或硫代烷基聚二醇)，并合并：
包含共价连接到所述活性剂的硫衍生化的连接体的溶液；
包含谷胱甘肽和/或硫衍生化的碳水化合物的溶液；
包含核形成材料的溶液；和
还原剂。所述硫衍生化的化合物通常以氧化形式作为二硫化物被提供，其允许一旦添加还原剂就进行自组装过程。
在一些情况下，共价连接到所述活性剂的所述硫衍生化的连接体包括共价连接至所述活性剂的硫代烷基连接体和/或硫代二醇连接体。
在一些情况下，尤其当生物活性剂包括肽或多肽时，纳米粒子可以首先产生，并与包含肽或多肽的溶液以及允许非共价结合至所述纳米粒子冠的肽或多肽接触。
根据本发明的所有方面，所述微粒以及用于其生产的方法可以是无菌的。另外或可替代地，所述纳米粒子以及用于其生产的方法可以是无菌的。然而，本文特别考虑到所述纳米粒子的生产和/或所述微粒的生产包括一个或多个灭菌步骤。
在第八方面，本发明提供了当向哺乳动物受试者施用时，用于延长生物活性剂的体内半衰期的方法，所述方法包括：
提供至少一种具有与其结合或缀合的活性剂的纳米粒子，所述纳米粒子包括：(i)核，其包括金属和/或半导体；和(ii)冠，其包括共价连接至所述核的多个配体，其中所述配体包括至少一种碳水化合物和/或谷胱甘肽；和
将所述至少一种纳米粒子包封在生物相容性聚合物微粒中。在一些情况下，所述纳米粒子可如本发明的第一方面有关所定义的。在一些情况下，所述微粒可如根据本发明的第一方面所定义的。
根据本发明，尤其第四方面和第五方面，受试者可以是人、伴侣动物(例如狗或猫)、实验动物(例如小鼠、大鼠、兔、猪或非人类灵长类动物)、家畜或农畜(例如猪、牛、马或羊)。优选地，受试者是人。
本发明包括所描述的方面和优选的特征的组合，除了这种组合是明显不允许的或者被规定明确避免的。本发明的这些方面和进一步的方面和实施方案在下面进一步详细描述，并且参考所附的实施例和附图。
附图简述
图1显示纳米粒子的示意图，所述纳米粒子具有比例为1:1的α-半乳糖:PEG胺的多个配体和金核。
图2显示球形微粒的电子显微镜图像。显示的是50μm比例尺。
图3显示本发明微粒的“剖面(cut-away)”示意图。显示了包封在微粒中的纳米粒子(不按比例)。
图4显示如实施例3的试验1中所述产生的微粒的电子显微照片。比例尺显示为50μm。
图5显示382nm处的吸光度对金浓度(μg/ml)的标准曲线。
发明详述
在描述本发明时，将采用下述术语，并且这些术语旨在如下所示进行定义。
纳米粒子
如本文所用，“纳米粒子”是指具有纳米尺度的粒子，并且不旨在表示任何特别的形状限制。尤其是，“纳米粒子”包括纳米球、纳米管、纳米盒、纳米簇、纳米棒等。在某些实施方案中，本文考虑的纳米粒子和/或纳米粒子核具有总的为多面体或球形的几何形状。
包含多个含碳水化合物的配体的纳米粒子已在例如WO 2002/032404、WO 2004/108165、WO 2005/116226、WO 2006/037979、WO 2007/015105、WO 2007/122388、WO 2005/091704(其各自的全部内容通过引用明确地并入本文)中进行了描述，并且这种纳米粒子可以根据本发明发现用途。
如本文所用，“冠”是指层或涂层，其可以部分地或完全地覆盖纳米粒子核的暴露表面。冠包括多个配体，所述配体通常包括至少一个碳水化合物部分、一个表面活性剂部分和/或一个谷胱甘肽部分。因此，冠可被认为是围绕或部分围绕金属核的有机层。在某些实施方案中，冠提供和/或参与纳米粒子的核的钝化。因此，在某些情况下，冠可以包括充分完整的涂层，以基本上使半导体或含金属的核稳定。然而，本文特别考虑具有核(例如，包括由贵金属涂覆的含金属氧化物的内核)的某些纳米粒子可包括仅部分涂覆核表面的冠。在某些情况下，冠促进本发明的纳米粒子的溶解度，诸如水溶解度。
纳米粒子为小粒子，例如金属或半导体原子的簇，其可用作固定配体的基底。
优选地，纳米粒子具有平均直径在0.5与50nm之间，更优选地在0.5与10nm之间，更优选地在0.5与5nm之间，更优选地在0.5与3nm之间，还要更优选地在0.5与2.5nm之间的核。当除了核以外还考虑配体时，优选地，粒子的总平均直径在2.0与20nm之间，更优选地在3与10nm之间，并且最优选地在4与5nm之间。可使用本领域熟知的技术诸如透射电子显微镜法来测量平均直径。
核材料可以为金属或半导体(所述半导体任选地包括金属原子或为有机半导体)并且可由超过一种类型的原子形成。优选地，核材料为选自Au、Fe或Cu的金属。纳米粒子核也可由包括Au/Fe、Au/Cu、Au/Gd、Au/Fe/Cu、Au/Fe/Gd和Au/Fe/Cu/Gd的合金形成，并可用于本发明。优选的核材料为Au和Fe，最优选的材料为Au。纳米粒子的核优选地包括约100与500个之间的原子(例如金原子)以提供纳米范围内的核直径。其它特别有用的核材料掺杂有一种或多种具有NMR活性的原子，允许使用NMR在体外和体内检测纳米粒子。NMR活性原子的实施例包括Mn+2、Gd+3、Eu+2、Cu+2、V+2、Co+2、Ni+2、Fe+2、Fe+3和镧系元素+3，或在本申请其它地方描述的量子点。
包括可作为纳米尺度半导体晶体而检测的半导体化合物的纳米粒子核能够充当量子点，即它们可吸收光从而将材料中的电子激发至更高的能级，随后在该材料特有的频率下释放光子。半导体核材料的实例为硒化镉、硫化镉、碲化镉。也包括锌化合物，诸如硫化锌。
在一些实施方案中，纳米粒子或其配体包括可检测的标记物。标记物可以为纳米粒子的核或配体的元素。由于纳米粒子的该元素的固有性质，或通过与可检测的另外部分连接、缀合或缔合，该标记物可被检测。标记物的优选的实例包括为荧光基团、放射性核素、磁性标记物或染料的标记物。荧光基团包括荧光素、若丹明或四甲基若丹明、德克萨斯红(Texas-Red)、Cy3、Cy5等，并且可以通过激发荧光标记物并用拉曼散射光谱(Ramanscattering spectroscopy)检测发出的光而检测(Y.C.Cao,R.Jin,C.A.Mirkin,Science2002,297:1536-1539)。在一些情况下，可检测的标记物可包括异硫氰酸荧光素(FITC)。在某些情况下，可检测的标记物(例如FITC)可被共价连接至纳米粒子的核，例如通过连接体。
在一些实施方案中，纳米粒子可包括放射性核素，其用于使用由放射性核素发出的放射性来检测纳米粒子(例如，通过使用PET、SPECT)或用于治疗(即，用于杀伤靶细胞)。本领域常用的能够容易地加以修改而用于本发明的放射性核素的实例包括99mTc，其以多种氧化态存在，但最稳定的是TcO4-；32P或33P；57Co；59Fe；67Cu，其通常作为Cu2+盐使用；67Ga，其通常作为Ga3+盐使用，例如柠檬酸镓；68Ge；82Sr；99Mo；103Pd；111In，其通常作为In3+盐使用；125I或131I，其通常作为碘化钠使用；137Cs；153Gd；153Sm；158Au；186Re；201Tl，其通常作为Tl+盐使用，诸如氯化铊；39Y3+；71Lu3+和24Cr2+。放射性核素作为标记物和示踪剂的一般使用是本领域熟知的并且可由本领域的技术人员容易地修改而用于本发明的多个方面。放射性核素可通过以下方式最容易地使用：掺杂纳米粒子的核或包括它们而作为固定在纳米粒子上的配体的一部分而存在的标记物。
活性物
如本文所用，术语“生物活性剂”是指包括对生物系统施加作用，优选地治疗作用的药物和前体药物。本文考虑的活性剂的分类包括小分子有机化合物、肽、多肽和核酸。具体的实例包括：化学治疗剂(例如替莫唑胺、伊立替康、氯毒素、卡莫司汀、铂(IV)、铂(II)、喜树碱、阿霉素、多西他赛、美登素、美登木素生物碱、一甲基澳瑞他汀E(MMAE)和/或组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂诸如帕比司他、伏立诺他、罗醚酯肽和西达本胺)；肽或多肽(例如胰岛素、GLP-1、淀粉不溶素、艾塞那肽、奥曲肽、特立帕肽、胰高血糖素、细胞因子和/或抗体)；DNA或RNA(包括例如siRNA)。
微粒
根据本发明的微粒可以为固体珠粒的形式。如本文所用，关于微粒或珠粒，固体旨在包括凝胶。如本文所用的微粒特别包括微米尺度(通常直径高达999μm)的任何聚合物粒子或珠粒。本文考虑的微粒有利地包括通过WO 2012/042274(其全部内容通过引用明确地并入本文-参见，例如，其权利要求1至权利要求44)中描述的方法可获得的单分散聚合物珠粒。
纳米粒子包封在微粒中的方法
在某些情况下，微粒通过如WO2012/042274(其全部内容通过引用明确地并入本文-参见，例如，其权利要求1至44)中描述的Q 方法产生。
施用和治疗
可将本发明的微粒和组合物通过多种不同的途径(包括肠内或肠胃外途径)施用给患者。肠胃外施用包括通过以下途径施用：静脉内、皮肤或皮下、鼻腔、肌内、眼内、经上皮、腹膜内和局部(包括皮肤、眼、直肠、鼻腔、吸入和气溶胶)以及直肠系统途径。
施用通过例如注射、尤其是积存注射进行。
本发明的微粒可被配制成可以呈固体或液体组合物的形式的药物组合物。这种组合物将通常包括某种载体，例如固体载体或液体载体，诸如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。也可包括生理盐水溶液或二醇类，诸如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。这种组合物和制剂通常含有至少0.1wt％的化合物。
对于静脉内、皮肤或皮下注射，或在病灶部位的注射，活性成分将呈肠胃外可接受的无热源且具有合适pH、等渗性和稳定性的水溶液或液体的形式。本领域的相关技术人员完全能够使用例如化合物或其衍生物例如在生理盐水中的溶液，用甘油、液体聚乙二醇或油制备的分散体来制备合适的溶液。
除了任选地与其它活性成分组合的一种或多种化合物外，组合物可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂、等渗剂(isotonicising agent)、防腐剂或抗氧化剂或本领域技术人员熟知的其它材料。这类材料应为无毒的并且不应影响活性成分的功效。载体或其它材料的确切性质可取决于施用途径，例如肌内注射。
优选地，药物组合物以预防有效量或治疗有效量(根据具体情况，预防也可被认为是治疗)给予个体，该量足以显示出对个体的益处。通常，这将产生治疗上有用的活性，从而向个体提供益处。施用的化合物的实际量以及施用的速率和时间进程将取决于所治疗的病状的性质和严重程度。治疗处方(例如剂量决定等)在全科医生和其它医生的责任范围内并通常考虑到待治疗的病症、个体患者的病状、递送部位、施用方法和执业医师已知的其它因素。上文提到的技术和方案的实施例可见于Handbook of Pharmaceutical Additives,第2版(M.Ash和I.Ash编)，2001(Synapse Information Resources,Inc.,Endicott,New York,USA)；Remington’s Pharmaceutical Sciences,第20版,2000年出版.Lippincott,Williams&Wilkins；和Handbook of Pharmaceutical Excipients,第2版,1994。举例来说，组合物优选地以每kg体重约0.01至100mg之间的活性化合物的剂量，并且更优选地以每kg体重约0.5至10mg之间的剂量施用给患者。
下文通过实施例的方式来展示，并且不应被解释为是对权利要求范围的限制。
实施例
实施例1–纳米粒子的合成
基本上如以前所述(WO 2011/154711；和Lund等,2011,BiomaterialsVol.32pp.9776-9784，其全部内容通过引用明确地并入本文)合成具有碳水化合物配体或谷胱甘肽配体的冠的金纳米粒子。
AL/α-Gal NP
2-硫代-乙基-α-D-半乳糖苷(α-半乳糖C2SH)的制备
向半乳糖(3g，16.65mmol)在2-溴乙醇(30ml)中的悬浮液中加入酸性树脂安伯来特(Amberlite)120-H达到pH 2。在50-60℃搅拌反应16小时。过滤反应混合物并用MeOH洗涤。添加三乙胺达到pH 8。浓缩反应的粗品，并用甲苯共蒸发3次。反应混合物溶解在吡啶(75ml)和Ac2O(35ml)中，并在0℃添加催化量的DMAP并在室温下搅拌3h。混合物用AcOEt稀释并用1.H2O；2.HCl(10％)3.NaHCO3dis 4.H2O稀释。收集有机层并在无水Na2SO4上干燥。TLC(己烷:AcOEt 3:1，2次洗脱)显示主要产物(所需)和较低Rf少数。产物利用己烷:乙酸乙酯为6:1的混合物作为洗脱液通过快速色谱纯化，并得到2-溴乙基-α-半乳糖苷(2)。
将之前反应的产物2溶解在27ml的2-丁酮中。向该溶液添加催化量的四丁基碘化铵和4当量的硫代乙酸钾。在室温条件下搅拌产生的悬浮液2h。在整个该过程中，反应通过TLC(己烷-AcOEt 2:1，2次洗脱)检测起始材料的消失。混合物用20ml的AcOEt稀释并用饱和的NaCl溶液洗涤。有机相被干燥、过滤和在真空下蒸发。产物在2:1→1:1的己烷/AcOEt中纯化，以获得乙酰基硫代-α-半乳糖苷3。
将反应的新产物3溶解在2:1的二氯甲烷-甲醇混合物中。向该混合物添加1N甲醇钠(1当量)溶液并在室温下搅拌1小时。添加安伯来特IR-120H树脂以达到pH 5-6。然后过滤并浓缩产生的混合物至干以获得最终产物(α-半乳糖C2SH)。
氨基-硫醇连接体的制备。
向PPh3(3g，11.4mmol)在20ml无水THF中的溶液中添加DIAC(2.3g，11.4mmol)。允许在0℃搅拌混合物15min直到出现白色产物。向该混合物逐滴添加(添加漏斗)六甘醇(1.45mL，5.7mmol)和HSAc(610μl，8.55mmol)在无水THF(20mL)中的溶液。15min后产物开始出现，在TLC上Rf 0.2。在蒸发器中浓缩溶液。反应的粗品溶解在50ml的二氯甲烷中，并用10％的K2CO3溶液洗涤。有机相在无水Na2SO4之上干燥、过滤和真空浓缩。使用1:1的AcOEt:己烷、AcOEt和最后以4:1的DCM:MeOH作为洗脱液(eluyent)对粗品进行快速色谱，得到乙酰基-硫代-六甘醇衍生物。
将反应产物溶解在5ml的DMF和PPh3(2.25g，8.55mmol)中，添加NaN3(0.741g，11.4mmol)和BrCl3C(0.845ml，8.55mmol)，并随后在室温下搅拌溶液40min。当进行TLC(DCM:MeOH 25:1)时，产生的产物较起始产物具有较高的Rf。反应混合物用100ml的二乙醚稀释并用H2O洗涤三次。有机相在无水Na2SO4之上干燥、过滤和真空蒸发。使用洗脱液DMC/MeOH 200:1和DCM/MeOH 40:1的混合物通过快速色谱纯化产物以获得叠氮基-乙酰基硫代-六甘醇衍生物。
为了除去三苯基氧化膦，将反应产物溶解在10ml的THF中，并向该溶液添加0.5g的MgCl2。在80℃搅拌反应2h，直到出现白色沉淀，然后通过硅藻土过滤。将产物溶解在3:1的乙醇:水的混合物中，并添加Zn粉(0.45g，6.84mmol)和NH4Cl(0.6g，11.4mmol)。反应在回流下搅拌1h直到存在的起始材料不再可通过TLC(DCM/MeOH25:1)检测到。通过硅藻土过滤反应并蒸发溶剂。反应的粗品用AcOEt稀释并用5ml水萃取。将水相蒸发至干以获得氨基-硫醇-六甘醇(hexaethylenglycol)产物。
α-半乳糖C2衍生物3和六甘醇胺连接体6取自Midatech Biogune原料。N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)、HAuCl4、NaBH4从Sigma-Aldrich化学公司购买。咪唑-4-乙酸单盐酸盐从Alfa Aesar购买。所有实验和溶液都使用公司高质量的MeOH和Nanopure水(18.1mΩ)。
α-GalC2(α)
2′-硫代乙基-α-D-吡喃半乳糖苷(α)
EG6NH2
1-氨基-17-巯基-3,6,9,12,15,-五氧杂-十七烷醇或
1-氨基-6-巯基-六甘醇(俗名)
AL/α-Gal NP的制备：向1:1比例的胺-巯基六甘醇连接体6和α-半乳糖配体3在MeOH(49ml)中的混合物(0.58mmol，3当量)添加金盐的水溶液(7.86mL，0.19mmol，0.025M)。搅拌反应30秒，且然后以若干份添加NaBH4(1N)的水溶液(4.32mL,4.32mmol)。在900rpm下震荡反应100分钟。此后，在14000rpm下离心悬浮液1分钟。移除上清液，并将沉淀溶解在2ml的水中。然后，将2ml的悬浮液引入两个过滤器(AMICON，10KDa，4mL)中，并在4500g下离心5分钟。过滤器中的残渣用水再洗涤两次。将最终的残渣溶解在80ml的水中。
对于金NP的制备，在层流橱内制造。所有的玻璃和塑料材料(诸如eppendorfs、小瓶和瓶子)和溶剂(水、HAc)首先在高压釜内灭菌。所有的其他一次性用品(诸如刀片和过滤器)都提前经过灭菌。
GSH NP
在9:1甲醇:水中溶解氧化的配体，谷胱甘肽(Fluka 49741)并添加氯化金III(Sigma-Aldrich,Poole,UK)。使用相对于金四倍摩尔过量的有机配体。然后在平板振动器上将溶液温和混合5分钟。在剧烈涡旋下在快速添加相对于金20倍摩尔过量的新制的1M硼氢化钠(Sigma-Aldrich,Poole,UK)后通过还原制得纳米粒子。将样品涡旋总共30秒，然后在平板振动器上再温和混合1小时。由于纳米粒子在甲醇/水溶剂中不溶，因此通过台式离心、移除上清液并将纳米粒子小球分散在水中而进行初步纯化。通过在10kDa vivaspin离心设备(GE Healthcare)中进行4次水洗而实现进一步的纯化。通过简单的比色测定确定所有纳米粒子制剂的金浓度。简而言之，将10μl纳米粒子样品或12mg/ml金标准品(Fluka(Sigma-Aldrich,Poole,UK))和空白在ELISA板中用30μl的50:50的水:王水消化1分钟，这之后添加150μl的2M NaBr，然后立即测量405nm吸光度，该测定在0-10μg范围内具有优异的线性。
胶体金纳米粒子
胶体金纳米粒子使用标准技术在内部制备。
实施例2-纳米粒子在聚合物微粒中的包封
使用以下三种GNP溶液进行金纳米粒子(GNP)在PLGA微粒(固体珠粒)中的包封：
·溶解在90:10DMSO/水的混合物中的NP-PEG胺/αGal(即具有大约50:50比例的PEG胺配体(1-氨基-17-巯基-3,6,9,12,15,-五氧杂-十七烷醇)与C2-α-半乳糖配体(2-硫代-乙基-α-D-半乳糖苷)的冠的GNP)(1mg/ml)[“NP1”]。
·溶解在90:10DMSO/水的混合物中的NP-谷胱甘肽(即具有谷胱甘肽配体的冠的GNP)(1mg/ml)[“NP2”]。
·在90:10DMSO/水的混合物中的胶体金(0.18mg/ml)[“NP3”]。
由于PLGA在水中是不溶的，因此难以产生稳定的PLGA、DMSO和水的溶液。作为最大限度，可产生含有高达～10％水的混合物。
本发明人因此努力获得在DMSO-水混合相中制备的金纳米粒子(GNP)。本文考虑使用高度浓缩的GNP的溶液。
为制备PLGA和GNP的溶液，首先制备PLGA在DMSO中的高度浓缩的溶液(60-80％w/v)。这是线性PLGA(L/G 75:25)，具有羧酸末端，分子量～10kDa。然后用上述GNP溶液之一将该溶液稀释33％-50％，得到40％w/v的最终的聚合物浓度。
产生抗溶剂(85:15水/叔-丁醇)的溶液并冷却至～4℃。然后将该溶液放置在压电式液滴发生器设备(参见WO2012/042273)中，并产生稳定的液滴流。液滴被允许下落到上述抗溶剂溶液中并在5-8℃之间的温度下与之反应。发生快速的萃取反应，产生直径～53μm的固体微粒。
固体微球使用Bead Harvester设备真空干燥(参见WO2013/014466)并储存在4℃。
包封纳米粒子的微粒的表征
为了量化包封率，使用NP3(其在～520nm具有可见的吸收)进行分光光度法测定。在乙腈中制备连续稀释液。然后将准确质量的含GNP的微球溶解在乙腈中，并量化了溶液的吸收。使用这种方法，我们确定NP3成功包封，具有～96％的包封率。
使用紫外-可见分光光度计，我们也确定了在该过程期间NP1和NP2的包封的样品没有团聚，即微球在乙腈中溶解后没有检测到紫外-可见吸收带。本发明人考虑使用电感耦合等离子体质谱分析(ICPMS)技术进行装载&释放研究的量化。
用200μl 50％的王水处理一定量(3.5mg)的包封NP2(即谷胱甘肽纳米粒子)的PLGA微粒，并且微粒在视觉上溶解至>50％(仍可看到一些粒子)。将该材料离心，并使用内部比色法测定上清液中的金含量。
30μl上清液得到0.21μg的Au，其相当于1.4μg Au/3.5mg PLGA-NP微粒。如果包封率为100％，则基于NP2的1.94μg金的理论最大值，这些结果表示72％的回收率。本发明人得出结论，证明了高水平的纳米粒子掺入PLGA微球。
实施例3-金纳米粒子在PLGA微球中的包封
纳米粒子已经被包封并且被表征的进一步的实施例基本上如实施例2中所描述。
实验1
使用压电式液滴生成器设备，在DMSO中的40％w/v RG752H( RG 752H，聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)酸末端，丙交酯:乙交酯75:25，Mw 4,000-15,000)与0.25mg/mLC2-葡萄糖GNP(9:1的DMSO:水)一起成功产生微球。抗溶剂为在室温下的15％v/v叔丁醇。在图4中可看到显示微粒的电子显微照片。
微粒的平均直径为53.49μm；标准偏差为4.34μm；CV为8.12％。
实验2
使用压电式液滴生成器设备，在DMSO中的40％w/v RG752H与0.5mg/mL C2-葡萄糖GNP(9:1DMSO:水)一起成功产生微球。抗溶剂——室温下15％v/v叔丁醇。
平均直径-46.67μm，标准偏差–2.11μm，CV–4.53％。
实验3
使用压电式液滴生成器设备，在DMSO中的40％w/v RG752H与0.18mg/mL胶体金(9:1DMSO:水)一起成功产生微球。抗溶剂——室温下的15％v/v叔丁醇。
平均直径-44.82μm，标准偏差–3.35μm，CV–7.47％。
由于胶体金可通过紫外分光光度计在520nm处检测到，因此分析了微球内的浓度。它产生0.174mg/mL的负荷，其包封率为96.4％。
实验4
FITC-缀合的GNP的包封
将FITC-PEG-SH-1kda GNP c(Au)0.587g/l离心，并重悬浮于250μL DMSO中。转移至33％w/v的在DMSO中的RG752H制剂中。使用15％v/v叔丁醇作为抗溶剂，用压电式液滴发生器成功制造。
平均直径-59.4μm标准偏差–3μm CV–5.1％。
在1mg的GNP微球中检测到有2.18μg/ml的FITC-PEG-SH-1kda。
偶联到可检测标记物的纳米粒子的成功包封说明提供了根据本发明的包封的有效载荷偶联的纳米粒子。
实验5
谷胱甘肽缀合的GNP的包封
将谷胱甘肽-缀合的GNP c(Au)6.52mg/mL在超过滤器(amicon)中离心30分钟，以移除大多数的水，然后将GNP重悬浮于200μL的DMSO中。然后将200μL添加至在DMSO中的30％w/v RG752H制剂。其然后使用压电式液滴生成器用于制造微球。使用15％v/v叔丁醇作为抗溶剂。
平均直径-49.36μm标准偏差–4.48μm CV–9.07％。
将纳米粒子溶解于王水中，并使用比色测定法测量金浓度。该测定使用金AAS标准溶液，用于产生在382nm读出的标准曲线。在600μg/mL的HLQ和10μg/mL的LLQ之间显示线性趋势(参见图5)。
微球产生0.8279mg/ml的金浓度。制剂理论最大值-1.304mg/ml的金浓度，其给出63.49％的包封率。
本文引用的所有文献通过引用以其整体并入本文，并且对于所有目的，达到如同每个单个出版物或专利或专利申请被具体地和单独地指出通过引用以其整体并入的相同程度。
本文的具体的实施方案通过实施例的方式，而不是通过限制的方式提供。本文包括的任何副标题仅仅为了方便起见，并且不被解释为以任何方式限制公开。

Claims (60)

1.一种微粒，其包括至少一种生物相容性聚合物，所述微粒包封至少一种纳米粒子，所述纳米粒子包括：
(i)核，其包括金属和/或半导体；
(ii)冠，其包括共价连接至所述核的多个配体，其中所述配体包括至少一种碳水化合物和/或谷胱甘肽。
2.根据权利要求1所述的微粒，其中所述至少一种纳米粒子进一步包括至少一种生物活性剂或可检测的标记物，所述可检测的标记物共价连接或非共价结合至所述冠和/或所述核。
3.根据权利要求1或2所述的微粒，其中所述至少一种生物活性剂包括化学治疗剂，并通过连接体共价连接至所述核。
4.根据权利要求2或3所述的微粒，其中所述至少一种生物活性剂通过连接体共价连接至所述核，所述连接体包括C2-C15烷基和/或C2-C15二醇。
5.根据权利要求3或4所述的微粒，其中所述化学治疗剂选自由以下组成的组：替莫唑胺、伊立替康、氯毒素、卡莫司汀、铂(IV)、铂(II)、喜树碱、阿霉素、多西他赛、美登素、美登木素生物碱、一甲基澳瑞他汀E(MMAE)和组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂。
6.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述纳米粒子进一步包含细胞、组织或肿瘤靶向部分。
7.根据权利要求6所述的微粒，其中所述靶向部分选自由以下组成的组：叶酸、乳糖、白蛋白、谷氨酰胺、结合细胞表面受体的配体、和抗体。
8.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述至少一种生物活性剂包括至少一种肽或多肽，所述肽或多肽非共价结合至所述冠。
9.根据权利要求8所述的微粒，其中所述肽或多肽选自由以下组成的组：胰岛素、GLP-1、淀粉不溶素、艾塞那肽、奥曲肽、特立帕肽、胰高血糖素、细胞因子和抗体。
10.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述纳米粒子的所述冠包括至少5个、10个、20个或至少50个配体/纳米粒子核。
11.根据权利要求2-10中任一项所述的微粒，其中每个纳米粒子核中的所述生物活性剂的分子数量选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29和30。
12.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述纳米粒子的所述核的直径在1nm至5nm的范围内。
13.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中包括其配体的所述纳米粒子的直径在2nm至50nm、或3nm至30nm、或4nm至20nm、或5nm至15nm的范围内。
14.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述核包括金属，所述金属选自由以下组成的组：Au、Ag、Cu、Pt、Pd、Fe、Co、Gd、Eu和Zn或其任何组合。
15.根据权利要求2-14中任一项所述的微粒，其中所述微粒包括多个所述纳米粒子，其中在所述微粒中的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的所述纳米粒子具有至少一种缀合或结合的生物活性剂。
16.根据权利要求2-15中任一项所述的微粒，其中所述微粒包括至少两种不同种类的生物活性剂。
17.根据权利要求16所述的微粒，其中所述至少两种不同种类的生物活性剂中的第一种缀合或结合至第一纳米粒子，且所述至少两种不同种类的生物活性剂中的第二种缀合或结合至第二纳米粒子。
18.根据权利要求16所述的微粒，其中所述至少一种纳米粒子具有与其缀合或结合的至少两种不同种类的生物活性剂。
19.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述微粒沿着其最长维度的直径在1μm至900μm、5μm至500μm、10μm至100μm或25μm至75μm的范围内。
20.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述微粒的形态为基本上球形或是透镜状的。
21.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述微粒的表面孔隙度的特征在于平均表面孔隙尺寸<20nm、<100nm、<1μm或<10μm。
22.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述至少一种生物相容性聚合物选自由以下组成的组：聚交酯、聚己内酯、聚酐、和乳酸与乙醇酸的共聚物(”PLGA”)。
23.根据权利要求22所述的微粒，其中所述聚合物或共聚物包括至少一个端基或末端官能团，所述端基或末端官能团选自由以下组成的组：羧基、羟基和酯基。
24.根据权利要求22或23所述的微粒，其中所述聚合物或共聚物包括至少一个端基或末端官能团，所述端基或末端官能团结合至所述纳米粒子的所述冠上存在的官能团。
25.根据权利要求24所述的微粒，其中所述至少一种生物相容性聚合物包括乳酸与乙醇酸的共聚物(“PLGA”)，所述共聚物具有羧基端基，并且所述纳米粒子冠包括至少一个胺基。
26.根据权利要求25所述的微粒，其中所述纳米粒子包括PEG胺配体和α-半乳糖配体的冠，所述PEG胺配体诸如1-氨基-17-巯基-3,6,9,12,15-五氧杂-十七烷醇，所述α-半乳糖配体诸如2-硫代-乙基-α-D-半乳糖苷。
27.根据权利要求22-26中任一项所述的微粒，其中所述至少一种生物相容性聚合物具有在1:1至1:0的范围内的丙交酯与乙交酯的比例，任选地具有在70:30至90:10的范围内的丙交酯与乙交酯的比例。
28.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述纳米粒子基本上均匀分布于整个所述微粒，任选地其中依据每单位体积微粒中纳米粒子的数量测量的所述纳米粒子的密度的变化不超过平均值的50％、不超过20％或不超过10％。
29.根据权利要求1-27中任一项所述的微粒，其中所述纳米粒子在所述微粒中具有偏向所述微粒的表面的分布，任选地其中超过50％、超过80％或超过90％的所述纳米粒子相比所述微粒的中心更接近位于所述微粒的表面。
30.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中所述纳米粒子的平均浓度在0.01％至25％w/w的范围内，任选地在0.05％至10％w/w的范围内，所述纳米粒子的平均浓度以每重量微粒聚合物中的纳米粒子的重量％表示。
31.根据权利要求2-30中任一项所述的微粒，其中所述生物活性剂的平均密度在0.005％至20％w/w的范围内，任选地在0.01％至10％w/w的范围内，所述平均密度以每重量微粒聚合物中的活性剂的重量％表示。
32.根据前述权利要求中任一项所述的微粒，其中在哺乳动物受试者中积存注射所述微粒后，所述微粒的体内释放行为在1周至6个月的范围内，任选地在3周至3个月的范围内。
33.一种药物组合物，其包含多个在前述权利要求中任一项所述的微粒和药学上可接受的载体或赋形剂。
34.根据权利要求33所述的药物组合物，其中所述组合物包含抗凝结剂。
35.根据权利要求33或34所述的药物组合物，其中所述载体是含水的或有机液体，诸如生物相容性油。
36.根据权利要求22-35中任一项所述的药物组合物，被配制成用于通过注射途径递送，或被配制成用于在外科手术期间植入，所述注射途径诸如皮下或肌内积存注射。
37.根据权利要求1-32中任一项所述的微粒或根据权利要求33-36中任一项所述的药物组合物在医药中的用途。
38.根据权利要求1-32中任一项所述的微粒或根据权利要求33-36中任一项所述的药物组合物用于在哺乳动物受试者中治疗癌症、内分泌病症或中枢神经系统(CNS)病症或眼部病症的方法中的用途。
39.根据权利要求38所述的微粒或药物组合物的用途，其中所述微粒包括化学治疗剂，并且所述方法是治疗癌症，所述癌症选自由以下组成的组：脑癌、任选地成胶质细胞瘤、神经胶质瘤或星形细胞瘤；卵巢癌；肝癌；和皮肤癌。
40.根据权利要求39所述的微粒或药物组合物的用途，其中所述化学治疗剂选自由以下组成的组：替莫唑胺、伊立替康、氯毒素、卡莫司汀、铂(IV)、铂(II)、喜树碱、阿霉素、多西他赛、美登素、美登木素生物碱、一甲基澳瑞他汀E(MMAE)和组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂。
41.治疗哺乳动物受试者中的癌症、内分泌病症或中枢神经系统(CNS)病症或眼部病症的方法，其包括向需要所述治疗的受试者施用治疗有效量的如权利要求1-32中任一项所述的微粒或如权利要求33-36中任一项所述的药物组合物。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述方法是癌症的治疗，所述癌症选自由以下组成的组：脑癌、任选地成胶质细胞瘤、神经胶质瘤或星形细胞瘤；卵巢癌；肝癌；和皮肤癌。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述化学治疗剂选自由以下组成的组：替莫唑胺、伊立替康、氯毒素、卡莫司汀、铂(IV)喜树碱、阿霉素、多西他赛、美登素、美登木素生物碱、一甲基澳瑞他汀E(MMAE)和组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂。
44.根据权利要求38-40中任一项所述的微粒或药物组合物的用途或根据权利要求41-43中任一项所述的方法，其中剂量的施用之间的时间间隔为至少一周，任选地至少2周、3周或4周，并且进一步任选地至少1月、2月或3月。
45.一种制品，其包括：
如权利要求1-32中任一项所述的微粒或根据权利要求33-36中任一项所述的药物组合物；
容器，其用于容纳所述的微粒或药物组合物；和
插入物和/或标签。
46.根据权利要求45所述的制品，其中所述插入物和/或标签提供说明、剂量和/或施用信息，所述说明、剂量和/或施用信息是关于在哺乳动物受试者中所述微粒或药物组合物在癌症、内分泌病症或中枢神经系统(CNS)病症或眼部病症中的用途。
47.用于生产如权利要求1-32中任一项所述的微粒的方法，所述方法包括：
提供第一液体，所述第一液体包含溶质、溶剂和旨在被包封在所述微粒内的多个纳米粒子，所述溶质包括聚合物，在所述第一液体中的聚合物的浓度为至少10％w/v，其中“w”为所述聚合物的重量，且“v”为所述溶剂的体积，所述纳米粒子包括：(i)核，所述核包括金属和/或半导体；和(ii)冠，所述冠包括共价连接至所述核的多个配体，其中所述配体包括至少一种碳水化合物和/或谷胱甘肽；
提供液滴发生器，其包括可操作以产生液滴的压电元件，
引起所述液滴发生器形成所述第一液体的液滴；
使所述液滴通过气体，
使所述液滴与第二液体接触，以引起所述溶剂离开所述液滴，从而形成固体微粒；
在所述第二液体中的所述溶剂的溶解度为至少5g溶剂/100ml第二液体，所述溶剂与所述第二液体基本上可混溶，
其中所述第二液体作为流被提供，并且所述方法包括使所述液滴与第二液体的所述流接触。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述纳米粒子提供在有机溶剂:水混合相中，任选地DMSO:水混合相中，且进一步任选地在DMSO:水比例在80:20至95:5的范围内的DMSO:水混合相中。
49.根据权利要求47或48所述的方法，其中所述第一液体包括DMSO、聚-丙交酯-共-乙交酯共聚物(“PLGA”)和纳米粒子，所述纳米粒子如权利要求1-32中任一项所述。
50.根据权利要求47-49中任一项所述的方法，其中所述第二液体包括水，任选地进一步包括醇，进一步任选地包括叔-丁醇。
51.根据权利要求47-50中任一项所述的方法，其中所述第二液体的温度在1℃至10℃，任选地4℃至8℃的范围内。
52.根据权利要求47-51中任一项所述的方法，其中在所述第一液体中的聚合物的浓度为至少20％w/v、至少30％w/v或至少40％w/v。
53.根据权利要求47-52中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括通过任选地在真空下，将所述固体微粒与所述第二液体分离来收集所述固体微粒。
54.根据权利要求47-53中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括收集所述固体微粒并将所述微粒配制或包装入药物组合物中或递送形式。
55.根据权利要求54所述的方法，其中所述微粒被配制入通过积存注射用于递送的液体中。
56.根据权利要求47-55中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括生产所述纳米粒子的先前步骤，所述先前步骤包括：
将包含谷胱甘肽和/或硫衍生化的碳水化合物的溶液与包含核形成材料的溶液以及还原剂合并，从而引起所述纳米粒子自组装，任选地其中所述核形成材料包括金盐的溶液。
57.根据权利要求56所述的方法，其中生产所述纳米粒子的所述先前步骤进一步包括将所述生物活性剂缀合至或结合至所述纳米粒子，任选地其中所述缀合包括提供溶液，所述溶液包含共价连接到所述活性剂的硫衍生化的连接体，并合并：
包含共价连接到所述活性剂的所述硫衍生化的连接体的溶液；
包含谷胱甘肽和/或硫衍生化的碳水化合物的溶液；
包含核形成材料的溶液；和
所述还原剂。
58.根据权利要求57所述的方法，其中共价连接到所述活性剂的所述硫衍生化的连接体包括共价连接至所述活性剂的硫代烷基连接体和/或硫代二醇连接体。
59.根据权利要求47-58中任一项所述的方法，其中产生的所述微粒是无菌的。
60.用于当向哺乳动物受试者施用时，延长生物活性剂的体内半衰期的方法，所述方法包括：
提供至少一种具有与其结合或缀合的所述活性剂的纳米粒子，所述纳米粒子包括：(i)核，所述核包括金属和/或半导体；和(ii)冠，所述冠包括共价连接至所述核的多个配体，其中所述配体包括至少一种碳水化合物和/或谷胱甘肽；和
将所述至少一种纳米粒子包封在生物相容性聚合物微粒中。
CN201580065153.7A 2014-11-11 2015-11-11 缓释包封的纳米粒子 Expired - Fee Related CN107106495B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1420080.2A GB201420080D0 (en) 2014-11-11 2014-11-11 Sustained release encapsulated nanoparticles
GB1420080.2 2014-11-11
PCT/EP2015/076364 WO2016075211A1 (en) 2014-11-11 2015-11-11 Sustained release encapsulated nanoparticles

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107106495A true CN107106495A (zh) 2017-08-29
CN107106495B CN107106495B (zh) 2020-12-29

Family

ID=52118345

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580065153.7A Expired - Fee Related CN107106495B (zh) 2014-11-11 2015-11-11 缓释包封的纳米粒子

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20170319505A1 (zh)
EP (1) EP3217958B1 (zh)
CN (1) CN107106495B (zh)
ES (1) ES2787517T3 (zh)
GB (1) GB201420080D0 (zh)
WO (1) WO2016075211A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113412126A (zh) * 2018-12-14 2021-09-17 Mida科技有限公司 炎症性失调的基于纳米颗粒的疗法
CN113423433A (zh) * 2018-12-14 2021-09-21 Mida科技有限公司 携带抗叶酸剂的纳米颗粒及其在药物中的用途

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3237016A1 (en) * 2014-12-23 2017-11-01 Midatech Ltd Nanoparticles and their use in cancer therapy
GB2541166A (en) 2015-07-24 2017-02-15 Midatech Ltd Nanoparticle-based liver-targeting therapy and imaging
GB2551944B (en) 2015-12-18 2021-09-01 Midatech Pharma Wales Ltd Microparticle production process and apparatus
GB2548084A (en) 2016-02-26 2017-09-13 Midatech Ltd Nanoparticle production
GB201701745D0 (en) * 2017-02-02 2017-03-22 Midatech Ltd Nanoparticle-based liver-targeting therapy and imaging
US20210162013A1 (en) * 2018-08-03 2021-06-03 Brown University Compositions and methods for improving the bioavailability of glp1 and analogues thereof
GB201819430D0 (en) * 2018-11-29 2019-01-16 Midatech Ltd Therapeutic compounds, nanoparticles and uses thereof
JP2021028305A (ja) 2019-08-09 2021-02-25 株式会社リコー 粒子、医薬組成物、及び粒子の製造方法
GB202002727D0 (en) 2020-02-26 2020-04-08 Midatech Pharma Wales Ltd Microparticle production platform, method of producing microparticles and a pharmaceutical composition

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010059135A1 (en) * 2008-11-24 2010-05-27 Agency For Science, Technology And Research Anti-cancer microparticle
US20110212029A1 (en) * 2008-11-06 2011-09-01 Middlesex University Higher Education Detection of cancer
US20120171291A1 (en) * 2010-06-10 2012-07-05 Thomas Rademacher Peptide-carrying nanoparticles
CN103209681A (zh) * 2010-06-10 2013-07-17 Mida科技有限公司 纳米颗粒薄膜递送系统
CN103269783A (zh) * 2010-09-30 2013-08-28 Q芯片有限公司 用于制造固体珠粒的设备和方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013523651A (ja) * 2010-03-24 2013-06-17 ノースイースタン ユニヴァーシティ 多重コンパートメントのマクロファージ送達
GB201301991D0 (en) * 2013-02-05 2013-03-20 Midatech Ltd Permeation enhanced active-carrying nanoparticles

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110212029A1 (en) * 2008-11-06 2011-09-01 Middlesex University Higher Education Detection of cancer
WO2010059135A1 (en) * 2008-11-24 2010-05-27 Agency For Science, Technology And Research Anti-cancer microparticle
US20120171291A1 (en) * 2010-06-10 2012-07-05 Thomas Rademacher Peptide-carrying nanoparticles
CN103209681A (zh) * 2010-06-10 2013-07-17 Mida科技有限公司 纳米颗粒薄膜递送系统
CN103269783A (zh) * 2010-09-30 2013-08-28 Q芯片有限公司 用于制造固体珠粒的设备和方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113412126A (zh) * 2018-12-14 2021-09-17 Mida科技有限公司 炎症性失调的基于纳米颗粒的疗法
CN113423433A (zh) * 2018-12-14 2021-09-21 Mida科技有限公司 携带抗叶酸剂的纳米颗粒及其在药物中的用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN107106495B (zh) 2020-12-29
US20170319505A1 (en) 2017-11-09
EP3217958A1 (en) 2017-09-20
ES2787517T3 (es) 2020-10-16
GB201420080D0 (en) 2014-12-24
WO2016075211A1 (en) 2016-05-19
EP3217958B1 (en) 2020-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107106495A (zh) 缓释包封的纳米粒子
Patra et al. Nano based drug delivery systems: recent developments and future prospects
Sattari et al. Functionalized graphene platforms for anticancer drug delivery
Parveen et al. Polymeric nanoparticles for cancer therapy
Sekhon et al. Inorganic nanomedicine—part 2
Duan et al. Fluorescent carbon dots as carriers for intracellular doxorubicin delivery and track
Abdellatif et al. Nano-scale delivery: A comprehensive review of nano-structured devices, preparative techniques, site-specificity designs, biomedical applications, commercial products, and references to safety, cellular uptake, and organ toxicity
JP4920056B2 (ja) 癌標的性に優れたタンパク質複合体及びその製造方法
EP3092012B1 (en) Magnetic nanoparticles functionalized with cathecol, production and use thereof
CN109395087A (zh) 一种共递送no供体和纳米药物的纳米共递送系统
Sharma et al. Cancer treatment and toxicity outlook of nanoparticles
Sahoo et al. Zinc oxide nanoparticles for bioimaging and drug delivery
Hamid et al. Nanomedicines: nano based drug delivery systems challenges and opportunities
Lee et al. Potential use of gold-silver core-shell nanoparticles derived from Garcinia mangostana peel for anticancer compound, protocatechuic acid delivery
CN107106699A (zh) 纳米粒子及其在癌症治疗中的用途
Fatima et al. A review of multifunction smart nanoparticle based drug delivery systems
Ghaemi et al. Targeted Nano-Delivery of Flutamide with polymeric and lipid nanoparticles
Naik Nano based drug delivery
Sharma et al. Application of Nanotechnology in Clinical Research: Present and Future Prospects
CN103830735B (zh) 一种具有克服和避免p糖蛋白介导的肿瘤多药耐药性双重作用的金纳米药物载体
Polat et al. Recent advances in chitosan-based systems for delivery of anticancer drugs
CN105339011A (zh) 纳米颗粒肽组合物
Gurnani et al. Nanotech drug delivery system: The perfect physio-chemical deal for biological command
KR101685379B1 (ko) 레반 나노입자의 제조 및 이의 생의학적 응용
US20240216548A1 (en) Method for preparing theragnostic carbon quantum-dot nanomedicines for targeted drug delivery to acute-myeloid leukemia

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20201229