CN107033113B - 一种高纯度槲皮素制备方法 - Google Patents

一种高纯度槲皮素制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高纯度槲皮素制备方法。配制槲皮素粗品的溶液，采用聚合物色谱填料装填在色谱柱，使用去离子水做流动相，收集各个洗脱液并进行纯度检测，将高纯度槲皮素洗脱液合并，用酸沉淀槲皮素，过滤后清洗，最终产品纯度大于99％。本发明方法经济、环保，操作简便、重复性好，适用高纯度槲皮素的工业化制备，具有较高的经济效益和应用价值。

Description

一种高纯度槲皮素制备方法
技术领域
本发明涉及了一种槲皮素制备方法，尤其是涉及了一种高纯度槲皮素制备方法。
背景技术
槲皮素(Quercetin)，又名栎精，槲皮黄素，Meletin，Sophretin，分子式C15H10O7，分子量302.23。二水合物为黄色针状结晶，在95～97℃成为无水物，熔点314℃(分解)。能溶于冷乙醇(1∶290)，易溶于热乙醇(1∶23)，可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等，几乎不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等。溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，乙醇溶液味很苦。槲皮素广泛存在于自然界中，其英文名“quercetin”最早出现于1857年，其来源于“quercetum”，意为栎树林，是一种天然的生长素极性运输抑制剂。结构式如下：槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，此外还有降低血压、减少毛细血管脆性增强其抵抗力、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量的作用。槲皮素能显著抑制致癌剂、离体恶性细胞、艾氏腹水癌细胞DNA、RNA和蛋白质合成与生长。对各种因素诱导的血小板聚集均有明显抑制作用，可抑制5-羟色胺的释放作用。槲皮素导入亲水性基团能增加其水溶性，更有利于吸收，从而增强药理作用，如槲皮素氧乙酸赖氨酸盐的水溶性增加，临床试验证明，其可用于治疗出血性疾病、循环障碍、动脉粥样硬化等。槲皮素可以阻断雄激素对激素依赖型的人类前列腺癌细胞的作用，雄激素的作用被阻断后，前列腺癌细胞的生长会延缓或停止。洋葱、苹果、红酒、绿茶中含有大量的槲皮素，前列腺癌患者可以多食用。在美国，槲皮素治疗前列腺癌已是非处方药，但在中国，还没批准该药物作为前列腺治疗药物。槲皮素用于治疗慢性支气管炎，对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。槲皮素也可用于其它行业。作为抗氧化剂，主要用于油脂、饮料、冷饮、肉类加工制品；
基于医药保健品对产品质量的高要求，因此开发一种制备高纯度槲皮素的方法具有很强的现实意义。由于槲皮素本身的性质特点，使得制备高纯度槲皮素具有较高的难度，目前市售的槲皮素一般纯度在95％左右，尚不能很好满足医药保健品的要求。
发明内容
为了解决背景技术中存在的问题，本发明提出了一种高纯度槲皮素制备方法。
为达到上述目的，本发明的技术方案是采用柱色谱方法进行提纯制备，色谱柱中所装填料为聚合物色谱填料。
聚合物色谱填料是指以苯乙烯、甲基丙烯酸酯及苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物为基质，通过对粒径大小、形貌、粒径分布、比表面积、孔径结构及表面功能基团等的精确控制，粒径小于100um，孔径低于
Figure BDA0001310555350000021
的色谱填料。
优选的，具体实施采用色谱填料UniPSTM 10-300。
具体方法步骤是：
1)配制样品溶液：取槲皮素粗品，加入一定量的热水并充分搅拌，再加入一定量的碱性溶剂并充分搅拌，溶解后过滤备用；
加入热水和碱性溶剂能够使得槲皮素粗品快速溶解。
2)色谱分离过程：
将色谱填料装填在色谱柱后，用去离子水冲洗，平衡后将步骤1)获得的样品用泵注射入色谱柱内上样，上样后用去离子水洗脱，收集各个洗脱液并进行纯度检测，将纯度大于99％的槲皮素洗脱液合并，用酸沉淀槲皮素，过滤后清洗，最后干燥得到高纯度槲皮素产品。
所述步骤1)中所槲皮素浓度为10-30mg/mL，优选上样液浓度为15mg/mL。
所述步骤1)中加入的热水温度是70℃，相对于槲皮素粗品的加入质量比是60:1。
所述步骤1)中的碱性溶剂为氢氧化钠或者氢氧化钾溶液，所配制溶液pH为8-10，碱性溶剂相对于热水的体积比为1:8。
所述步骤2)中的色谱填料为聚合物色谱填料，骨架为聚苯乙烯-二乙烯基苯，亲水修饰的聚苯乙烯-二乙烯基苯和聚丙烯酸酯材质，填料粒径为30-100微米。
具体实施可采用如苏州纳微科技有限公司生产的UniPSN，UniPS系列色谱填料。
在步骤2)中所用的酸为盐酸、甲酸、三氟乙酸等可挥发性酸。
具体实施可采用1:1的盐酸，加入量以调节pH至2-3为准
本发明独特地采用柱色谱制备高纯度槲皮素，包括将色谱填料装入色谱柱成为固定相，使用去离子水做流动相，把含有待分离或分析含槲皮素粗品的溶液流过该色谱柱，然后再把吸附在固定相上的待分离或分析的槲皮素洗脱下来，由此能够获得高纯度的槲皮素。
采用本发明技术方案的有益效果是：
本发明使用柱色谱方法时可以使用去离子水做流动相的对样品进行分离，具有极好的选择性，一次操作就可得到99％以上纯度的槲皮素。
本发明所使用的色谱填料具有机械强度高，独特的表面等优点，且其流动相为去离子水，与常规方法所用有机溶剂相比更加经济，环保，且本方法操作简便、重复性好，适用高纯度槲皮素的工业化制备，具有较高的经济效益和应用价值。
本发明与现有工艺相比，具有操作简单，效率高，重现性好，容易工业化生产，环境污染小等优点。
具体实施方式
下面通过实施例更详细地说明本发明。但是本发明的范围并不限于这些实施例。
本发明的实施例如下：
本发明实施例中针对槲皮素纯度均采用高效液相色谱法检测。
实施例一
1)配制样品溶液：称取槲皮素粗品5.0g，加入70℃热水250mL并充分搅拌，同时滴加1M NaOH溶液至溶液pH为8，溶解后趁热过滤备用。
2)色谱分离过程：将色谱填料UniPSTM 10-300装填在36mm*460mm色谱柱中，用去离子水冲洗1L，之后将步骤1)所配制的样品用泵注射入色谱柱内，流速10mL/min，上样结束后继续用去离子水洗脱1L，将洗脱液按50mL每管收集，并检测其中的槲皮素纯度，结果如下表：
Figure BDA0001310555350000031
然后将纯度大于99％的槲皮素洗脱液合并，用1:1盐酸沉淀槲皮素，至pH为2-3，之后静置过滤，用去离子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小时得到产品2.7g。
本实施例产品进行检测纯度，纯度是99.692％。
实施例二
1)配制样品溶液：称取槲皮素粗品5.0g，加入70℃热水250mL并充分搅拌，同时滴加1M NaOH溶液至溶液pH为10，溶解后趁热过滤备用。
2)色谱分离过程：将色谱填料UniPSTM 10-300装填在36mm*460mm色谱柱中，用去离子水冲洗1L，之后将步骤1)所配制的样品用泵注射入色谱柱内，流速10mL/min，上样结束后继续用去离子水洗脱1L，将洗脱液按50mL每管收集，并检测其中的槲皮素纯度，结果如下表：
Figure BDA0001310555350000041
然后经检测后将纯度大于99％的槲皮素洗脱液合并，用1:1盐酸沉淀槲皮素，至pH为2-3，之后静置过滤，用去离子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小时即可得到产品2.8g。
本实施例产品进行检测纯度，纯度是99.535％。
实施例三
1)配制样品溶液：称取槲皮素粗品5.0g，加入70℃热水250mL并充分搅拌，同时滴加1M NaOH溶液至溶液pH为9，溶解后趁热过滤备用。
2)色谱分离过程：将色谱填料UniPSTM 10-300装填在36mm*460mm色谱柱中，用去离子水冲洗1L，之后将1)所配制的样品用泵注射入色谱柱内，流速10mL/min，上样结束后继续用去离子水洗脱1L，将洗脱液按50mL每管收集，并检测其中的槲皮素纯度，结果如下表：
编号 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
纯度(％) 97.672 98.802 99.285 99.429 99.704 99.878 99.945 99.951 99.390 94.782
然后经检测后将纯度大于99％的槲皮素洗脱液合并，用1:1盐酸沉淀槲皮素，至pH为2-3，之后静置过滤，用去离子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小时即可得到产品3.1g。
本实施例产品进行检测纯度，纯度是99.780％。
实施例四
1)配制样品溶液：称取槲皮素粗品5.0g，加入70℃热水250mL并充分搅拌，同时滴加1M NaOH溶液至溶液pH为9，溶解后趁热过滤备用。
2)色谱分离过程：将色谱填料UniPSTM 10-300装填在36mm*460mm色谱柱中，用去离子水冲洗1L，之后将1)所配制的样品用泵注射入色谱柱内，流速10mL/min，上样结束后继续用去离子水洗脱1L，将洗脱液按50mL每管收集，并检测其中的槲皮素纯度，结果如下表：
Figure BDA0001310555350000051
然后经检测后将纯度大于99％的槲皮素洗脱液合并，用1:1盐酸沉淀槲皮素，至pH为2-3，之后静置过滤，用去离子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小时即可得到产品2.5g。
本实施例产品进行检测纯度，纯度是99.532％。
实施例五
1)配制样品溶液：称取槲皮素粗品110.0g，加入70℃热水6000mL并充分搅拌，同时滴加1M NaOH溶液至溶液pH为9，溶解后趁热过滤备用。
2)色谱分离过程：将色谱填料UniPSTM 10-300装填在16cm*60cm色谱柱中，用去离子水冲洗24L，之后将1)所配制的样品用泵注射入色谱柱内，流速200mL/min，上样结束后继续用去离子水洗脱24L，将洗脱液按1000mL每份收集，并检测其中的槲皮素纯度，结果如下：
Figure BDA0001310555350000052
然后经检测后将纯度大于99％的槲皮素洗脱液合并，用1:1盐酸沉淀槲皮素，至pH为2-3，之后静置过滤，用去离子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小时即可得到产品75g。
本实施例产品进行检测纯度，纯度是99.692％。

Claims (2)

1.一种槲皮素制备方法，其特征在于：采用柱色谱方法进行提纯制备，色谱柱中所装填料为聚合物色谱填料；
所述方法具体包含以下步骤：
1)配制样品溶液：取槲皮素粗品，加入一定量的热水并充分搅拌，再加入一定量的碱性溶剂并充分搅拌，溶解后过滤备用；
所述步骤1)中所槲皮素浓度为10-30mg/mL；
所述步骤1)中加入的热水温度是70℃，相对于槲皮素粗品的加入质量比是60:1；
所述步骤1)中的碱性溶剂为氢氧化钠或者氢氧化钾溶液，碱性溶剂相对于热水的体积比为1:8，所配制的样品溶液pH为8-10；
2)色谱分离过程：将色谱填料装填在色谱柱后，用去离子水冲洗，平衡后将步骤1)获得的样品用泵注射入色谱柱内上样，上样后用去离子水洗脱，收集各个洗脱液并进行纯度检测，将纯度大于99％的槲皮素洗脱液合并，用酸沉淀槲皮素，过滤后清洗，最后干燥得到槲皮素产品；
所述聚合物色谱填料的骨架为聚苯乙烯-二乙烯基苯，填料粒径为30-100微米。
2.如权利要求1所述的一种槲皮素制备方法，其特征在于：
在步骤2)中所用的酸选自盐酸、甲酸或三氟乙酸中的一种。
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