CN107014650A - 一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，属于水产学领域。一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，分别随机选择实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤，并将实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤分别编号，将清水煮沸，放入文蛤，煮沸4‑6分钟。它可以实现能够完全消解贝壳样品上的Sr等微量元素，也可以提高前处理的速度，为文蛤的放流效果的评估提供了一个新的前处理方法，能够快速准确的处理并测量贝壳上的微量元素，便于后期分析不同生长阶段文蛤的微量元素含量，从而进一步分析它的生活环境与生活史。

Description

一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法
技术领域
本发明涉及水产学领域，更具体地说，涉及一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法。
背景技术
文蛤又名花蛤，是我国近海重要的经济种类之一，主要分布于我国大陆和台湾沿岸。文蛤肉质鲜美、营养丰富，具有很高的食疗药用价值。近年来由于过度捕捞，环境污染等因素，野生文蛤开始逐步衰退，为了更好的保护文蛤，在我国近海开始广泛开展文蛤苗种的放流，放流过后需要评估放流的效果。
传统标记重捕的放流效果评估方法因受限于回捕率低、标记死亡率高、标记困难、费用高等因素的影响，而不适合用作文蛤放流效果的评估。微量元素主要指Sr、Ba等，它不能被降解，相反却能在生物体上富集，因此贝壳上的微量元素也被看作是一种天然标记来评估文蛤的放流效果，通过比较野外捕捞文蛤与养殖文蛤贝壳上的微量元素的差异，采用逐步判别分析捕捞成蛤是否来自于放流群体。要测定贝壳上的微量元素需要先对样本进行处理，但目前没有快速准确的处理并测量贝壳上的微量元素的方法，不便于后期分析它的生活环境与生活史。
发明内容
1.要解决的技术问题
针对现有技术中存在的目前没有快速准确的处理并测量贝壳上的微量元素的方法问题，本发明的目的在于提供一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，它可以实现快速准确的处理并测量贝壳上的微量元素。
2.技术方案
为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。
一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，包括如下步骤：
（1）分别随机选择实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤，并将实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤分别编号；
（2）将清水煮沸，放入文蛤，煮沸4-6分钟；
（3）取出文蛤，然后用解剖刀和镊子剔除贝壳内部的肌肉和结缔组织，并对文蛤贝壳进行切割，分别切取文蛤幼苗的贝壳顶端和文蛤成体的贝壳边缘，放入自封袋，编号，备用；
（4）用超声波清洗文蛤幼苗的贝壳顶端和文蛤成体的贝壳边缘9-11分钟，清洗后用超纯水冲洗；
（5）将清洗去污后的贝壳冷冻干燥24小时，研磨成粉末样品，100目过筛，制备过程应避免沾污待测元素；
（6）使用天平准确称取研磨后的粉末样品，置于消解罐中，加入分析纯硝酸消解，放入真空干燥箱中24小时；
（7）取出溶解好的溶液，用少量纯硝酸溶液清洗消解罐的盖子内壁、罐体内壁和滤渣至少3次，洗液一并过滤收集于50ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度；
（8）用慢速定量滤纸过滤容量瓶中的溶液，收集在离心管中备用；
（9）制备空白对比试样：不加粉末样品，自己处理纯硝酸溶液，按照步骤（6）、（7）和（8）制备空白试样；
（10）在电感耦合等离子质谱仪上测定微量元素。
通过上述步骤方法能够完全消解贝壳样品上的Sr等微量元素，也可以提高前处理的速度，为文蛤的放流效果的评估提供了一个新的前处理方法，能够快速准确的处理并测量贝壳上的微量元素，便于后期分析不同生长阶段文蛤的微量元素含量，从而进一步分析它的生活环境与生活史。
优选地，所述步骤（3）中使用的解剖刀和镊子在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗，使用烘箱烘干，对解剖刀和镊子进行消毒去污处理，提高测量准确度。
优选地，所述步骤（3）中的切割工具使用小型手动切割机，通过小型手动切割机便于切割贝壳。
优选地，所述步骤（6）中的天平使用百万分之一天平，消解罐使用20ml高温高压消解罐，百万分之一天平提高了称重准确度，20ml高温高压消解罐便于盛放并消解样品粉末。
优选地，所述消解罐内胆为聚四氟乙烯，使用前在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗3遍，使用烘箱烘干，消解罐内胆为聚四氟乙烯抗腐蚀性好，使用前将消解罐在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗3遍，使用烘箱烘干，进一步提高了测量准确度。
优选地，所述步骤（6）中准确称取过筛后的贝壳粉末为1 mg，纯硝酸为5ml，一定比例的贝壳粉末和纯硝酸便于后期测量计算。
优选地，所述步骤（6）真空干燥箱的温度调至90摄氏度，一定温度的真空干燥箱便于消解罐对粉末进行消解。
优选地，所述步骤（10）微量元素测定分析步骤为：
（1）绘制标准曲线:以空白对比试样的纯硝酸溶液为标准系列的最低浓度点，制备至少5个浓度点的标准系列。内标标准使用液通过蠕动泵在线加入。将标准系列从低浓度至高浓度依次导入雾化器进行分析，以各元素的质量浓度为横坐标，对应的响应值和内标响应值的比值为纵坐标，建立标准曲线，通过绘制标准曲线便于测定并分析微量元素的含量；
（2）测定试样:每个试样测定前，用纯硝酸溶液冲洗系统直至信号降至最低，待分析信号稳定后开始测定，若试样中待测目标元素浓度超过标准曲线范围，须经稀释后重新测定，稀释液使用纯硝酸溶液，纯硝酸溶液冲洗系统中使用5%的纯硝酸溶液冲洗进样管，雾化器等，降低仪器的背景信号，避免元素干扰；
（3）根据测定结果计算出实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤的微量元素含量，通过对比实验室饲养的文蛤与野外捕捞的文蛤测量结果，便于后期分析生活环境与生活史，从而便于分析捕捞文蛤是否来自于放流群体。
优选地，所述浓度点的标准系列为0,20ug/L，40ug/L,60ug/L,
80ug/L,100ug/L，通过建立多个标准系列的最低浓度点便于建立标准曲线。
3.有益效果
相比于现有技术，本发明的优点在于：
（1）本方案的能够完全消解贝壳样品上的Sr等微量元素，也可以提高前处理的速度，为文蛤的放流效果的评估提供了一个新的前处理方法，能够快速准确的处理并测量贝壳上的微量元素，便于后期分析不同生长阶段文蛤的微量元素含量，从而进一步分析它的生活环境与生活史。
（2）对解剖刀和镊子进行消毒去污处理，提高测量准确度。
（3）通过小型手动切割机便于切割贝壳。
（4）百万分之一天平提高了称重准确度，20ml高温高压消解罐便于盛放并消解样品粉末。
（5）消解罐内胆为聚四氟乙烯抗腐蚀性好，使用前将消解罐在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗3遍，使用烘箱烘干，进一步提高了测量准确度。
（6）一定比例的贝壳粉末和纯硝酸便于后期测量计算。
（7）一定温度的真空干燥箱便于消解罐对粉末进行消解。
（8）通过绘制标准曲线便于测定并分析微量元素的含量，纯硝酸溶液冲洗系统中使用5%的纯硝酸溶液冲洗进样管，雾化器等，降低仪器的背景信号，避免元素干扰，通过对比实验室饲养的文蛤与野外捕捞的文蛤测量结果，便于后期分析生活环境与生活史，从而便于分析捕捞文蛤是否来自于放流群体。
（9）通过建立多个标准系列的最低浓度点便于建立标准曲线。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述；显然；所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例；而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例；本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例；都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，包括如下步骤：
（1）分别随机选择实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤各20个，并将实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤分别编号；
（2）将清水煮沸，放入文蛤，煮沸4-6分钟，便于将肌肉与贝壳分开；
（3）取出文蛤，然后用解剖刀和镊子剔除贝壳内部的肌肉和结缔组织，有一些结缔组织比较难分离，需要用解剖刀和镊子剔除，这些组织会影响分析结果，并对文蛤贝壳进行切割，分别切取文蛤幼苗的贝壳顶端和文蛤成体的贝壳边缘，放入自封袋，编号，备用，解剖刀和镊子在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗，使用烘箱烘干，对解剖刀和镊子进行消毒去污处理，提高测量准确度，切割贝壳工具使用小型手动切割机，通过小型手动切割机便于切割贝壳；
（4）用超声波清洗文蛤幼苗的贝壳顶端和文蛤成体的贝壳边缘9-11分钟，清洗后用超纯水冲洗，9-10分钟的超纯水冲洗，基本可以完全清洗干净贝壳表面的残留物；
（5）将清洗去污后的贝壳冷冻干燥24小时，研磨成粉末样品，100目过筛，制备过程应避免沾污待测元素，贝壳一般较硬，经过24h冷冻干燥后的样品更容易进行研磨；
（6）使用天平准确称取研磨后的粉末样品，置于消解罐中，加入分析纯硝酸消解，放入真空干燥箱中24小时，天平使用百万分之一天平，消解罐使用20ml高温高压消解罐，百万分之一天平提高了称重准确度，20ml高温高压消解罐便于盛放并消解样品粉末，消解罐内胆为聚四氟乙烯，使用前在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗3遍，使用烘箱烘干，消解罐内胆为聚四氟乙烯抗腐蚀性好，使用前将消解罐在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗3遍，使用烘箱烘干，进一步提高了测量准确度，准确称取过筛后的贝壳粉末为1 mg，纯硝酸为5ml，一定比例的贝壳粉末和纯硝酸便于后期测量计算，真空干燥箱的温度调至90摄氏度，一定温度的真空干燥箱便于消解罐对粉末进行消解，该条件下溶解效果好，微量元素的提取更完整；
（7）取出溶解好的溶液，用少量纯硝酸溶液清洗消解罐的盖子内壁、罐体内壁和滤渣至少3次，洗液一并过滤收集于50ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度，避免了微量元素的损失；
（8）用慢速定量滤纸过滤容量瓶中的溶液，收集在离心管中备用，避免大颗粒堵塞仪器的雾化器；
（9）制备空白对比试样：不加粉末样品，自己处理纯硝酸溶液，按照步骤（6）、（7）和（8）制备空白试样，空白试验便于进行空白对照。
（10）在电感耦合等离子质谱仪上测定微量元素，微量元素测定分析步骤为：
（1）绘制标准曲线:以空白对比试样的纯硝酸溶液为标准系列的最低浓度点，另制备至少5个浓度点的标准系列，浓度点的标准系列为0,20ug/L，40ug/L,60ug/L,80ug/L,100ug/L，通过建立多个标准系列的最低浓度点便于建立标准曲线。内标标准使用液通过蠕动泵在线加入。将标准系列从低浓度至高浓度依次导入雾化器进行分析，以各元素的质量浓度为横坐标，对应的响应值和内标响应值的比值为纵坐标，建立标准曲线，通过绘制标准曲线便于测定并分析微量元素的含量；
（2）测定试样:每个试样测定前，用纯硝酸溶液冲洗系统直至信号降至最低，待分析信号稳定后开始测定，若试样中待测目标元素浓度超过标准曲线范围，须经稀释后重新测定，稀释液使用纯硝酸溶液，纯硝酸溶液冲洗系统中使用5%的纯硝酸溶液冲洗进样管，雾化器等，降低仪器的背景信号，避免元素干扰；
（3）根据测定结果计算出实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤的微量元素含量，通过对比实验室饲养的文蛤与野外捕捞的文蛤测量结果，便于后期分析生活环境与生活史，从而便于分析捕捞文蛤是否来自于放流群体。
通过上述步骤方法能够完全消解贝壳样品上的Sr等微量元素，也可以提高前处理的速度，为文蛤的放流效果的评估提供了一个新的前处理方法，能够快速准确的处理并测量贝壳上的微量元素，便于后期分析不同生长阶段文蛤的微量元素含量，从而进一步分析它的生活环境与生活史。
以上所述；仅为本发明较佳的具体实施方式；但本发明的保护范围并不局限于此；任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内；根据本发明的技术方案及其改进构思加以等同替换或改变；都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）分别随机选择实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤，并将实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤分别编号；
（2）将清水煮沸，放入文蛤，煮沸4-6分钟；
（3）取出文蛤，然后用解剖刀和镊子剔除贝壳内部的肌肉和结缔组织，并对文蛤贝壳进行切割，分别切取文蛤幼苗的贝壳顶端和文蛤成体的贝壳边缘，放入自封袋，编号，备用；
（4）用超声波清洗文蛤幼苗的贝壳顶端和文蛤成体的贝壳边缘9-11分钟，清洗后用超纯水冲洗；
（5）将清洗去污后的贝壳冷冻干燥24小时，研磨成粉末样品，100目过筛，制备过程应避免沾污待测元素；
（6）使用天平准确称取研磨后的粉末样品，置于消解罐中，加入纯硝酸消解，放入真空干燥箱中24小时；
（7）取出溶解好的溶液，用少量纯硝酸溶液清洗消解罐的盖子内壁、罐体内壁和滤渣至少3次，洗液一并过滤收集于50ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度；
（8）用慢速定量滤纸过滤容量瓶中的溶液，收集在离心管中备用；
（9）制备空白对比试样：不加粉末样品，直接处理纯硝酸溶液，按照步骤（6）、（7）和（8）制备空白对比试样；
（10）在电感耦合等离子质谱仪上测定微量元素。
2.根据权利要求1所述的一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：所述步骤（3）中使用的解剖刀和镊子在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗，使用烘箱烘干。
3.根据权利要求1或2所述的一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：所述步骤（3）中的切割工具使用小型手动切割机。
4.根据权利要求1所述的一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：所述步骤（6）中的天平使用百万分之一天平，消解罐使用20ml高温高压消解罐。
5.根据权利要求1或4所述的一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：所述消解罐内胆为聚四氟乙烯，使用前在酸缸中浸泡过夜，用超声清洗9-11分钟，超纯水冲洗3遍，使用烘箱烘干。
6.根据权利要求1或4所述的一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：所述步骤（6）中准确称取过筛后的贝壳粉末为1 mg，纯硝酸为5ml。
7.根据权利要求1或4所述的一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：所述步骤（6）真空干燥箱的温度调至90摄氏度。
8.根据权利要求1所述的一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：所述步骤（10）微量元素测定分析步骤为：
（1）绘制标准曲线:以空白对比试样的纯硝酸溶液为标准系列的最低浓度点，制备至少5个浓度点的标准系列，内标标准使用液通过蠕动泵在线加入，将标准系列从低浓度至高浓度依次导入雾化器进行分析，以各元素的质量浓度为横坐标，对应的响应值和内标响应值的比值为纵坐标，建立标准曲线；
（2）测定试样:每个试样测定前，用纯硝酸溶液冲洗系统直至信号降至最低，待分析信号稳定后开始测定，若试样中待测目标元素浓度超过标准曲线范围，须经稀释后重新测定，稀释液使用纯硝酸溶液；
（3）根据测定结果计算出实验室饲养的文蛤和野外捕捞的文蛤的微量元素含量。
9.根据权利要求9所述的一种利用微量元素评估文蛤放流效果的前处理方法，其特征在于：所述浓度点的标准系列为0,20ug/L，40ug/L,60ug/L,
80ug/L,100ug/L。
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