CN107002010A - 用于培养微生物和细胞种子培养物的方法和系统 - Google Patents

用于培养微生物和细胞种子培养物的方法和系统 Download PDF

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Abstract

一种用于培养微生物或细胞种子培养物的方法包含在第一止动器(14)的腔室(40)内定位第一柔性包(68)，所述第一止动器(14)紧固到混合器台(12)。在所述第一柔性包(68)的隔室(80)内生成培养物(82)，所述培养物(82)包括添加到其的生长介质和微生物或细胞起子培养物。启动所述混合器台(12)使得当所述培养物的所述微生物或细胞生长时在所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)内混合所述培养物(82)，所述培养物(82)具有小于10升的最大容积。

Description

用于培养微生物和细胞种子培养物的方法和系统
技术领域
本发明涉及用于使用一次性容器组合件培养微生物和细胞种子培养物的方法和系统。
背景技术
生物细胞在生物反应器内的生长需要对许多不同工艺参数的关键控制。举例来说，随着细胞生长，其从周围介质吸收氧气且释放CO2。必须仔细地监测和调节介质内的氧气和CO2的浓度以确保细胞的存活力和最优生长。需要仔细监测和控制的另一因素是培养物内的细胞的密度。为了确保恰当地控制所有处理参数，细胞通常在日益更大的反应器的依序平台中生长。举例来说，细胞种子培养物可一开始通过生长在定位于振动台上的小玻璃烧瓶中而开始。一旦细胞密度接近临界值，那么将培养物转移到较大台式反应器，在台式反应器中，将培养物与额外介质组合。
虽然玻璃烧瓶在使种子培养物生长过程中有用，但其具有一些缺点。举例来说，在每一次使用期间，有必要对烧瓶清洁和灭菌。这过程耗时、劳动密集，且需要使用化学品。此外，由于清洁过程中的潜在故障，这过程具有细胞培养物可被污染的增加的风险。
玻璃烧瓶也采取大面积来输送和存储，易于破坏，制造灭菌的气体和进行与其的流体连接繁琐不堪，且可能难以以灭菌方式去除样本，且不易于用多个传感器来操作。
因此，在此项技术中所需的是解决以上缺点中的全部或一些的用于生长细胞种子培养物的系统和方法。
附图说明
现在将参看附图论述本发明的各种实施例。应了解，这些图式只是描绘了本发明的典型实施例，且因此不应被考虑为限制其范围。
图1为并有本发明的特征的种子培养系统的透视图；
图2为图1中展示的系统的止动器的透视图；
图3为图2中展示的止动器的替代性实施例的透视图；
图4为无侧向侧壁地形成的止动器的另一替代性实施例的透视图；
图5为止动器的又一替代性实施例的透视图，其中前与后侧壁相互断开连接；
图6为图1中展示的系统的容器组合件的透视图；
图7为安置于图2的止动器内的容器组合件的透视图，其中容器组合件的对置突出部由扣件紧固在一起；
图8为图6中展示的容器组合件的替代性实施例的透视图；
图9为其中具有管状隔板的图6中展示的容器组合件的透视图；
图10为其中具有壁隔板的图6中展示的容器组合件的透视图；
图11为可通过配件附接到柔性包的挡扳的透视图；
图12为图11中展示的组装的挡扳和配件的透视图；
图13为具有薄膜隔板的替代性容器组合件的透视图；
图14为具有直接安装到止动器的底板上的隔板的止动器的透视图；以及
图15为具有安装于其上的多个止动器与容器组合件和耦合到其的培育箱的图1中展示的混合器台的透视图。
具体实施方式
本发明是针对用于培养微生物或细胞种子培养物的方法和系统。举例来说，本发明的方法和系统可用于从起子培养物培养细菌、真菌、藻、植物细胞、哺乳动物细胞、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、原虫、线虫和类似者过程中。
在详细描述本发明之前，应理解，本发明不限于特别举例说明的设备、系统、方法或工艺参数，当然这些设备、系统、方法或工艺参数可以变化。还应理解，本文中所使用的术语仅出于描述本发明的特定实施例的目的，且并不希望以任何方式限制本发明的范围。
在本文中所引用的所有公开、专利和专利申请(无论上文或下文)均以引用的方式全部并入本文中，引用程度如同每一个别公开、专利或专利申请具体并且个别地指示为以引用的方式并入一样。
与“包含”、“含有”或“特性在于”同义的术语“包括”为包含性的或开放式的，且不排除额外未列出的元件或方法步骤。
应注意，除非内容清晰地规定，否则如本说明书和所附权利要求书中所使用，单数形式“一个”和“所述”包括复数个提及物。因此，举例来说，对“容器组合件”的参考可包含一个、两个或更多个容器组合件。
如在说明书和所附权利要求书中使用，例如“顶部”、“底部”、“左”、“右”、“上”、“下”、“上部”、“下部”、“近”、“远”和类似者的方向术语在本文中仅用以指示相对方向且并不希望限制本发明或权利要求的范围。
在可能的情况下，元件的相似编号已经用于各图中。此外，元件和或母元件的子元件的多个实例可各自包含附加到元件编号的单独字母。举例来说，特定元件“91”的两个实例可标注为“91A”和“91B”。在那个情况下，可使用无附加字母的元件标注(例如，“91”)以大体指元件或元件中的任一者的实例。包含附加字母的元件标注(例如，“91A”)可用以指元件的具体实例或区分元件的多个使用或吸引对元件的多个使用的注意力。此外，具有附加字母的元件标注可用以指明无附加字母的元件或特征的替代性设计、结构、功能、实施和/或实施例。同样地，具有附加字母的元件标注可用以指示母元件的子元件。举例来说，元件“12”可包括子元件“12A”和“12B”。
本装置和系统的各种方面可通过描述耦合、附接和/或接合在一起的组件来说明。如本文所使用，术语“耦合”、“附接”和/或“接合”用以指示两个组件之间的直接连接，或在适当时通过插入的或中间组件到彼此的间接连接。相比之下，当组件被称作“直接耦合”、“直接附接”和/或“直接接合”到另一组件时，不存在插入的元件。此外，如本文所使用，术语“连接”、“被连接”和类似者不必暗示两个或更多个元件之间的直接接触。
可以参考一或多个示范性实施例说明本装置、系统和方法的各种方面。如本文中所使用，术语“示范性”意味着“充当实例、例子或说明”且未必应解释为相比本文中所揭示的其它实施例为优选的或有优势的。
除非另有定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属的领域的一般技术人员通常所理解相同的意义。虽然在本发明的实践中可以使用与本文中描述的方法和材料类似或等效的许多方法和材料，但是在本文中描述了优选的材料和方法。
在某些实施例中，本发明的系统(或其部分)被设计使得接触正被处理的材料的至少一些组件可在每次使用之后被丢弃。因此，本发明的一些实施例大体上消除了常规玻璃或塑料系统需要的清洁和杀菌的负担。这特征还确保在多个批次的重复处理期间可一贯地维持无菌性。鉴于前述内容和某些实施例可易于可缩放、相对低成本且易于操作的事实，本发明的一些实施例可用于先前外购此处理的多种工业和研究设施中。
图1中所描绘的是并有本发明的特征的培养系统10的一个实施例。一般来说，培养系统10包括混合器台12、安置于混合器台12上的一或多个止动器14和至少部分安置于每一止动器14内的容器组合件16。下文将更详细地论述所述元件中的每一个。
混合器台12包括基底18，其具有可移动地安装于其上的平台20。平台20具有通常扁平且安置于水平面中的顶表面22。也可使用其它轮廓、定向和配置。虽然不是必需的，但在一个实施例中，多个螺纹孔洞24均匀地形成于顶表面22的全部区域或预定义区域上。孔洞24通常具有在约0.2cm到约1cm之间的范围中的直径，其中约0.2cm到约0.5cm是更常见的。也可使用其它尺寸。如下文将更详细地论述，在一个实施例中，孔洞24用以在所要的位置将每一止动器14紧固到平台20。孔洞24的数目可取决于平台20的大小，但常见的平台20将常常包含多于20个孔洞24，且通常多于100、200或400个孔洞24。也可以使用其它数目。
混合器台12具有有助于平台20相对于基底18的迅速位移的驱动电动机或其它机构。位移可呈多种不同型样，但通常导致平台20在单个平面内移动。举例来说，平台20可水平地左右、前后或按前述组合往复移动。此外，平台20可在二维路径(例如，圆形路径、椭圆形路径或其它随机或重复路径)中移动。在其它实施例中，平台20可被配置以来回摇摆或倾斜或可被配置以在三维路径中移动。举例来说，平台20可在其同时水平移动(例如上文所论述)之时摇摆、倾斜或重复地升高与降低。鉴于前述，混合器台12可包括常规振动台或摇臂台。
图1中描绘的是用于将容器组合件16紧固到可移动平台20的止动器14A的一个实施例。如图2中所描绘，止动器14A包括具有外围边缘28的底板26。底板26具有正方形或矩形配置。然而，也可使用其它配置，包含圆形、椭圆形和其它多边形或不规则配置。从底板26直立(通常在外围边缘28处)的是多个侧壁30。在描绘的实施例中，多个侧壁30包含前侧壁30A、后侧壁30B和对置的侧向侧壁30C与30D。侧壁30被描绘为从底板26直立且也朝向底板26向内倾斜。具体地说，在底板26安置于水平位置中的情况下，侧壁30可通常按在约2°到约15°之间的范围中的角度朝向底板26向回倾斜，其中约3°到约10°更常见。也可以使用其它角度。侧壁30的倾斜并非关键，但辅助帮助将容器组合件16保留于止动器14内，且将容器组合件16维持于其优选的定向上。在替代性实施例中，侧壁30可垂直延伸或可远离底板26向外倾斜。
每一侧壁30具有在对置的侧边缘34A和B之间延伸的顶部边缘32。槽36形成于邻近侧壁30的每一对邻近侧边缘34之间。在描绘的实施例中，槽36延伸从顶部边缘32到底板26的侧边缘34的全部长度。然而，槽36不需要延伸到底板26且不需要延伸到顶部边缘32。举例来说，侧壁30可在顶部边缘32处、邻近底板26处或在其间的一或多个位置处桥接槽36，使得槽36形成一或多个有界的开口。下文将论述槽36的功能。
止动器14A具有部分界限腔室40的内部表面38。即，腔室40至少部分由底板26的内部表面和侧壁30中的每一个的内部表面界限。腔室40被定大小以收纳容器组合件16。延伸穿过每一侧壁30的是窗42，其准许容器组合件16的视觉检验且使从容器组合件16延伸的口穿过其。窗并非必要，且可加以消除。延伸穿过底板26的是多个间隔开的孔洞44。孔洞44具有与平台20上的孔洞24(图1)相当的大小和间距。因此，为了将止动器14紧固到平台20，将止动器14的底板26放置于平台20的顶表面22上使得孔洞44中的至少一些与孔洞24对准。然后一或多个扣件46穿过选择孔洞44且螺纹拧入到孔洞24内，由此将止动器14紧固到平台20。用于附接的此机构使将止动器14A移动到平台20上的任何所要的位置变得容易，且使在任何所要的位置和/或定向将任何数目个止动器14A附接到平台20变得容易。然而，在替代性实施例中，应了解，孔洞24和/或44可被夹钳、托架、皮带和准许止动器14可去除地紧固到平台20的其它类型的扣件替换。在其它实施例中，一或多个止动器14可永久地紧固到平台20，例如，通过焊接或粘合剂。本文中揭示的止动器14通常由例如不锈钢或铝的金属制成，但也可从塑料、复合物或将承受施加的力的其它材料制造。
图3中描绘的是止动器14B的替代性实施例。因此，止动器14A与14B之间的相似元件由相似参考字符识别。止动器14B大体上等同于止动器14A，除了槽36已被去除使得侧壁30A到D组合以形成围住腔室40的连续侧壁30之外。再次，在此描绘的实施例中，底板26具有自其直立的四个侧和四个侧壁30A到D。在替代性实施例中，止动器14可形成有具有自其直立的三个、五个、六个、七个、八个或更多个侧并伴有对应的数目个侧壁的底板26。侧壁可连接在一起或具有形成于其间的槽。在其它实施例中，底板26可为圆形、椭圆形或不规则的，且可因此具有自其直立的互补圆形、椭圆形或不规则的侧壁，即，单个连续侧壁。再次，所述一或多个侧壁可为垂直的或向内倾斜的。举例来说，止动器14的圆形侧壁30可形成圆锥截体、圆柱体或界限腔室40的其它三维配置。
图4中所描绘的为止动器14C的另一替代性实施例。再次，止动器14A与14C之间的相似元件由相似参考字符识别。止动器14C包含具有前壁30A和对置的后壁30B的底板26。然而，侧向侧壁30C和30D已被消除，使得腔室40仅界限于侧壁30A与30B之间。在前壁30A的顶部边缘32上凹进的是一对凹槽48A和B，其中来自容器组合件16的管可被收纳，且通过摩擦配合紧固以用于所要的对准。可形成任何所要的数目个凹槽48。从后侧壁30B的顶部边缘32直立的是台架50，其具有收纳于其上的凹槽52，用于啮合和支撑来自容器组合件16的过滤器或管。
图5中描绘的是并有本发明的特征的止动器14D的再一替代性实施例。再次，止动器14A与14D之间的相似元件由相似参考字符识别。止动器14D包含前侧壁30A和后侧壁30B。然而，与通过在其间延伸的单个连续底板26连接在一起的侧壁大不相同，每一侧壁30A和30B分别具有单独的底板部分56A和B，侧壁30A和30B从所述底板部分直立。孔洞44延伸穿过每一底板部分56以使底板部分56能够按优选的间距和定向被选择性地附接到平台20(如先前论述)，使得腔室40形成于侧壁30A与30B之间。应了解，具有连接到其上的单独的底板部分56的任何数目个单独的侧壁30可分开来安装到平台20以用于形成所要的腔室40。
关于以上止动器14A到14C中的每一个，应了解，针对一个论述的实例、材料和替代性实施例也适用于其它，且不同止动器之间的特征可混合和匹配以形成其它止动器。此外，也可使用本文中未揭示但可在平台20上支撑容器组合件16的其它止动器。
如图1中所描绘，容器组合件16A定位在止动器14A的腔室40内，使得在平台20移动时止动器14A将容器组合件16A保持在平台20上。一般来说，容器组合件16A被配置以装下包含起子培养物和生长介质的培养物。混合器台12迅速地移动容器组合件16A，使得连续地均匀混合培养物。传递到容器组合件16A内的气体与培养物相互作用以给培养物充氧。取决于应用，气体也可用以剥离CO2，调节pH值，且具有其它用途。培养物通常继续在容器组合件16A内生长，直到培养物达成所要的细胞/微生物密度。然后将培养物转移到较大容器用于后续生长和处理。
转到图6，容器组合件16A包括柔性包68，其具有上部端70到对置的下部端72。上部端70可端接于上部端壁74处，而下部端72可端接于下部端壁76处。环绕侧壁75可在端壁74与76之间延伸。柔性包68也具有界限隔室80的内部表面78。隔室80被配置以装下流体，例如，生物培养物。在描绘的实施例中，展示培养物82容纳于具有顶表面83的隔室80内。顶部空间84占据在培养物82的顶表面83上方的隔室80的其余部分。
培养物82包括起子培养物和生长介质。起子培养物包括用以培植生长介质的细胞或微生物。起子培养物可包括来自新细胞或微生物线的细胞或微生物的菌落，或可从细胞或微生物的现有培养物取得。起子培养物可处于冷冻或至少部分冷冻状态中，处于自由流动液体状态中，或处于半固体状态中(例如，在琼脂板上生长的菌落)。起子培养物通常具有在总培养物容积的约0.25％到约20％之间的范围中的容积，其中在总培养物容积的约1％到约10％、约1％到约5％或约5％到约10％之间更常见。也可以使用其它百分比。如此项技术中已知，生长介质包括可与养分、维生素和/或其它所要的组分混合以优化起子培养物的所要的生长的介质培养液。培养物82包括起子培养物与生长介质的组合且通常具有在约0.3升到约10升之间的范围中的容积，其中约1升到约7升或约1升到约5升之间更常见。培养物82的体积常常小于10升、7升、5升或3升。也可以使用其它容积。
继续图6，柔性包68由柔性不透水材料组成，例如，低密度聚乙烯或具有在约0.05mm到约5mm之间的范围中的厚度(其中约0.1mm到约1mm更常见)的其它聚合薄片或薄膜。也可使用其它厚度。所述材料可以由单层材料组成或可以包括两个或更多个层，这些层要么密封在一起要么是分离的以形成双层壁容器。在层密封在一起的情况下，材料可包括层压或挤压材料。层压材料包括两个或更多个分开形成的层，这些层随后通过粘合剂紧固在一起。可在本发明中使用的挤压材料的实例包含可购自来自Logan，Utah的LifeTechnologies Corporation的HyQ CX3-9和HyQ CX5-14薄膜。材料可被批准用于与活细胞直接接触并且能够维持溶液灭菌。在此实施例中，材料还可以例如通过电离辐射灭菌。在使用前，容器组合件16A通常密封闭合且灭菌，使得在引入种子培养物前，隔室80无菌。
在一个实施例中，柔性包68可包括二维枕头样式包。在另一实施例中，柔性包68可从按长度切割的聚合材料的连续管状挤压形成。可将端部缝合闭合，或可将面板密封于开口端上以形成三维包。三维包不仅具有环形侧壁，而且具有二维顶部端壁和二维底部端壁。三维容器可包括多个离散面板，通常是三个或更多个，且更常见的是四个或六个。每个面板大体上相同并且包括容器的侧壁、顶部端壁和底部端壁的一部分。每个面板的对应的外围边缘被缝合在一起。缝隙通常使用此项技术中已知的方法形成，例如，热能、RF能、声能或其它密封能量。
在替代性实施例中，面板可以多种不同图案形成。关于制造三维包的一个方法的进一步揭示在2002年9月19日公开的美国专利公开第US 2002-0131654 A1号中揭示，所述专利公开被以具体参考的方式全部并入本文中。
应了解，柔性包68可以制造成具有实际上任何所要的大小、形状和配置。柔性包68通常被形成而具有隔室80，所述隔室具有在0.5升与15升之间的范围中的容积，其中1升与10升之间或1升与7升之间更常见。隔室80的容积常在一开始形成于隔室80内的培养物82的容积的1.1倍到10倍之间的范围中，其中在培养物82的容积的1.5倍到6倍或2倍到4倍之间更常见。也可以使用其它容积。如下文所论述，当好氧地生长细胞/微生物时，具有大于安置于其中的培养物82的容积的隔室80的容积比当厌氧地生长时重要。当好氧地生长时，附加容积(即，顶部空间84)用于装下在培养物的混合期间给细胞/微生物充氧的气体。当厌氧地生长细胞/微生物时，不使用气体，且因此不需要大顶部空间84。在此实施例中，可消除通往气体过滤器的管和口，或可夹紧闭合通往气体过滤器的管。
虽然柔性包68可为任何形状，但在一个实施例中，柔性包68被配置以当收纳于腔室40内时抵靠止动器14的侧壁30中的一或多个搁置，由此帮助支撑容器组合件16且在使用期间将其维持于其所要的定向上。
如还在图6中展示，容器组合件16A进一步包括紧固到柔性包68且与隔室80连通的多个口86。口86可包括常规有刺的口、管口或用于将管耦合到柔性包68的任何其它类型的管状配件。在描绘的实施例中，三个口86A到C在上部端70处形成于柔性包68上，其中管88A到C分别与其耦合。管88和本文中论述的其它管可包括任何形式的管状部件，但通常包括软质管道或软管。管88可具有多种不同用途。通过实例且不受限制，管88A可用于将起子培养物和生长介质传递到隔室80内供形成培养物82。在其它实施例中，起子培养物与生长介质可组合以在柔性包68外形成培养物82且然后通过管88A传递到隔室80内。管88A也可用于从隔室80去除培养物82。管88B可用于将气体传递到隔室80内。气体通常包括空气或氧气且常与例如氮的其它气体混合。管88C可用于从隔室80去除气体，或可使气体能够通过穿过气体过滤器在周围环境与顶部空间84之间转移。在描绘的实施例中，管88A到C中的每一个分别通过口86A到C直接与顶部空间84连通。在替代性实施例中，如下文所论述，管88中的一或多个可通过口86A到C中的一或多个定位于下部端72、下部端壁76或侧壁75处直接与培养物82连通。
任何数目个管88可与柔性包68耦合，且每一管可具有一或多个不同用途。举例来说，因为柔性包68相对小且装有相对少量的流体，所以柔性包68可被手动拾取和移动，甚至当填充有所要容积的培养物时。因此，当需要测试培养物82或从柔性包68去除培养物82时，即，当培养物82已达到所要的细胞或微生物密度时，可手动提升且然后倒转柔性包68，使得培养物82传到安置于上部端70或上部端壁74处的管88中的一个，例如，管88A。针筒可与管88A耦合，且用以通过管88A抽出培养物82的样本供测试。替代地，管88A可与容器耦合且然后用以在重力流下将培养物82分配到容器内。如果只收集样本，那么容器可小于柔性包68，或如果分配供后续处理，那么大于柔性包68。此与针筒或其它容器的耦合通常发生在灭菌的罩盖与容器组合件16内，或可在此耦合和分配期间将至少柔性包68和/或管88A手动移动到灭菌的罩盖内。然而，在替代性实施例中，排泄管96可与柔性包68通过口86D在下部端72或下部端壁76处耦合。排泄管96可用于从隔室80排泄或抽取培养物82，而不需要倒转或压缩柔性包86。当容器组合件16A保持支撑于平台20上时，可使用排泄管96，或在从平台20手动去除容器组合件16A后，可使用排泄管96。同样地，管88AA可通过口86AA耦合到柔性包68的侧壁75且用于从柔性包68抽取培养物82的样本。管88AA可穿过止动器14A的窗40(图2)。在其它实施例中，汲取管可安置于隔室80内且与管88A耦合。汲取管可用于从隔室80抽取或推出培养物，例如，通过压缩柔性包68，而不需要倒转容器组合件16。
由于柔性包68内相对小容积的培养物82，因此通常不必使用安置于柔性包68的下部端72处的喷雾器来用于将气体传递到隔室80内。即，气体通常用于给培养物充氧，从培养物剥离CO2，和调节培养物的pH值。在大规模生物反应器和发酵槽中，这通常通过在容器的底部连续地传递气体来实现，使得气体以小和/或大的气泡向上穿过培养物，从而在气体进入容器中的顶部空间前实现在培养物与气体之间的质量转移。叶轮或其它混合元件通常用以同时混合培养物，使得质量转移贯穿培养物而发生。如本文中所使用，术语“喷雾器”希望大致涵盖烧结、多孔、穿孔和其它气体可渗透结构，气体可穿过所述结构以将气体的小气泡分散到液体内，并且还包含可用以将较大气泡传递到液体内的导管、管、口和其它结构。
在本发明的一个实施例中，可通过管88B或其它管88将气体馈入到隔室80内，使得气体在不穿过培养物82的情况下，直接进入到隔室80中的顶部空间84内。此外，与在培养物82的生长期期间在强迫的气体流动或正气体压力下连续地将气体传递到隔室80内大不相同，因为培养物82为相对小容积且只在相对短的时间周期内生长于容器组合件16内，所以可传递气体以在生长期开始时填充或充分填充顶部空间84，但随后在随后生长期期间在强迫的气体流动或正气体压力下不传递。通过使用混合器台12在隔室80内混合培养物82足够引起培养物82的均匀混合，和达成在顶部空间84内在培养物82与气体之间的充分质量转移，而不需要施加的强迫气体流动或正气体压力。然而，可将过滤器(例如，图8中描绘和下文论述的过滤器120)安装于管88C的端部上。在生长期期间，空气可通过穿过过滤器120在周围环境与隔室80之间自由地转移以辅助维持培养物82的所要的充氧。
因此，在于起子培养物的传递前柔性包68填充有气体的本发明的一个实施例中，培养物82可生长于柔性包68中，而不在其中的培养物82的生长期间将强迫的气流供应到柔性包68内。替代地，在于用气体填充柔性包68前将起子培养物传递到柔性包68内的情况下，可通过在小于培养物82生长于柔性包68内的总时间周期的15％和更通常小于10％、5％或1％的时间周期内在培养物82的生长期间将强迫的气流供应到柔性包68的隔室内，使培养物82生长于柔性包68中。
再次，可以上文所论述的方式达成气体与培养物82之间的充分质量转移，这是由于正被处理的培养物82的相对小容积和相对短的生长周期。因而，在本发明的一个实施例中，容器组合件16无位于柔性包68的下部端72处的任何喷雾器，喷雾器可将气泡直接分配到隔室80内的培养物82内。同样地，容器组合件16也可在隔室80内无任何混合元件，所述混合元件被配置以通过所述混合元件在隔室80内的移动而直接混合隔室80内的培养物82。此类混合元件可包含叶轮、浆、搅拌棒或可通过具有从动移动(例如，由旋转驱动轴、往复运动轴杆、磁性混合器或与混合元件啮合的其它机构驱动)而达成混合的其它元件。
避免使用喷雾器和混合元件简化了容器组合件16的制造、使用和操作，且减少制造和操作成本。举例来说，通过使所有管88在柔性包68的上部端70连接，容器组合件16A可易于定位在止动器14的腔室40内，而管88不干扰止动器14，不需要修改止动器14或混合器台12以收纳一或多个管88，且无一或多个管88纽结或夹紧的风险。
然而，在替代性实施例和使用中，如图6中所描绘，与气体管线94耦合的喷雾器92可与柔性包68在下部端72或下部端壁76处耦合，使得穿出喷雾器的气体直接进入到培养物82的一部分内，且需要所述气体在到达顶部空间84前穿过培养物82的一部分。气体可被连续地传递通过喷雾器92，或可在培养物82的生长期期间通过管88连续地直接传递到顶部空间84内。此外，独立于喷雾器92或与喷雾器92一起，具有从动移动的混合元件可安置于隔室80内供混合其中的培养物82。
在培养物于延长的时间周期内生长的大容积生物反应器和发酵槽中，至关紧要的是，连续地监测和调节培养物的化学和物理性质以维持培养物的生存力。为此，传感器(例如，经溶解氧气传感器、pH值传感器、温度传感器、二氧化碳传感器、细胞块传感器、养分传感器和类似者和前述的组合)安置于常规生物反应器和发酵槽的容器内和/或耦合到常规生物反应器和发酵槽的容器以感测其中的培养物的化学和物理性质。
相比之下，因为本发明是针对相对小且在转移到较大容器前在相对短的时间周期上生长的起子培养物的初始生长，连续地监测培养物的物理和化学性质并非那么至关紧要。即，所属领域的技术人员可安全地维持初始起动培养物的所要的物理和化学性质，而不必通过传感器连续地监测性质。在需要一些监测的情况下，可取得培养物82的周期性样本且测量所要的性质。
因而，在本发明的一个实施例中，容器组合件16A可无直接测量隔室80内的培养物82的物理或化学性质的任何传感器。因此，容器组合件16A可无安置于容器组合件16A或柔性包68内、耦合到容器组合件16A或柔性包68或与容器组合件16A或柔性包68交互的任何经溶解氧气传感器、pH值传感器、温度传感器、质量传感器和/或养分传感器来感测隔室80内的培养物的对应的性质。系统10的这种配置简化了系统的操作且使成本最少化。然而，在其它实施例中，以上传感器中的一或多个可与柔性包68耦合或另外与柔性包68交互以检测隔室80内的培养物的对应的性质。传感器可通过安装于柔性包68上的一或多个口连接到柔性包68。可通过口将传感器安装到柔性包68的方式的实例揭示于2009年2月10日发布的美国专利第7,487,688号和2011年3月8日发布的美国专利第7,901,934号中，所述专利被以具体引用的方式并入本文中。
本发明的一个实施例的独特特征中的一个为，因为容器组合件16从聚合薄片和软质管道形成，所以容器组合件16制造起来容易且廉价。因而，容器组合件16可在单次使用后被丢弃。这种一次性避免了需要清洁和再杀菌，且由此使任何污染风险最小化。这与必须在每次使用之间清洁和灭菌的常规玻璃烧瓶大不相同。此外，与在输送和存储期间占据大容积且易于破坏的常规玻璃和塑料烧瓶大不相同，可将容器组合件16倒下来供输送和存储以便占据最小空间且存在最小的破坏风险。
在本发明的一个实施例中，提供用于将容器组合件16可去除地紧固到止动器14的构件。通过实例且不受限制，如也在图6中描绘，容器组合件16A进一步包括从柔性包68向外突出的多个突出部98。突出部98可从与柔性包68相同的材料(即，聚合薄片或薄膜)制造，且可通过使一端焊接或另外紧固于形成柔性包68的邻接薄片的边缘之间来附接到柔性包68。可将任何所要的数目个突出部98附接到柔性包68。举例来说，容器组合件68可具有自其突出的至少两个、四个、六个、八个、十个或更多个突出部98。
在本发明的一个实施例中，提供用于将突出部98紧固到止动器14的构件，所述构件包括用于将容器组合件16可去除地紧固到止动器14的构件的部分。通过实例且不受限制，展示每一突片98具有延伸穿过其的开口100。返回到图2，从前侧壁30A的外部表面向外突出的是多个扣件102。具体地说，扣件102A和B邻近侧边缘34A安置，而扣件102C和D沿着对置的侧边缘34B安置。对应的扣件也从后侧壁30B的外部表面突出。
在使用期间，如图1中所描绘，容器组合件16A收纳于腔室40内。突出部98A和B穿过槽36A且分别折叠于扣件102A和102B上，使得扣件102A和102B穿过突出部98A和B中的对应的开口100。同样地，突出部98C和D穿过槽36B且分别折叠于扣件102C和102D上，使得扣件102C和102D收纳于其开口100内。位于柔性包68的对置侧上的四个突出部同样地穿过止动器14A上的对应的槽，且啮合从后侧壁30B突出的扣件102。作为突出部98与扣件102之间啮合的结果，容器组合件16A/柔性包68紧固到止动器14。止动器14与容器组合件16A之间的此紧固帮助防止容器组合件16A在混合器台12的移动期间与止动器14A分开，且帮助防止容器组合件16A旋转离开在止动器14A的腔室40内的恰当对准。此外，将容器组合件16A紧固到止动器14A帮助优化在混合器台12的移动期间在容器组合件16A内的培养物82的混合。
应注意，突出部98A和C位于柔性包68的上部端70处，而突出部98B和D位于柔性包68的下部端72处。定位和使用在上部端70处的突出部98(如与仅下部端72相反)优化了容器组合件16的止动。替代地，对于较小柔性包68(即，通常6升或更小)，位于描绘的突出部98A与B之间的中间位置处的一个突出部98和位于突出部98C与98D之间的中间位置处的一个突出部可足以紧固柔性包68的那些垂直拐角。单个突出部98可同样地用于其它拐角上。
在描绘的实施例中，扣件102包括线性杆103，其具有安置于其自由端处的放大的圆头104。在替代性实施例中，扣件102可呈卡钩、弯管、弯曲臂或被配置以收纳于开口100内的其它突起的形状。在再其它实施例中，扣件102可呈穿过开口100且与侧壁30螺纹连接或以其它方式啮合的螺杆、螺栓、栓钉、销或类似者的形式。在又其它实施例中，可消除开口100，且扣件可包括夹钳、楔、夹子或直接啮合突出部100的其它类型的扣件。在其它实施例中，例如锁扣、维可牢尼龙搭扣(即，卡钩与环圈)、搭扣、按钮、弹簧、结、线和类似者的其它常规扣件可用以将突出部100连接到止动器14，或用以不使用突出部100将容器组合件16连接到止动器14。通过形成突出部98可穿过的槽26，容器组合件16A可在上部端70和下部端72两者处紧固到止动器14。然而，在不提供槽26的替代性实施例中，例如，在图3中描绘的止动器14B中，可邻近侧壁30的顶部边缘32安置扣件102。举例来说，将扣件102A和102B安置于邻近顶部边缘32的前壁30A的外部表面上。在柔性包68的上部端70处的突出部98可然后在顶部边缘32上通过，且然后折叠于扣件102A和102B上使得扣件收纳于每一突出部98的开口100内。再次，可使用如先前论述的其它扣件来将突出部98连接到止动器14B。
返回到图4中描绘的止动器14C，与扣件102呈圆柱形栓钉的形式在不相同，止动器14具有呈通过切割通过前侧壁30A和后侧壁30B的U形槽104形成的圆突起的形式的扣件102。具体地说，扣件102A和E邻近侧边缘34A形成，而扣件102G和H邻近侧边缘34B形成。在容器组合件16A安置于隔室40内的情况下，突出部98A和B(图6)可围绕侧边缘34A折叠和操纵，使得扣件102E和F滑动到突出部98A和B上的开口100内。同样地，突出部98C和D(图6)可围绕侧边缘34B折叠，使得扣件102G和H滑动到突出部98C和D的开口100内。容器组合件16A的背面上的突出部98类似地附接到后侧壁30B上的止动器102。在此配置中，突出部98将容器组合件16A紧固到止动器14C，使得不需要在前侧壁30A与后侧壁30B之间延伸的侧向侧壁。再次，应了解，实际上可收纳于突出部98的开口100内的任何类型的突起都可用作扣件102。同样地，可使用其它类型的连接将容器组合件16A紧固到止动器14C。
在如图7中所描绘的另一实施例中，在突出部98A和B穿过槽36A且突出部98C和D穿过槽36B的情况下，扣件1021在前侧壁30A的外侧上在突出部98A与C之间延伸，而扣件102J在前侧壁30A的外侧上在突出部98B与D之间延伸。虽然扣件102I和J不紧固到止动器14A，但将突出部98连接在一起将容器组合件16A紧固到止动器14A。在描绘的实施例中，扣件102I包括紧固到突出部98A的第一皮带190和紧固到突出部98C的第二皮带191。皮带190和191由扣件192(例如，卡钩和环圈(维可牢尼龙搭扣)、搭扣、卡钩、锁扣、夹钳或类似者)可去除地紧固在一起。在另一实施例中，皮带190和191可形成循环通过突出部98A和C的一个连续皮带，其中对置端由扣件192连接在一起。为了说明再一对比实例，扣件102J包括弹簧194，其具有连接到突出部98B和D的对置端。所属领域的技术人员将了解，可使用多种不同类型的扣件(例如，皮带、束带、线和类似者)替换将突出部98紧固在一起的扣件102H和/或I。
扣件102I和J也可用以将在后侧壁30B的外侧上的对置突出部98紧固在一起。扣件102I和J特别好地适合于将容器组合件16连接到分别在图4和图5中描绘的止动器14C和14D，其中所述止动器不包含侧向侧壁30C和D。
图8中描绘的是并有本发明的特征的容器组合件16B的替代性实施例。容器组合件16A与16B之间的相似元件由相似参考字符识别。容器组合件16B包括描绘处于倒下的位置中的柔性包68。柔性包68包括顶部薄片122、具有互补配置的对置底部薄片124和两个折叠的侧薄片125和126(呈沿着其对置侧安置于薄片122与124之间的角撑的形式)。沿着外围边缘将薄片焊接在一起，使得柔性包68可扩大。管88A通过口86E与柔性包68耦合。管88A具有形成于其端部上的Y连接器108，其将管110A和B耦合到管88A。管110A具有夹钳112A，其可打开和闭合以选择性地打开和关闭延伸穿过管110A的流体路径。安装于管110A的端部上的是配件114，其可用以选择性地与用于将流体传递到柔性包68内或从柔性包68分配流体的单独的容器耦合。可去除的盖116A安置于配件114上以在已将容器组合件16B灭菌作为充分组装的系统后维持配件114无菌。在使用期间，去除用于耦合到所要的容器或流体源的灭菌的罩盖内的盖116A。
管110B也具有安装于其上的夹钳112B，用于选择性地打开和关闭延伸穿过管110B的路径。配件118安置于管110B的端部上，且用于与气体源耦合以用于将气体传递到柔性包68内。如同配件114，盖116B可去除地安置于配件118上。夹钳112C安置于管88F上，且同样地用于选择性地打开和关闭通过管88F的过道。灭菌气体过滤器120安置于管88F的端部上。如先前论述，在一个使用实施例中，气体源只用以用气体填充顶部空间84(图6)且然后在培养物82的生长期期间关断。在此情况下，气体过滤器120通过允许气体逸出来防止在初始填充期间的柔性包68的过加压，并且还通过允许气体穿过过滤器120而准许气体在环境与顶部空间84之间的自由流动。然而，过滤器120防止环境中的任何污染物通过管88F传到容器68内。因而，过滤器120可包括气体灭菌过滤器，例如，具有为2微米或更小的最大孔径的过滤器。
在替代使用方法中，气体源可用以在培养物82的生长期期间将连续或大体上连续的气流传递到顶部空间84。举例来说，可在大于培养物82在柔性包68内生长的总时间周期的70％且更通常地大于80％或90％的时间周期内，在培养物82的生长期间将气体传递到柔性包68的隔室内。随着气体压力堆积于柔性包68内，气体可穿过管88F且离开过滤器120到周围环境内。过滤器120因此使气体能够安全地从柔性包68逸出，而不准许环境中的污染物通过管88F传到容器68内。
可去除的盖116C也安置于过滤器120上，在使用前将所述盖去除。鉴于前述，应了解，可在每一容器组合件16B上使用多种不同的管配置和配件。在此实施例中，应注意，无管或喷雾器安置于柔性容器68的下部端处。
在本发明的一个实施例中，可与容器组合件16相关联地使用隔板以改善隔室80内的培养物的混合和改善容器组合件16内的培养物82与气体的质量转移。举例来说，图9中描绘的是具有安置于其中的隔板130A的容器组合件16A。一般来说，本文中论述的隔板130在下部端72处且更常见地在下部端壁76上紧固到柔性包68。然而，隔板130也可安装于侧壁75上。隔板130可通过粘合剂、焊接、机械连接或使用其它常规技术来附接。在描绘的实施例中，挡扳130A包括圆柱形管，其具有界限在对置的端面136与138之间延伸的过道134的内部表面132。虽然将容器组合件16A展示为具有安置于隔室80内的四个隔板，但应了解，可使用一个、两个、三个、五个、六个、七个或更多个或前述数目中的至少每一个的隔板。隔板130部分帮助改善在培养物82正通过混合器台12的移动而移动时在柔性包68内的培养物82(图6)的混合。隔板130帮助确保培养物82被均匀地混合且达成气体与培养物82之间的所要的质量转移。
隔板130可随机地安置于隔室80内或放置于预定位置处。举例来说，在图6中描绘的实施例中，隔板130被定位使得隔板130的中心纵轴垂直于柔性包86的邻近侧壁延伸。此定位帮助增大当流体在隔板130上和周围流动时的扰流。在其它实施例中，隔板130的中心纵轴可被安置以形成与柔性包86的邻近侧壁的内部角度，所述角度在45°与90°之间的范围中，且更常见地，在60°与90°或75°与90°之间的范围中。在另一实施例中，隔板可被安置使得每一挡扳130的中心纵轴被安置以便与柔性包的下部端壁76上的共同半径相切。半径可基于居中地位于下部端壁76上的点。举例来说，在图10中描绘和下文论述的实施例中，隔板130B的纵轴与半径R相切地安置。此定向帮助使正朝向柔性包86的侧流出的流体改方向。在其它实施例中，隔板130不需要为线性，而可弯曲、折弯或具有不规则图案。
如先前所提到，应了解，隔板130可为将改善培养物的混合的任何所要的配置。举例来说，图10中描绘的是安置在柔性包68的下部端72或下部端壁76处的隔板130B。与隔板130A大不相同，隔板130B包括以先前论述的方式中的一或多个紧固到柔性包68的基底144和自其直立的壁146。在描绘的实施例中，壁146具有矩形配置。然而，在其它实施例中，壁146可为正方形、半圆形、多边形、不规则或任何其它所要的配置。关于用于挡扳130B的数目、定位、使用和类似者的替代性实施例与如先前关于挡扳130A所论述相同。
如先前所提到，可使用多种不同技术将隔板130附接到柔性包68。在一个实施例中，如图11中所描绘，配件152一开始附接到柔性包68。配件152包括细长杆154、围住杆154的第一端且从其径向向外突出的凸缘156和围住杆154的对置端且从其径向向外突出的锥形倒钩158。如同其它常规口，可通过使杆152穿过下部端壁72上的开口160且然后将凸缘56焊接或以其它方式紧固到下部端壁72的底表面来将配件152附接到柔性包68的下部端壁72。因此，杆154向上突出到柔性包68的隔室80内。
在此实施例中，挡扳130C包括基底162，其具有自其直立的壁146。基底162包括具有底表面164的环管，所述底表面具有形成于其上的开口166。开口166被配置以按锁定啮合收纳杆154和倒钩158。即，倒钩158可在开口166内形成摩擦配合，或可与开口166内的肋或其它特征啮合，使得挡扳130C锁定到配件152，如图12中所描绘。倒钩158为可形成于杆152上用于啮合基底162的锁定特征的一个实例。在其它实施例中，倒钩158可由例如肋、旋钮、卡扣和从杆154延伸且啮合基底162的其它突起的其它锁定特征替换。
图13中描绘的是关于具有安置于其中的柔性隔板130D的容器组合件16A的另一实施例。每一挡扳130D包括聚合薄膜的薄片，例如，用以制造柔性包68的相同薄膜或只由例如HDPE(高密度聚乙烯)的一种材料组成的薄膜。每一挡扳130D具有紧固到下部端壁76的下部端200、紧固到上部端壁74的上部端202、紧固到侧壁75的外侧边缘204和自由安置于柔性包68的隔室80内的内侧边缘206。可通过焊接、粘合剂或类似者将隔板130D紧固到柔性包68。随着平台20(图1)移动，隔板130D帮助均匀地混合隔室80内的培养物82。
与将隔板130定位在柔性包68的隔室80内大不相同，隔板130也可紧固到止动器14的底板26或直接到混合器台12的平台20上，使得一旦容器组合件16收纳于止动器14的腔室40内，那么柔性包68坐落于隔板130之上。举例来说，如图14中所描绘，隔板130B安置于止动器14C的底板26上。再次，隔板130可为多种不同配置，且可按多种不同数目和不同定向使用，各如上文所论述。作为柔性包68坐落于隔板130B上的结果，下部端壁76在隔板130B的顶部上向上挠曲，由此有效地充当柔性包68内的隔板。应了解，隔板130可位于先前关于止动器14论述的底板26中的任一个上，或可直接安装到止动器壁之间的平台20上，如图5中所描绘。
如图15中所描绘，因为容器组合件16相对小，所以应了解，多个不同止动器14和对应的容器组合件16可同时安装于混合器台12的平台20上。每一容器组合件16可然后在其中同时培养单独的培养物。在描绘的实施例中，四个止动器14和四个对应的容器组合件16安置于平台20上。在其它实施例中，2、3、5、6、7或更多个或前述数目中的至少每一个的止动器14和容器组合件16可安置于平台20上用于同时培养单独的培养物。
图15还展示培育箱172可与混合器台12一起操作，用于控制容器组合件16内的培养物82的温度。培育箱172包括界限壳体176的罩盖174，和用于加热和/或冷却壳体176或壳体176内的物件的温度调节源178。温度调节源178可包括辐射热源、加热的强迫空气、电加热元件、加热的流体系统或可用以使容器组合件16内的培养物82变暖的任何其它类型的加热系统。通常，热源178将使壳体176内的空气变暖，这又将使培养物82变暖。温度调节源178也可包括空调、冷却流体系统、散热片或可用以冷却容器组合件16内的培养物82的其它系统。通常通过冷却壳体176内的空气来实现冷却。
罩盖174可铰接地安装或另外可移动地安装到混合器台12，使得可将其从其中可接取容器组合件16的打开位置和其中罩盖174覆盖止动器14和容器组合件16的闭合位置移动。在处于闭合位置中时，与温度调节源178耦合的控制器可用以调节壳体176内的温度。
在一个典型的操作方法期间，将所要的数目个止动器14安装于混合器台12的平台20上，随后，容器组合件16收纳于每一止动器14的腔室40内且紧固到每一止动器14。通过管88将生长介质分配到每一容器组合件16内。也通过管88将气体传递到每一容器组合件16内，以便填充顶部空间84。罩盖174通常闭合且使用培育箱172使生长介质变暖到所要的温度。在需要的情况下，可在将容器组合件16定位于腔室40内前将生长介质和/或气体传递到容器组合件16内。一旦达到所要的温度，那么将起子培养物分配到每一容器组合件16的生长介质内。启动混合器台12，使得平台20移动，由此混合每一容器组合件16内的培养物使得连续地均匀地混合培养物，且因此通过与顶部空间84中的气体的质量转移给培养物充分地充氧。
允许培养物在这些条件下生长，直到符合预定条件。举例来说，可允许培养物在预定时间周期内生长，或可允许培养物生长直到达到预定细胞/微生物密度。通过周期性地从每一容器组合件取得培养物的样本(例如，通过使用先前论述的方法中的一个)和测试所述样本，可确定密度。举例来说，可通过在容器组合件16的上部端或侧处的管88或通过在容器组合件16的下部端处的管96提取出样本。在一个方法中，通过首先从止动器14去除容器组合件16来取得样本。可然后将容器组合件16手动放置于灭菌的罩盖内，和/或倒转，随后，从容器组合件16分配或抽出样本。然后将容器组合件16返回到止动器14供进一步处理。在其它实施例中，可在容器组合件16保持搁置于平台20上时从容器组合件16抽取样本。在此实施例中，可在取得样本前对混合器台12去启动，且然后在已取得样本后再启动。
也可测试样本以确定本文中论述的其它物理和/或化学性质。基于此测试的结果，可将需要的组分添加到培养物或操作条件，例如，可更改温度、混合速率或气体含量。与取得样本大不相同或除了取得样本之外，可将传感器安装于容器组合件16上或另外与容器组合件16相关联以用于连续地监测培养物的各种或选择的化学和/或物理性质。
基于本文中论述的容积和条件，包括微生物培养物的培养物82将通常在达到所要的密度前在容器组合件16中生长范围从约1小时到约48小时的时间周期，其中约4小时到约24小时或约4小时到约16小时或约4小时到约8小时更常见。对于哺乳动物或昆虫细胞培养物，培养物82将通常在达到所要的细胞培养物密度前在容器组合件16中生长范围从约1天到约14天的时间周期，其中约2天到约3天或约3天到约5天更常见。伴随养分馈入，可达成较长的培养时间。培养物82可在以上时间周期内完全生长和从容器组合件16去除，例如，通过转移到另一容器。还可以使用其它时间周期。
一旦满足预定条件，便关断混合器台12。每一容器组合件16可然后从对应的止动器14手动去除，且然后通过管88中的一个耦合到次级容器。在需要进一步处理的情况下，次级容器通常大于容器组合件16/柔性包68，且形成生物反应器或发酵槽的一部分。然后可通过管88或96将来自容器组合件16的培养物82分配(例如，通过重力流或抽吸)到次级容器内。在需要的情况下，可在分配前将容器组合件16倒转。然后可抛弃容器组合件16且重复所述过程。也可如本文中先前所论述来执行用于本发明的其它替代性实施例和步骤。
在不脱离本发明的精神或必要特性的情况下，可以其它具体形式体现本发明。所描述的实施例在所有方面应视为仅具说明性而非限制性。因此，本发明的范围由所附权利要求书而不是由前述描述指示。在权利要求书等效物的含义和范围内的所有改变均被涵盖在权利要求书的范围内。

Claims (24)

1.一种用于培养微生物或细胞种子培养物的方法，包括：
将第一柔性包(68)定位于第一止动器(14)的腔室(40)内，所述第一止动器(14)紧固到可移动平台(20)；
在所述第一柔性包(68)的隔室(80)内生成培养物(82)，所述培养物(82)包括添加到其的生长介质和微生物或细胞起子培养物；以及
移动所述平台(20)使得所述培养物(82)在所述培养物的所述微生物或细胞生长时在所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)内混合，所述培养物具有小于10升的最大容积。
2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括将所述第一柔性包(68)紧固到所述第一止动器(14)。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一止动器(14)包括从所述平台(20)直立的一或多个侧壁(30A到30D)，所述一或多个侧壁(30A到30D)至少部分界限所述腔室(40)，所述方法进一步包括将从所述柔性包(68)突出的突出部(98A到98D)紧固到所述第一止动器(14)的所述一或多个侧壁(30A到30D)。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一止动器(14)包括从所述平台(20)直立的一或多个侧壁(30A到30D)，所述一或多个侧壁(30A到30D)具有至少部分界限所述腔室(40)的内部表面(38)和对置的外部表面，所述方法进一步包括将从所述柔性包(68)突出的两个突出部紧固在一起使得所述两个突出部邻近所述侧壁(30A到30D)中的一个的所述外部表面安置。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一止动器(14)包括从所述平台(20)直立的两个侧壁，其中槽(36)形成于其间，所述方法进一步包括：
使从所述第一柔性包(68)突出的突出部(98A到98B)穿过所述槽(36)；以及
将所述突出部(98A到98D)紧固到所述第一止动器(14)的所述侧壁(30A到30D)中的一个。
6.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：
将第二柔性包(68)定位在第二止动器的腔室(40)内，所述第二止动器(14)紧固到所述平台(20)；以及
在所述第二柔性包(68)的隔室(80)内生成微生物或细胞培养物(82)，使得当移动所述平台(20)时，同时在所述第一柔性包(68)和所述第二柔性包(68)内混合所述培养物(82)。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养物(82)具有小于7升的最大容积。
8.根据权利要求1所述的方法，其中移动所述平台(20)的步骤包括在水平路径中连续地移动所述平台(20)。
9.根据权利要求1所述的方法，进一步包括启动安置所述第一柔性包(68)和所述第一止动器(14)的培育箱(172)。
10.根据权利要求1所述的方法，进一步包括当所述培养物在所述培养物(82)正在所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)内生长的全部时间期间处于所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)内时，不测量所述培养物(82)的pH值或经溶解氧气含量。
11.根据权利要求1所述的方法，进一步包括在所述培养物(82)在所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)中的生长期间不将强迫的气流供应到所述隔室内，或在小于所述培养物(82)正在所述第一柔性包(68)的隔室(80)内生长的总时间周期的10％的时间周期内，在所述培养物(82)在所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)中的生长期间不将强迫的气流供应到所述隔室内。
12.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：
在所述培养物(82)的部分生长后从所述第一止动器(14)去除所述第一柔性包(68)；以及
当将所述第一柔性包(68)从所述第一止动器(14)去除时从其取得所述培养物(82)的样本；以及
将所述第一柔性包(68)返回到第一止动器(14)的所述腔室(40)供所述培养物(82)的进一步生长。
13.根据权利要求12所述的方法，其中取得所述样本的步骤包括在取得所述样本时至少部分创造所述第一柔性包(68)。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)无任何可移动混合元件。
15.根据权利要求1所述的方法，进一步包括在处于1小时与24小时之间的范围中的时间周期内生长所述培养物(82)并从所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)去除所述培养物(82)。
16.一种用于培养(10)微生物或细胞种子培养物的系统，包括：
混合器台(12)，其具有可移动平台(20)；
第一止动器(14)，其紧固到所述可移动平台(20)，所述第一止动器(14)至少部分界限腔室(40)；以及
第一柔性包(68)，其至少部分安置于所述第一止动器(14)的所述腔室(40)内，所述第一柔性包(68)界限具有小于10升的容积的隔室(80)。
17.根据权利要求16所述的系统，进一步包括安置于所述柔性包(68)的所述隔室(80)内的一或多个隔板(130)。
18.根据权利要求16所述的系统，进一步包括多个隔板(130)，其紧固到所述第一柔性包(68)的内部表面(132)以便至少部分安置于其所述隔室(80)内。
19.根据权利要求16所述的系统，进一步包括安置于所述第一止动器(14)的所述腔室(40)内但在所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)之外的一或多个隔板(130)，所述第一柔性包(68)坐落在所述一或多个隔板(130)上以便修改所述第一柔性包(68)的配置。
20.根据权利要求16所述的系统，其中无可移动混合元件安置于所述第一柔性包(68)的所述隔室(80)内。
21.根据权利要求16所述的系统，进一步包括：
所述止动器(14)，其包括具有面向所述隔室(80)的内部表面(38)和对置的外部表面的直立侧壁(30A到30D)，扣件(46)紧固到所述外部表面；以及
至少一个突出部(98)，其从所述第一柔性包(68)突出，所述突出部(98)可去除地紧固到所述扣件(46)。
22.根据权利要求16所述的系统，进一步包括：
所述止动器(14)，其包括具有面向所述腔室(40)的内部表面(38)和对置的外部表面的一对直立侧壁(30A到30D)，所述一对邻近的侧壁(30A到30D)具有形成于其间的槽(36)，扣件(46)安置于所述一对直立的侧壁(30A到30D)中的至少一个的所述外部表面上；以及
突出部(98)，其从所述第一柔性包(68)突出，突出部穿过槽(36)且紧固到所述扣件(46)。
23.根据权利要求16所述的系统，进一步包括：
第二止动器(14)，其紧固到所述可移动平台(20)，所述第二止动器(14)至少部分界限腔室(40)；以及
第二柔性包(68)，其至少部分安置于所述第二止动器(14)的所述腔室(40)内。
24.根据权利要求16所述的系统，其中所述第一止动器(14)和所述第一柔性包(68)安置于培育箱(172)的罩盖(174)内。
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