CN106978401A - 抗ros1蛋白单克隆抗体及其用途 - Google Patents

抗ros1蛋白单克隆抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN106978401A
CN106978401A CN201611134220.9A CN201611134220A CN106978401A CN 106978401 A CN106978401 A CN 106978401A CN 201611134220 A CN201611134220 A CN 201611134220A CN 106978401 A CN106978401 A CN 106978401A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ros1
monoclonal antibodies
hybridoma
protein monoclonal
ros1 protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201611134220.9A
Other languages
English (en)
Inventor
何为无
马东晖
陈才伟
魏海涛
王广力
褚伯阳
叶露
闫文广
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
WUXI ORIGENE BIO-TECHNOLOGY CO LTD
Original Assignee
WUXI ORIGENE BIO-TECHNOLOGY CO LTD
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by WUXI ORIGENE BIO-TECHNOLOGY CO LTD filed Critical WUXI ORIGENE BIO-TECHNOLOGY CO LTD
Priority to CN201611134220.9A priority Critical patent/CN106978401A/zh
Publication of CN106978401A publication Critical patent/CN106978401A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
    • G01N2333/9121—Phosphotransferases in general with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. general tyrosine, serine or threonine kinases

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及生物技术领域，公开了抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗ROS1单克隆抗体和应用。本发明所述抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞保藏编号为CGMCC NO：12288。本发明提供的杂交瘤细胞可稳定分泌产生抗ROS1蛋白单克隆抗体，且与ROS1蛋白特异性结合，显著提高了ROS1蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性，适用于非小细胞肺癌中ROS1的检测。

Description

抗ROS1蛋白单克隆抗体及其用途
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗ROS1单克隆抗体和应用。
背景技术
ROS1是最先在UR2鸟肉瘤病毒中被发现的具有独特致癌作用的病毒原癌基因，而人类ROS1基因是胰岛素受体家族的一种跨膜络氨酸激酶，定位于第6号染色体q21区，分子量为259kDa。ROS1基因含有44个外显子，编码2347aa，由胞内酪氨酸激酶活性区(C末端464aa)、跨膜区(1862-1882aa)及胞外区(N端1-1861aa,含多个糖基化位点)三部分组成。
ROS1融合基因是新发现的NSCLC一个分子亚型，癌症患者常见于年龄偏小，不吸烟，病理类型为腺癌的肺癌，在NSCLC突变基因中占2.4％，它的发现使其成为NSCLC患者有效的治疗靶点，其抑制剂克唑替尼(Crizotinib)抗肿瘤临床活性的证实，进一步推动了晚期NSCLC个体化治疗的发展。ROS1基因重排位点主要在32-36外显子，ROS1基因发生重排时保留胞内酪氨酸激酶区和跨膜区，丢失N末端糖基化胞外区。迄今为止，共发现9种不同的ROS1融合基因型(图2)[4]，不同的ROS1融合基因变体具有不同的恶性转化和致瘤能力。
目前在临床病理学上通常用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)病理实验检测肿瘤细胞中ROS1的表达状况。其实验方法的核心为特异性结合ROS1的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性和灵敏度较高的针对ROS1蛋白的单克隆抗体具有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗ROS1单克隆抗体和应用，提高所述杂交瘤细胞产生的单抗与ROS1蛋白的结合特异性并应用到相关产品的制备中。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞，保藏编号为CGMCC NO：12288。
本发明所述抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞由以下方法制备获得：
(1)重组表达载体的构建：根据ROS1 ORF核苷酸序列(ROS1 ORF核苷酸序列如SEQID NO.1所示，7041bp；ROS1氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示)设计引物进行PCR扩增，基因两侧分别引入限制性内切酶位点SgfI和MluI，插入表达载体pCMV6-Entry(货号PS100001，Origene公司)，构建ROS1重组表达质粒RC220652；
(2)ROS1重组蛋白的表达与纯化：将ROS1重组表达质粒转化HEK293T，裂解离心取上清，DDK亲和层析柱纯化，获得纯化的ROS1重组蛋白；
(3)单克隆抗体的筛选与制备：采用上述纯化的ROS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞进行融合，有限稀释法获得单克隆，ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，获得能分泌抗ROS1特异性抗体的杂交瘤细胞株；通过无血清培养基制备抗体，通过亲和层析柱纯化获得ROS1单克隆抗体。通过免疫组化实验验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。
经过上述方法制备后，筛选出能够稳定分泌抗ROS1单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为OTI1A1，亚型鉴定为IgG2a，并于2016年4月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO：12288。
同时，本发明还提供一种抗ROS1蛋白单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞分泌产生。制备抗ROS1蛋白单克隆抗体可采用本技术领域常规方法，如通过无血清培养基制备抗体，通过亲和层析柱纯化获得ROS1单克隆抗体。
本发明所述保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞染色体稳定，其分泌产生的抗ROS1蛋白单克隆抗体为IgG2a型，效价较高。所述单克隆抗体的免疫组化检测结果显示，其能够特异性识别非小细胞肺癌组织中的ROS1蛋白，同时细胞化学染色检测结果显示，其能够特异性识别非小细胞肺癌肺癌细胞系HCC78中的ROS1蛋白。
因此，本发明还提供了保藏编号为CGMCC NO：12288的的杂交瘤细胞在制备抗ROS1蛋白单克隆抗体中的应用以及所分泌的抗ROS1蛋白单克隆抗体在制备检测ROS1蛋白的免疫检测产品中的应用。
作为优选，所述免疫检测产品为试剂盒、试纸或芯片。
本发明还提供一种免疫组化检测的试剂盒，包括保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞分泌产生的抗ROS1蛋白单克隆抗体。所述免疫检测试剂盒可检测肿瘤组织中ROS1的表达状况。
此外，本发明还提供保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞分泌产生的抗ROS1蛋白单克隆抗体在制备标记肿瘤组织及其微环境中淋巴细胞的试剂盒中的应用。
作为优选，所述肿瘤包括非小细胞肺癌。
本发明提供的杂交瘤细胞可稳定分泌产生抗ROS1蛋白单克隆抗体，而与ROS1融合蛋白阳性细胞系HCC78中的ROS1特异性结合，显著提高了ROS1蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性，适用于非小细胞肺癌中ROS1的检测。
生物保藏信息说明
OTI1A1，分类命名为程序性死亡分子1(ROS1)单克隆抗体杂交瘤细胞株，于2016年4月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO：12288。
附图说明
图1所示为实施例1中克隆位点图；
图2所示为实施例2中ROS1蛋白Western blot检测结果图，以anti-DDK检测ROS1蛋白在HEK293T细胞中的表达，其中泳道L为转染空载体的HEK293T细胞裂解液为抗原的检测结果、泳道R为转染pCMV6-ROS1质粒的HEK293T细胞裂解液抗原的检测结果；
图3所示为实施例2中ROS1蛋白SDS-PAGE结果图；
图4所示实施例4非小细胞肺癌组织免疫组化检测结果图(一抗为OTI1A1分泌产生的ROS1单抗，1:5000)；
图5所示实施例5非小细胞肺癌细胞系HCC78细胞化学染色检测结果图(一抗为OTI1A1分泌产生的ROS1单抗，1:500)。
具体实施方式：
本发明公开了抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗ROS1单克隆抗体和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
下面就本发明提供的抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗ROS1单克隆抗体和应用做进一步说明。
实施例1：ROS1重组表达质粒的构建
以ROS1的cDNA序列合成全长基因，设计两条引物并分别引入酶切位点SgfI和MluI，克隆入表达载体pCMV6-Entry，建立ROS1全长蛋白的重组真核表达质粒。克隆位点设计如图1所示。
实施例2：ROS1重组蛋白的表达与纯化
1、转染HEK293T细胞：HEK293T细胞以1:3传至培养皿中继续培养；取7.5mLDMEM(无血清及抗生素)至50mL管中，加入300μLPEI MegaTran 1.0混匀；加入75μg ROS1重组质粒DNA至混匀液中，混匀并静置30分钟；分别取515μL至各培养皿中于37℃5％CO2培养箱中培养。转染24小时后，每皿细胞添加25μL2M丁酸钠至终浓度5mM。
2、裂解细胞：转染48小时后，进行细胞裂解。吸去培养基，加入1mLPBS进行漂洗，吸去PBS。加入1mL裂解缓冲液，使用前加入蛋白酶抑制剂PI和PMSF。置于冰盒中在摇床上振荡，收集所有培养皿中得裂解液，4度离心，收集上清。
3、DDK亲和层析柱纯化：以0.45μM，33mm PVDF膜滤器过滤离心后的裂解液上清并转入15mL管，加入混合好的Beads 1mL，封口后放入360度混匀器中，于4℃结合2小时；取出15mL管，将裂解液倒入BIO-RAD层析柱中，并接住穿透液，滴尽后穿透液取样WB检测，见图2；以裂解缓冲液冲洗柱料1-2次，滴尽后再用TBST冲洗Beads 3次，滴尽后用0.1M GlycinepH3.5洗脱，第一次200μL，滴尽不收集，第二、三次各500μL，第三次250μL，收集至一个1.5mLTube中，并迅速加入NaH2PO4(pH＝11.0)中和至pH7.0左右，每管加入甘油至终浓度为10％，Tween-80至终浓度为0.1％。纯化后的ROS1蛋白用SDS-PAGE鉴定，见图3。
由图2结果可见，标签抗体anti-DDK能检测到转染pCMV6-ROS1的重组质粒的HEK293T细胞裂解液中ROS1重组蛋白(R)，由于ROS1是I型跨膜糖蛋白，因此其蛋大小为45～55kDa之间多条带，与预期相符，表明ROS1重组蛋白正确表达。
由图3结果可见，经过DDK亲和层析柱纯化，Glycine洗脱可得到高纯度的ROS1重组蛋白。
实施例3：抗ROS1单克隆抗体杂交瘤细胞及其单克隆抗体的制备筛选
根据标准方法用重组产生的纯化的全长ROS1重组蛋白(以下简称为ROS1抗原)用于对B6/C57小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)进行免疫。具体方法如下：
1、动物免疫：经过纯化的ROS1抗原以完全弗氏佐剂乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫6-8周龄BALB/c小鼠，免疫剂量为50μg/只，间隔两周后进行第二次免疫，以不完全弗氏佐剂乳化，免疫剂量为50μg/只。免疫两次后取尾血以ELISA法梯度稀释测定血清效价；根据结果确定是否加强免疫，选取抗体效价最高的小鼠进行细胞融合。
2、细胞融合：骨髓瘤细胞采用BALB/c来源的sp2/0，融合时处于对数生长期；取已免疫小鼠脾脏，制成淋巴细胞单细胞悬液；小鼠脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞以1:5-1:10混合，滴加37℃的50％PEG(PH 8.0)1mL，加入不完全培养基及其余终止液，离心弃上清后加入HAT培养基悬浮混匀，MC定容到50mL，分装到3.5cm培养皿中，放于湿盒中，置于37℃、5％CO2恒温培养箱中进行培养。
3、筛选和克隆：融合7-10天内挑选细胞克隆，使用纯化的ROS1重组蛋白进行ELISA测试。标记细胞株号。对阳性孔细胞进行有限稀释，每次有限稀释后5-6天测定ELISA值，挑取OD280阳性值较高的单克隆孔进行有限稀释，直至ELISA测定96孔板全板结果为阳性。挑取阳性值高的单克隆定株。其对应融合板细胞株为OTI1A1。
4、细胞上清单抗的制备与纯化：将细胞株OTI1A1用含15％血清的DMEM培养基培养于10cm培养皿中培养，扩培至约4×107个时，800rpm离心5min，弃上清并将细胞转移到2L转瓶中，加入无血清培养基，使细胞密度约为3×105个/ml。继续培养1～2周后，当细胞死亡率达到60％-70％时(此时细胞密度大概为1-2×106个/ml)，收取细胞悬液6000rpm高速离心20min，取上清，亲和层析法进行上清纯化，根据抗体亚型选择相应柱料，细胞株OTI1A1产生的单抗亚型为IgG2a，采用protein G进行纯化。纯化后的单抗浓度测定、分装(100uL/管，浓度为1mg/ml)、保存在4-8℃。
实施例4：OTI1A1分泌产生的单克隆抗体为一抗的免疫组化检测
(1)、实验方法：
1、分别取2例非小细胞肺癌组织进行石蜡包埋，使用SAKURA组织切片机进行切片，组织厚度为4μm。
2、脱蜡与水化：分析纯二甲苯3×10min，无水乙醇3×10min，95％乙醇5min，85％乙醇5min，75％乙醇5min，去离子水浸泡3min×3次
3、加入抗原修复液(1mM EDTA,pH8.5的10mM Tris-HCL缓冲液)高压锅高压热修复2.5min，待高压锅温度降至约90℃时，打开高压锅，取出标本，然后自然冷却至室温。去离子水浸泡3min×3次。
4、使用3％过氧化氢灭活组织内源性过氧化物酶，室温静置10min。去离子水浸泡5min×3次。
5、加上封闭液(PBS+5％脱脂奶粉+5％正常山羊血清)，37℃孵育60min。
6、去除封闭液，勿冲洗，加入ROS1单抗(OTI1A1分泌产生)，稀释比：1:150，使用封闭液进行稀释。置于湿盒中，37℃孵育60min。PBST(0.1％Tween-20)洗涤2次，每次洗涤5min。PBST(0.02％Tween-20)洗涤1次，每次洗涤5min。
7、滴加聚合物HRP染色试剂盒中试剂PV6000(Catlog No.PV-6000)，37℃孵育15分钟。使用PBS洗涤3次，每次5min。
8、应用DAB溶液(中杉金桥ZLI-9019)显色，显色3～10min。蒸馏水洗涤。
9、苏木精复染细胞核2min，蒸馏水漂洗，1％盐酸分化。蒸馏水漂洗3次，室温静置1min。
10、脱水和透明：75％乙醇5min，100％乙醇5min x 3次，85％乙醇5min，95％乙醇5min，100％乙醇3×5min；二甲苯3×5min，中性树胶封片。
11、镜检，见图4。
(2)、实验结果：
由图4结果可见，ROS1蛋白在非小细胞肺癌ROS1阳性病例1#的肿瘤细胞中呈特异性细胞质表达，而在ROS1阴性病例2#中无任何着色，如图箭头所示肿瘤细胞。表明本发明所述单抗可与肿瘤细胞中ROS1蛋白特异性结合。
实施例5：OTI1A1分泌产生的单克隆抗体的特异性细胞化学染色检测
人非小细胞肺癌细胞系HCC78为文献报道的能高表达ROS1融合蛋白的细胞系,HELA为ROS1阴性细胞系。我们通过细胞化学染色检测抗体OTI1A1在HCC78和HELA细胞系上的染色，基本过程如下：
1、准备细胞：准备HCC78和HELA细胞(293T，ATCC Catlog No.CRL-3216)和稳定表达LGR5的293T细胞系(LGR5/293T)，于含5％CO2的37℃细胞培养箱中培养。
2、固定细胞：加入75％丙酮溶液于这2种细胞系中，4度孵育30min,固定细胞；
3、封闭细胞：PBST(0.05％TritonX-100)清洗上述细胞后，加入含4％BSA的PBS溶液封闭细胞，4度2h。
4、孵育抗体：将ROS1鼠单抗OTI1A1(工作浓度为1ug/ml)分别与以上2种细胞于4度共孵育1小时，设置空白对照(不加一抗，仅加PBS)。
5、孵育二抗：将上述的细胞-抗体混合液用PBS洗涤3次，；然后加入驴抗鼠Alexa488标记二抗(Jackson,Catlog No.715-545-151)200ul/孔，4度共孵育1小时。
6、洗涤后显微镜观察分析。
7、根据阴性，阳性，空白对照来进行结果分析和判定。
结果见图5。
图5结果显示，在HCC78上仅有ROS1蛋白与OTI1A1分泌产生的单克隆抗体结合，呈现棕褐色染色信号；而HELA上不见任何信号。表明本发明所述单抗可与ROS1蛋白特异性结合。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
<110> 无锡傲锐东源生物科技有限公司
<120> 抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗ROS1单克隆抗体和应用
<210> 1
<211> 864
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ATGAAGAACATTTACTGTCTTATTCCGAAGCTTGTCAATTTTGCAACTCTTGGCTGCCTATGGATTTCTGTGGTGCAGTG
TACAGTTTTAAATAGCTGCCTAAAGTCGTGTGTAACTAATCTGGGCCAGCAGCTTGACCTTGGCACACCACATAATCTGA
GTGAACCGTGTATCCAAGGATGTCACTTTTGGAACTCTGTAGATCAGAAAAACTGTGCTTTAAAGTGTCGGGAGTCGTGT
GAGGTTGGCTGTAGCAGCGCGGAAGGTGCATATGAAGAGGAAGTACTGGAAAATGCAGACCTACCAACTGCTCCCTTTGC
TTCTTCCATTGGAAGCCACAATATGACATTACGATGGAAATCTGCAAACTTCTCTGGAGTAAAATACATCATTCAGTGGA
AATATGCACAACTTCTGGGAAGCTGGACTTATACTAAGACTGTGTCCAGACCGTCCTATGTGGTCAAGCCCCTGCACCCC
TTCACTGAGTACATTTTCCGAGTGGTTTGGATCTTCACAGCGCAGCTGCAGCTCTACTCCCCTCCAAGTCCCAGTTACAG
GACTCATCCTCATGGAGTTCCTGAAACTGCACCTTTGATTAGGAATATTGAGAGCTCAAGTCCCGACACTGTGGAAGTCA
GCTGGGATCCACCTCAATTCCCAGGTGGACCTATTTTGGGTTATAACTTAAGGCTGATCAGCAAAAATCAAAAATTAGAT
GCAGGGACACAGAGAACCAGTTTCCAGTTTTACTCCACTTTACCAAATACTATCTACAGGTTTTCTATTGCAGCAGTAAA
TGAAGTTGGTGAGGGTCCAGAAGCAGAATCTAGTATTACCACTTCATCTTCAGCAGTTCAACAAGAGGAACAGTGGCTCT
TTTTATCCAGAAAAACTTCTCTAAGAAAGAGATCTTTAAAACATTTAGTAGATGAAGCACATTGCCTTCGGTTGGATGCT
ATATACCATAATATTACAGGAATATCTGTTGATGTCCACCAGCAAATTGTTTATTTCTCTGAAGGAACTCTCATATGGGC
GAAGAAGGCTGCCAACATGTCTGATGTATCTGACCTGAGAATTTTTTACAGAGGTTCAGGATTAATTTCTTCTATCTCCA
TAGATTGGCTTTATCAAAGAATGTATTTCATCATGGATGAACTGGTATGTGTCTGTGATTTAGAGAACTGCTCAAACATC
GAGGAAATTACTCCACCCTCTATTAGTGCACCTCAAAAAATTGTGGCTGATTCATACAATGGGTATGTCTTTTACCTCCT
GAGAGATGGCATTTATAGAGCAGACCTTCCTGTACCATCTGGCCGGTGTGCAGAAGCTGTGCGTATTGTGGAGAGTTGCA
CGTTAAAGGACTTTGCAATCAAGCCACAAGCCAAGCGAATCATTTACTTCAATGACACTGCCCAAGTCTTCATGTCAACA
TTTCTGGATGGCTCTGCTTCCCATCTCATCCTACCTCGCATCCCCTTTGCTGATGTGAAAAGTTTTGCTTGTGAAAACAA
TGACTTTCTTGTCACAGATGGCAAGGTCATTTTCCAACAGGATGCTTTGTCTTTTAATGAATTCATCGTGGGATGTGACC
TGAGTCACATAGAAGAATTTGGGTTTGGTAACTTGGTCATCTTTGGCTCATCCTCCCAGCTGCACCCTCTGCCAGGCCGC
CCGCAGGAGCTTTCGGTGCTGTTTGGCTCTCACCAGGCTCTTGTTCAATGGAAGCCTCCTGCCCTTGCCATAGGAGCCAA
TGTCATCCTGATCAGTGATATTATTGAACTCTTTGAATTAGGCCCTTCTGCCTGGCAGAACTGGACCTATGAGGTGAAAG
TATCCACCCAAGACCCTCCTGAAGTCACTCATATTTTCTTGAACATAAGTGGAACCATGCTGAATGTACCTGAGCTGCAG
AGTGCTATGAAATACAAGGTTTCTGTGAGAGCAAGTTCTCCAAAGAGGCCAGGCCCCTGGTCAGAGCCCTCAGTGGGTAC
TACCCTGGTGCCAGCTAGTGAACCACCATTTATCATGGCTGTGAAAGAAGATGGGCTTTGGAGTAAACCATTAAATAGCT
TTGGCCCAGGAGAGTTCTTATCCTCTGATATAGGAAATGTGTCAGACATGGATTGGTATAACAACAGCCTCTACTACAGT
GACACGAAAGGCGACGTTTTTGTGTGGCTGCTGAATGGGACGGATATCTCAGAGAATTATCACCTACCCAGCATTGCAGG
AGCAGGGGCTTTAGCTTTTGAGTGGCTGGGTCACTTTCTCTACTGGGCTGGAAAGACATATGTGATACAAAGGCAGTCTG
TGTTGACGGGACACACAGACATTGTTACCCACGTGAAGCTATTGGTGAATGACATGGTGGTGGATTCAGTTGGTGGATAT
CTCTACTGGACCACACTCTATTCAGTGGAAAGCACCAGACTAAATGGGGAAAGTTCCCTTGTACTACAGACACAGCCTTG
GTTTTCTGGGAAAAAGGTAATTGCTCTAACTTTAGACCTCAGTGATGGGCTCCTGTATTGGTTGGTTCAAGACAGTCAAT
GTATTCACCTGTACACAGCTGTTCTTCGGGGACAGAGCACTGGGGATACCACCATCACAGAATTTGCAGCCTGGAGTACT
TCTGAAATTTCCCAGAATGCACTGATGTACTATAGTGGTCGGCTGTTCTGGATCAATGGCTTTAGGATTATCACAACTCA
AGAAATAGGTCAGAAAACCAGTGTCTCTGTTTTGGAACCAGCCAGATTTAATCAGTTCACAATTATTCAGACATCCCTTA
AGCCCCTGCCAGGGAACTTTTCCTTTACCCCTAAGGTTATTCCAGATTCTGTTCAAGAGTCTTCATTTAGGATTGAAGGA
AATGCTTCAAGTTTTCAAATCCTGTGGAATGGTCCCCCTGCGGTAGACTGGGGTGTAGTTTTCTACAGTGTAGAATTTAG
TGCTCATTCTAAGTTCTTGGCTAGTGAACAACACTCTTTACCTGTATTTACTGTGGAAGGACTGGAACCTTATGCCTTAT
TTAATCTTTCTGTCACTCCTTATACCTACTGGGGAAAGGGCCCCAAAACATCTCTGTCACTTCGAGCACCTGAAACAGTT
CCATCAGCACCAGAGAACCCCAGAATATTTATATTACCAAGTGGAAAATGCTGCAACAAGAATGAAGTTGTGGTGGAATT
TAGGTGGAACAAACCTAAGCATGAAAATGGGGTGTTAACAAAATTTGAAATTTTCTACAATATATCCAATCAAAGTATTA
CAAACAAAACATGTGAAGACTGGATTGCTGTCAATGTCACTCCCTCAGTGATGTCTTTTCAACTTGAAGGCATGAGTCCC
AGATGCTTTATTGCCTTCCAGGTTAGGGCCTTTACATCTAAGGGGCCAGGACCATATGCTGACGTTGTAAAGTCTACAAC
ATCAGAAATCAACCCATTTCCTCACCTCATAACTCTTCTTGGTAACAAGATAGTTTTTTTAGATATGGATCAAAATCAAG
TTGTGTGGACGTTTTCAGCAGAAAGAGTTATCAGTGCCGTTTGCTACACAGCTGATAATGAGATGGGATATTATGCTGAA
GGGGACTCACTCTTTCTTCTGCACTTGCACAATCGCTCTAGCTCTGAGCTTTTCCAAGATTCACTGGTTTTTGATATCAC
AGTTATTACAATTGACTGGATTTCAAGGCACCTCTACTTTGCACTGAAAGAATCACAAAATGGAATGCAAGTATTTGATG
TTGATCTTGAACACAAGGTGAAATATCCCAGAGAGGTGAAGATTCACAATAGGAATTCAACAATAATTTCTTTTTCTGTA
TATCCTCTTTTAAGTCGCTTGTATTGGACAGAAGTTTCCAATTTTGGCTACCAGATGTTCTACTACAGTATTATCAGTCA
CACCTTGCACCGAATTCTGCAACCCACAGCTACAAACCAACAAAACAAAAGGAATCAATGTTCTTGTAATGTGACTGAAT
TTGAGTTAAGTGGAGCAATGGCTATTGATACCTCTAACCTAGAGAAACCATTGATATACTTTGCCAAAGCACAAGAGATC
TGGGCAATGGATCTGGAAGGCTGTCAGTGTTGGAGAGTTATCACAGTACCTGCTATGCTCGCAGGAAAAACCCTTGTTAG
CTTAACTGTGGATGGAGATCTTATATACTGGATCATCACAGCAAAGGACAGCACACAGATTTATCAGGCAAAGAAAGGAA
ATGGGGCCATCGTTTCCCAGGTGAAGGCCCTAAGGAGTAGGCATATCTTGGCTTACAGTTCAGTTATGCAGCCTTTTCCA
GATAAAGCGTTTCTGTCTCTAGCTTCAGACACTGTGGAACCAACTATACTTAATGCCACTAACACTAGCCTCACAATCAG
ATTACCTCTGGCCAAGACAAACCTCACATGGTATGGCATCACCAGCCCTACTCCAACATACCTGGTTTATTATGCAGAAG
TTAATGACAGGAAAAACAGCTCTGACTTGAAATATAGAATTCTGGAATTTCAGGACAGTATAGCTCTTATTGAAGATTTA
CAACCATTTTCAACATACATGATACAGATAGCTGTAAAAAATTATTATTCAGATCCTTTGGAACATTTACCACCAGGAAA
AGAGATTTGGGGAAAAACTAAAAATGGAGTACCAGAGGCAGTGCAGCTCATTAATACAACTGTGCGGTCAGACACCAGCC
TCATTATATCTTGGAGAGAATCTCACAAGCCAAATGGACCTAAAGAATCAGTCCGTTATCAGTTGGCAATCTCACACCTG
GCCCTAATTCCTGAAACTCCTCTAAGACAAAGTGAATTTCCAAATGGAAGGCTCACTCTCCTTGTTACTAGACTGTCTGG
TGGAAATATTTATGTGTTAAAGGTTCTTGCCTGCCACTCTGAGGAAATGTGGTGTACAGAGAGTCATCCTGTCACTGTGG
AAATGTTTAACACACCAGAGAAACCTTATTCCTTGGTTCCAGAGAACACTAGTTTGCAATTTAATTGGAAGGCTCCATTG
AATGTTAACCTCATCAGATTTTGGGTTGAGCTACAGAAGTGGAAATACAATGAGTTTTACCATGTTAAAACTTCATGCAG
CCAAGGTCCTGCTTATGTCTGTAATATCACAAATCTACAACCTTATACTTCATATAATGTCAGAGTAGTGGTGGTTTATA
AGACGGGAGAAAATAGCACCTCACTTCCAGAAAGCTTTAAGACAAAAGCTGGAGTCCCAAATAAACCAGGCATTCCCAAA
TTACTAGAAGGGAGTAAAAATTCAATACAGTGGGAGAAAGCTGAAGATAATGGATGTAGAATTACATACTATATCCTTGA
GATAAGAAAGAGCACTTCAAATAATTTACAGAACCAGAATTTAAGGTGGAAGATGACATTTAATGGATCCTGCAGTAGTG
TTTGCACATGGAAGTCCAAAAACCTGAAAGGAATATTTCAGTTCAGAGTAGTAGCTGCAAATAATCTAGGGTTTGGTGAA
TATAGTGGAATCAGTGAGAATATTATATTAGTTGGAGATGATTTTTGGATACCAGAAACAAGTTTCATACTTACTATTAT
AGTTGGAATATTTCTGGTTGTTACAATCCCACTGACCTTTGTCTGGCATAGAAGATTAAAGAATCAAAAAAGTGCCAAGG
AAGGGGTGACAGTGCTTATAAACGAAGACAAAGAGTTGGCTGAGCTGCGAGGTCTGGCAGCCGGAGTAGGCCTGGCTAAT
GCCTGCTATGCAATACATACTCTTCCAACCCAAGAGGAGATTGAAAATCTTCCTGCCTTCCCTCGGGAAAAACTGACTCT
GCGTCTCTTGCTGGGAAGTGGAGCCTTTGGAGAAGTGTATGAAGGAACAGCAGTGGACATCTTAGGAGTTGGAAGTGGAG
AAATCAAAGTAGCAGTGAAGACTTTGAAGAAGGGTTCCACAGACCAGGAGAAGATTGAATTCCTGAAGGAGGCACATCTG
ATGAGCAAATTTAATCATCCCAACATTCTGAAGCAGCTTGGAGTTTGTCTGCTGAATGAACCCCAATACATTATCCTGGA
ACTGATGGAGGGAGGAGACCTTCTTACTTATTTGCGTAAAGCCCGGATGGCAACGTTTTATGGTCCTTTACTCACCTTGG
TTGACCTTGTAGACCTGTGTGTAGATATTTCAAAAGGCTGTGTCTACTTGGAACGGATGCATTTCATTCACAGGGATCTG
GCAGCTAGAAATTGCCTTGTTTCCGTGAAAGACTATACCAGTCCACGGATAGTGAAGATTGGAGACTTTGGACTCGCCAG
AGACATCTATAAAAATGATTACTATAGAAAGAGAGGGGAAGGCCTGCTCCCAGTTCGGTGGATGGCTCCAGAAAGTTTGA
TGGATGGAATCTTCACTACTCAATCTGATGTATGGTCTTTTGGAATTCTGATTTGGGAGATTTTAACTCTTGGTCATCAG
CCTTATCCAGCTCATTCCAACCTTGATGTGTTAAACTATGTGCAAACAGGAGGGAGACTGGAGCCACCAAGAAATTGTCC
TGATGATCTGTGGAATTTAATGACCCAGTGCTGGGCTCAAGAACCCGACCAAAGACCTACTTTTCATAGAATTCAGGACC
AACTTCAGTTATTCAGAAATTTTTTCTTAAATAGCATTTATAAGTCCAGAGATGAAGCAAACAACAGTGGAGTCATAAAT
GAAAGCTTTGAAGGTGAAGATGGCGATGTGATTTGTTTGAATTCAGATGACATTATGCCAGTTGCTTTAATGGAAACGAA
GAACCGAGAAGGGTTAAACTATATGGTACTTGCTACAGAATGTGGCCAAGGTGAAGAAAAGTCTGAGGGTCCTCTAGGCT
CCCAGGAATCTGAATCTTGTGGTCTGAGGAAAGAAGAGAAGGAACCACATGCAGACAAAGATTTCTGCCAAGAAAAACAA
GTGGCTTACTGCCCTTCTGGCAAGCCTGAAGGCCTGAACTATGCCTGTCTCACTCACAGTGGATATGGAGATGGGTCTGAT
7041
<210> 2
<211> 288
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
MetLysAsnIleTyrCysLeuIleProLysLeuValAsnPheAlaThrLeuGlyCys
LeuTrpIleSerValValGlnCysThrValLeuAsnSerCysLeuLysSerCysVal
ThrAsnLeuGlyGlnGlnLeuAspLeuGlyThrProHisAsnLeuSerGluPro
CysIleGlnGlyCysHisPheTrpAsnSerValAspGlnLysAsnCysAlaLeuLysCysArgGluSerCysGluValGlyCysSerSerAlaGluGlyAlaTyrGluGluGluVal
LeuGluAsnAlaAspLeuProThrAlaProPheAlaSerSerIleGlySerHisAsn
MetThrLeuArgTrpLysSerAlaAsnPheSerGlyValLysTyrIleIleGlnTrpLysTyrAlaGlnLeuLeuGlySerTrpThrTyrThrLysThrValSerArgProSerTyrValVal
LysProLeuHisProPheThrGluTyrIlePheArgValValTrpIlePheThrAlaGlnLeuGlnLeuTyrSerProProSerProSerTyrArgThrHisProHisGlyValProGluThrAlaProLeuIleArgAsnIleGluSerSerSerProAspThrValGluValSerTrpAspPro
ProGlnPheProGlyGlyProIleLeuGlyTyrAsnLeuArgLeuIleSerLysAsn
GlnLysLeuAspAlaGlyThrGlnArgThrSerPheGlnPheTyrSerThrLeuProAsnThrIleTyrArgPheSerIleAlaAlaValAsnGluValGlyGluGlyProGluAlaGluSerSerIleThrThrSerSerSerAlaValGlnGlnGluGluGlnTrpLeuPheLeuSerArg
LysThrSerLeuArgLysArgSerLeuLysHisLeuValAspGluAlaHisCysLeuArgLeuAspAlaIleTyrHisAsnIleThrGlyIleSerValAspValHisGlnGlnIleVal
TyrPheSerGluGlyThrLeuIleTrpAlaLysLysAlaAlaAsnMetSerAspVal
SerAspLeuArgIlePheTyrArgGlySerGlyLeuIleSerSerIleSerIleAspTrp
LeuTyrGlnArgMetTyrPheIleMetAspGluLeuValCysValCysAspLeuGluAsnCysSerAsnIleGluGluIleThrProProSerIleSerAlaProGlnLysIleValAla
AspSerTyrAsnGlyTyrValPheTyrLeuLeuArgAspGlyIleTyrArgAlaAspLeuProValProSerGlyArgCysAlaGluAlaValArgIleValGluSerCysThrLeuLysAspPheAlaIleLysProGlnAlaLysArgIleIleTyrPheAsnAspThrAlaGlnValPheMetSerThrPheLeuAspGlySerAlaSerHisLeuIleLeuProArgIleProPheAlaAspValLysSerPheAlaCysGluAsnAsnAspPheLeuValThrAspGlyLysValIlePhe
GlnGlnAspAlaLeuSerPheAsnGluPheIleValGlyCysAspLeuSerHisIleGlu
GluPheGlyPheGlyAsnLeuValIlePheGlySerSerSerGlnLeuHisProLeuProGlyArgProGlnGluLeuSerValLeuPheGlySerHisGlnAlaLeuValGlnTrpLysPro
ProAlaLeuAlaIleGlyAlaAsnValIleLeuIleSerAspIleIleGluLeuPheGluLeu
GlyProSerAlaTrpGlnAsnTrpThrTyrGluValLysValSerThrGlnAspProProGluValThrHisIlePheLeuAsnIleSerGlyThrMetLeuAsnValProGluLeuGlnSerAlaMetLysTyrLysValSerValArgAlaSerSerProLysArgProGlyProTrpSerGluPro
SerValGlyThrThrLeuValProAlaSerGluProProPheIleMetAlaValLysGluAspGlyLeuTrpSerLysProLeuAsnSerPheGlyProGlyGluPheLeuSerSerAspIle
GlyAsnValSerAspMetAspTrpTyrAsnAsnSerLeuTyrTyrSerAspThrLysGly
AspValPheValTrpLeuLeuAsnGlyThrAspIleSerGluAsnTyrHisLeuProSerIleAlaGlyAlaGlyAlaLeuAlaPheGluTrpLeuGlyHisPheLeuTyrTrpAlaGlyLys
ThrTyrValIleGlnArgGlnSerValLeuThrGlyHisThrAspIleValThrHisValLys
LeuLeuValAsnAspMetValValAspSerValGlyGlyTyrLeuTyrTrpThrThrLeu
TyrSerValGluSerThrArgLeuAsnGlyGluSerSerLeuValLeuGlnThrGlnProTrpPheSerGlyLysLysValIleAlaLeuThrLeuAspLeuSerAspGlyLeuLeuTyrTrp
LeuValGlnAspSerGlnCysIleHisLeuTyrThrAlaValLeuArgGlyGlnSerThrGlyAspThrThrIleThrGluPheAlaAlaTrpSerThrSerGluIleSerGlnAsnAlaLeuMetTyrTyrSerGlyArgLeuPheTrpIleAsnGlyPheArgIleIleThrThrGlnGluIleGly
GlnLysThrSerValSerValLeuGluProAlaArgPheAsnGlnPheThrIleIleGlnThrSerLeuLysProLeuProGlyAsnPheSerPheThrProLysValIleProAspSerValGln
GluSerSerPheArgIleGluGlyAsnAlaSerSerPheGlnIleLeuTrpAsnGlyProProAlaValAspTrpGlyValValPheTyrSerValGluPheSerAlaHisSerLysPheLeuAlaSerGluGlnHisSerLeuProValPheThrValGluGlyLeuGluProTyrAlaLeuPhe
AsnLeuSerValThrProTyrThrTyrTrpGlyLysGlyProLysThrSerLeuSerLeuArgAlaProGluThrValProSerAlaProGluAsnProArgIlePheIleLeuProSerGlyLys
CysCysAsnLysAsnGluValValValGluPheArgTrpAsnLysProLysHisGluAsn
GlyValLeuThrLysPheGluIlePheTyrAsnIleSerAsnGlnSerIleThrAsnLysThr
CysGluAspTrpIleAlaValAsnValThrProSerValMetSerPheGlnLeuGluGly
MetSerProArgCysPheIleAlaPheGlnValArgAlaPheThrSerLysGlyProGlyProTyrAlaAspValValLysSerThrThrSerGluIleAsnProPheProHisLeuIleThrLeu
LeuGlyAsnLysIleValPheLeuAspMetAspGlnAsnGlnValValTrpThrPheSer
AlaGluArgValIleSerAlaValCysTyrThrAlaAspAsnGluMetGlyTyrTyrAlaGluGlyAspSerLeuPheLeuLeuHisLeuHisAsnArgSerSerSerGluLeuPheGlnAsp
SerLeuValPheAspIleThrValIleThrIleAspTrpIleSerArgHisLeuTyrPheAla
LeuLysGluSerGlnAsnGlyMetGlnValPheAspValAspLeuGluHisLysValLys
TyrProArgGluValLysIleHisAsnArgAsnSerThrIleIleSerPheSerValTyrPro
LeuLeuSerArgLeuTyrTrpThrGluValSerAsnPheGlyTyrGlnMetPheTyrTyr
SerIleIleSerHisThrLeuHisArgIleLeuGlnProThrAlaThrAsnGlnGlnAsnLys
ArgAsnGlnCysSerCysAsnValThrGluPheGluLeuSerGlyAlaMetAlaIleAsp
ThrSerAsnLeuGluLysProLeuIleTyrPheAlaLysAlaGlnGluIleTrpAlaMetAspLeuGluGlyCysGlnCysTrpArgValIleThrValProAlaMetLeuAlaGlyLysThr
LeuValSerLeuThrValAspGlyAspLeuIleTyrTrpIleIleThrAlaLysAspSerThr
GlnIleTyrGlnAlaLysLysGlyAsnGlyAlaIleValSerGlnValLysAlaLeuArgSerArgHisIleLeuAlaTyrSerSerValMetGlnProPheProAspLysAlaPheLeuSerLeuAlaSerAspThrValGluProThrIleLeuAsnAlaThrAsnThrSerLeuThrIleArgLeuProLeuAlaLysThrAsnLeuThrTrpTyrGlyIleThrSer
ProThrProThrTyrLeuValTyrTyrAlaGluValAsnAspArgLysAsnSerSerAspLeuLysTyrArgIleLeu
GluPheGlnAspSerIleAlaLeuIleGluAspLeuGlnProPheSerThrTyrMetIleGlnIleAlaValLysAsn
TyrTyrSerAspProLeuGluHisLeuProProGlyLysGluIleTrpGlyLysThrLysAsnGlyValProGluAla
ValGlnLeuIleAsnThrThrValArgSerAspThrSerLeuIleIleSerTrpArgGluSerHisLysProAsnGly
ProLysGluSerValArgTyrGlnLeuAlaIleSerHisLeuAlaLeuIleProGluThrProLeuArgGlnSerGlu
PheProAsnGlyArgLeuThrLeuLeuValThrArgLeuSerGlyGlyAsnIleTyrValLeuLysValLeuAlaCys
HisSerGluGluMetTrpCysThrGluSerHisProValThrValGluMetPheAsnThrProGluLysProTyrSer
LeuValProGluAsnThrSerLeuGlnPheAsnTrpLysAlaProLeuAsnValAsnLeuIleArgPheTrpValGlu
LeuGlnLysTrpLysTyrAsnGluPheTyrHisValLysThrSerCysSerGlnGlyProAlaTyrValCysAsnIle
ThrAsnLeuGlnProTyrThrSerTyrAsnValArgValValValValTyrLysThrGlyGluAsnSerThrSerLeu
ProGluSerPheLysThrLysAlaGlyValProAsnLysProGlyIleProLysLeuLeuGluGlySerLysAsnSer
IleGlnTrpGluLysAlaGluAspAsnGlyCysArgIleThrTyrTyrIleLeuGluIleArgLysSerThrSerAsn
AsnLeuGlnAsnGlnAsnLeuArgTrpLysMetThrPheAsnGlySerCysSerSerValCysThrTrpLysSerLys
AsnLeuLysGlyIlePheGlnPheArgValValAlaAlaAsnAsnLeuGlyPheGlyGluTyrSerGlyIleSerGlu
AsnIleIleLeuValGlyAspAspPheTrpIleProGluThrSerPheIleLeuThrIleIleValGlyIlePheLeu
ValValThrIleProLeuThrPheValTrpHisArgArgLeuLysAsnGlnLysSerAlaLysGluGlyValThrVal
LeuIleAsnGluAspLysGluLeuAlaGluLeuArgGlyLeuAlaAlaGlyValGlyLeuAlaAsnAlaCysTyrAla
IleHisThrLeuProThrGlnGluGluIleGluAsnLeuProAlaPheProArgGluLysLeuThrLeuArgLeuLeu
LeuGlySerGlyAlaPheGlyGluValTyrGluGlyThrAlaValAspIleLeuGlyValGlySerGlyGluIleLys
ValAlaValLysThrLeuLysLysGlySerThrAspGlnGluLysIleGluPheLeuLysGluAlaHisLeuMetSer
LysPheAsnHisProAsnIleLeuLysGlnLeuGlyValCysLeuLeuAsnGluProGlnTyrIleIleLeuGluLeu
MetGluGlyGlyAspLeuLeuThrTyrLeuArgLysAlaArgMetAlaThrPheTyrGlyProLeuLeuThrLeuVal
AspLeuValAspLeuCysValAspIleSerLysGlyCysValTyrLeuGluArgMetHisPheIleHisArgAspLeu
AlaAlaArgAsnCysLeuValSerValLysAspTyrThrSerProArgIleValLysIleGlyAspPheGlyLeuAla
ArgAspIleTyrLysAsnAspTyrTyrArgLysArgGlyGluGlyLeuLeuProValArgTrpMetAlaProGluSer
LeuMetAspGlyIlePheThrThrGlnSerAspValTrpSerPheGlyIleLeuIleTrpGluIleLeuThrLeuGly
HisGlnProTyrProAlaHisSerAsnLeuAspValLeuAsnTyrValGlnThrGlyGlyArgLeuGluProProArg
AsnCysProAspAspLeuTrpAsnLeuMetThrGlnCysTrpAlaGlnGluProAspGlnArgProThrPheHisArg
IleGlnAspGlnLeuGlnLeuPheArgAsnPhePheLeuAsnSerIleTyrLysSerArgAspGluAlaAsnAsnSer
GlyValIleAsnGluSerPheGluGlyGluAspGlyAspValIleCysLeuAsnSerAspAspIleMetProValAla
LeuMetGluThrLysAsnArgGluGlyLeuAsnTyrMetValLeuAlaThrGluCysGlyGlnGlyGluGluLysSer
GluGlyProLeuGlySerGlnGluSerGluSerCysGlyLeuArgLysGluGluLysGluProHisAlaAspLysAsp
PheCysGlnGluLysGlnValAlaTyrCysProSerGlyLysProGluGlyLeuAsnTyrAlaCysLeuThrHisSer
GlyTyrGlyAspGlySerAsp

Claims (8)

1.抗ROS1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞，其特征在于，保藏编号为CGMCC NO：12288。
2.保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞在制备抗ROS1蛋白单克隆抗体中的应用。
3.抗ROS1蛋白单克隆抗体，其特征在于，由保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞分泌产生。
4.保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞分泌产生的抗ROS1蛋白单克隆抗体在制备检测ROS1蛋白的免疫检测产品中的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述免疫检测产品为试剂盒、试纸或芯片。
6.一种免疫组化检测的试剂盒，其特征在于，包括保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞分泌产生的抗ROS1蛋白单克隆抗体。
7.保藏编号为CGMCC NO：12288的杂交瘤细胞分泌产生的抗ROS1蛋白单克隆抗体在制备标记肿瘤组织的试剂盒中的应用。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述肿瘤包括非小细胞肺癌。
CN201611134220.9A 2016-12-13 2016-12-13 抗ros1蛋白单克隆抗体及其用途 Pending CN106978401A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611134220.9A CN106978401A (zh) 2016-12-13 2016-12-13 抗ros1蛋白单克隆抗体及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611134220.9A CN106978401A (zh) 2016-12-13 2016-12-13 抗ros1蛋白单克隆抗体及其用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106978401A true CN106978401A (zh) 2017-07-25

Family

ID=59340762

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611134220.9A Pending CN106978401A (zh) 2016-12-13 2016-12-13 抗ros1蛋白单克隆抗体及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106978401A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108997502A (zh) * 2018-08-09 2018-12-14 靖江市人民医院 鼠抗人ros1蛋白单克隆抗体制备及其免疫组化用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105274060A (zh) * 2015-10-26 2016-01-27 无锡傲锐东源生物科技有限公司 抗gata3蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗gata3单克隆抗体和应用
WO2016089853A1 (en) * 2014-12-03 2016-06-09 Ignyta, Inc. Multiplexed immunohistochemistry assays for diagnosis and treatment of cancer

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016089853A1 (en) * 2014-12-03 2016-06-09 Ignyta, Inc. Multiplexed immunohistochemistry assays for diagnosis and treatment of cancer
CN105274060A (zh) * 2015-10-26 2016-01-27 无锡傲锐东源生物科技有限公司 抗gata3蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗gata3单克隆抗体和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
VICTORIA M.RIMKUNAS等: "Analysis of Receptor Tyrosine Kinase ROS1-Positive Tumorsin Non–Small Cell Lung Cancer: Identification of a FIG-ROS1 Fusion", 《CLINICAL CANCER RESEARCH》 *
梁小芹等: "免疫组织化学和荧光原位杂交检测肺腺癌ROS1表达的对比", 《临床与实验病理学杂志》 *
金静思等: "非小细胞肺癌分子靶向治疗药物的现状及进展", 《中国肿瘤临床》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108997502A (zh) * 2018-08-09 2018-12-14 靖江市人民医院 鼠抗人ros1蛋白单克隆抗体制备及其免疫组化用途

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106978400A (zh) 抗pd‑l1蛋白单克隆抗体及其用途
CN102659923B (zh) 人卵透明带蛋白-4的表位最小基序肽及其扩展短肽和应用
CN105504049B (zh) 宫颈癌相关的hpv e7蛋白单克隆抗体及其应用
CN110041411B (zh) 稳定的非典型猪瘟病毒亚单位蛋白及其疫苗和制备方法和应用
CN107188962A (zh) 抗ck7蛋白单克隆抗体及其用途
CN108467432A (zh) 抗E-cadherin蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
CN108997496A (zh) 抗gfap蛋白单克隆抗体及其用途
CN105131114B (zh) 抗p16蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗p16单克隆抗体和应用
CN106188292B (zh) 抗cd4蛋白单克隆抗体及其用途
CN103923212A (zh) Ehd2抗体及其在制备乳腺癌免疫组化检测试剂中的应用
CN108997501A (zh) 抗vwf蛋白单克隆抗体及其用途
CN107188965A (zh) 抗dog1蛋白单克隆抗体及其用途
CN106978401A (zh) 抗ros1蛋白单克隆抗体及其用途
CN101781656A (zh) 齿兰环斑病毒外壳蛋白基因的表达及其抗体制备方法
CN108998423A (zh) 抗波形蛋白(Vimentin)单克隆抗体及其用途
CN102924594A (zh) 抗肿瘤蛋白p63单克隆抗体及其用途
CN106977605A (zh) 抗cd19蛋白单克隆抗体及其用途
CN106749668A (zh) 抗ido1蛋白单克隆抗体及其用途
CN106957823A (zh) 抗pd‑l2蛋白单克隆抗体及其用途
CN107916254A (zh) Homer1单克隆抗体及其应用
CN107446046A (zh) 抗cd20蛋白单克隆抗体及其用途
CN109535255A (zh) 一种抗人cd26抗体及其在检测试剂盒中的应用
CN107236040A (zh) 抗msh6蛋白单克隆抗体及其用途
CN113527479B (zh) 特异结合电压门控钠离子通道α亚基Nav1.7的抗体或抗体片段
CN105445460B (zh) 一种抗乙肝病毒HBx单克隆抗体及其制备与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20170725