CN106973865A - 一种龟纹瓢虫纯化与扩繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种龟纹瓢虫室内纯化与扩繁方法，该方法包括(1)将龟纹瓢虫饲养于种植蚕豆苗且养殖足够多豌豆蚜的养虫笼中，种植蚕豆苗的花盆外包覆保鲜膜，且蚕豆苗舒展叶片尽量少，以达到多数卵产在保鲜膜上；(2)收取产卵的保鲜膜于温湿环境下孵化出幼虫，(3)将幼虫及时取出置于另一个养虫笼中饲养，待幼虫化蛹后，停止步骤(2)收集卵的操作；(4)将步骤(3)中另一个养虫笼的卵用保鲜膜收集后重复步骤(2)‑步骤(4)至5代后得到纯化的卵；(5)纯化的卵孵化后于养虫笼中进行扩繁。本发明方法有利于在室内纯化田间龟纹瓢虫的代数和降低初孵幼虫以及成虫对卵的取食，操作简便，成本低，可有效完成室内龟纹瓢虫纯化和扩繁。

Description

一种龟纹瓢虫纯化与扩繁方法

技术领域

本发明涉及一种龟纹瓢虫的人工纯化扩繁饲养方法，具体地说，涉及龟纹瓢虫的人工室内饲养方法。

背景技术

龟纹瓢虫属于鞘翅目昆虫，它是田间主要的天敌昆虫之一，它的成虫和幼虫均能捕食蚜虫、蓟马、叶螨和鳞翅目的卵及低龄幼虫。因此当龟纹瓢虫的数目达到一定量时可以很好地控制田间蚜虫和一些小型害虫的数目，一定程度上保护作物。依据龟纹瓢虫的捕食特性，可以考虑把龟纹瓢虫运用在田间害虫的生物防治上，达到田间害虫综合治理的目的。现在已有大量文献报道了有关龟纹瓢虫捕食特性和室内人工饲养龟纹瓢虫以及与龟纹瓢虫人工饲料相关研究的文章，这些文章为龟纹瓢虫的深入研究奠定基础。

龟纹瓢虫室内饲养的第一步是田间龟纹瓢虫的抓取和室内龟纹瓢虫的纯化与扩繁，室内饲养一般都采用豌豆蚜。关于龟纹瓢虫室内纯化和扩繁的饲养体系至今还未见报道。但是，该饲养体系是后续龟纹瓢虫各方面研究如转基因植物(毒蛋白)对其发育历期、虫重、各历期形态、体内解毒蛋白等影响的基础，因此尤为必要。室内饲养时，龟纹瓢虫会把卵产在茎干、叶片、养虫笼壁上，为其人工纯化带来一定的麻烦，且这些场所都不利于试验时人为的取卵和对卵的收集，卵的收取问题亟待解决。龟纹瓢虫幼虫孵化出来后会取食附近的卵，一定程度上减少卵的孵化率，因此，人为的控制孵化时间和挑取出刚孵化的幼虫可以一定程度上保证孵化率。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供一种龟纹瓢虫纯化和扩繁方法。

本发明提供的一种龟纹瓢虫纯化方法，包括：

(1)将龟纹瓢虫养殖于种植接有豌豆蚜的蚕豆苗的养虫笼中，种有蚕豆苗的容器外围包覆保鲜膜，蚕豆苗的苗高9-17cm，确保蚕豆苗舒展叶片少以达到龟纹瓢虫在保鲜膜上产卵；

(2)收取产卵的保鲜膜于温湿环境下孵化出幼虫；

(3)将幼虫及时取出置于另一个养虫笼中饲养，待幼虫化蛹后，停止步骤(2)收集卵的操作；

(4)将步骤(3)中另一个养虫笼的卵用保鲜膜收集后重复步骤(2)-步骤(4)至纯化4代以上后得到纯化的虫卵。

上述纯化方法中，步骤(1)养殖龟纹瓢虫前，把发芽时间≤24h的蚕豆苗放入饲养豌豆蚜的恒温培养箱中，光周期14L:10D，温度20±1℃，湿度70±10％，放置三天后，此蚕豆苗可用于龟纹瓢虫的纯化饲养。种植的蚕豆苗足够豌豆蚜食用。

步骤(1)的养虫笼中可以用小花盆种植蚕豆苗，蚕豆苗上接有够多的豌豆蚜。

步骤(1)中，早、中、晚各换一次保鲜膜。

在本发明的实施例中，优选上午在9点到10点之间换一次保鲜膜；下午在3点到3点半之间再换一次保鲜膜；晚上在9点到10点之间第三次换保鲜膜；换保鲜膜时，在养虫笼开口处横放蚕豆苗，使蚕豆苗的茎和叶在笼内，外覆保鲜膜的容器在笼外来换保鲜膜。

在保鲜膜上取卵的同时，采取措施使蚕豆苗上的虫卵不能孵化出幼虫，有利于分笼饲养，保证笼内龟纹瓢虫代数的一致性。

本发明纯化方法的步骤(2)温湿环境是指保鲜盒底部铺一层湿纱布(湿纱布竖直放置，20s不滴水为标准)，孵化条件为：光周期16L:8D，温度25±1℃，外环境湿度为70±10％，50-55h卵会孵化出来。若延缓幼虫的孵化时间可把卵放在4℃冰箱里，放置时间<12h。

步骤(2)中幼虫孵化出来就将其挑出置于另一个养虫笼中，所述另一个养虫笼同步骤(1)中的养虫笼条件一致。

上述方法中，步骤(3)幼虫在另一个养虫笼的饲养条件为温度25±1℃，湿度70±10％，光周期16L:8D。

本发明还提供了一种龟纹瓢虫扩繁的方法，首先采用上述龟纹瓢虫的纯化方法进行龟纹瓢虫的纯化，纯化后的卵、幼虫、成虫置于扩繁笼中扩大培养；扩繁笼中种植有蚕豆苗，以及豌豆蚜，所述蚕豆苗的叶片数＞6，扩繁笼外围包覆保鲜膜。这样可以使龟纹瓢虫可以在其背面产卵。也有利于龟纹瓢虫产卵的分散，使卵和幼虫不太集中，减少幼虫取食的卵量和降低初孵幼虫自相残杀的概率

扩繁方法中不分笼饲养，采集保鲜膜上的卵进行孵化。

本发明提供了上述方法在植物病害生物防治中的应用。

本发明针对龟纹瓢虫的生物学特性，为其提供光滑的保鲜膜做为产卵场所，用保鲜膜来进行卵的收集。依据龟纹瓢虫产卵在一天中的高峰期来换保鲜膜；依据其卵的有利孵化条件，通过加湿(或4℃放置一晚)来一定程度加快(或延缓)龟纹瓢虫卵的孵化；依据龟纹幼虫幼虫数量密集时会自相残杀的特性，扩繁时采用叶片相对较多的蚕豆苗来饲养，增加其产卵的场所，一定条件下减少刚孵化幼虫的自相残杀率，从而有利于龟纹瓢虫的扩繁。本发明针对不同目的，对于室内龟纹瓢虫的纯化提供单一产卵场所—保鲜膜，扩繁时提供保鲜膜、蚕豆叶片为其产卵场所。

采用本发明方法饲养龟纹瓢虫，易收卵，易进行卵的孵化，易人工控制孵化时间(12h内)。在纯化时，能够获得同一代的均一的龟纹瓢虫。且能够保证一定的孵化率。在试验中，本发明采用保鲜膜收到的卵相对于叶片收到的卵更容易放置和笼外孵化，叶片采下来就容易皱缩变干不利于卵的孵化，且采摘叶片也不利于豌豆蚜的生长，从而可能影响龟纹瓢虫的产卵。本方法操作简便，成本低，材料易获取，易实现实验室内龟纹瓢虫的纯化和扩繁，易实验室内不间断饲养龟纹瓢虫，为龟纹瓢虫的规模化繁育饲养奠定良好基础。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1龟纹瓢虫的室内人工饲养方法(纯化+扩繁)

1、从田间捉取龟纹瓢虫，放有养虫笼中(称为1号养虫笼，此养虫笼中的龟纹瓢虫称为1代龟纹瓢虫)，养虫笼内放有接有足够豌豆蚜的蚕豆苗(种在小花盆里)，蚕豆苗高度尽量在9-17cm，且舒展的叶片数尽量少。在小花盆上缠绕一圈湿的保鲜膜。在9点、15点、21点换保鲜膜。从换下的保鲜膜上剪下卵块儿，放在铺有湿纱布的保鲜盒中。龟纹瓢虫的饲养条件为温度25±1℃，湿度70±10％，光周期16L:8D。

2、孵化出来的幼虫挑出来放在一个新的养虫笼中，笼中也放有接有豌豆蚜的蚕豆苗(同上)，称为2号养虫笼，2代龟纹瓢虫。在2号养虫笼出现化蛹之前，孵化出的幼虫都放在2号养虫笼中。化蛹出现后，1号养虫笼中不再收取卵。注意：在保鲜盒中孵化出来的幼虫要及时挑取出来，不然刚孵化的幼虫会取食卵并且有可能会被保鲜盒中的湿纱布粘死；在纯化过程中化蛹出现后不再续放幼虫是为了防止二代成虫产的卵被幼虫取食，保证在纯化过程中获得最大卵量。

3、2号养虫笼中的卵用保鲜膜收集后，在保鲜盒中孵化出来后放在3号养虫笼中(同上)。以上依次纯化到第5代后，可以用于试验。也就是5号养虫笼中产的卵可用于试验。

4、纯化完成后，依旧用保鲜膜进行部分卵的收集。收集到的卵在湿纱布增加湿度的保鲜盒中孵化。孵化出的幼虫可以用于试验。且能保证得到相对均一的幼虫，避免给试验带来某方面的误差。

1到4号养虫笼中的蚕豆苗叶片数尽量少。5号养虫笼中的蚕豆苗叶片数尽量多，舒展叶片最好大于6，此笼中用于扩繁或试验。扩繁不需要一产卵就换笼，在笼内龟纹瓢虫达到一定数量时可以换笼继续扩繁，扩繁和纯化步骤几乎相同，区别在于：扩繁时用到的蚕豆苗舒展叶片数应尽量多，利于龟纹瓢虫在叶片背面产卵。

实施例2增加湿度孵化卵的试验

1、24:00把保鲜膜包覆在实施例1的5号养虫笼中种有蚕豆苗的小花盆上，收集卵，第二天早上7:50收保鲜膜，剪下卵块儿，分别放在两种湿度的培养皿中，一个培养皿底部铺有湿纱布(竖直放置，20s无水珠滴下来)，一个培养皿中没有湿纱布。一共收集六天的卵，6组试验(2017年1月8号到1月13号)。

2、观察6组试验卵孵化的开始时间，以刚孵化出多于一半幼虫的时间为孵化时间。

表1不同湿度下孵化时间比较

湿度

实验1

实验2

实验3

实验4

实验5

实验6

湿纱布

53h

52h

53h

53h

51h

53h

70±10％

56h

59h

56h

54h

58h

57h

在此条件下，湿纱布可缩短孵化时间在3-7h。

外界的环境影响卵的孵化时间，该试验是在环境温度25±1℃，环境湿度70±10％，光周期16L:8D的条件下进行，

实施例3保鲜膜收卵法的试验

在实施例1的5号养虫笼中用保鲜膜、滤纸、蚕豆叶片进行卵的收集，滤纸为圆形直径15cm，贴近放在养虫笼内种蚕豆苗容器的旁边，笼中大约有50头成虫(31头雌虫)。以三天为准。查每天收集到的卵量。时间为2016年12月7号到12月9号。

表2不同装置的卵量(粒)

装置	12月7号	12月8号	12月9号
				保鲜膜	275	217	258
滤纸	0	0	7
				蚕豆叶	183	121	153

实施例4保鲜膜收卵的孵化率试验

用保鲜膜收集实施例1中的5号养虫笼中的卵。用剪刀把卵块儿剪下来，一定数量的卵数放在有湿纱布的保鲜盒中孵化，下表中的实验1、3、5在卵变黑时放在4℃冰箱中10h，其余时间正常孵化。一共做了六组实验，计算孵化率。正常孵化条件为温度25±1℃，湿度70±10％，光周期16L:8D。试验时间为2016年12月17号到12月20号。

表3保鲜膜上卵的孵化率

实验1

实验2

实验3

实验4

实验5

实验6

卵数

32粒

28粒

24粒

26粒

30粒

26粒

孵化数

25头

24头

18头

21头

23头

21头

孵化率

78.13％

85.71％

75％

80.77％

76.67％

80.77％

4℃放置12h没有明显影响卵的孵化率，且可控制卵尽量在白天孵化，便于人为操作。

注：孵化过程中要及时挑出已孵化出的幼虫，否则未孵化的卵会被幼虫取食而不能孵化出来。

实施例5笼内龟纹瓢虫数量扩繁到一定量所需时间

本实施例采用两种方法进行笼内龟纹瓢虫的扩繁，且以化蛹数为计算量标准。方法1：用扩繁笼6，笼内原有35头成虫，雌虫20头，及时收取养虫笼内保鲜膜上的卵，收取一星期，用实施例4的方法进行孵化，孵化出的幼虫放回养虫笼内；方法2：用用扩繁笼7，笼内原有35头成虫，雌虫20头，不采用保鲜膜收卵和笼外人工孵化。其他条件均一致。温度25±1℃，湿度70±10％，光周期16L:8D

表4不同方法养虫笼扩繁的时间

	方法1	方法2
			原有成虫(头)	35	35
化蛹数量(头)	50	50
			扩繁用时(d)	17	38

注：本实施例中的化蛹是指活动特别不活跃且尾部末端黏着的四龄末的龟纹幼虫，人为挑出来在透气的EP管中单独化蛹，计算化蛹数。

结果说明，采用本发明的孵化扩繁方法，能够比对照组(方法2)的扩繁效率提高一倍以上，短时间内可达到扩繁目的。

虽然，上文已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种龟纹瓢虫纯化方法，其特征在于，包括：

(1)将龟纹瓢虫养殖于种植接有豌豆蚜的蚕豆苗的养虫笼中，种有蚕豆苗的容器外周包覆保鲜膜，蚕豆苗的苗高9-17cm，确保蚕豆苗舒展叶片少以达到龟纹瓢虫的多数卵产在在保鲜膜上；

(2)收取产有卵的保鲜膜于温湿环境下孵化出幼虫；

(3)将幼虫及时取出置于另一个养虫笼中饲养，待幼虫化蛹后，停止步骤(2)收集卵的操作；

(4)将步骤(3)中另一个养虫笼的卵用保鲜膜收集后重复步骤(2)-步骤(4)至纯化4代以上后得到纯化的卵。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)养殖龟纹瓢虫前，把发芽时间≤24h的蚕豆苗放入饲养豌豆蚜的恒温培养箱中，光周期14L:10D，温度20±1℃，湿度70±10％，放置三天后，此蚕豆苗可用于龟纹瓢虫的纯化饲养。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，早、中、晚各换一次保鲜膜；在换取保鲜膜取卵的同时，采取措施使蚕豆苗上的卵不能孵化出幼虫。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，上午在9点到10点之间换一次保鲜膜；下午在3点到3点半之间再换一次保鲜膜；晚上在9点到10点之间第三次换保鲜膜；换保鲜膜时，在养虫笼开口处横放蚕豆苗，使蚕豆苗的茎和叶在笼内，外覆保鲜膜的容器在笼外来换保鲜膜。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)温湿环境是指保鲜盒底部铺一层湿纱布，所述湿纱布其含水量以湿纱布竖直时，20s不滴水为标准；孵化条件为：光周期16L:8D，温度25±1℃，环境湿度为70±10％，孵化时间50-55小时；若延缓幼虫的孵化时间可把卵放在4℃冰箱里，放置时间<12h。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中幼虫孵化出来就将其挑出置于另一个养虫笼中，与步骤(1)中的养虫笼条件一致。

7.如权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)幼虫在另一个养虫笼的饲养条件为温度25±1℃，湿度70±10％，光周期16L:8D。

8.一种龟纹瓢虫扩繁的方法，其特征在于，首先采用权利要求1-7任一所述的方法进行龟纹瓢虫的纯化，纯化后的卵、幼虫或成虫置于扩繁笼中扩大培养；扩繁笼中种植接有足够豌豆蚜的蚕豆苗，所述蚕豆苗的叶片数＞6，苗高＞15cm，且种植蚕豆苗的容器上包覆保鲜膜。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，不分笼饲养，采集保鲜膜上的卵进行孵化。

10.权利要求1-9任一所述的方法在植物病害生物防治中的应用。