CN106957891A - 金纳米簇与铜锌超氧化物歧化酶的用途及试剂盒 - Google Patents
金纳米簇与铜锌超氧化物歧化酶的用途及试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106957891A CN106957891A CN201710342988.3A CN201710342988A CN106957891A CN 106957891 A CN106957891 A CN 106957891A CN 201710342988 A CN201710342988 A CN 201710342988A CN 106957891 A CN106957891 A CN 106957891A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- copper
- superoxide dismutase
- gold nanoclusters
- zinc superoxide
- purposes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 108
- 239000010931 gold Substances 0.000 title claims abstract description 108
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 105
- TUGDLVFMIQZYPA-UHFFFAOYSA-N tetracopper;tetrazinc Chemical compound [Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2] TUGDLVFMIQZYPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 99
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 10
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 2
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 claims 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- TVZPLCNGKSPOJA-UHFFFAOYSA-N copper zinc Chemical compound [Cu].[Zn] TVZPLCNGKSPOJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 4
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229910004042 HAuCl4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 3
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- -1 Oxygen anion free radical Chemical class 0.000 description 2
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 2
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 2
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 2
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000549556 Nanos Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLLRIXZGBQOFLM-UHFFFAOYSA-N Xanthorin Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=C(O)C(OC)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O GLLRIXZGBQOFLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYZRMWCPMJEXKL-UHFFFAOYSA-N [Fe].[Cu].[Zn] Chemical compound [Fe].[Cu].[Zn] NYZRMWCPMJEXKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- HPDFFVBPXCTEDN-UHFFFAOYSA-N copper manganese Chemical compound [Mn].[Cu] HPDFFVBPXCTEDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- LGZXYFMMLRYXLK-UHFFFAOYSA-N mercury(2+);sulfide Chemical compound [S-2].[Hg+2] LGZXYFMMLRYXLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
- G01N2333/90283—Oxidoreductases (1.) acting on superoxide radicals as acceptor (1.15)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种金纳米簇与铜锌超氧化物歧化酶的用途及试剂盒，属于荧光检测领域。铜锌超氧化物歧化酶的用途包括：铜锌超氧化物歧化酶在淬灭金纳米簇产生的荧光中的用途；铜锌超氧化物歧化酶在抗金纳米簇的荧光干扰中的用途。金纳米簇的用途包括：金纳米簇在铜锌超氧化物歧化酶的检测中的用途；金纳米簇用于制备铜锌超氧化物歧化酶的检测试剂盒中的用途。本发明还提供一种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法，其包括：将待测溶液与金纳米簇混合。发明人研究发现，铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇所产生的荧光具有淬灭效应，其为后期金纳米簇的广泛应用、以及铜锌超氧化物歧化酶的准确检测提供了新的思路。
Description
技术领域
本发明涉及荧光检测领域，具体而言，涉及一种金纳米簇与铜锌超氧化物歧化酶的用途及试剂盒。
背景技术
铜锌超氧化物歧化酶(SOD)是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。研究表明，铜锌超氧化物歧化酶具有抗衰老的功效。按照其所含金属辅基的不同，铜锌超氧化物歧化酶可以分为铜锌超氧化物歧化酶、锰铜锌超氧化物歧化酶、以及铁铜锌超氧化物歧化酶等。铜锌超氧化物歧化酶是真核生物酶，主要存在于真核细胞的细胞浆中，也是研究最多，结构最清楚的一类铜锌超氧化物歧化酶。对铜锌超氧化物歧化酶的含量进行检测，在抗衰老及肿瘤预防方面起着重要的作用，并且日益受到重视。
目前检测铜锌超氧化物歧化酶的方法主要有黄嘌呤氧化酶细胞色素C法、邻苯三酚法、羟胺法、化学发光法等。以黄嘌呤氧化酶-细胞色素C法为例，在有氧条件下，黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤生成尿酸，同时产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基将氧化型细胞色素C还原为还原型细胞色素C，后者在550nm有最大吸收。存在铜锌超氧化物歧化酶时，超氧阴离子自由基被催化而歧化，细胞色素C还原反应速率降低，根据细胞色素C在加入铜锌超氧化物歧化酶前后被超氧阴离子自由基还原的速率变化，即可测定铜锌超氧化物歧化酶的活性。
现有测定铜锌超氧化物歧化酶的方法，多是通过其对超氧阴离子自由基的清除反应，改变发色团或者发光试剂的浓度，来间接对其活性进行定量。这些方法技术繁琐、步骤多、成本高，且超氧阴离子自由基的寿命很短，通过铜锌超氧化物歧化酶清除超氧阴离子自由基的测定方法，容易受到超氧阴离子浓度不准确的影响，从而影响其准确度。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种金纳米簇和铜锌超氧化物歧化酶的用途，本发明的研究结果显示，铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇所产生的荧光具有淬灭效应，其为后期金纳米簇的广泛应用、以及铜锌超氧化物歧化酶的准确检测提供了新的思路。
本发明的另一目的在于提供一种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法，该方法能够实现铜锌超氧化物歧化酶的定性检测和定量检测，且检测的特异性强、灵敏度高。
本发明的另一目的在于提供一种用于测定铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒。利用这种试剂盒，可方便的对铜锌超氧化物歧化酶进行定性检测和定量检测。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了铜锌超氧化物歧化酶在对金纳米簇的荧光淬灭效应中的应用，即：
本发明提供了一种铜锌超氧化物歧化酶在淬灭金纳米簇产生的荧光中的用途。
本发明提供了一种铜锌超氧化物歧化酶在抗金纳米簇的荧光干扰中的用途。
第二方面，本发明提供了金纳米簇在检测铜锌超氧化物歧化酶中的应用，即：
本发明提供了一种金纳米簇在铜锌超氧化物歧化酶的检测中的用途。
本发明提供了一种金纳米簇用于制备铜锌超氧化物歧化酶的检测试剂盒中的用途。
第三方面，本发明提供了一种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法，即：
一种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法，其包括：将待测溶液与金纳米簇混合。
第四方面，本发明提供了一种铜锌超氧化物歧化酶的检测试剂盒，即：
一种用于检测铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒，其包括：金纳米簇。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
发明人在对金纳米簇的研究中发现，金纳米簇所产生的荧光能够被铜锌超氧化物歧化酶淬灭，且铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇的荧光淬灭能力与其浓度呈正相关。这就为金纳米簇的应用拓宽了新方向，比如在某些需要去除或避免金纳米簇的荧光干扰的情况下，可以选用铜锌超氧化物歧化酶将其荧光淬灭；或者将金纳米簇应用到生物溶液的分析检测中，如用金纳米簇检测铜锌超氧化物歧化酶。
本实施方式提供的这种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法和试剂盒，能够实现铜锌超氧化物歧化酶的定性检测和定量检测，且检测的特异性强、灵敏度高，能够有效解决现有技术中由于超氧阴离子自由基寿命较短，导致测定铜锌超氧化物歧化酶的准确度低的问题。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本公开内容的实施例1中的标准工作曲线图；
图2为本公开内容的实施例2中制备的金纳米簇的透射电镜扫描图；
图3为本公开内容的实验例1中铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇的荧光淬灭效应的实验结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本实施方式提供的金纳米簇和铜锌超氧化物歧化酶的用途进行具体说明：
金纳米簇，是由几个至上百个金原子组成。由于金纳米簇的尺寸与电子的费米波长相近，导致其具有离散的电子态和荧光发光等类似分子的性质；并且因其超小的尺寸、良好的生物相容性和卓越的光学稳定性，在纳米技术领域中展现了良好的应用前景。
发明人在对金纳米簇的研究中发现，金纳米簇所产生的荧光能够被铜锌超氧化物歧化酶淬灭，即铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇具有荧光淬灭效应，且铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇的荧光淬灭能力与其浓度呈正相关。
这就为金纳米簇的应用拓宽了新方向，比如，本实施方式提供的一种铜锌超氧化物歧化酶在抗金纳米簇的荧光干扰中的用途。
在某些需要去除或避免金纳米簇的荧光干扰的情况下，可以选用铜锌超氧化物歧化酶将其荧光淬灭。更为具体的，利用铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇的荧光淬灭效应，在含有金纳米簇的溶液体系中加入适当浓度的铜锌超氧化物歧化酶以减弱金纳米簇的荧光，以此来实现金纳米簇更为广泛的用途。
拓宽金纳米簇的应用，还体现在将金纳米簇应用到生物溶液的分析检测中，如用金纳米簇检测铜锌超氧化物歧化酶、或者制备用来检测铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒。
采用金纳米簇检测铜锌超氧化物歧化酶的原理是：铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇的荧光产生淬灭的现象，通过测定金纳米簇的荧光，便可得到铜锌超氧化物歧化酶的活性或含量。更为具体的，当待测溶液中含有铜锌超氧化物歧化酶时，当待测溶液与金纳米簇混合时，铜锌超氧化物歧化酶会使金纳米簇的荧光减弱，即可实现对铜锌超氧化物歧化酶的定量检测。此外，由于铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇的荧光淬灭效应与铜锌超氧化物歧化酶的浓度在一定范围内呈正相关，因此可实现铜锌超氧化物歧化酶的定量检测。
本实施方式基于上述原理，提供了一种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法，包括：
将待测溶液与金纳米簇混合。
当待测溶液与金纳米簇混合时，如果待测溶液中含有铜锌超氧化物歧化酶，则混合液中金纳米簇的荧光会减弱；且铜锌超氧化物歧化酶的浓度越大，混合液中金纳米簇的荧光会减弱的趋势越大。
进一步的，将待测溶液与金纳米簇混合后，还包括检测所得混合液的荧光发射光谱的步骤，以得到混合液中金纳米簇的荧光强度。
可选择的，在测定所得混合液的荧光发射光谱时，选用的激发波长为350～380nm，或为355～375nm，或360～370nm，或363～368nm。更为具体的为，在激发波长为365nm下，测定所得混合液的荧光发射光谱。
可选择的，金纳米簇的荧光强度为金纳米簇在最大发射波长处的荧光强度。最大发射波长处的荧光强度最大、且相对其他发射波长处的荧光更加稳定，从而使得检测结果的准确度更高。
在本实施方式中采用标准曲线法，建立混合液的荧光强度与铜锌超氧化物歧化酶的浓度之间的线性关系，来实现对铜锌超氧化物歧化酶的定量检测。该方法的操作简单、可实施性强，能够实现铜锌超氧化物歧化酶的定量测定。
这种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法，能够实现铜锌超氧化物歧化酶的定性检测和定量检测，且检测的特异性强、灵敏度高，能够有效解决现有技术中由于超氧阴离子自由基寿命较短，导致测定铜锌超氧化物歧化酶的准确度低的问题。
本实施方式中所用到的金纳米簇可以直接购买，或者采用现有技术中的方法进行合成。可选择的，金纳米簇的粒径为2～4nm，或者为3nm。发明人研究发现，金纳米簇的粒径在上述范围内时，荧光效应更强、且更加稳定。
在某些具体的实施例中，金纳米簇的制备方法包括：将氯金酸与多肽混合，并于65～75℃下反应20～28h，其中所述多肽中含有至少一个硫原子。
其中，多肽中至少含有一个硫原子，即可以是一个、两个或者更多。更为具体的，形成多肽的氨基酸中至少有一个甲硫氨酸、或至少有一个半胱氨酸、或至少有一个胱氨酸；当然，也可以是同时含有甲硫氨酸、半胱氨酸和胱氨酸中任意两个、或三者都含有。
可选择的，多肽为短肽，例如可以是二肽、三肽或者四肽。更为具体的，在某些实施例中，多肽为谷胱甘肽。
合成金纳米簇时的反应温度为65～75℃，或者为67～73℃；或者为69～71℃；或者为69℃、70℃、71℃。
合成金纳米簇时的反应时间为20～28h，或者为22～26h；或者为23～25h；或者为24h。
本实施方式还提供的一种检测铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒，该试剂盒包括金纳米簇。利用该试剂盒，可方便的对铜锌超氧化物歧化酶进行定性检测和定量检测，且特异性强、灵敏度高。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：
实施例1
本实施例提供一种用于检测铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒，其包括：金纳米簇。
本实施例提供一种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法，其包括以下步骤：
a.配制含有铜锌超氧化物歧化酶的标准溶液(铜锌超氧化物歧化酶的浓度分别为5U/mL、10U/mL、30U/mL、50U/mL)。
b.分别将不同浓度的标准溶液与50μg/mL的金纳米簇混合均匀，得到多个第一混合液；同时，将50μg/mL的金纳米簇与水混合均匀，得到空白对照液，其中，水的体积与标准溶液体积一致。
c.设置激发波长为365nm，分别测定空白对照液、以及多个第一混合液的荧光发射光谱，并测定最大发射波长(610nm)处的荧光强度。
d.以铜锌超氧化物歧化酶的浓度为横坐标，以所测得的荧光强度为纵坐标进行线性拟合，得到标准工作曲线，如图1所示，其线性方程为：y＝-2.51x+169.34
e.将含有铜锌超氧化物歧化酶的待测溶液与50μg/mL的金纳米簇混合均匀，得到第二混合液。采用步骤c的方法，测定第二混合液的荧光强度，并将其带入所得到的标准工作曲线，计算得到待测溶液中铜锌超氧化物歧化酶的浓度。
实施例2
本实施例提供了一种用于检测铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒，其包括：金纳米簇。
其中，金纳米簇的制备方法包括：
将5mL、4mM HAuCl4和5mL、4mM的谷胱甘肽溶液混合，在室温下搅拌5min，然后油浴升温到70℃，反应24h，将得到的金纳米簇通过3000分子量的超滤离心管进行提纯，即得，其透射电镜扫描图如图2所示。
实施例3
本实施例提供了一种用于检测铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒，其包括：金纳米簇。
其中，金纳米簇的制备方法包括：
将5mL、4mM HAuCl4和5mL、4mM的二肽(由甘氨酸-甲硫氨酸-脯氨酸-半胱氨酸形成)溶液混合，在室温下搅拌5min，然后油浴升温到75℃，反应20h，将得到的金纳米簇通过3000分子量的超滤离心管进行提纯，即得。
实施例4
本实施例提供了一种用于检测铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒，其包括：金纳米簇。
其中，金纳米簇的制备方法包括：
将5mL、4mM HAuCl4和5mL、4mM的三肽(由甘氨酸-甲硫氨酸-脯氨酸形成)溶液混合，在室温下搅拌5min，然后油浴升温到65℃，反应28h，将得到的金纳米簇通过3000分子量的超滤离心管进行提纯，即得。
实验例1
本实验例对本发明实施方式中提供的一种铜锌超氧化物歧化酶在淬灭金纳米簇产生的荧光中的用途进行说明。
将金纳米簇溶液与铜锌超氧化物歧化酶混合均匀，放置在365nm紫外灯下观察，同时以金纳米簇溶液作为空白对照。结果如图3中的插图所示。
金纳米簇溶液在365nm紫外灯下呈橘红色(如图3中a管溶液所示)，再将金纳米簇溶液与铜锌超氧化物歧化酶混合后，所得混合液在365nm紫外灯下呈无色(如图3中b管溶液所示)，由此可见，铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇具有荧光淬灭效应。
设置激发波长为365nm，分别测定上述a管溶液(金纳米簇溶液)和b管溶液(金纳米簇溶液与铜锌超氧化物歧化酶的混合液)的荧光发射光谱。
结果如图3所示，其中，a曲线是金纳米簇溶液的发光光谱，即淬灭前的发射光谱；b曲线是金纳米簇溶液与铜锌超氧化物歧化酶的混合液的发射光谱，即淬灭后的发光光谱。由图3可见，铜锌超氧化物歧化酶能够使金纳米簇在最大发射波长600nm处的发光强度由165锐减到40左右，由此说明，铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇具有荧光淬灭效应。
综上所述，在本实施方式中，发明人在对金纳米簇的研究中发现，金纳米簇所产生的荧光能够被铜锌超氧化物歧化酶淬灭，且铜锌超氧化物歧化酶对金纳米簇的荧光淬灭能力与其浓度呈正相关。这就为金纳米簇的应用拓宽了新方向，比如在某些需要去除或避免金纳米簇的荧光干扰的情况下，可以选用铜锌超氧化物歧化酶将其荧光淬灭；或者将金纳米簇应用到生物溶液的分析检测中，如用金纳米簇检测铜锌超氧化物歧化酶。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (10)
1.铜锌超氧化物歧化酶在淬灭金纳米簇产生的荧光中的用途。
2.铜锌超氧化物歧化酶在抗金纳米簇的荧光干扰中的用途。
3.金纳米簇在铜锌超氧化物歧化酶的检测中的用途。
4.金纳米簇用于制备铜锌超氧化物歧化酶的检测试剂盒中的用途。
5.根据权利要求1～4任一项所述的用途，其特征在于，所述金纳米簇的粒径为2～4nm。
6.根据权利要求1～4任一项所述的用途，其特征在于，所述金纳米簇的制备方法包括：将氯金酸与多肽混合，并于65～75℃下反应20～28h，其中所述多肽中含有至少一个硫原子。
7.根据权利要求6任一项所述的用途，其特征在于，所述多肽包括二肽、三肽或四肽。
8.根据权利要求6任一项所述的用途，其特征在于，所述多肽为谷胱甘肽。
9.一种铜锌超氧化物歧化酶的检测方法，其特征在于，其包括：
将待测溶液与金纳米簇混合。
10.一种用于检测铜锌超氧化物歧化酶的试剂盒，其特征在于，其包括：金纳米簇。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710342988.3A CN106957891B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 金纳米簇与铜锌超氧化物歧化酶的用途及试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710342988.3A CN106957891B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 金纳米簇与铜锌超氧化物歧化酶的用途及试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106957891A true CN106957891A (zh) | 2017-07-18 |
| CN106957891B CN106957891B (zh) | 2021-03-12 |
Family
ID=59482446
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710342988.3A Expired - Fee Related CN106957891B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 金纳米簇与铜锌超氧化物歧化酶的用途及试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106957891B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108031859A (zh) * | 2017-11-29 | 2018-05-15 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 合成金纳米簇的方法及其产品和应用 |
| CN108420748A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-08-21 | 上海谦懋纺织科技有限公司 | 一种蓝铜胜肽结合纳米金及纳米钻石结构的加工工艺 |
| CN110280777A (zh) * | 2019-07-02 | 2019-09-27 | 青岛科技大学 | 一种合成荧光金纳米簇的新型有效的多肽序列的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102095856A (zh) * | 2010-12-23 | 2011-06-15 | 无锡安迪生物工程有限公司 | 一种超氧化物歧化酶快速检测卡及其检测方法 |
| CN105352925A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-02-24 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种基于纳米簇的铜离子检测方法 |
| CN106085420A (zh) * | 2016-06-02 | 2016-11-09 | 中国石油大学(华东) | 一种多肽修饰的金纳米簇及其制备方法 |
-
2017
- 2017-05-16 CN CN201710342988.3A patent/CN106957891B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102095856A (zh) * | 2010-12-23 | 2011-06-15 | 无锡安迪生物工程有限公司 | 一种超氧化物歧化酶快速检测卡及其检测方法 |
| CN105352925A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-02-24 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种基于纳米簇的铜离子检测方法 |
| CN106085420A (zh) * | 2016-06-02 | 2016-11-09 | 中国石油大学(华东) | 一种多肽修饰的金纳米簇及其制备方法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108031859A (zh) * | 2017-11-29 | 2018-05-15 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 合成金纳米簇的方法及其产品和应用 |
| CN108420748A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-08-21 | 上海谦懋纺织科技有限公司 | 一种蓝铜胜肽结合纳米金及纳米钻石结构的加工工艺 |
| CN108420748B (zh) * | 2018-04-25 | 2021-11-30 | 上海谦懋纺织科技有限公司 | 一种蓝铜胜肽结合纳米金及纳米钻石结构的加工工艺 |
| CN110280777A (zh) * | 2019-07-02 | 2019-09-27 | 青岛科技大学 | 一种合成荧光金纳米簇的新型有效的多肽序列的方法 |
| CN110280777B (zh) * | 2019-07-02 | 2022-02-22 | 青岛科技大学 | 一种多肽序列合成荧光金纳米簇的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106957891B (zh) | 2021-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Alkaline phosphatase-triggered in situ formation of silicon-containing nanoparticles for a fluorometric and colorimetric dual-channel immunoassay | |
| Jin et al. | Quantitative determination of uric acid using CdTe nanoparticles as fluorescence probes | |
| Liu et al. | A fluorescence and colorimetric dual-mode assay of alkaline phosphatase activity via destroying oxidase-like CoOOH nanoflakes | |
| Li et al. | Recent progress in fluorescent probes for metal ion detection | |
| Zhang et al. | An ultrasensitive electrochemiluminescence biosensor for MicroRNA detection based on luminol-functionalized Au NPs@ ZnO nanomaterials as signal probe and dissolved O2 as coreactant | |
| Wang et al. | A FRET-based carbon dot–MnO2 nanosheet architecture for glutathione sensing in human whole blood samples | |
| Hu et al. | Double-strand DNA-templated synthesis of copper nanoclusters as novel fluorescence probe for label-free detection of biothiols | |
| Han et al. | Self-assembled gold nanoclusters for fluorescence turn-on and colorimetric dual-readout detection of alkaline phosphatase activity via DCIP-mediated fluorescence resonance energy transfer | |
| Huang et al. | Cation-driven luminescent self-assembled dots of copper nanoclusters with aggregation-induced emission for β-galactosidase activity monitoring | |
| Wu et al. | Fabrication of a LRET-based upconverting hybrid nanocomposite for turn-on sensing of H 2 O 2 and glucose | |
| Dong et al. | Ratio fluorescent hybrid probe for visualized fluorescence detection of H2O2 in vitro and in vivo | |
| Zhao et al. | Multi-stimuli responsive copper nanoclusters with bright red luminescence for quantifying acid phosphatase activity via redox-controlled luminescence switch | |
| Zhang et al. | Time-resolved probes and oxidase-based biosensors using terbium (III)–guanosine monophosphate–mercury (II) coordination polymer nanoparticles | |
| Deng et al. | Fenton reaction-mediated fluorescence quenching of N-acetyl-L-cysteine-protected gold nanoclusters: analytical applications of hydrogen peroxide, glucose, and catalase detection | |
| Tian et al. | Ratiometric time-gated luminescence probe for nitric oxide based on an apoferritin-assembled lanthanide complex-rhodamine luminescence resonance energy transfer system | |
| Chen et al. | Highly cysteine-selective fluorescent nanoprobes based on ultrabright and directly synthesized carbon quantum dots | |
| Shu et al. | A near− infrared fluorescent sensor based on the architecture of low− toxic Ag2S quantum dot and MnO2 nanosheet for sensing glutathione in human serum sample | |
| Zhou et al. | Mn2+-doped NaYF4: Yb, Er upconversion nanoparticles for detection of uric acid based on the Fenton reaction | |
| CN106957891A (zh) | 金纳米簇与铜锌超氧化物歧化酶的用途及试剂盒 | |
| Li et al. | A simple and sensitive assay of alkaline phosphatase activity in serum by fluorescent silicon nanoparticles based on inner filter effect | |
| Xu et al. | A Cu2+-assisted fluorescence switch biosensor for detecting of coenzyme A employing nitrogen-doped carbon dots | |
| Sun et al. | 2, 4-Dinitrobenzenesulfonate-functionalized carbon dots as a turn-on fluorescent probe for imaging of biothiols in living cells | |
| Qu et al. | A dual-channel ratiometric fluorescent probe for determination of the activity of tyrosinase using nitrogen-doped graphene quantum dots and dopamine-modified CdTe quantum dots | |
| Shao et al. | Dual-colored carbon dots-based ratiometric fluorescent sensor for high-precision detection of alkaline phosphatase activity | |
| Liu et al. | One-pot synthesis of highly fluorescent boron and nitrogen co-doped graphene quantum dots for the highly sensitive and selective detection of mercury ions in aqueous media |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20210312 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |