CN106954776A - 一种可抑制黄曲霉的食品添加剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品加工领域，具体涉及一种可抑制黄曲霉的食品添加剂，还涉及一种上述食品添加剂的制备方法。所述可抑制黄曲霉的食品添加剂由下列质量份数的各组分制备而成：藿香18‑25份、牡丹皮4‑5份、土荆皮3‑5份、姜末2‑5份、鱼腥草9‑12份、淡竹叶9‑15份、马齿苋6‑8份、小球藻15‑20份、绿茶浸泡液40‑50份、浒苔粉15‑20份、大蒜泥1‑3份。本发明的可抑制黄曲霉的食品添加剂对动物和人无毒副作用，可有效抑制黄曲霉菌，因此可作为优良的食品添加剂。
Description
技术领域
本发明属于食品加工领域，具体涉及一种可抑制黄曲霉的食品添加剂，还涉及一种上述食品添加剂的制备方法。
背景技术
黄曲霉，半知菌类，一种常见腐生真菌。多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上。黄曲霉菌落生长较快，结构疏松，表面灰绿色，背面无色或略呈褐色。菌体有许多复杂的分枝菌丝构成。营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端产生烧瓶形或近球形顶囊，表面产生许多小梗(一般为双层)，小梗上着生成串的表面粗糙的球形分生孢子。分生孢子梗、顶囊、小梗和分生孢子合成孢子头，可用于产生淀粉酶、蛋白酶和磷酸二酯酶等，也是酿造工业中的常见菌种。
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。黄曲霉毒素中毒主要对动物肝脏的伤害，受伤害的个体因动物种类，年龄，性别和营养状态而异。研究结果表明，黄曲霉毒素可导致肝功能下降，降低牛奶产量和产蛋率，并使动物的免疫力降低，易受有害微生物的感染。此外，长期食用含低浓度黄曲霉毒素的饲料也可导致胚胎内中毒。通常年幼的动物对黄曲霉毒素更敏感。黄曲霉毒素的临床表现为消化系统功能紊乱，降低生育能力，降低饲料利用率，贫血等。黄曲霉毒素不仅能够使奶牛的产奶量下降，而且还使牛奶中含有转型的黄曲霉毒素m1和m2。据美国农业经济学家统计，由于食用黄曲霉毒素污染的饲料，每年至少要使美国畜牧业遭受10％的经济损失。在中国，黄曲霉同样给畜牧业带来严重的损失。因此，开发出一种能抑制黄曲霉的食品添加剂具有重要的研发价值和市场价值。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种可抑制黄曲霉的食品添加剂，以有效抑制黄曲霉菌。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案，一种可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将培养至稳定期的小球藻培养液离心、弃上清液收集沉淀的小球藻细胞，向收集的小球藻内加入重量为收集的小球藻质量的5-10％的蒸馏水，震荡混匀，放入超低温冰箱中存放4-6小时，取出，放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟，再超声波处理30-40min；
(2)将绿茶用开水浸泡4-6小时，过滤取绿茶浸泡液；
(3)将海水中打捞的浒苔清洗干净，晾干或烘干，粉碎，过80目筛，得浒苔粉；
(4)将新鲜的大蒜去皮、捣碎，得大蒜泥；
(5)按照配比称取以下质量份数的各组分：藿香18-25份、牡丹皮4-5份、土荆皮3-5份、姜末2-5份、鱼腥草9-12份、淡竹叶9-15份、马齿苋6-8份、步骤(1)所得到的小球藻15-20份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液40-50份、步骤(3)所得到的浒苔粉15-20份、步骤(4)所得到的大蒜泥1-3份；
(6)将称量好的牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软；
(7)将称量好的藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细，与步骤(6)浸泡所得的牡丹皮和土荆皮混合，加入适量清水，文火煎煮至剩余的液体量为初始液体总量的30％-40％，过滤取煎煮液；
(8)将步骤(7)所得的煎煮液与称量好的步骤(1)所得到的小球藻、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液、步骤(3)所得到的浒苔粉混匀，放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；
(9)将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀，然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h；
(10)将步骤(9)所得的混合物减压浓缩，浓缩至60℃时测密度为1.14～1.18的稠膏状流浸膏，即得。
步骤(1)中，将离心收集的小球藻培养液放入超低温冰箱中存放4-6小时然后取出放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟的作用是有利于将大部分小球藻细胞壁破碎，进而有利于使小球藻细胞内的有效成分被释放出来进而发挥其相应的作用，超声波处理30-40min的作用是使小球藻细胞壁更充分破壁。将绿茶用开水浸泡的作用是充分浸出绿茶中的杀菌抑菌成分。将浒苔清洗、晾干或烘干、粉碎的作用是有利于后续步骤中充分萃取出浒苔中的有效成分。将大蒜捣碎的作用是增大其与其他组分的接触面积，有利于各组分之间更好的反应。牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软的作用是有利于后续步骤中充分煎出牡丹皮和土荆皮中的有效成分。将藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细并与浸泡后的牡丹皮和土荆皮一起煎煮的作用是使上述各组分充分煎出和反应，并能改善药物的刺激作用。步骤(8)的萃取步骤可以充分萃取出小球藻和浒苔粉的有效成分，并与步骤(7)所得的煎煮液、绿茶浸泡液充分结合和反应，进而有利于发挥各组分之间的协同效果。将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀、然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h的作用是，使大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液充分混合和反应，所制得的产品能对黄曲霉菌发挥很好的抑制作用。
优选地，步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香18份、牡丹皮5份、土荆皮5份、姜末3份、鱼腥草9份、淡竹叶12份、马齿苋8份、步骤(1)所得到的小球藻20份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液45份、步骤(3)所得到的浒苔粉15份、步骤(4)所得到的大蒜泥2份。
优选地，步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香20份、牡丹皮4份、土荆皮4份、姜末4份、鱼腥草12份、淡竹叶9份、马齿苋6份、步骤(1)所得到的小球藻20份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液40份、步骤(3)所得到的浒苔粉18份、步骤(4)所得到的大蒜泥1份。
优选地，步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香21份、牡丹皮4份、土荆皮5份、姜末3份、鱼腥草10份、淡竹叶10份、马齿苋7份、步骤(1)所得到的小球藻16份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液50份、步骤(3)所得到的浒苔粉20份、步骤(4)所得到的大蒜泥3份。
优选地，步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香24份、牡丹皮5份、土荆皮3份、姜末5份、鱼腥草9份、淡竹叶14份、马齿苋7份、步骤(1)所得到的小球藻18份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液48份、步骤(3)所得到的浒苔粉16份、步骤(4)所得到的大蒜泥2份。
优选地，步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香25份、牡丹皮5份、土荆皮4份、姜末2份、鱼腥草11份、淡竹叶15份、马齿苋6份、步骤(1)所得到的小球藻15份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液45份、步骤(3)所得到的浒苔粉20份、步骤(4)所得到的大蒜泥3份。
一种上述制备方法所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂。
用法用量：每1kg食品或饲料中加入2-5g本发明所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂。
本发明的各原料组分均为绿色天然原料，对动物和人无毒副作用，可有效抑制黄曲霉菌，因此可作为优良的食品添加剂。以上述比例、按本发明的制备方法所制得的食品添加剂能很好的发挥各组分的杀菌抑菌效果，对黄曲霉菌具有显著的抑制效果，添加到食物或饲料中可以减少黄曲霉菌的危害，且食品添加剂中的各组分不仅天然无毒，还具有一定的保健作用，有利于人体或养殖动物的健康。在养殖动物的饲料中添加本发明的食品添加剂，可降低黄曲霉菌的影响，提高养殖动物的免疫力，提高养殖收益。
具体来说本发明与现有技术相比可产生如下积极效果：
(1)步骤(1)中，将离心收集的小球藻培养液放入超低温冰箱中存放4-6小时然后取出放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟的作用是有利于将大部分小球藻细胞壁破碎，进而有利于使小球藻细胞内的有效成分被释放出来进而发挥其相应的作用，超声波处理30-40min的作用是使小球藻细胞壁更充分破壁。将绿茶用开水浸泡的作用是充分浸出绿茶中的杀菌抑菌成分。将浒苔清洗、晾干或烘干、粉碎的作用是有利于后续步骤中充分萃取出浒苔中的有效成分。将大蒜捣碎的作用是增大其与其他组分的接触面积，有利于各组分之间更好的反应。牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软的作用是有利于后续步骤中充分煎出牡丹皮和土荆皮中的有效成分。将藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细并与浸泡后的牡丹皮和土荆皮一起煎煮的作用是使上述各组分充分煎出和反应，并能改善药物的刺激作用。步骤(8)的萃取步骤可以充分萃取出小球藻和浒苔粉的有效成分，并与步骤(7)所得的煎煮液、绿茶浸泡液充分结合和反应，进而有利于发挥各组分之间的协同效果。将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀、然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h的作用是，使大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液充分混合和反应，所制得的产品能对黄曲霉菌发挥很好的抑制作用。
(2)本发明的各原料组分均为绿色天然原料，对动物和人无毒副作用，可有效抑制黄曲霉菌，因此可作为优良的食品添加剂。以上述比例、按本发明的制备方法所制得的食品添加剂能很好的发挥各组分的杀菌抑菌效果，对黄曲霉菌具有显著的抑制效果，添加到食物或饲料中可以减少黄曲霉菌的危害，且食品添加剂中的各组分不仅天然无毒，还具有一定的保健作用，有利于人体或养殖动物的健康。在养殖动物的饲料中添加本发明的食品添加剂，可降低黄曲霉菌的影响，提高养殖动物的免疫力，提高养殖收益。
具体实施方式
实施例1
一种可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将培养至稳定期的小球藻培养液以8000r/min的转速离心5min、弃上清液收集沉淀的小球藻细胞，向收集的小球藻内加入重量为收集的小球藻质量的6％的蒸馏水，震荡混匀，放入超低温冰箱中存放4-6小时，取出，放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟，再超声波处理30-40min使小球藻细胞壁破碎；
(2)将绿茶用开水浸泡4-6小时，加入的开水的重量为绿茶重量的30倍，过滤取绿茶浸泡液；
(3)将海水中打捞的浒苔清洗干净，晾干或烘干，粉碎，过80目筛，得浒苔粉；
(4)将新鲜的大蒜去皮、捣碎，得大蒜泥；
(5)按照配比称取以下质量份数的各组分：藿香18份、牡丹皮5份、土荆皮5份、姜末3份、鱼腥草9份、淡竹叶12份、马齿苋8份、步骤(1)所得到的小球藻20份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液45份、步骤(3)所得到的浒苔粉15份、步骤(4)所得到的大蒜泥2份；
(6)将称量好的牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软；
(7)将称量好的藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细，与步骤(6)浸泡所得的牡丹皮和土荆皮混合，加入适量清水(加入的清水的质量为藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶、马齿苋牡丹皮和土荆皮总质量的25倍)，文火煎煮至剩余的液体量为初始液体总量的30％-40％，过滤取煎煮液；
(8)将步骤(7)所得的煎煮液与称量好的步骤(1)所得到的小球藻、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液、步骤(3)所得到的浒苔粉混匀，放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；
(9)将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀，然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h；
(10)将步骤(9)所得的混合物减压浓缩，浓缩至60℃时测密度为1.14～1.18的稠膏状流浸膏，即得。
一种上述制备方法所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂。
实施例2
一种可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将培养至稳定期的小球藻培养液放入离心机中以8000r/min的转速离心5min、弃上清液收集沉淀的小球藻细胞，向收集的小球藻内加入重量为收集的小球藻质量的10％的蒸馏水，震荡混匀，放入超低温冰箱中存放4-6小时，取出，放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟，再超声波处理30-40min使小球藻细胞壁破碎；
(2)将绿茶用开水浸泡4-6小时，加入的开水的重量为绿茶重量的30倍，过滤取绿茶浸泡液；
(3)将海水中打捞的浒苔清洗干净，晾干或烘干，粉碎，过80目筛，得浒苔粉；
(4)将新鲜的大蒜去皮、捣碎，得大蒜泥；
(5)按照配比称取以下质量份数的各组分：藿香20份、牡丹皮4份、土荆皮4份、姜末4份、鱼腥草12份、淡竹叶9份、马齿苋6份、步骤(1)所得到的小球藻20份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液40份、步骤(3)所得到的浒苔粉18份、步骤(4)所得到的大蒜泥1份；
(6)将称量好的牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软；
(7)将称量好的藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细，与步骤(6)浸泡所得的牡丹皮和土荆皮混合，加入适量清水(加入的清水的质量为藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶、马齿苋牡丹皮和土荆皮总质量的25倍)，文火煎煮至剩余的液体量为初始液体总量的30％-40％，过滤取煎煮液；
(8)将步骤(7)所得的煎煮液与称量好的步骤(1)所得到的小球藻、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液、步骤(3)所得到的浒苔粉混匀，放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；
(9)将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀，然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h；
(10)将步骤(9)所得的混合物减压浓缩，浓缩至60℃时测密度为1.14～1.18的稠膏状流浸膏，即得。
一种上述制备方法所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂。
实施例3
一种可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将培养至稳定期的小球藻培养液放入离心机中以8000r/min的转速离心5min、弃上清液收集沉淀的小球藻细胞，向收集的小球藻内加入重量为收集的小球藻质量的8％的蒸馏水，震荡混匀，放入超低温冰箱中存放4-6小时，取出，放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟，再超声波处理30-40min使小球藻细胞壁破碎；
(2)将绿茶用开水浸泡4-6小时，加入的开水的重量为绿茶重量的30倍，过滤取绿茶浸泡液；
(3)将海水中打捞的浒苔清洗干净，晾干或烘干，粉碎，过80目筛，得浒苔粉；
(4)将新鲜的大蒜去皮、捣碎，得大蒜泥；
(5)按照配比称取以下质量份数的各组分：藿香21份、牡丹皮4份、土荆皮5份、姜末3份、鱼腥草10份、淡竹叶10份、马齿苋7份、步骤(1)所得到的小球藻16份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液50份、步骤(3)所得到的浒苔粉20份、步骤(4)所得到的大蒜泥3份；
(6)将称量好的牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软；
(7)将称量好的藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细，与步骤(6)浸泡所得的牡丹皮和土荆皮混合，加入适量清水(加入的清水的质量为藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶、马齿苋牡丹皮和土荆皮总质量的25倍)，文火煎煮至剩余的液体量为初始液体总量的30％-40％，过滤取煎煮液；
(8)将步骤(7)所得的煎煮液与称量好的步骤(1)所得到的小球藻、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液、步骤(3)所得到的浒苔粉混匀，放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；
(9)将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀，然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h；
(10)将步骤(9)所得的混合物减压浓缩，浓缩至60℃时测密度为1.14～1.18的稠膏状流浸膏，即得。
一种上述制备方法所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂。
实施例4
一种可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将培养至稳定期的小球藻培养液放入离心机中以8000r/min的转速离心5min、弃上清液收集沉淀的小球藻细胞，向收集的小球藻内加入重量为收集的小球藻质量的6％的蒸馏水，震荡混匀，放入超低温冰箱中存放4-6小时，取出，放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟，再超声波处理30-40min使小球藻细胞壁破碎；
(2)将绿茶用开水浸泡4-6小时，加入的开水的重量为绿茶重量的30倍，过滤取绿茶浸泡液；
(3)将海水中打捞的浒苔清洗干净，晾干或烘干，粉碎，过80目筛，得浒苔粉；
(4)将新鲜的大蒜去皮、捣碎，得大蒜泥；
(5)按照配比称取以下质量份数的各组分：藿香24份、牡丹皮5份、土荆皮3份、姜末5份、鱼腥草9份、淡竹叶14份、马齿苋7份、步骤(1)所得到的小球藻18份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液48份、步骤(3)所得到的浒苔粉16份、步骤(4)所得到的大蒜泥2份；
(6)将称量好的牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软；
(7)将称量好的藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细，与步骤(6)浸泡所得的牡丹皮和土荆皮混合，加入适量清水(加入的清水的质量为藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶、马齿苋牡丹皮和土荆皮总质量的25倍)，文火煎煮至剩余的液体量为初始液体总量的30％-40％，过滤取煎煮液；
(8)将步骤(7)所得的煎煮液与称量好的步骤(1)所得到的小球藻、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液、步骤(3)所得到的浒苔粉混匀，放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；
(9)将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀，然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h；
(10)将步骤(9)所得的混合物减压浓缩，浓缩至60℃时测密度为1.14～1.18的稠膏状流浸膏，即得。
一种上述制备方法所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂。
实施例5
一种可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将培养至稳定期的小球藻培养液放入离心机中以8000r/min的转速离心5min、弃上清液收集沉淀的小球藻细胞，向收集的小球藻内加入重量为收集的小球藻质量的5％的蒸馏水，震荡混匀，放入超低温冰箱中存放4-6小时，取出，放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟，再超声波处理30-40min使小球藻细胞壁破碎；
(2)将绿茶用开水浸泡4-6小时，加入的开水的重量为绿茶重量的30倍，过滤取绿茶浸泡液；
(3)将海水中打捞的浒苔清洗干净，晾干或烘干，粉碎，过80目筛，得浒苔粉；
(4)将新鲜的大蒜去皮、捣碎，得大蒜泥；
(5)按照配比称取以下质量份数的各组分：藿香25份、牡丹皮5份、土荆皮4份、姜末2份、鱼腥草11份、淡竹叶15份、马齿苋6份、步骤(1)所得到的小球藻15份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液45份、步骤(3)所得到的浒苔粉20份、步骤(4)所得到的大蒜泥3份；
(6)将称量好的牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软；
(7)将称量好的藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细，与步骤(6)浸泡所得的牡丹皮和土荆皮混合，加入适量清水(加入的清水的质量为藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶、马齿苋牡丹皮和土荆皮总质量的25倍)，文火煎煮至剩余的液体量为初始液体总量的30％-40％，过滤取煎煮液；
(8)将步骤(7)所得的煎煮液与称量好的步骤(1)所得到的小球藻、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液、步骤(3)所得到的浒苔粉混匀，放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；
(9)将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀，然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h；
(10)将步骤(9)所得的混合物减压浓缩，浓缩至60℃时测密度为1.14～1.18的稠膏状流浸膏，即得。
一种上述制备方法所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂。
抑菌实验
培养基：察氏培养基，加热溶解，分装后121℃灭菌15-20min。
菌种为：黄曲霉菌(ATCC28539)，购自北纳创联生物技术研究院。
菌悬液制备：用接种环挑取3-4环培养5天左右的黄曲霉菌孢子，置于10ml带无菌玻璃珠的无菌水中，采用活菌计数法测定菌数，制成菌体浓度为106-107CFU/ml的均匀菌悬液。
抑菌圈实验：取0.1ml菌悬液滴入察氏培养基，涂布均匀，即为含菌平板。实验组处理如下：用灭菌去离子水分别将本发明实施例1-实施例5所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂溶解稀释至质量百分比为2％，将灭菌滤纸片(d＝6mm)分别用质量百分比为2％的本发明实施例1-实施例5所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂浸泡1h，取出分别贴于各处理组的含菌平板的琼脂表面中央。对照组处理如下：将灭菌滤纸片(d＝6mm)用灭菌去离子水浸泡1h，取出贴于含菌平板的琼脂表面中央。每个实验组和对照组分别设置3个平行。将各处理组的培养皿置于28℃条件下恒温培养，倒置培养5天后用游标卡尺(精度为0.02mm)测量抑菌圈大小，计算平均值，并记录。
无抑菌圈以“-”表示；
抑菌圈直径7-9mm为轻度抑菌，以“+”表示；
抑菌圈直径10～15mm为中度抑菌，以“++”表示；
抑菌圈直径＞15mm为高度抑菌，以“+++”表示；
实验结果见表1：
表1 本发明的可抑制黄曲霉的食品添加剂对黄曲霉的抑制效果
由表1可知，本发明的可抑制黄曲霉的食品添加剂对黄曲霉具有显著的抑菌效果。
最低抑菌浓度实验
培养基：察氏培养基，加热溶解，分装后121℃灭菌15-20min。
菌种为：黄曲霉菌(ATCC28539)，购自北纳创联生物技术研究院。
菌悬液制备：用接种环挑取3-4环培养5天左右的黄曲霉菌孢子，置于10ml带无菌玻璃珠的无菌水中，采用活菌计数法测定菌数，制成菌体浓度为106-107CFU/ml的均匀菌悬液。
将本发明实施例1-实施例5的可抑制黄曲霉的食品添加剂用灭菌去离子水分别进行50倍、100倍、200倍、400倍、800倍、1000倍、1500倍稀释。取0.1ml菌悬液滴入已灭菌冷却凝固的培养基中，涂布均匀，得含菌平板。吸取各稀释液0.1ml，于无菌条件下涂布到含菌平板的琼脂表面，倒置培养5天(培养温度28℃)，以不生长菌的样品的浓度为可抑制黄曲霉的食品添加剂的最低抑菌浓度(MIC)。实验结果见下表(表2)：
表2 本发明的可抑制黄曲霉的食品添加剂对黄曲霉的MIC
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将培养至稳定期的小球藻培养液离心、弃上清液收集沉淀的小球藻细胞，向收集的小球藻内加入重量为收集的小球藻质量的5-10％的蒸馏水，震荡混匀，放入超低温冰箱中存放4-6小时，取出，放水浴振荡器中30-40℃溶解20-30分钟，再超声波处理30-40min；
(2)将绿茶用开水浸泡4-6小时，过滤取绿茶浸泡液；
(3)将海水中打捞的浒苔清洗干净，晾干或烘干，粉碎，过80目筛，得浒苔粉；
(4)将新鲜的大蒜去皮、捣碎，得大蒜泥；
(5)按照配比称取以下质量份数的各组分：藿香18-25份、牡丹皮4-5份、土荆皮3-5份、姜末2-5份、鱼腥草9-12份、淡竹叶9-15份、马齿苋6-8份、步骤(1)所得到的小球藻15-20份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液40-50份、步骤(3)所得到的浒苔粉15-20份、步骤(4)所得到的大蒜泥1-3份；
(6)将称量好的牡丹皮和土荆皮用清水浸泡至药材变软；
(7)将称量好的藿香、姜末、鱼腥草、淡竹叶和马齿苋分别研细，与步骤(6)浸泡所得的牡丹皮和土荆皮混合，加入适量清水，文火煎煮至剩余的液体量为初始液体总量的30％-40％，过滤取煎煮液；
(8)将步骤(7)所得的煎煮液与称量好的步骤(1)所得到的小球藻、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液、步骤(3)所得到的浒苔粉混匀，放置于超临界萃取仪中的萃取釜中，利用二氧化碳作为介质进行萃取，萃取釜压力为40Mpa，萃取温度为45℃，分离器压力12Mpa，分离器温度为70℃，萃取2小时，得到萃取液；
(9)将步骤(4)所得到的大蒜泥与步骤(8)所得的萃取液混匀，然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h；
(10)将步骤(9)所得的混合物减压浓缩，浓缩至60℃时测密度为1.14～1.18的稠膏状流浸膏，即得。
2.根据权利要求1所述的可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香18份、牡丹皮5份、土荆皮5份、姜末3份、鱼腥草9份、淡竹叶12份、马齿苋8份、步骤(1)所得到的小球藻20份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液45份、步骤(3)所得到的浒苔粉15份、步骤(4)所得到的大蒜泥2份。
3.根据权利要求1所述的可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香20份、牡丹皮4份、土荆皮4份、姜末4份、鱼腥草12份、淡竹叶9份、马齿苋6份、步骤(1)所得到的小球藻20份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液40份、步骤(3)所得到的浒苔粉18份、步骤(4)所得到的大蒜泥1份。
4.根据权利要求1所述的可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香21份、牡丹皮4份、土荆皮5份、姜末3份、鱼腥草10份、淡竹叶10份、马齿苋7份、步骤(1)所得到的小球藻16份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液50份、步骤(3)所得到的浒苔粉20份、步骤(4)所得到的大蒜泥3份。
5.根据权利要求1所述的可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香24份、牡丹皮5份、土荆皮3份、姜末5份、鱼腥草9份、淡竹叶14份、马齿苋7份、步骤(1)所得到的小球藻18份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液48份、步骤(3)所得到的浒苔粉16份、步骤(4)所得到的大蒜泥2份。
6.根据权利要求1所述的可抑制黄曲霉的食品添加剂的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，称取的各组分的质量份数如下：藿香25份、牡丹皮5份、土荆皮4份、姜末2份、鱼腥草11份、淡竹叶15份、马齿苋6份、步骤(1)所得到的小球藻15份、步骤(2)所得到的绿茶浸泡液45份、步骤(3)所得到的浒苔粉20份、步骤(4)所得到的大蒜泥3份。
7.一种权利要求1-6中任一项所述的制备方法所制得的可抑制黄曲霉的食品添加剂。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20170718 |