CN106924354B - 一种具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物及其应用；所述中药组合物由下述重量配比的原料制成：淫羊藿8～12份，博落回4～20份，厚朴7～11份，甘草6～10份。本发明的中药组合物，具有通过抑制肿瘤细胞端粒酶活性、细胞毒性作用以及增加动物机体免疫力而达到抑制肺癌细胞增殖的功效，并且毒副作用小，成本低廉。

Description

一种具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物及其应用
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物及其应用。
背景技术
肿瘤(tumor)是在各种致癌因素作用下，机体局部组织细胞生长失控而恶性化增殖的产物。肿瘤细胞向正常组织细胞的侵润、转移最终导致了患者的死亡。近年来肿瘤性疾病已广泛发生于人、禽、猪、牛、兔、鱼类以及实验动物中。
目前，随着肺部肿瘤发病率的不断升高，不仅对动物的呼吸系统造成严重影响，也威胁着畜禽的生命健康，给畜禽业造成严重危害。如何提高抗肿瘤药物的临床应用效果，有效控制肺部肿瘤患者的病死率是广大医学工作者应探讨的重要课题，而抗肿瘤药物的治疗效果主要取决于药物对肿瘤细胞的杀伤力以及药物在肿瘤组织中存留时间。然而，在传统肺脏肿瘤患者的临床治疗中，多采用西药和放射性治疗，虽暂时延缓病情，但对患者的正常组织细胞也造成一定损害，包括伴有白细胞下降、血红蛋白下降、恶心呕吐及体质量下降等多种毒副作用。
中草药在抑制肿瘤生长方面，有着独到的优势，而且中草药价格低廉、毒副作用小、来源广，选择中草药抑制肿瘤生长不仅节约成本，而且能增强机体免疫力达到抑制肿瘤增长，控制病情，减少动物死亡，进而提高养殖效益。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物及其应用，该中药组合物具有抑制肺癌细胞增殖的功效，并且原料来源广泛，成本低廉，且毒副作用小。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物，所述中药组合物由下述重量配比的原料制成：淫羊藿8～12份，博落回4～20份，厚朴7～11份，甘草6～10份。
作为本发明的优选技术方案，所述中药组合物由下述重量配比的原料制成：淫羊藿9～11份，博落回8～14份，厚朴8～10份，甘草7～9份。
作为本发明的优选技术方案，所述中药组合物由下述重量配比的原料制成：淫羊藿10份，博落回12份，厚朴9份，甘草8份。
本发明的中药组合物的各原料具有如下性质和功效：
淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescensMaxim.或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥叶；味微苦，性辛、甘，温；归肝、肾经；功能补肾经。强筋骨，祛风湿；主治肾阳虚衰，阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛。
博落回为学名罂粟科植物博落回Papaveraceae Macleaya cordata的干燥根；味辛、苦，温，有毒；功能消肿，解毒，杀虫；主治指疔，脓肿，急性扁桃体炎，中耳炎，滴虫性阴道炎，下肢溃疡，烫伤，顽癣。
厚朴为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils或凹叶面厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮；味辛、苦，温；归脾、胃、肺、大肠经；功能燥湿消痰，下气除满；主治湿滞伤中，脘痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳。
甘草为豆科植物甘草Radix Glycyrrhiza uralensis Fisch、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎；味甘、平；归心、肺、脾、胃经；功能补脾益气，清热解毒，祛痰止咳、缓急止痛，调和诸药；主治脾胃虚弱，倦怠乏力，脘腹等。
上述具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物在制备治疗肺癌的药物中的应用。
上述具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物制备的药液，采用50％醇提取法提取淫羊藿、博落回、厚朴和甘草进行药液制备，并旋转蒸发成浓度为1×10-2g/mL至1×10- 5g/mL的药液。
本发明的有益效果在于：
本发明的中药组合物，具有通过抑制肿瘤细胞端粒酶活性、细胞毒性作用以及增加动物机体免疫力而达到抑制肺癌细胞增殖的功效；药物浓度在1×10-2g/mL至1×10-5g/mL均能够抑制肺癌细胞生长能力，并且毒副作用小，成本低廉。
附图说明
图1为胎鼠肺上皮细胞生长情况图；a为培养0h的胎鼠肺上皮细胞(10×)，b为培养12h的胎鼠肺上皮细胞(10×)，c为培养24h的胎鼠肺上皮细胞(10×)。
图2为小鼠肺癌细胞生长情况图；a为正常小鼠肺癌细胞(10×)，b为药物作用后的小鼠肺癌细胞(10×)。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1 中药组合物
中药组合物配方1：淫羊藿8g，博落回4g，厚朴7g，甘草6g。
中药组合物配方2：淫羊藿9g，博落回8g，厚朴8g，甘草7g。
中药组合物配方3：淫羊藿10g，博落回12g，厚朴9g，甘草8g。
中药组合物配方4：淫羊藿11g，博落回16g，厚朴10g，甘草9g。
中药组合物配方5：淫羊藿12g，博落回20g，厚朴11g，甘草10g。
实施例2 中药组合物制成药液
将实施例1的五种配方的中药组合物制成药液，其制备方法为：采用50％醇提取法提取淫羊藿、博落回、厚朴和甘草进行药液制备，并旋转蒸发成所需浓度的药液，对应配方1-5分别为配方1液、配方2液、配方3液、配方4液、配方5液。
实施例3 正常胎鼠肺上皮细胞的制备
方法：选择孕期满19d的怀孕昆明母鼠，在无菌环境下，剖宫取出胎鼠，正常小鼠肺细胞再取出胎鼠的肺脏，除净杂质，用胰酶和胶原纤维酶多次消化得到混合的小鼠肺细胞(由西南大学荣昌校区中兽药研究与开发室分离培养鉴定)悬液，接种于培养瓶中，于37℃、5％CO2培养箱中培养，并观察细胞的生长情况及其形态的变化。
结果：经剖腹产的胎鼠，在胰酶和胶原纤维酶消化分离都得到的肺细胞，呈均匀散在分布在细胞瓶中进行培养，如图1，培养12h后，细胞开始贴壁生长，多个细胞聚在一起形成小集落，24h后，细胞伸展呈多边形或立方形，聚集成岛状生长，细胞之间紧密连接。
实施例4 配方1-5的中药组合物对正常胎鼠肺细胞毒性试验
方法：选择生长良好的、对数生长期的正常鼠肺细胞，加入0.25％的胰蛋白酶37℃消化，用含10％胎牛血清的培养液稀释成1×105个/mL的细胞悬液，每孔200μL接种于96孔板中，待长满单层后弃去培养液，用PBS洗涤2次，加入分别含有100，10-1，10-2，10-3，10-4，10- 5g/mL中药的维持液，每孔200μL，每个浓度重复6孔，同时设正常细胞对照组，置培养箱中培养，每日观察细胞形态变化，24h后，在避光条件下每孔加20μL的MTT，37℃孵育4h，吸弃上清液，每孔加150μL的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)，充分震荡混匀，于570nm处测定吸光值(OD值)。
结果：见表1，5个中药配方浓度C均大于10-2g/mL时，细胞开始出现圆缩，脱落，甚至死亡，且存活率显著低于正常细胞对照组，且P<0.05。当5个配方浓度C≤10-2g/mL时，细胞存活率与空白组相比差异不显著，P>0.05。配方1、配方2、配方3、配方4、配方5对小鼠正常胎鼠肺细胞的最大无毒浓度分别为10-2、10-3、10-3、10-3、10-4g/mL。
表1 配方1-5的中药组合物对正常胎鼠肺细胞毒性试验结果
Figure BDA0001247502490000051
Figure BDA0001247502490000061
注：与正常细胞对照组相比，*表示P<0.05，**表示P<0.01，下同
实施例5 配方1-5的中药组合物对小鼠肺癌细胞增殖抑制的药效学试验
方法：根据实施例4所述的各配方最大无毒浓度，将小鼠肺癌细胞悬液稀释成1×105个/mL接入96孔细胞培养板，每孔200μL，长满单层后，吸弃培养液，再分不同浓度药物组，正常细胞对照组，正常细胞对照组只加细胞维持液，不同浓度药物组分别加入含各配方最大无毒浓度的维持液，置培养箱中培养，每日观察细胞形态变化，72h后，在避光条件下每孔加20μL的MTT，37℃孵育4h，吸弃上清液，每孔加150μL的二甲基亚砜(DMSO)，充分震荡混匀，检测490nm处的吸光值(OD值)。细胞增殖抑制率(％)＝(正常细胞对照组OD值-药物组OD值)/正常细胞对照组OD值×100％。
结果：见表2，配方1、配方4和配方2、配方3对肺癌细胞增殖抑制率显著或极显著高于正常细胞对照组，且p＜0.05或p＜0.01，其配方3抑制效果最好。当配方5浓度为10mg/L时，肺癌细胞存活率与空白组相比差异不显著，p>0.05。
表2 配方1-5的中药组合物对小鼠肺癌细胞增殖抑制的药效学试验结果
组别 药液浓度(mg/L) OD<sub>570</sub> 细胞增殖抑制率(％)
配方1 1000 0.521±0.139* 24.27±1.28
配方2 100 0.253±0.109** 63.23±1.32
配方3 100 0.202±0.049** 70.64±0.62
配方4 100 0.519±0.087* 24.56±0.78
配方5 10 0.578±0.192 15.99±0.68
正常细胞对照组 — 0.688±0.130 0
实施例6 配方3的中药组合物对小鼠肺癌细胞增殖抑制的药效学试验
方法见实施例5，实例6所用药为配方3。按Reed-Muench法计算中药复方组合物对正常胎鼠肺细胞的半数细胞毒浓度(TC50)及半数抑制浓度(IC50)。并将结果TC50和IC50进行分析，计算其治疗指数(TI)，TI＝TC50/IC50。
结果：见表3和表4，通过线性回归计算得到配方3的TC50和IC50分别为269.51mg/L和30.01mg/L，该药物的治疗指数TI为8.9，说明其对小鼠肺癌细胞有一定的抑制效果。
表3 配方3的中药组合物对小鼠肺癌细胞增殖抑制的药效学试验结果
Figure BDA0001247502490000071
表4 HBE抑制小鼠肺癌细胞增殖效果
药物 TC<sub>50</sub>(mg/L) IC<sub>50</sub>(mg/L) TI
配方3 269.51 30.01 8.98
实施例7 配方3的中药组合物对鼠肺癌细胞形态作用研究
方法：实施例7所用药为配方3浓度为100mg/L，将小鼠肺癌细胞(LLC，中国科学院典型培养物保藏中心昆明细胞所，编号：KCB2078YJ)接种于培养瓶中，于37℃、5％CO2培养箱中培养，并观察细胞的生长情况及其形态的变化。
结果：如图2所示，经光镜下观察，正常小鼠肺癌细胞为半贴壁生长，贴壁细胞形态呈多边形，未贴壁细胞散在分布在细胞底部；在药物作用24h后，肺癌细胞间彼此分离，细胞间连接减少，体积缩小且凝聚，细胞形态极度不规则，且随着作用时间的增长，细胞不断死亡而漂浮至培养液中。
本发明通过以上实施例研究了淫羊藿、博落回、厚朴、甘草组成的中药组合物在体外对小鼠肺癌细胞增殖的抑制作用，结果表明：本发明的中药组合物对小鼠肺癌细胞增殖有一定抑制效果，在试验中，药物对正常胎鼠肺上皮细胞细胞毒性小，药物对小鼠肺癌细胞的TC50为269.51mg/L，对LLC有一定的抑制增长的效果，IC50为30.01mg/L。
因此，本发明的中药组合物毒副作用小，可有效抑制肺癌细胞增殖，并且能达到高效、安全、经济地治疗肺癌病的目的。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (3)

1.一种具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由下述重量配比的原料制成：淫羊藿10份，博落回12份，厚朴9份，甘草8份。
2.根据权利要求1所述的具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物在制备治疗肺癌的药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的具有抑制肺癌细胞增殖作用的中药组合物制备的药液，其特征在于：采用50％醇提取法提取淫羊藿、博落回、厚朴和甘草进行药液制备，并旋转蒸发成浓度为1×10-2g/mL至1×10-5g/mL的药液。
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博落回抗肿瘤作用及诱导人体端粒DNA 形成G-四链体分子机制研究;杨舒等;《中草药》;20110430;第42卷(第4期);第738-742页，尤其是第738页摘要 *
和厚朴酚对人肺小细胞癌N446 细胞增殖与凋亡的影响;黄清松等;《长春中医药大学学报》;20131231;第29卷(第6期);第967-969页，尤其是第967页第2段，第968页右栏最后一段，第969页第1段 *
淫羊藿醇提物抑制肺癌生长及调节免疫作用研究;袁嘉瑞等;《中国中药杂志》;20160131;第41卷(第1期);第112-117页，尤其是第113页左栏第2段，右栏第2段，第116页讨论 *

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