CN106885898B - 一种用于检测血浆炎性细胞因子天然抗体的组合物、试剂盒、阻断剂及其临床应用 - Google Patents

一种用于检测血浆炎性细胞因子天然抗体的组合物、试剂盒、阻断剂及其临床应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种用于检测血浆炎性细胞因子天然抗体(Natural antibody for inflammatory cytokine，NAIC)的组合物、由该组合物制成的试剂盒和一组可用于阻断测试对象体内炎性细胞因子病理性反应的组合物及其临床应用。本发明利用与目标NAIC完全互补的2种线性抗原多肽实现对血浆中NAIC的定性、定量检测，并据以设计出一组可以针对性阻断炎性细胞因子病理性反应的组合物配方，从而为进一步探索精准治疗Ⅱ型糖尿病、心脑血管梗死等炎症相关疾病的研究打下实验基础。

Description

一种用于检测血浆炎性细胞因子天然抗体的组合物、试剂盒、 阻断剂及其临床应用
技术领域
本发明属于免疫学技术临床应用领域，涉及一种用于检测血浆炎性细胞因子天然抗体(Naturanl antibody for inflammatory cytokine,NAIC)的组合物、由该组合物制成的试剂盒、一组可用于阻断测试对象体内炎性细胞因子病理性反应的组合物及其临床应用。本发明利用与目标NAIC完全互补的2种线性抗原多肽实现对血浆中NAIC的定性、定量检测，并据以提出针对性阻断炎性细胞因子病理性反应的组合物优选配方，进而为探索低毒副作用的长期精准治疗Ⅱ型糖尿病、心脑血管梗死等炎症相关疾病的研究打下实验基础。
背景技术
炎症是人类及动物体内产生的一种防御性免疫反应，长期持续的慢性炎症反应可能会伴生机体内组织和细胞损伤导致多种常见疾病的发生。例如在糖尿病、动脉粥样硬化、肥胖症、肿瘤、类风湿性关节炎等疾患中炎性细胞因子的影响时隐时现，孰因孰果学界却未有定论。目前研究较多的炎性细胞因子，主要包括白细胞介素1(interleukin 1α和β，IL1-α和IL1-β),白细胞介素6(interleukin 6，IL6),白细胞介8(interleukin8，IL8)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα，TNF-α)。学界公认这些炎性细胞因子几乎参与所有炎症反应过程且与多种疾病的发生有关，同时大量研究报道表明这些炎性细胞因子可随年龄增长或长期亚健康状态而持续性增高，但相当大比例的一部分心脑血管梗塞疾患和Ⅱ型糖尿病的发生与发展却又未发现与此相关的证据或迹象。如能针对性监测炎性细胞因子天然抗体水平增减与病症变化，从中控制、影响某些环节，就可能防止慢性炎症反应对机体造成的损伤。
在抗炎性细胞因子临床应用方面，常见的有以单克隆抗体药物治疗类风湿性关节炎，例如抗肿瘤坏死因子的单克隆抗体-阿达木单抗(Adalimumab或Humira)和英利昔单抗(Infliximab或Remicade)，抗白细胞介素-1β单克隆抗体-卡那单抗(Canakinumab或Ilaris)以及抗白细胞介素-6受体的单克隆抗体-托珠单抗(Actemra或Tocilizumab)，但普遍毒副作用较大，不宜长期连续用于维持性治疗。目前，Ⅱ型糖尿病患者一般须长期承受胰岛素外部介入的伤害来换取病情发展减缓，心脑血管梗塞高危人群用药亦多有无的放矢长期过量用药。
发明内容
本发明的主要目的是提供一组用于检测人血浆中炎性细胞因子天然抗体(Natural antibody for inflammatory cytokine,NAIC)浓度的线性抗原多肽和由此制备的试剂盒，以及使用该组抗原多肽或该试剂盒检测人血浆中NAIC的方法。所述抗原多肽为IL6及IL8两种炎性细胞因子的抗原表位。这些抗原表位能够与人血浆中针对IL6和IL8的自身抗体发生特异性结合。
本发明所定义的“炎性细胞因子天然抗体”或“NAIC”是自然存在于人体内的，能识别一种或多种炎性细胞因子抗原表位的多克隆抗体混合物。在本发明中，“炎性细胞因子天然抗体”或“NAIC”首先是能识别IL6和IL8两种炎性细胞因子抗原表位的多种抗体(单克隆抗体和/或多克隆抗体)的混合物。在本发明的特定实施方案中，所述“炎性细胞因子天然抗体”或“NAIC”是指能识别选自SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的一个或两个多肽序列的抗体(单克隆抗体和/或多克隆抗体)的混合物。
本发明人利用免疫信息学方法和计算机软件，在IL6及IL8蛋白序列上进行人类白细胞二类抗原(Human leukocyte antigen II,HLA-II)表位制图，甄别具有高度亲和力的序列，进而设计能被绝大多数人类抗原提呈细胞识别的HLA-II限制性表位及线性抗原多肽。
已经公认，抗原抗体的结合主要发生在抗原决定簇(即抗原表位)与抗体结合位点之间。因此，两者在空间结构和构型上越接近完全互补，抗原抗体的结合就越稳定，特异性就越强，结合效率就越高，因此，目标抗体(待检测抗体)及其结合位点结构是先决因素，抗原决定簇影响整个蛋白抗原与抗体结合状态和亲和特性。
本发明根据IL6及IL8两种蛋白的生物学特性，针对这两种蛋白的多个抗原表位进行免疫信息学预测和模拟，经分析与抗原性相关的各种参数，分别设计了两种在空间结构和构型上与目标抗体完全互补的线性抗原表位多肽，其氨基酸序列见表1。
表1.检测人血浆中NAIC的两种线性抗原表位多肽序列
IL6分子的全长氨基酸序列(212氨基酸)及线性抗原多肽区域
IL8分子的全长氨基酸序列(99氨基酸)及线性抗原多肽区域
经固相化学法合成上述2种抗原多肽，并按等浓度比例混合后制备ELISA抗体检测试剂盒，按设定的流程规范检测人血浆中NAIC浓度。上述2种抗原多肽在实际应用中可制备成简单易用的便捷试剂盒，以玻璃、医用塑料等非金属材料真空密封包装，4度(4℃)环境下可保存6个月以上。简言之，用2种抗原多肽的混合液包被马来酰亚胺(Maleimide)活化的96孔微量检测板,在45度(45℃)烤箱中干燥后，用非金属包装材料真空密封包装，制成试剂盒。优选地，2种合成抗原多肽均为纯度>95％的制品。
因此，根据本发明之一，提供了一种用于检测人血浆NAIC的组合物，其中包含如下2种抗原多肽：
H-LLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALR-OH
H-KELRCQCIKTY SKPFHPKFIK ELRVIESGPHC-OH
在一些实施方案中，所述2种抗原多肽为高纯度制品，优选为纯度>95％的化学合成制品。
在一些实施方案中，所述组合物中2种抗原多肽的比例为1:1(重量体积浓度比)。根据本发明的另一个方面，提供一种包含上述组合物的试剂盒。
在一些实施方案中，所述试剂盒是用上述2种抗原多肽的混合液包被马来酰亚胺(Maleimide)活化的96孔微量检测板,干燥后用非金属医用包装材料真空密封包装而制得。
在一些优选的实施方案中，所述非金属医用包装材料为玻璃或医用塑料。
在另一些实施方案中，所述试剂盒还包括阳性对照和/或阴性对照。
根据本发明的另一个方面，提供一种使用上述组合物或上述试剂盒检测待测样品中NAIC浓度的方法，包括使所述组合物与待测样品中的NAIC之间发生抗原抗体反应，并确定待测样品中的NAIC水平。优选所述方法是在体外进行的，并且是非诊断目的的。
在一些实施方案中，所述方法包括将上述组合物中的2种抗原多肽等比混合，然后通过抗原抗体结合反应检测待测样品中的NAIC水平。
利用抗原多肽通过抗原抗体结合反应检测或确定待测样品中的抗体水平的技术在本领域是众所周知的，例如酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。在优选的实施方案中，在上述方法中通过酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测或确定待测样品中的NAIC水平。
在更优选的实施方案中，所述酶联免疫吸附测定为夹心法ELISA。
在更优选的实施方案中，将上述组合物中的2种抗原多肽等浓度比混合后，包被马来酰亚胺(Maleimide)活化的96孔微量检测板，放置4度过夜孵育，洗板，再对待测样品进行检测分析。
在更优选的实施方案中，所述对待测样品进行检测包括分步加样分析，所述分步加样分析包括将待测样品设双复孔，同时设2个阴性对照孔和2个阳性对照孔，用分析液将待测血浆稀释，并稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体，洗板，每孔加100μl 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)及过氧化物酶混合液，室温避光20～30分钟，每孔添加50μl终止液12％硫酸溶液(12％H2SO4)，然后用酶标仪检测光密度(OD)值，检测波长为450nm，参考波长为630nm。
在更优选的实施方案中，所述待测样品为个体血浆。
在更优选的实施方案中，所述方法的具体操作步骤为：
1、操作前，每种抗原用67％乙酸溶解为5毫克/ml储存液,然后等体积混合并放置-20℃(误差在±2℃范围内)冰箱中保存。
2、操作开始时，首先将表1中所列2种抗原多肽的混合液用包被液稀释为10～50微克/ml的工作液，该包被液为含0.15M氯化钠和10mMEDTA的0.1M磷酸盐缓冲液，pH值为7.0～7.4之间。
3、用工作液包被马来酰亚胺(Maleimide)活化的96孔微量检测板(ThermoScientific,美国)，4℃过夜孵育后，用洗液洗板3遍,所述洗液为含0.15M氯化钠和0.1％TWEEN-20的0.1M磷酸盐缓冲液，pH值为7.0～7.4之间。
4、然后按一下步骤分步加样和分析：
a、待测血浆样品设双复孔，另设2个阴性对照(NC)孔(参照物为不含抗IL6抗体和抗IL8抗体的阴性对照液，如牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich公司提供)，藉此可反映表1所述的2种多肽抗原在NAIC阴性反应体系中的实验指标值)和2个阳性对照(PC)孔(参照物为人抗IL6抗体和人抗IL8抗体的混合物，藉此可反映表1所述的2种多肽抗原在ICA阳性反应体系中的实验指标值)。
b、用分析液将待测血浆样品1:100-200稀释，所述分析液与抗原包被液相同，即含0.15M氯化钠和10mM EDTA的0.1M磷酸盐缓冲液，pH值为7.0～7.4之间，每孔加100μl,20-25℃孵育1-2小时，然后洗板3遍。
c、用分析液(即含0.15M氯化钠和10mM EDTA的0.1M磷酸盐缓冲液，酸碱度为7.0～7.4之间)稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体(用以验证血浆中被检测的物质是否是特异性抗体)，抗体稀释比例为1:10000～1:50000，每孔加100μl，20-25℃孵育1-2小时。
d、用洗液(即含0.15M氯化钠和0.1％TWEEN-20的0.1M磷酸盐缓冲液，pH值为7.0～7.4之间)洗板3遍后，每孔加100μl 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)及过氧化物酶混合液，室温避光20～30分钟。
e、每孔加50μl终止液12％硫酸溶液(12％H2SO4)，然后用酶标仪检测光密度(OD)值，检测波长为450nm，参考波长为630nm。检测过程在加入终止液后10分钟内完成，由此定量分析个体血浆中NAIC水平。
进行群体随机抽样分析时,可针对每一个体检测所得数据进行分析。在一些实施方案中，采用特异性结合比值(Specific binding ratio，SBR)判定血浆中NAIC的相对水平。SBR计算方法如下：
SBR＝[待测样品OD值–NC OD值]/[阳性标准品OD值–NCOD值]。
在本发明的另一个方面，提供上述组合物或试剂盒在体外地、非诊断目的地检测人血浆中NAIC水平中的应用。
在优选的实施方案中，所检测的NAIC是来自不同个体的人血浆。
基于以上方案，本发明提供了一种精度高、操作简易、成本适中的NAIC检测技术，并在此基础上，进一步提供了对NAIC半定量(或相对定量)的分析和应用方案，进而为预测炎症相关疾病的发病风险和发展全新且副作用低的免疫治疗策略奠定重要基础。
本发明还有一个衍生技术。通过检测人血浆中的NAIC水平，可将患有炎症相关疾病的病人划分为NAIC阳性与阴性两组。由于本发明试剂盒检测后结果为NAIC阴性目标个体可界定为存在炎性细胞因子引发的病理反应，因此若以一种可阻断血浆中炎性细胞因子产生病理反应的组合物对目标个体进行介入干预一段时间后，重新检测目标个体血浆中NAIC水平，则目标个体的血浆NAIC水平应当变成弱阳性或阳性，同时出现相应体征变化。这也能进一步印证血浆中炎性细胞因子产生病理反应与相关疾病的因果关系。
对此，本发明人经多方实验确认了一组可作为血浆中炎性细胞因子引发病理反应的阻断剂的组合物配方，其由可阻断血浆中炎性细胞因子产生病理反应的主要成分和维持组合物稳定性的片剂类药物传统辅助成分组成。目前所知，所述具有阻断血浆中炎性细胞因子产生病理反应作用的主要成分至少包括乙酰水杨酸、非那西丁、咖啡因、氨基比林、巴比妥等现有各类具有解热镇痛作用的药物以及各类应用抗炎性细胞因子的单克隆抗体药物，实际应用时可以是择一使用也可以是其中两种或多种的组合。所述维持组合物稳定性的传统辅助成分可选用枸橼酸、淀粉、二氧化硅、滑石粉等常见片剂类药物辅料。根据已有试验数据，常用的主料单独或混合使用时一般可以是乙酰水杨酸30-150毫克、咖啡因4-20毫克、氨基比林5-50毫克的剂量范围。
实践中，可阻断血浆中炎性细胞因子产生病理反应的该组合物可以用于开发NAIC检测结果为阴性的Ⅱ型糖尿病患者和心脑血管梗塞高危人群的辅助治疗的药物。根据目前实验结果，约20％的亚裔Ⅱ型糖尿病患者人群的血浆中NAIC检测结果为阴性。以本发明的检测试剂甄别出Ⅱ型糖尿病患者和心脑血管梗塞高危人群中的目标患者后，其中的自愿者以本发明所述可阻断血浆中炎性细胞因子产生病理反应的组合物介入观察一段时间后，其中Ⅱ型糖尿病患者对胰岛素的敏感性均有升高而不同程度地减少了胰岛素注射的剂量和频率(个别人员已停止注射补充胰岛素达六个月以上)，而该类心脑血管梗塞高危患者(筛选一年以上无解热镇痛类药物摄入史的部分)所有的血生化指标亦明显得到改善。本组合物方案在临床上可选用大多数具有阻断炎症细胞因子病理性反应过程的现有药物，在本发明所述试剂盒测试结果的引导下，本发明进一步设计了远低于现行剂量的给药方案并实现了意想不到的精准治疗效果，小剂量的给药方案亦意味着极低毒副作用，从而使现有药物得到全新的应用，或是拓展至长期维持治疗和部分原本并不适于用药的目标人群。
综上，本发明发现了一组全新的抗原多肽进而设计成实用的试剂盒并配套提出了阻断剂的组合物配方，因而提供了一种有效便捷的人血浆NAIC检测手段，可用于辅助定性、定量检测NAIC这类炎性细胞因子自身抗体，辅助量化测定不同个体血浆NAIC水平，区分富含NAIC(强阳性)和不含NAIC(阴性)的血浆。富含NAIC的血浆对炎症相关疾病具有防治作用，且配套的阻断剂配方对目标适应症亦有实质性的治疗价值。因此，本发明为生物制药公司研发像托珠单抗(Actemra或Tocilizumab)之类的新产品和临床医学发展防治炎症相关疾病的新措施提供了重要工具。由于本发明的抗原多肽合成手段相对简单而成本适中，为下一步应用富含NAIC血浆防治炎症相关疾病和评估血浆NAIC阴性个体的炎症相关疾病发病风险的临床实践奠定了重要基础。此外，用本发明产品检测出的血浆NAIC阴性个体，可能具有较高的炎症相关疾病发病风险，可以对其进行临床随访和追踪，达到早期实施防治的目的。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的主要目的和其它优点可通过在说明书、权利要求书中所特别指出的方案来实现和获得。
抗原多肽组合物及试剂盒的具体实施方式
下面结合实施例:使用表1所述2种抗原多肽检测血浆中NAIC水平,阐释本发明的原理及临床应用价值。
1.样本收集：由广东省某医院提供420份II糖尿病患者和正常成年人的血浆样品。所述正常成年人为临床体检确定的未曾患有糖尿病患者和其它严重炎症相关疾病的个体。所有血浆样品均在负80度(-80℃)条件下保存，使用前12小时在4度(4℃)冰箱中解冻。
2.样本检测：本实验所采用的表1中所列2种多肽抗原均由英国SEVERN BIOTECH有限公司合成，纯度为95％，具体操作步骤如下：
(1)操作前，每种抗原用67％乙酸溶解为5.0mg/ml储存液,然后等体积混合、成为包被液并放置-20℃(误差在±2℃范围内)冰箱中保存。
(2)操作开始时，首先将2种抗原的混合液用包被液稀释为20微克/ml，该包被液为含0.15M氯化钠和10mM EDTA的0.1M磷酸盐缓冲液，测得酸碱度pH值为7.3。
(3)然后用上述步骤(2)中获得的含2种抗原混合液的包被液包被马来酰亚胺(Maleimide)活化的96孔微量检测板(Thermo Scientific,美国)，4℃过夜(14-18小时)孵育后，用洗液洗板3遍,所述洗液为含0.15M氯化钠和0.1％TWEEN-20的0.1M磷酸盐缓冲液，测得酸碱度pH值为7.3。
(4)然后分步加样分析如下：
a、待测血浆样品设双复孔，另设2个阴性对照(NC)孔(牛血清白蛋白,由Sigma-Aldrich公司提供)和2个阳性对照(PC)孔(人抗IL6和人抗IL8抗体的混合物)。
b、用分析液将血浆1:150稀释，所述分析液与抗原包被液相同，为含0.15M氯化钠和10mM EDTA的0.1M磷酸盐缓冲液，酸碱度pH值为7.3，每孔加100μl，25℃孵育1.5小时。
c、以洗液(即含0.15M氯化钠和0.1％TWEEN-20的0.1M磷酸盐缓冲液，测得酸碱度pH值为7.3)洗板3遍后，用分析液(含0.15M氯化钠和10mM EDTA的0.1M磷酸盐缓冲液，酸碱度pH值为7.3)稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体(由Sigma-Aldrich公司提供)，抗体稀释比例为1:25000，每孔加100μl，25℃孵育1.5小时。
d、以前述洗液(即含0.15M氯化钠和0.1％TWEEN-20的0.1M磷酸盐缓冲液，测酸碱度pH值为7.3)洗板3遍后，每孔加100μl3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)及过氧化物酶混合液(由LifeTechnologies公司提供)，室温避光25分钟。
e、每孔加50μl终止液12％硫酸溶液(12％H2SO4，)，然后用酶标仪检测光密度(OD)值，检测波长为450nm，参考波长为630nm，加入终止液后10分钟内检测完毕，后续步骤可以依据此结果针对每一个体进行ICA的定量对比分析。
(5)针对前述检测所得数据进行分析，采用特异性结合比值(Specific bindingratio，SBR)判定血浆中ICA水平，SBR计算公式为：SBR＝[待测样品OD值–NC OD值]/[阳性标准品OD值–NC OD值]。应用第95百分位数法确定不含NAIC(阴性)血浆的阈值(cut-off)。
3.实验结果：本实施例随机抽取的220份正常成年人血浆样品中，其NAIC浓度平均值为SBR＝1.07±0.35。应用第95百分位数法确定血浆NAIC阴性阈值为0.36,SBR低于0.36的人为NAIC检测阴性者。如表2所示，在受检的200例糖尿病患者中，20.5％为NAIC检测阴性者；在220例正常人中，4.5％为NAIC检测阴性者；经卡方(X2)检验，两组之间差别显著(X2＝25.0，P<0.001)。
表2.分析比较420份II型糖尿病与正常成年人血浆样品NAIC阴性检测率的结果
4.结果评价：上述2种线性抗原多肽与血浆中NAIC可发生特异性结合。即,这2种线性抗原多肽的氨基酸序列在空间结构和构型上与NAIC分子是完全互补的。
阻断剂组合物配方的具体实施方式
本发明所述的阻断剂组合物以下实施例配方的辅料默认为淀粉一种，但可供本发明组合物配方选用的辅料实际包括但不限于淀粉等任何适于主料药物的辅料及其相互常规搭配。以下仅就主料的不同配伍举例说明本发明所述阻断剂组合物的实施方式。
配方一：所述阻断剂组合物的主料由50-100毫克的乙酰水杨酸和15-50毫克的非那西丁组成，其中乙酰水杨酸与非那西丁的质量比为2：1至5:1之间。如：所述阻断剂组合物的主料由50毫克的乙酰水杨酸和25毫克的非那西丁组成。
配方二：所述阻断剂组合物的主料由75毫克的乙酰水杨酸和15毫克咖啡因组成。
配方三：所述阻断剂组合物的主料由15-25毫克的非那西丁和10-15毫克的咖啡因组成，其中非那西丁与咖啡因的质量比为2.5：1至1:1之间。如：所述阻断剂组合物的主料由25毫克的非那西丁和12.5毫克的咖啡因组成。
阻断剂组合物的应用效果记录
下面结合自愿者体验的观察数据，介绍阻断剂组合物部分配伍的对目标人群的临床应用价值。
1.样本收集：由某地某组织推介34位II糖尿病患者(含高血压患者26人，均未见其它糖尿病并发症明显体征)和23位临床诊断心脑血管梗塞高危人员(本人确认及连续病历显示一年以上无解热镇痛类药物摄入史，近三年体检存在血液粘稠度过高、高血压及血脂高体征，无并发糖尿病，生活均可自理)的血浆样品共57份。经本发明试剂盒检测两次后确认，检出NAIC(阴性)的血浆的II糖尿病患者12人，检出NAIC(阴性)的血浆的心脑血管梗塞高危患者11人。
排除无法遵守测试规则人员和不清楚是否接触过阿司匹林、扑尔敏、安痛定等药物的人员后，同意接受并实际完成本发明阻断剂组合物剂量测试的人员包括II糖尿病患者(均有高血压，无黎明现象病征)8人以及心脑血管梗塞高危人员7人，均为男性。测试前指标如表：
2.实施体验过程安排：本次体验数据可供采集的自愿者样本较少，因此实施中以定性研究为目的。
实施中主料来源包括：阿司匹林主料采用丹东医创药业有限责任公司(国药准字H21022137)300mg阿司匹林片，咖啡因主料采用美国PROLAB Nutrition Caffeine 200mg纯咖啡因片剂，哈尔滨三木制药厂(国药准字H23022620)复方氨基比林咖啡因片(含氨基比林150mg和咖啡因40mg)
实施中，采用的阻断剂组合物制剂采用各主料OTC药物制剂充分机械粉碎后定量预先分装的制备方法，由测试者同时混合口服的的方式摄入。制备后的制剂包括：
A剂型：每份包含75mg阿司匹林和15mg咖啡因(美国产)；
B剂型：每份包含50mg阿司匹林、氨基比林15mg和咖啡因4mg(中国产)；
具体过程实施如下：
(1)II糖尿病患者8人随机分成A、B两组，每组4人，测试期内A组仅服用A剂型，B组仅服用B剂型。具体用法用量为每人每日早晚各一次饭后半小时口服一份指定剂型阻断剂组合物，为期90日。期满每人用本发明试剂盒相隔48小时分别检测两次。
(2)心脑血管梗塞高危人员7人，根据血压低压值高低分成3人的高压组和4人的低压组两个组别，低压值较高的高压组选服A剂型，其余低压组选服B剂型。具体用法用量为每人每日早晚各一次饭后半小时口服一份指定剂型阻断剂组合物，为期90日。期满每人用本发明试剂盒相隔48小时分别检测两次。
3.实施结果：实施完成后，经测试全部自愿者的两次重测结果均为一致，所有测试对象均呈现NAIC检测结果为阳性。其中，A、B两组人员测试结果分别有一人呈现为NAIC强阳性，其余均为NAIC弱阳性，该两强阳性自愿者的其中一人在完全戒烟戒酒的状态下至今已停用胰岛素逾六个月(四次四段尿糖检测阴性，早上7点空腹血糖值保持在5.0以下)；高压组和低压组全部人员呈现为NAIC弱阳性。自愿者体检数据范围变化如下表：
4.结果评价：实施结果显示，经过90天药物干预试验，所有自愿者均呈现NAIC阳性反应，说明相关药物均具有一定阻断炎症因子病理反应的作用。尽管实施样本规模较小，亦未能就全部药物进行逐一单独和混合测试，但本实施例已足以证明利用具有阻断炎性因子病理反应作用的相关药物进行小剂量维持治疗的有益效果。进而根据目标患者均有不同程度的体征变化可知，本发明涉及的阻断剂组合物所呈现的阻断炎性因子病理反应的机制，在对NAIC检测结果为阴性的II糖尿病患者和心脑血管梗塞高危人群辅助治疗方面具有一定的疗效。
以上所述仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内所想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种检测炎性细胞因子天然抗体(Natual antibody for inflammatory cytokine，NAIC)的组合物，其中包含如下2种抗原多肽:
H-LLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALR-OH
H-KELRCQCIKTY SKPFHPKFIK ELRVIESGPHC-OH。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物中各抗原多肽的重量浓度体积比的比例为1:1。
3.包含权利要求1或2的组合物的试剂盒。
4.根据权利要求3的试剂盒，其中将2种抗原多肽混合液包被的马来酰亚胺(Maleimide)活化的96孔微量检测板干燥后，用非金属医用包装材料真空密封包装，制成试剂盒。
5.根据权利要求4的试剂盒，其中所述非金属医用包装材料为玻璃或医用塑料。
6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：可用于人血浆中NAIC的定量检测。
7.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于：可用于人血浆中NAIC的定量检测。
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