CN106866762B - 一种核苷酸基金属仿生漆酶 - Google Patents
一种核苷酸基金属仿生漆酶 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106866762B CN106866762B CN201611197305.1A CN201611197305A CN106866762B CN 106866762 B CN106866762 B CN 106866762B CN 201611197305 A CN201611197305 A CN 201611197305A CN 106866762 B CN106866762 B CN 106866762B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- laccase
- bionical
- nucleotidyl
- metal
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 title claims abstract description 140
- 239000002184 metal Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 78
- 125000002796 nucleotidyl group Chemical group 0.000 title claims abstract description 70
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 19
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 19
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 17
- -1 phenol amine Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 25
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims description 17
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 16
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 9
- RQFCJASXJCIDSX-UHFFFAOYSA-N 14C-Guanosin-5'-monophosphat Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O RQFCJASXJCIDSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 claims description 8
- RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N guanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229940048102 triphosphoric acid Drugs 0.000 claims description 6
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- XQRLCLUYWUNEEH-UHFFFAOYSA-N diphosphonic acid Chemical compound OP(=O)OP(O)=O XQRLCLUYWUNEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 3
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- RAJMXAZJKUGYGW-POYBYMJQSA-N 2',3'-dideoxycytidine-5'-monophosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)CC1 RAJMXAZJKUGYGW-POYBYMJQSA-N 0.000 claims description 2
- UPJKSWLLCONYMW-UHFFFAOYSA-N 5'-Adenosine monophosphate Natural products COc1cc(O)c(C(=O)C)c(OC2OC(COC3OC(C)C(O)C(O)C3O)C(O)C(O)C2O)c1 UPJKSWLLCONYMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical group [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000004780 naphthols Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 claims description 2
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 claims 1
- XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N copper(II) nitrate Chemical compound [Cu+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 37
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 abstract description 3
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000010953 base metal Substances 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 9
- HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 2,4-dichlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 230000001800 adrenalinergic effect Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 3
- ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 2-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Cl ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L copper(II) chloride Chemical compound Cl[Cu]Cl ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 2
- 239000010842 industrial wastewater Substances 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPQOPVIELGIULI-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC(Cl)=C1 ZPQOPVIELGIULI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIISVQYDQWJITQ-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrrole;quinoline Chemical compound C=1C=CNC=1.N1=CC=CC2=CC=CC=C21 HIISVQYDQWJITQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 1
- 229910021592 Copper(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010718 Oxidation Activity Effects 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- VEQOALNAAJBPNY-UHFFFAOYSA-N antipyrine Chemical compound CN1C(C)=CC(=O)N1C1=CC=CC=C1 VEQOALNAAJBPNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 229920001795 coordination polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229960005222 phenazone Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003911 water pollution Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
- C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/33—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种核苷酸基金属仿生漆酶，具体涉及一种用于酚类物质和肾上腺素类化合物检测的核苷酸基金属仿生漆酶，该金属仿生漆酶为Cu2+与核苷酸形成的纳米网状配位复合物，该复合物以Cu2+为催化中心，以核苷酸为有机骨架，具有类漆酶活性。该金属仿生漆酶具有较高活性，能够多次重复利用，并且稳定性大大优于生物漆酶，能够代替生物漆酶应用于酚胺类物质的检测。该金属仿生酶还能够直接催化氧化肾上腺素类化合物生成显色物质，从而实现对肾上腺素类化合物的检测。应用该金属仿生漆酶检测酚胺类物质及肾上腺素类化合物的方法简便易行且灵敏度较高，在生化检测领域具有较好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种核苷酸基金属仿生漆酶，具体涉及一种用于酚类物质和肾上腺素类化合物检测的核苷酸基金属仿生漆酶。
背景技术
漆酶(苯二酚氧化酶，EC 1.10.3.2)是一类含铜多酚氧化酶，可催化氧化多种酚类和非酚类的底物，如苯酚、氯酚、邻苯二胺等。漆酶作为一种绿色、环保生物催化剂，催化氧化的底物十分广泛，在废水处理、生物漂白、芳香化合物转化、生物传感器构建等方面领域有广泛的应用前景。但是，天然漆酶不仅价格昂贵，稳定性差，活性在使用过程中易受环境条件变化影响，另外酶无法回收进行重复使用，从而限制了天然漆酶在实际生活中的应用。因此，需要一种具有高稳定性和可循环利用的模拟酶来克服天然酶在应用过程中的诸多问题。
随着工业的发展，在改善人类生活的同时，也对环境带来巨大的的危害。环境中的酚污染主要指酚类化合物对水体的污染，酚类化合物是指苯及其稠环的羟基衍生物。含酚废水是当今世界上危害大、污染范围广的工业废水之一，是环境中水污染的重要来源。目前，我国测定工业废水中挥发酚的标准方法是以K3(Fe(CN)6)作氧化剂，4-氨基安替吡啉作显色剂的紫外分光光度法，但是该法所生成的络合物在水溶液中很不稳定，而且氧化剂对人体有毒害，因此需要一种新的氧化剂取代K3(Fe(CN)6)作氧化剂，应用于水体的酚类物质检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种核苷酸基金属仿生漆酶，以解决上述问题。
本发明的实施例提供了一种核苷酸基金属仿生漆酶，为Cu2+与核苷酸形成的纳米网状配位复合物，复合物以Cu2+为催化中心，以核苷酸为有机骨架，具有类漆酶活性。
进一步，该核苷酸基金属仿生漆酶用于检测酚类化合物，酚类化合物包括苯酚、邻苯二酚、对苯二酚、萘酚和2,4-二氯苯酚。
进一步，检测酚类化合物的方法包括:将核苷酸基金属仿生漆酶与显色剂4-氨基安替吡啉和酚类化合物的混合溶液反应30-120min，溶液反应后离心，上清液在510nm下测定吸光度。
进一步，核苷酸基金属仿生漆酶的浓度为0.025-0.5mg/ml,混合溶液中酚类化合物的浓度为0.005-0.1mg/mL，混合溶液中显色剂4-氨基安替吡啉的浓度为0.1-0.5mg/mL，混合溶液的pH为2-10，混合溶液的盐浓度为0-1000mmol/L。
进一步，该盐包括NaCl,KCl,CaCl2,MgCl2。
进一步，该核苷酸基金属仿生漆酶还用于检测肾上腺素类化合物，肾上腺素类化合物包括肾上腺素和去甲肾上腺素。
进一步，检测肾上腺素类化合物的方法包括:将核苷酸基金属仿生漆酶与肾上腺素类化合物和缓冲液混合反应15-120min，溶液反应后离心，在485nm下测定上清液的吸光度。
进一步，核苷酸基金属仿生漆酶的浓度为0.025-0.5mg/ml,肾上腺素类化合物的浓度为0.005-0.1mg/mL，缓冲液为MES缓冲液，缓冲液的浓度为30-100mmol/L，缓冲液的pH为6.8-7.4。
进一步，该复合物的制备方法包括如下步骤：
1)分别配制可溶性铜盐和可溶性核苷酸溶液；其中，可溶性铜盐的浓度为50-250mmol/L，可溶性核苷酸溶液的浓度为5-25mmol/L；可溶性核苷酸为5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐(GMP、GDP、GTP)、5’-腺嘌呤核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐(AMP、ADP、ATP)、5’-胞嘧啶核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐或鸟嘌呤核苷(CMP、CDP、CTP；
2)将步骤1)配制的可溶性铜盐和可溶性核苷酸溶液在常温下混合，静置0.5-3h，离心得到蓝色沉淀，即核苷酸基金属仿生漆酶；其中，离心转速为10000-12000rpm，时间为5-10min。
进一步，配制可溶性核苷酸溶液所采用的溶剂为水溶液、HEPES缓冲液或MES缓冲液；HEPES缓冲液的浓度为10mmol/L，pH为6.8-8.0；MES缓冲液的浓度为30mmol/L，pH为5.5-6.8。
与现有技术相比本发明的有益效果是：该金属仿生漆酶具有较高活性，能够多次重复利用，并且稳定性大大优于生物漆酶，能够代替生物漆酶应用于酚胺类物质的检测，还能够直接催化氧化肾上腺素类化合物生成显色物质，从而实现对肾上腺素类化合物的检测，检测方法简便易行且灵敏度较高。
附图说明
图1为本发明实施例1和实施例2制备的含铜核酸基金属仿生漆酶的结构示意图；
图2为本发明实施例3核苷酸基金属仿生漆酶检测酚类底物反应的紫外吸收光谱图；
图3为本发明实施例4核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶在pH3.0、9.0检测2,4-二氯苯酚的活性比较图；
图4为本发明实施例5核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶在40℃和90℃检测2,4-二氯苯酚的活性比较图；
图5为本发明实施例6核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶在不同盐溶度检测2,4-二氯苯酚的活性比较图；
图6为本发明实施例7核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶在9天后检测2,4-二氯苯酚的活性比较图；
图7为本发明实施例8不同浓度2,4-二氯苯酚与吸光度的线性回归曲线图；
图8为本发明实施例9不同浓度肾上腺素与吸光度的线性回归曲线图。
具体实施方式
下面结合附图所示的各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。
本实施例的第一目的在于提供一种水体中酚类物质的检测方法，以克服现有工业废水中挥发酚的标准测定方法的缺点。所述方法可应用于多种酚类物质的检测，灵敏度高，稳定性好，在极端环境下仍能保持较高活性。
本发明的第二目的在于提供一种检测肾上腺素的方法。所述方法简单方便，无需加入显色剂，环保经济，具有较低检测限。
为达到上述两个目的，首先需要制备一种核苷酸基金属仿生漆酶，通过游离铜离子溶液与核苷酸形成沉淀物，即得到金属有机仿生酶。本方法原料易得，成本较低而且操作简单方便。
本实施例制备的核苷酸基金属仿生漆酶是一种核苷酸-金属配位聚合物。该核苷酸基金属仿生漆酶对漆酶底物酚类物质具有催化氧化活性，表现出类似于漆酶的活性特征，因此可作为漆酶替代物，主要应用于水体的酚类物质检测。检测酚类物质的方法，是通过核苷酸基模拟酶催化漆酶酚类底物水溶液与在显色剂聚合产生有色物质，在510nm处由紫外吸收，从而实现对漆酶底物的检测。
肾上腺素属儿茶酚胺类神经递质，在中枢神经内分布很广，与人体神经系统应急能力密切相关，对其的检测在临床和基础研究中非常重要。本实施例将制备的核苷酸基金属仿生漆酶取代漆酶，应用于肾上腺素类化合物的检测，检测肾上腺素的方法，是利用核苷酸基金属仿生漆酶直接催化氧化肾上腺素类化合物并生成褐色的显色产物，在485nm处有紫外吸收，从而实现对肾上腺素类化合物的检测。该检测方法，其灵敏度高，重复性好，而且操作方便。
下面通过具体的实施例对本发明作进一步说明。
参图1所示，图1为本发明实施例1和实施例2制备的含铜核酸基金属仿生漆酶的结构示意图。
实施例1一种核苷酸基金属仿生漆酶的制备，包括以下步骤：
1)分别配制氯化铜和5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐水溶液，其中氯化铜浓度为50mmol/L，5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐水溶液浓度为6mmol/L。
2)取900μL步骤1)配制的5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐水溶液与100μL步骤1)配制的CuCl2溶液，涡旋振荡混合均匀，静置1h后，离心除去上清液，沉淀用超纯水洗涤3次即可得到核苷酸基金属仿生漆酶。
实施例2一种核苷酸基金属仿生漆酶的制备，包括以下步骤：
1)分别配制硫酸铜和5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐溶液，其中硫酸化铜浓度为50mmol/L，5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐溶液用HEPES缓冲液(10mmol/L，pH8.0)将其配制成浓度为6mmol/L。
2)取900μL步骤1)配制的5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐溶液与100μL步骤1)配制的CuSO4溶液，涡旋振荡混合均匀，静置1h后，离心除去上清液，沉淀用超纯水洗涤3次即可得到核苷酸基金属仿生漆酶。
参图2所示，图2为本发明实施例3核苷酸基金属仿生漆酶检测酚类底物反应的紫外吸收光谱图。
实施例3核苷酸基金属仿生漆酶的活性检测。
1)按实施例1制得核苷酸基金属仿生漆酶，并配制成浓度为1mg/mL，分别配制浓度均为1mg/mL的2,4-二氯苯酚和4-氨基安替吡啉，以及pH6.8Mes缓冲液的浓度为0.03mol/L；
2)取100μL步骤1)配制的2,4-二氯苯酚和4-氨基安替吡啉分别定容至1mL，在紫外和可见光波长范围即200-800nm内进行光谱扫描。
3)取100μL步骤1)配制的核苷酸基金属仿生漆酶，加入到含有700μL Mes缓冲液(pH6.8)，100μL 2,4-二氯苯酚和100μL 4-氨基安替吡啉，混合均匀，反应1h，10000rpm离心2min后，取上清液于紫外和可见光波长范围即200-800nm内进行光谱扫描。
经过核苷酸基金属仿生漆酶作用后，在510nm处有紫外吸收说明其具有模拟漆酶的活性，可应用于酚类物质的检测。
参图3所示，图3为本发明实施例4核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶在pH3.0、9.0检测2,4-二氯苯酚的活性比较图。
实施例4核苷酸基金属仿生漆酶耐pH稳定性的检测。
按实施例1制得核苷酸基金属仿生漆酶，并配制成浓度为1mg/mL，配制浓度为1mg/mL的天然漆酶，将模拟酶和漆酶分别置于pH 3.0和9.0的环境中，室温下放置8h后，按照实施例3的方法测定核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶的活性，以各自未经pH处理过的活性为对照(记为100％)，比较经过强酸和强碱处理后的活性变化。
所制得核苷酸基金属仿生漆酶在极端pH环境下活性基本保持不变，而天然漆酶在强酸强碱环境中活性明显受到影响。
参图4所示，图4为本发明实施例5核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶在40℃和90℃检测2,4-二氯苯酚的活性比较图。
实施例5核苷酸基金属仿生漆酶耐温度稳定性的检测。
按实施例1制得核苷酸基金属仿生漆酶，并配制成浓度为1mg/mL，配制浓度为1mg/mL的天然漆酶，将模拟酶和漆酶分别置于40和90℃水浴锅中加热30min，按照实施例3的方法测定核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶的活性，以各自在室温下的活性为对照(记为100％)，比较经过高温处理后的活性。
所制得核苷酸基金属仿生漆酶在高温处理后仍保持较高活性，而天然漆酶在高温处理后中几乎没有活性。
参图5所示，图5为本发明实施例6核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶在不同盐浓度中检测2,4-二氯苯酚的活性比较图。
实施例6核苷酸基金属仿生漆酶耐盐浓度稳定性的检测。
1)按实施例1制得核苷酸基金属仿生漆酶，并配制成浓度为1mg/mL，配制浓度为1mg/mL的天然漆酶，配制浓度为150mmol/L和500mmol/LNaCl溶液。
2)分别取100μL步骤1)配制的核苷酸基金属仿生漆酶，与步骤1)配制的300μL150mmol/L和500mmol/LNaCl溶液混合均匀，与100μL 2,4-二氯苯酚、100μL 4-氨基安替吡啉和400μLMes缓冲液(按照实施例3配制)，混合均匀，反应1h，10000rpm离心2min后，取上清液于510nm处测定其紫外吸光值，以未加入离子强度时的活性为对照(记为100％)，比较盐浓度对核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶活性的影响。
盐浓度的增加，所制得核苷酸基金属仿生漆酶活性反而有所提高，而天然漆酶活性受到极大的影响。
参图6所示，图6为本发明实施例7核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶在9天后检测2,4-二氯苯酚的活性比较图。
实施例7核苷酸基金属仿生漆酶贮存稳定性的检测。
按实施例1制得核苷酸基金属仿生漆酶，并配制成浓度为1mg/mL，配制浓度为1mg/mL的天然漆酶，将模拟酶和漆酶分别放置在室温环境9天后，按照实施例2的方法测定核苷酸基金属仿生漆酶和天然漆酶的活性，将第一天的活性记为100％，比较其活性变化。
所制得核苷酸基金属仿生漆酶室温储存9天后其活性基本不变，而天然漆酶活性仅剩约30％。
参图7所示，图7为本发明实施例8不同浓度2,4-二氯苯酚与吸光度的线性回归曲线图.
实施例8核苷酸基金属仿生漆酶对2,4-二氯苯酚的检测限。
1)按实施例1制得核苷酸基金属仿生漆酶，并配制成浓度为1mg/mL，配制不同浓度的2,4-二氯苯酚样品(50,100,150，200,300,400μg/mL)，4-氨基安替吡啉浓度为1mg/mL，以及MES缓冲液(30mM，pH6.8)。
2)取100μL步骤1)配制的核苷酸基漆酶模拟酶，加入到含有700μL Mes缓冲液(pH6.8)和100μL 4-氨基安替吡啉，混合均匀，分别加入100μL步骤1)配制的不同浓度2,4-二氯苯酚样品，反应1h，10000rpm离心2min后，取上清液测定510nm处的吸光值。
3)绘制不同浓度与吸光度的线性回归曲线，线性回归方程为y＝0.0087x+0.04317，R2＝0.999，根据公式SB:CLOD＝3SB/S求得最低检测限值，其中S为该线性曲线的斜率0.0087，SB为空白比色皿的标准偏差0.002，计算得出最低检出限为0.6896μg/mL。
按照同样方法得出天然漆酶用于检测2,4-二氯苯酚的检测限为1.85μg/mL。
参图8所示，图8为本发明实施例9不同浓度肾上腺素与吸光度的线性回归曲线图。
实施例9核苷酸基金属仿生漆酶对肾上腺素的检测限。
1)按实施例1制得核苷酸基金属仿生漆酶，并配制成浓度为1mg/mL，配制不同浓度的肾上腺素样品(50，100，200，300，400μg/mL)以及MES缓冲液(50mM，pH6.8)。
2)取100μL步骤1)配制的核苷酸基漆酶模拟酶，加入到含有800μL步骤1)配制的Mes缓冲液，混合均匀，分别加入100μL步骤1)配制的不同浓度肾上腺素样品，反应20min，10000rpm离心2min后，取上清液测定485nm处的吸光值
3)绘制不同浓度与吸光度的线性回归曲线，线性回归方程为y＝0.01463x+0.10779，R2＝0.995，根据公式SB:CLOD＝3SB/S求得最低检测限值，其中S为该线性曲线的斜率0.01463，SB为空白比色皿的标准偏差0.002，计算得出最低检出限为0.410μg/mL。
按照同样方法得出天然漆酶用于检测肾上腺素的检测限为6.67μg/m。
本发明提供的模拟酶(核酸基金属仿生漆酶)及其应用方面具有如下优点：
1)本发明的核酸基金属仿生漆酶有着高于天然漆酶的活性，而且可以回收重复利用。
2)本发明的核酸基金属仿生漆酶在不同pH条件下具有很好的稳定性，分别在pH3.0-9.0的环境中放置8小时，其活性损失不大，而天然漆酶在强酸强碱环境中，活性损失明显。
3)本发明的核酸基金属仿生漆酶具有较高的温度稳定性，分别经过温度30℃-90℃处理后，其活性未见明显变化，而天然漆酶在高温处理之后由于变性失活，基本失去活性。
4)本发明的核酸基金属仿生漆酶在高盐浓度条件下活性不但不受影响反而有所提高，而天然漆酶在高盐浓度下大大降低。
5)本发明的核酸基金属仿生漆酶能够在室温条件下长时间存放而活性不受影响，放置9天后，其活性基本不变，而天然漆酶的活性仅剩30％左右。
6)本发明的核酸基金属仿生漆酶对2,4-二氯苯酚的检测限低于天然漆酶，灵敏性更高。
7)本发明的核酸基金属仿生漆酶对肾上腺素的检测方法简单易操作，反应迅速，检测限低于天然漆酶，更加灵敏。
本发明所制备的核酸基金属仿生漆酶是一种既简单又具有高活性的Cu2+与核苷酸配位聚合物仿生漆酶。制备方法简单操作方便，得到的金属仿生酶能够高效模拟漆酶的结构和功能，能够抵抗极端的pH值，温度，并能长期储存，具有良好的稳定性，而且比天然漆酶适用性更强。因此在生化检测领域尤其是水体中酚类物质和人体内肾上腺素的检测具有较好的应用前景。
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
Claims (8)
1.一种核苷酸基金属仿生漆酶，其特征在于，为Cu2+与核苷酸形成的纳米网状配位复合物，所述复合物以Cu2+为催化中心，以核苷酸为有机骨架；所述复合物的制备方法包括如下步骤：
1)分别配制可溶性铜盐和可溶性核苷酸溶液；其中，所述可溶性铜盐的浓度为50-250mmol/L，所述可溶性核苷酸溶液的浓度为5-25mmol/L；所述可溶性铜盐为硫酸铜、氯化铜或硝酸铜；所述可溶性核苷酸为5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐、5’-腺嘌呤核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐、5’-胞嘧啶核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐；
2)将步骤1)配制的可溶性铜盐和可溶性核苷酸溶液在常温下混合，静置0.5-3h，离心得到蓝色沉淀，即所述核苷酸基金属仿生漆酶；其中，离心转速为10000-12000rpm，时间为5-10min；
配制所述可溶性核苷酸溶液所采用的溶剂为水溶液、HEPES缓冲液或MES缓冲液；所述HEPES缓冲液的浓度为10mmol/L，pH为6.8-8.0；所述MES缓冲液的浓度为30mmol/L，pH为5.5-6.8。
2.根据权利要求1所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶，其特征在于，用于检测酚类化合物，所述酚类化合物选自苯酚、邻苯二酚、对苯二酚、萘酚和2,4-二氯苯酚。
3.根据权利要求2所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶，其特征在于，所述检测酚类化合物的方法包括:将所述核苷酸基金属仿生漆酶与显色剂4-氨基安替吡啉和酚类化合物的混合溶液反应30-120min，溶液反应后离心，上清液在510nm下测定吸光度。
4.根据权利要求3所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶，其特征在于，所述核苷酸基金属仿生漆酶的浓度为0.025-0.5mg/ml,所述混合溶液中酚类化合物的浓度为0.005-0.1mg/mL，所述混合溶液中显色剂4-氨基安替吡啉的浓度为0.1-0.5mg/mL，所述混合溶液的pH为2-10，所述混合溶液的盐浓度为0-1000mmol/L。
5.根据权利要求4所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶，其特征在于，所述盐包括NaCl,KCl,CaCl2,MgCl2。
6.根据权利要求1所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶，其特征在于，还用于检测肾上腺素类化合物，所述肾上腺素类化合物选自肾上腺素和去甲肾上腺素。
7.根据权利要求6所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶，其特征在于，所述检测肾上腺素类化合物的方法包括:将所述核苷酸基金属仿生漆酶与肾上腺素类化合物和缓冲液混合反应15-120min，溶液反应后离心，在485nm下测定上清液的吸光度。
8.根据权利要求7所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶，其特征在于，所述核苷酸基金属仿生漆酶的浓度为0.025-0.5mg/ml,所述肾上腺素类化合物的浓度为0.005-0.1mg/mL，所述缓冲液为MES缓冲液，所述缓冲液的浓度为30-100mmol/L，所述缓冲液的pH为6.8-7.4。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611197305.1A CN106866762B (zh) | 2016-12-22 | 2016-12-22 | 一种核苷酸基金属仿生漆酶 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611197305.1A CN106866762B (zh) | 2016-12-22 | 2016-12-22 | 一种核苷酸基金属仿生漆酶 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106866762A CN106866762A (zh) | 2017-06-20 |
| CN106866762B true CN106866762B (zh) | 2019-10-18 |
Family
ID=59163942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201611197305.1A Active CN106866762B (zh) | 2016-12-22 | 2016-12-22 | 一种核苷酸基金属仿生漆酶 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106866762B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110511259B (zh) * | 2019-08-22 | 2022-08-16 | 陕西师范大学 | 环二核苷酸人工金属酶及其制备和催化不对称Friedel-Crafts反应的应用 |
| CN110756222B (zh) * | 2019-11-14 | 2022-08-23 | 陕西师范大学 | 核苷三磷酸人工金属酶及其制备和应用 |
| CN112473750A (zh) * | 2020-11-12 | 2021-03-12 | 陕西科技大学 | 一种具有类漆酶活性的纳米酶及其制备方法和应用 |
| CN113295682B (zh) * | 2021-05-21 | 2022-11-29 | 吉林大学 | 一种基于多酚氧化酶活性纳米酶的酚类化合物分析方法 |
| CN113694964B (zh) * | 2021-08-27 | 2022-08-02 | 中国科学院化学研究所 | 一种基于多糖/多巴胺复合膜的仿生漆酶体系及其制备方法与应用 |
| CN114904583B (zh) * | 2022-06-10 | 2023-05-16 | 北京师范大学 | 一种高特异性抗坏血酸氧化模拟酶及其制备方法和应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004000159A (ja) * | 2002-03-25 | 2004-01-08 | Iwate Prefecture | シイタケラッカーゼの調製法とフェノール性環境汚染物質の分解法 |
| CN1749258A (zh) * | 2005-07-19 | 2006-03-22 | 华中师范大学 | 多酚氧化酶模型化合物制备和应用 |
| CN101407793A (zh) * | 2008-09-08 | 2009-04-15 | 浙江理工大学 | 多酚氧化酶模拟酶的制备方法 |
| CN101974507A (zh) * | 2010-10-12 | 2011-02-16 | 尉亚辉 | 固定化漆酶的制备方法 |
| CN102206624A (zh) * | 2011-04-15 | 2011-10-05 | 北京师范大学 | 一种磁性复合微球固定化漆酶及其制备方法 |
| CN105018081A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-11-04 | 中国科学院理化技术研究所 | 一种负载铜的碳量子点模拟漆酶及其制备方法和用途 |
-
2016
- 2016-12-22 CN CN201611197305.1A patent/CN106866762B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004000159A (ja) * | 2002-03-25 | 2004-01-08 | Iwate Prefecture | シイタケラッカーゼの調製法とフェノール性環境汚染物質の分解法 |
| CN1749258A (zh) * | 2005-07-19 | 2006-03-22 | 华中师范大学 | 多酚氧化酶模型化合物制备和应用 |
| CN101407793A (zh) * | 2008-09-08 | 2009-04-15 | 浙江理工大学 | 多酚氧化酶模拟酶的制备方法 |
| CN101974507A (zh) * | 2010-10-12 | 2011-02-16 | 尉亚辉 | 固定化漆酶的制备方法 |
| CN102206624A (zh) * | 2011-04-15 | 2011-10-05 | 北京师范大学 | 一种磁性复合微球固定化漆酶及其制备方法 |
| CN105018081A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-11-04 | 中国科学院理化技术研究所 | 一种负载铜的碳量子点模拟漆酶及其制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| "磁性核苷酸基MOFzyme的构建及检测肾上腺素";林菲菲，等;《化工进展》;20161231;第35卷;第301-304页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106866762A (zh) | 2017-06-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106866762B (zh) | 一种核苷酸基金属仿生漆酶 | |
| Nam et al. | A colorimetric hydrogel biosensor for rapid detection of nitrite ions | |
| Sahub et al. | Effective biosensor based on graphene quantum dots via enzymatic reaction for directly photoluminescence detection of organophosphate pesticide | |
| Galbán et al. | The intrinsic fluorescence of FAD and its application in analytical chemistry: a review | |
| Lobnik et al. | Sol–gel based optical sensor for continuous determination of dissolved hydrogen peroxide | |
| Tian et al. | Highly sensitive chemiluminescent sensing of intracellular Al3+ based on the phosphatase mimetic activity of cerium oxide nanoparticles | |
| Luo et al. | Fluorescent and visual detection of methyl-paraoxon by using boron-and nitrogen-doped carbon dots | |
| Xiao et al. | Rational engineering of chromic material as near-infrared ratiometric fluorescent nanosensor for H2S monitoring in real food samples | |
| Zou et al. | Review of the application of quantum dots in the heavy-metal detection | |
| Bhunia et al. | “On/off/on” hydrogen-peroxide sensor with hemoglobin-functionalized carbon dots | |
| Pinto et al. | Automated evaluation of the effect of ionic liquids on catalase activity | |
| Nezhad et al. | Optical detection of phenolic compounds based on the surface plasmon resonance band of Au nanoparticles | |
| Liu et al. | Determination of nitrite based on its quenching effect on anodic electrochemiluminescence of CdSe quantum dots | |
| Tarasova et al. | Bioluminescence as a tool for studying detoxification processes in metal salt solutions involving humic substances | |
| Wang et al. | A fluorescence sensor for protein kinase activity detection based on gold nanoparticles/copper nanoclusters system | |
| CN107937480B (zh) | 一种荧光生物传感器、制备方法及其检测有机磷农药的应用 | |
| Yuan et al. | A rapid and simple strategy for discrimination and detection of catechol and hydroquinone by fluorescent silicon nanoparticles | |
| Veselova et al. | Properties and analytical applications of the self-assembled complex {peroxidase–chitosan} | |
| Wang et al. | A novel sensing platform for the determination of alkaline phosphatase based on SERS-fluorescent dual-mode signals | |
| Choudhary et al. | Stable paper-based colorimetric sensor for selective detection of phosphate ion in aqueous phase | |
| Mazhari et al. | Development of Paper Biosensor for the Detection of Phenol from Industrial Effluents Using Bioconjugate of Tyr‐AuNps Mediated by Novel Isolate Streptomyces tuirus DBZ39 | |
| CN108152263A (zh) | 一种基于碳量子点荧光法快速检测铁元素的方法 | |
| Wang et al. | A novel switchable fluorescent sensor for facile and highly sensitive detection of alkaline phosphatase activity in a water environment with gold/silver nanoclusters | |
| Chen et al. | Fluorescent quenching method for determination of trace hydrogen peroxide in rain water | |
| Afshary et al. | Electrochemiluminescence sensor based on N-doped carbon quantum dots for determination of ceftazidime in real samples |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |