CN106834386B - 一种几丁二糖的生产方法 - Google Patents
一种几丁二糖的生产方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106834386B CN106834386B CN201510883057.5A CN201510883057A CN106834386B CN 106834386 B CN106834386 B CN 106834386B CN 201510883057 A CN201510883057 A CN 201510883057A CN 106834386 B CN106834386 B CN 106834386B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chitin
- chitobiose
- polysaccharide
- monooxygenase
- chitinase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种以几丁质为底物生产几丁二糖的方法,即通过一种来自苏云金芽孢杆菌的多糖裂解单加氧酶(BtLPMO10A)与几丁质酶的协同作用,将几丁质转化为几丁二糖。
Description
技术领域
本发明涉及一种以几丁质为底物生产几丁二糖的方法。
背景技术
几丁质是一种主要来源于海洋虾蟹壳、真菌细胞壁、昆虫外壳等的难溶性天然多糖,几丁质经过降解可得到水溶性的几丁二糖,几丁二糖可作为一种合成前体,在生物医药、绿色农业和材料化工等领域具有广泛的应用。
目前几丁二糖的制备主要采用生物酶降解的方法或酸水解的方法。由于生物酶解具有反应条件温和、反应过程可控等优点,近几年来生物酶法生产几丁二糖已成为趋势。自然界中存在大量的几丁质酶,主要来源于植物、微生物以及昆虫等,从几丁质酶的催化反应模式上又可分为三类,包括内切型几丁质酶、外切型几丁质酶和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,其中内切型几丁质酶主要作用是将几丁质随机切割成不同聚合度的几丁寡糖,外切型几丁质酶主要是将几丁质按照一定的顺序切割成几丁二糖,而N-乙酰氨基葡萄糖苷酶则是把几丁二糖转化为两个N-乙酰氨基葡萄糖。
虽然到目前为止已有大量的关于这些几丁质酶的报道,由于几丁质具有非常致密的晶体结构,特别是来源于虾蟹壳的几丁质,其内部分子层与层之间,链与链之间存在大量的氢键,使得生物酶在降解几丁质时效率非常低,这在很大程度上限制了几丁二糖的生产与应用。
发明内容
针对上述问题,本发明提供了一种以几丁质为底物生产几丁二糖的方法,即利用多糖裂解单加氧酶和外切型几丁质酶相结合,协同高效降解几丁质,生产几丁二糖的方法。其中,多糖裂解单加氧酶是一类新发现的酶,该酶可作用于晶体几丁质的表面,破坏几丁质的表面结构,从而提高几丁质酶对几丁质的酶解效率。
本发明提供的技术方案包括:
将几丁质与溶剂混合,几丁质的浓度为0.5-2g/100ml,所用的溶剂包括磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液或醋酸缓冲液中一种。
将来自苏云金芽孢杆菌的多糖裂解单加氧酶与来自粘质沙雷氏菌的外切型几丁质酶添加到几丁质与溶剂的混合体系中,对几丁质进行酶催化降解反应,反应温度为20-40℃,处理持续时间为8-24h,反应体系中需要添加0.5-2mM的还原剂。
附图说明
图1A.利用多糖裂解单加氧酶和几丁质酶协同降解虾蟹壳来源的几丁质。
图1B.利用多糖裂解单加氧酶和几丁质酶协同降解鱿鱼来源的几丁质。
具体实施方式
实施例1利用多糖裂解单加氧酶(BtLPMO10A)和几丁质酶(SmChiA)协同降解不同来源的几丁质
1)虾蟹壳来源的几丁质。如图1A所示,两组反应均在1.0ml的几丁质-磷酸缓冲液(20mM,pH=6.0)中进行,其中一组只添加5.0μM几丁质酶(黑色方块表示),另一组同时添加了5.0μM几丁质酶、1.0μM的多糖裂解单加氧酶和1.0mM的抗坏血酸(黑色三角表示),反应在37℃振荡条件下进行,分别在0,1,2,3,4,5,8,24h取样,样品中几丁二糖的含量通过HPLC的方法进行定量分析。结果如图1A所示,经过24h酶解,不含多糖裂解单加氧酶的一组几丁二糖的终浓度为8.1μg/ml,而含有多糖裂解单加氧酶的一组几丁二糖的终浓度为92μg/ml,即通过添加多糖裂解单加氧酶,可将虾蟹壳来源的几丁质的酶水解效率提高10倍以上。
2)鱿鱼来源的几丁质。如图1B所示,两组反应均在1.0ml的几丁质-磷酸缓冲液(20mM,pH=6.0)中进行,其中一组只添加5.0μM几丁质酶(黑色方块表示),另一组同时添加了5.0μM几丁质酶、1.0μM的多糖裂解单加氧酶和1.0mM的抗坏血酸(黑色三角表示),反应在37℃振荡条件下进行,分别在0,0.5,1,2,3,4,5,8h取样,样品中几丁二糖的含量通过HPLC的方法进行定量分析。结果如图1B所示,几丁二糖的生成量随之酶解时间的延长而不断增加。经过24h酶解,不含多糖裂解单加氧酶的一组几丁二糖的终浓度为23.5μg/ml,而含有多糖裂解单加氧酶的一组几丁二糖的终浓度为73μg/ml,即通过添加多糖裂解单加氧酶,可将鱿鱼来源的几丁质的酶水解效率提高3.1倍。
Claims (3)
1.一种几丁二糖的生产方法,其特征在于:
利用一种多糖裂解单加氧酶与几丁质酶的协同作用,将几丁质转化为几丁二糖;
几丁质与溶剂的质量体积比0.5-2g/100ml;
几丁质酶为来自于粘质沙雷氏菌中的外切型几丁质酶(SmChiA);多糖裂解单加氧酶为来自于苏云金芽孢杆菌的多糖裂解单加氧酶(BtLPMO10A);BtLPMO10A用量为1-5μM/g几丁质;SmChiA用量为1-5μM/g几丁质;
酶处理体系中含0.5-2.0mM的抗坏血酸,在20-40℃,振荡条件下反应8-24h。
2.按照权利要求1所述的生产方法,其特征在于:几丁质来自于虾蟹壳、真菌细胞壁、昆虫外壳和鱿鱼中的一种或二种以上。
3.按照权利要求1所述的生产方法,其特征在于:反应于溶剂中进行,溶剂为磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液中的一种。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510883057.5A CN106834386B (zh) | 2015-12-04 | 2015-12-04 | 一种几丁二糖的生产方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510883057.5A CN106834386B (zh) | 2015-12-04 | 2015-12-04 | 一种几丁二糖的生产方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106834386A CN106834386A (zh) | 2017-06-13 |
CN106834386B true CN106834386B (zh) | 2021-03-02 |
Family
ID=59148834
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510883057.5A Active CN106834386B (zh) | 2015-12-04 | 2015-12-04 | 一种几丁二糖的生产方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106834386B (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1847267A (zh) * | 2006-05-10 | 2006-10-18 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 几丁寡糖制备方法 |
CN102286414A (zh) * | 2011-09-02 | 2011-12-21 | 海南大学 | 一株几丁质降解菌株及其制备几丁寡糖的方法 |
CN102573937A (zh) * | 2009-10-07 | 2012-07-11 | 株式会社耐热性酵素研究所 | 含有几丁质或壳聚糖的可降解复合材料 |
CN104762307A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-07-08 | 大连大学 | 几丁质酶基因chiC及其编码蛋白和应用 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2944957C (en) * | 2014-04-30 | 2022-03-29 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
-
2015
- 2015-12-04 CN CN201510883057.5A patent/CN106834386B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1847267A (zh) * | 2006-05-10 | 2006-10-18 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 几丁寡糖制备方法 |
CN102573937A (zh) * | 2009-10-07 | 2012-07-11 | 株式会社耐热性酵素研究所 | 含有几丁质或壳聚糖的可降解复合材料 |
CN102286414A (zh) * | 2011-09-02 | 2011-12-21 | 海南大学 | 一株几丁质降解菌株及其制备几丁寡糖的方法 |
CN104762307A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-07-08 | 大连大学 | 几丁质酶基因chiC及其编码蛋白和应用 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
Actinosynnema mirum DSM43827 溶解性多糖单加氧酶的异源表达和酶学性质表征;施贤卫 等;《中国生物工程杂志》;20140731;第34卷(第7期);摘要,第19页第1.7节,第22页第3节 * |
Expression and characterization of a lytic polysaccharide monooxygenase from Bacillus thuringiensis;Huiyan Zhang 等;《International Journal of Biological Macromolecules》;20150430;第79卷;摘要 * |
Listeria mono cytogenes has a functional chitinolytic system and an active lytic polysaccharide monooxygenase;Dafn i K. Pas paliari 等;《FEBS J.》;20150129;第282卷(第5期);第921-936页 * |
施贤卫 等.Actinosynnema mirum DSM43827 溶解性多糖单加氧酶的异源表达和酶学性质表征.《中国生物工程杂志》.2014,第34卷(第7期), * |
细菌几丁质酶基因转化番茄的研究;任春梅 等;《湖南农业大学学报》;20020831;第28卷(第4期);第299页左栏第1段 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106834386A (zh) | 2017-06-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Jahromi et al. | Marine bacterial chitinase as sources of energy, eco-friendly agent, and industrial biocatalyst | |
Jung et al. | Bioproduction of chitooligosaccharides: present and perspectives | |
Pancha et al. | Comparative evaluation of chemical and enzymatic saccharification of mixotrophically grown de-oiled microalgal biomass for reducing sugar production | |
Trivedi et al. | Enzymatic hydrolysis and production of bioethanol from common macrophytic green alga Ulva fasciata Delile | |
Jung et al. | Potentials of macroalgae as feedstocks for biorefinery | |
Villa-Lerma et al. | Ultrasonication and steam-explosion as chitin pretreatments for chitin oligosaccharide production by chitinases of Lecanicillium lecanii | |
Hu et al. | Green, simple, and effective process for the comprehensive utilization of shrimp shell waste | |
Fu et al. | Bioconversion of chitin waste using a cold-adapted chitinase to produce chitin oligosaccharides | |
Doan et al. | Bioprocessing of squid pens waste into chitosanase by Paenibacillus sp. TKU047 and its application in low-molecular weight chitosan oligosaccharides production | |
Gomaa et al. | Optimization of enzymatic saccharification of fucoidan and alginate from brown seaweed using fucoidanase and alginate lyase from the marine fungus Dendryphiella arenaria | |
Choi et al. | Sugar production from raw seaweed using the enzyme method | |
CN108912247B (zh) | 一种酸酶复合法制备的低聚甲壳素及制备方法 | |
CN106834386B (zh) | 一种几丁二糖的生产方法 | |
Allardyce et al. | Purification and characterisation of endo-β-1, 4-glucanase and laminarinase enzymes from the gecarcinid land crab Gecarcoidea natalis and the aquatic crayfish Cherax destructor | |
CN102286414B (zh) | 一株几丁质降解菌株及其制备几丁寡糖的方法 | |
Karmakar et al. | Saccharification of agro wastes by the endoglucanase of Rhizopus oryzae | |
Ueda et al. | Purification and characterization of 1, 3-β-d-glucanase from Eisenia foetida | |
JP6355727B2 (ja) | Chi92タンパク質の新たな用途及びChi92タンパク質発現菌株 | |
CN110724211B (zh) | 一种基于还原糖催化氧化的虾蟹壳高值化综合利用方法及其应用 | |
Xiao et al. | Enzyme production by a fungoid marine protist, Thraustochytrium striatum | |
CN112322525B (zh) | 一种用于纤维素降解的东方醋酸菌及应用 | |
Huynh et al. | Low-cost production of chitosanolytic enzymes from Lentzea sp. strain OUR-I1 for the production of antimicrobial substances against food-borne pathogens. | |
CN101608177A (zh) | 甲壳素脱乙酰酶的制备新方法 | |
LEWANDOWSKA et al. | Effect of metal cations on enzymatic hydrolysis of cellulose. | |
Kooren et al. | Exploration of seaweed degradation potential of the prioritized microbes as a green saccharification technology |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |