CN106701640B - 一种天然黄色素的产生菌xj2新菌种及其制备与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种天然黄色素的产生菌XJ2新菌种及其色素制备,通过对金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157进行鉴定表明属于典型的新菌种,通过活化、增殖、萃取生产天然黄色素,所述的生产的天然黄色素可溶于水及甲醇、乙醇,易溶于丙酮、乙酸乙酯及正丁醇等低极性溶剂,提取物乙醇溶液在438nm处有一最大吸收峰;具有抗氧化功能;在pH2.0~9.0范围内稳定;具有较好的热稳定性和一定的光稳定性,对于天然黄色素生产具有重大的现实意义。

Description

一种天然黄色素的产生菌XJ2新菌种及其制备与应用
技术领域
本发明主要涉及微生物工程技术领域,具体地说,本发明涉及天然色素的生产菌株、色素及制备方法。
背景技术
色素是指能够使被媒染物着色的物质,也叫着色剂,可用于改变物品或者食品的色泽,被广泛应用在纺织、建筑、食品、生物、医药卫生、化妆品、日用工业品、饲料等行业领域,色素按来源被分为天然色素和合成色素两大类。
天然色素主要是从植物的根、茎、叶、花、果实和动物、微生物中提取的天然色素类物质,是早在合成色素出现之前,人们一直使用的色素。与合成色素相比,绝大多数天然色素无毒副作用,生物相容性安全性高。虽然合成色素色泽鲜艳,着色力强、性质稳定和成本低廉,但是合成色素主要是从煤焦油中提取的苯、甲苯、萘、苯胺等芳香类化合物为原料合成的,都有不同程度的毒性,特别是偶氮型色素,有可能在体内通过代谢形成致癌物质,在合成色素合成过程中,还有可能被重金属或者其他物质污染。目前,天然色素已成为食品、化妆品、保健品行业的发展趋势。
红、黄、蓝做为三个基本色素,可以相互搭配呈现出丰富色调,具有极高的应用价值。天然色素中黄色素主要有抽提法和微生物发酵法制备。通过抽提法生产的主要有姜黄色素、叶黄素、栀子黄色素、红花黄色素等,这种生产方法主要从植物里抽提,受季节影响较大,而且抽提中引入了有机溶剂,成本较高,微生物发酵法生产黄色素不受季节影响,转化率较高,成本低,发展前景广阔,但是由于菌种资源匮乏,相关的报道较少,已经公开报道的红曲霉菌、假单胞菌等,红曲霉菌不仅产生黄色素也产生红色素,热稳定性较好,是天然黄色素提取的一个主要途径,专利(公开号CN102899265A)公开的荧光假单孢菌(Pseudomonasfluorescens BGM-1,CGMCC NO.6060)2%-8%接种量在20℃-28℃浅盘培养发酵提取黄色素,专利(公开号CN105349466A)公开的藤黄微球菌(Micrococcus luteus,CGMCCNO.11518)接种到pH7.0培养基30℃培养24h,热碱法可以提取黄色素,但是这些菌种的种类及数量远不能满足各行业对天然黄色素研究开发的需要。因此,筛选出能大量生产黄色素的新型微生物菌种和具有不同特性黄色素具有重要的科学研究和应用价值。
发明内容
针对现有技术现状,特别是菌种的种类及数量远不能满足各行业对天然黄色素研究开发需要的技术问题,本申请提供的一株分离自新疆木垒鹰嘴豆根瘤黄色菌株,是一种典型的新菌种,利用该菌种制备的天然黄色素,在天然黄色素生产和研究方面具有广泛的应用价值。
为了实现上述目的,本发明从新疆木垒鹰嘴豆根瘤中分离一种产生天然黄色素产生菌,同时提供了利用该菌株发酵产生提取黄色素的方法和生产的黄色素,所生产的黄色素具有抗氧化功能;在pH2.0~9.0范围内稳定;具有较好的热稳定性和一定的光稳定性。
本发明具体提供的一种天然黄色素产生菌,经微生物菌株分类鉴定,确定该菌株为金黄色杆菌新种,菌种的编号为XJ2,建议分类命名为金黄杆菌(Chryseobacteriumsp.)。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编:100101,保藏日期是2016年10月27日,菌种保藏号为CGMCCNo.13157。
编号为XJ2菌株可在25℃-55℃生长良好,革兰氏染色为阴性,杆菌,大约0.8μm-1.2μm×0.5μm-0.6μm,好氧,无运动性。可在20℃–37℃生长,最适生长温度30℃,可耐受含有8%NaCl的培养基上生长。在LB培养基上,菌落为黄色,圆形,微突起,边缘规则。菌体氧化酶和触酶为阳性,可利用葡萄糖、蔗糖和乳糖产酸。吲哚阳性,可水解明胶、淀粉、酪氨酸、吐温80,具有碱性磷酸酶,胰蛋白酶和胰蛋白酶酶活性;产flexirubin,硝酸盐还原和产H2S阴性。在GENIII板单一碳源利用实验中,糊精、蔗糖、海藻糖、蔗糖松二糖、葡萄糖、甘露糖、果糖、1%乳酸钠、D-丝氨酸、果胶、萘啶酸、吐温40、丙酸、乙酸氨丁酸等利用均为阳性,与常见的金黄色杆菌属成员菌种不同的生理生化特性,具有一些新菌种的特征。
提取金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2的总DNA,采用细菌16S rDNA PCR扩增通用引物,进行PCR扩增,PCR产物经切胶纯化,送由上海生工测序。将实验菌株的所得序列与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比较,确定与实验菌株亲缘关系最近的种属。并结合EzTaxon(http://www.ezbiocloud.net/eztaxon)中序列比对并调取相关模式菌株序列,以进行系统发育树分析标准模式菌序列,利用MEGA5.0软件包采用邻接法(Neighbor-Joiningmethod)进行聚类分析和系统进化树构建,由系统进化树可知,菌株XJ-2与模式菌株Chryseobacteriumanthropi NF 1366T(AM982786)最大同源为97.27%,与Chryseobacterium haifense H38T(EF204450)同源为97.24%,与同属其它菌株同源性均小于97.0%,表明该菌种为新种,具有新菌种典型性的特点,从分类学角度暂命名为金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)。
本发明中,所述的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157发酵产生提取黄色素的方法,包括如下步骤:
(1)对保藏的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157选择完全培养基以平板划线法或涂布法接种于固体培养基表面进行活化培养,同时检测菌株是否有杂菌污染。
(2)将步骤(1)活化培养的金黄色杆菌新种菌培养物接种于适合于菌体增殖的发酵培养基中,30℃、200rpm恒温震荡培养3d。
(3)离心收集步骤(2)发酵培养物中的菌体,以有机溶剂萃取,萃取物经浓缩干燥后所得的物质即为黄色素粗提物。
本发明中,所述的完全培养基为蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖1g,KH2PO43g,pH7.0。
本发明中,所述的发酵培养基为蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖1g,KH2PO43g,pH7.0。
本发明中,所述的有机溶剂为95%的乙醇溶液作为萃取剂。
本发明中,所述金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157的保藏采取斜面传代方式或真空冷冻干燥方式保藏。
本发明中,所述斜面传代保藏方法是指菌株金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157生长的完全培养基上,30℃下恒温培养48h-72h,待菌落完成生长后置于4℃下恒温保藏,6个月进行传代一次。
本发明中,所述真空冷冻干燥法保藏的菌种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157可在常温或低温条件下保藏1年。
本发明中,所述黄色素粗提物乙醇溶液在438nm处有一最大吸收峰。
本发明中,所述天然黄色素具有抗氧化功能;在pH2.0~9.0范围内稳定。
本发明采用上述提供的技术方案获得的有益效果:
本发明提供一种典型的新种菌金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2CGMCCNo.13157,其生长速度快,培养条件要求低,生产的天然黄色素可溶于水及甲醇、乙醇,易溶于丙酮、乙酸乙酯及正丁醇等低极性溶剂,提取物乙醇溶液在438nm处有一最大吸收峰;具有抗氧化功能;在pH2.0~9.0范围内稳定;具有较好的热稳定性和一定的光稳定性。
附图说明
图1:所示为金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157的菌落照片所产生的天然黄色素的可见吸收扫描图。
图2:所示为金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157的系统进化树。
图3:所示为金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157所产生的天然黄色素的紫外-可见吸收图。
图4:所示为自然光对金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157所产生的天然黄色素的影响图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细描述,但本发明的方法不限于下述实施例。
本发明中选用的所有原辅材料,以及选用的菌种培养方法都为本领域熟知选用的,本发明中涉及到的%都为重量百分比,除非特别指出除外。
实施例一:金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157的筛选、分类及鉴定
本发明所使用的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157分离自新疆木垒鹰嘴豆根瘤。用自来水冲洗干净鹰嘴豆根表面的泥土,用无菌水冲洗5次以上根瘤,用95%乙醇浸泡根瘤30秒,继续用无菌水冲洗5次以上,用0.1%的升汞溶液浸泡5分钟后,用无菌水冲洗根瘤5次以上,保留最后一次冲洗的无菌水涂布于相关平板上,以检测根瘤是否消毒彻底。然后用解剖刀将根瘤从鹰嘴豆根部剥离,用无菌研钵研磨消毒后的根瘤,适当稀释后,用枪尖吸取0.1mL稀释液加至完全培养基(蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖1g,KH2PO43g,pH7.0)平板上并涂布,平板置55℃恒温培养。待长出菌落后挑取形状、大小、颜色等不同的菌落分别划线接种于相应的平板,直至无杂菌落,从中优选出一株编号为XJ2的菌株,参见附图1。
金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157在25℃-55℃生长良好,菌株革兰氏染色为阴性,杆菌,大约0.8μm-1.2μm×0.5μm-0.6μm,好氧,无运动性。可在20℃-37℃生长,最适生长温度30℃,可耐受含有8%NaCl的培养基上生长。在LB培养基上,菌落为黄色,圆形,微突起,边缘规则。菌体氧化酶和触酶为阳性,可利用葡萄糖、蔗糖和乳糖产酸。吲哚阳性,可水解明胶、淀粉、酪氨酸、吐温80,具有碱性磷酸酶,胰蛋白酶和胰蛋白酶酶活性;产flexirubin,硝酸盐还原和产H2S阴性。在GENIII板单一碳源利用实验中,糊精、蔗糖、海藻糖、蔗糖松二糖、葡萄糖、甘露糖、果糖、1%乳酸钠、D-丝氨酸、果胶、萘啶酸、吐温40、丙酸、乙酸氨丁酸等利用均为阳性,与常见的金黄色杆菌属成员菌种不同的菌落形态和生理生化特性,具有一些新菌种的鲜明特征。
表1:专利菌种XJ2最为邻近菌株代谢差异
Figure BDA0001227282340000061
Figure BDA0001227282340000071
提取金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157的总DNA,采用细菌16S rDNAPCR扩增通用引物,进行PCR扩增,PCR产物经切胶纯化,送由上海生工测序,其序列参见附后提供的SEQUENCE LISTING。将实验菌株的所得序列与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比较,确定与实验菌株亲缘关系最近的种属。并结合EzTaxon(http://www.ezbiocloud.net/eztaxon)中序列比对并调取相关模式菌株序列,以进行系统发育树分析标准模式菌序列,利用MEGA5.0软件包采用邻接法(Neighbor-Joiningmethod)进行聚类分析和系统进化树构建,参见附图2。由系统进化树可示,与模式菌株Chryseobacteriumanthropi NF 1366T(AM982786)最大同源为97.27%,与Chryseobacterium haifense H38T(EF204450)同源为97.24%,与同属其它菌株同源性均小于97.0%,为新种,具有新菌种典型性的特点,菌株XJ-2从分类学角度暂命名为金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)。
该菌株XJ-2已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编:100101。保藏日期2016年10月27日,菌种保藏号为CGMCCNo.13157。经微生物学鉴定,编号为XJ-2菌株暂定建议名称为金黄杆菌(Chryseobacteriumsp.)。
实施例二:金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157发酵产生和提取黄色素的方法与吸光特性
本发明中,将金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157接种于发酵培养基(500mL三角瓶装填100mL发酵培养基,发酵培养基蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖1g,KH2PO43g,pH7.0),30℃,200rpm摇床培养3d。菌液以8000rpm、3min离心处理获得菌体,菌体经生理盐水洗涤三次后,加入20mL95%的乙醇溶液,50℃,100rpm振荡萃取处理1h;再以8000rpm、5min离心处理,所获得的上清液即为黄色素粗提取液;将黄色素粗提取液置于60℃恒温条件下进行真空浓缩,直至成为干物质,所得即为黄色素粗提物。
将所获得的黄色素粗制剂溶解于95%的乙醇溶液中,利用紫外分光光度计进行200-800nm的扫描分析,分析结果,参见说明书附图3。分析结果表时,金黄色杆菌新种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157产生的黄色素在438nm处有最大的吸收峰,说明可以用438nm波长的光波进行金黄色杆菌新种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157黄色素的含量测定。
实施例三:金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157产生的黄色素溶解性测定
金黄色杆菌新种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157发酵和获取黄色素粗提物,分别量取10mL纯净水、50%乙醇、95%乙醇、99.8%乙醇,50%甲醇溶液、100%甲醇,乙酸乙酯、丙酮、正丁醇至于比色管中,并加入绝对过量黄色素粗提物于各种溶剂中,密封后于摇床室温100rpm振荡溶解12小时,制取饱和黄色素溶液。再以8000rpm、5min离心处理,取上清液于438nm波长测定吸光值,并与95%乙醇饱和黄色素溶液OD对比,计算溶解倍率,见表2。
表2:不同溶液对提取效果
如表2所示,可以看出,使用实验所得黄色素更易溶于极性低的溶液。但考率到安全、环保和费用,优先选取使用95%的乙醇溶液提取。
实施例四:金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157产生的黄色素抗氧化特性测定
精确称取1,1-二苯-3-苦基肼(DPPH)10mg,使用无水乙醇溶解并且定容至50mL,从而配制成0.2g/L的DPPH标准溶液。将本发明新菌种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2CGMCC No.13157得到的黄色素配制成0.1mg/mL乙醇溶液,分别吸取2mL色素溶液和2mLDPPH标准溶液,快速混匀后置于扫描分光光度计上,517nm光波下进行时间-吸光值扫描(扫描时间为10min),记录起始吸光值Ai和10min后吸光值At;同时分别吸取2mL无水乙醇和2mLDPPH标准溶液作对照,记录AO,通过以下公式计算自由基消除率。
公式:消除率=[1-(Ai-At)/A0]×100%
其中:Ai为色素与DPPH溶液混匀后的吸光值;
At色素与DPPH溶液混匀,反应10min后的吸光值;
A0为乙醇与DPPH溶液混匀后的吸光值
通过测定计算可知,在本反应浓度和反应10min条件下,0.lmg/mL色素溶液对0.2g/L的DPPH标准溶液的自由基消除率为35.3%。
实施例五:金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157产生的黄色素热稳定特性测定
将本发明新菌种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157得到的黄色素分别配制成0.1mg/mL乙醇溶液,各吸取10mL并密闭分装于玻璃比色管中,置于4℃、20℃、40℃、60℃、80℃、100℃水浴2h时,迅速冷却至室温,于室温下测定438nm下的收光值,以未作保温处理的样本为对照计算色素的残余量,结果如表3所示。
表3:黄色素的热稳定性
处理温度 4℃ 20℃ 40℃ 60℃ 80℃ 100℃
损失率(%) 0 0.08% 1.2% 2.3% 3.8% 4.2%
由表3可以看出色素在乙醇溶液中较稳定,最大损失率仅为4.2%。
实施例六:金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157产生的黄色素光稳定特性测定
将本发明新菌种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157得到的黄色素配制成0.1mg/mL乙醇溶液,密闭分装于玻璃试管中,置于自然光下照射0-6天,分别测定438nm下的吸光值,计算色素残余量。参见附图4。
本发明新菌种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157产生黄色素的乙醇溶液在自然光下放置2d后仍有75%以上残余量,表现出一定的光稳定性,但放置3d后急剧下跌,6d后仅有12.2%的残余量,因此本色素溶液应避光保存。
实施例七:pH对金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157产生黄色素的影响
将本发明新菌种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157得到的黄色素配制成0.1mg/mL水溶液,各吸取10ml置于不同试管中,分别利用HCl、NaOH调至不同pH的色素水溶液,并定溶到25mL,室温避光放置2h后,于438nm测定其吸光值,计算残余率;
表4:pH对色素的影响
PH 3.0 5.0 7.0 9.0 11.0
残余率<sub>438nm</sub>(%) 94.4% 97.1% 100% 94.1% 30.7%
颜色变化 粉红色 橙黄色 金黄色 黄绿色 黄绿色
由表4可以看到本发明新菌种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCCNo.13157产生的黄色素在pH3.0-9.0下保持相对稳定,在pH11.0时色素损失极大,残余率仅为30.7%。同时色素溶液随着pH的增高,颜色也随之较为明显的改变。
通过上述系列实施例可以证实本发明提供典型的新种菌-金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157生长速度快,培养条件要求低,生产的天然黄色素可溶于水及甲醇、乙醇,易溶于丙酮、乙酸乙酯及正丁醇等低极性溶剂,提取物乙醇溶液在438nm处有一最大吸收峰;具有抗氧化功能;在pH2.0~9.0范围内稳定;具有较好的热稳定性和一定的光稳定性。可见,本发明提供的典型新种菌-金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 CGMCC No.13157获得显著的技术效果。
如上所述,即可较好地实现本发明,上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进,均应落入本发明确定的保护范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 新疆农业科学院微生物应用研究所(中国新疆-亚美尼亚生物工程研
究开发中心)
<120> 一种天然黄色素的产生菌XJ2新菌种及其制备与应用
<130> XJ2
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1415
<212> DNA
<213> XJ2
<400> 1
gcaatcggga gctaccatgc agccgagcgg tagaagtcct tcgggacttt gagagcggcg 60
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ttagaacacc aattgcgaag gcaggtcact aagatttaac tgacgctgat ggacgaaagc 720
gtgggtagcg aacaggatta gataccctgg tagtccacgc cgtaaacgat gctaactcgt 780
ttttggattt tcggattcag agaccaagcg aaagtgataa gttagccacc tggggagtac 840
gttcgcaaga atgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggattatgtg 900
gtttaattcg atgatacgcg aggaacctta ccaagactta aatgggaaat gacaggttta 960
gaaatagacc cttcttcgga catttttcaa ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc 1020
gtgaggtgtt aggttaagtc ctgcaacgag cgcaacccct gtcactagtt gccatcattc 1080
agttggggac tctagtgaga ctgcctacgc aagtagagag gaaggtgggg atgacgtcaa 1140
atcatcacgg cccttacgtc ttgggccaca cacgtaatac aatggccggt acagagggca 1200
gctacctagc gataggatgc gaatctcgaa agccggtctc agttcggatt ggagtctgca 1260
actcgactct atgaagctgg aatcgctagt aatcgcgcat cagccatggc gcggtgaata 1320
cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc aagccatgga agtttggggt acctgaagtc 1380
ggtgaccgta aaaggagctg cctaggtaag cagta 1415

Claims (7)

1.一种金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2,其菌种保藏编号为 CGMCC No.13157。
2.一种保藏号为CGMCC No.13157的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2发酵提取黄色素的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)对金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 菌株选择完全培养基以平板划线法或涂布法接种于完全培养基表面进行活化培养,同时检测菌株是否有杂菌污染;
(2)将步骤(1)活化培养的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 菌株培养物接种于适合于菌体增殖的发酵培养基中,30℃、200rpm恒温震荡培养3d;
(3)离心收集步骤(2)发酵培养物中的菌体,以有机溶剂萃取,萃取物经浓缩干燥后所得的物质即为黄色素粗提物。
3.如权利要求2所述的保藏号为CGMCC No.13157的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2发酵提取黄色素的方法,其特征在于,所述的完全培养基为蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖1g,KH2PO43g,pH7.0。
4.如权利要求2所述的保藏号为CGMCC No.13157的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2发酵提取黄色素的方法,其特征在于,所述的发酵培养基为蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖1g,KH2PO43g,pH7.0。
5.如权利要求2所述的保藏号为CGMCC No.13157的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2发酵提取黄色素的方法,其特征在于,所述的有机溶剂为95%的乙醇溶液作为萃取剂。
6.如权利要求2所述的保藏号为CGMCC No.13157的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2发酵提取黄色素的方法,其特征在于,所述金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2 采用斜面传代方式保藏,将菌株接种在固体培养基上,30℃下恒温培养48h-72h,待菌落完成生长后置于4℃下恒温保藏,6个月进行传代一次。
7.如权利要求2所述的保藏号为CGMCC No.13157的金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)XJ2发酵提取黄色素的方法产生的天然黄色素。
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