CN106687446B - 作为t790m/wt-egfr的选择性和不可逆的激酶抑制剂的5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申请提供式(I)的化合物、包含它们的药物组合物、它们的制备方法以及它们的用途。

Description

作为T790M/WT-EGFR的选择性和不可逆的激酶抑制剂的5-氨 基-4-氨甲酰基-吡唑化合物及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年6月18日提交的PCT申请PCT/CN2014/082439的权益，在此引入本申请作为参考。
发明背景
1.技术领域
本申请披露了5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物、包含它们的药物组合物、它们的制备方法以及它们在疗法中的用途。本申请披露了相对于WT EGFR抑制对T790M具有良好选择性且用于治疗由其介导的病症的某些5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物。
2.相关领域的描述
肺癌继续成为癌症相关死亡率的首要原因，这说明传统的细胞毒性化疗法在患有该疾病的患者中具有有限的效力(Bedano PM,Hanna NH.J Thorac Oncol.2006；1:582-587.；Jemal A,Siegel R,Ward E,Murray T,Xu J,Smigal C,et al.CA Cancer JClin.2006；56:106-130.)。开发针对患有晚期肺癌的患者的新型和有效疗法仍然具有极其迫切的健康需求，并且靶向疗法可在由相关癌基因突变状态所限定的患者群体中提供耐受良好的疾病调节治疗选择。基于所观测到的EGFR和HER2癌基因突变的模式，ERBB受体酪氨酸家族的成员(包括表皮生长因子受体(EGFR)、HER2、HER3和HER4)对患有NSCLC的患者的靶向疗法而言呈现为有吸引力的选择(Lynch TJ,Bell DW,Sordella R,Gurubhagavatula S,Okimoto RA,Brannigan BW,et al.N Engl J Med.2004；350:2129-2139.；Paez JG,JannePA,Lee JC,Tracy S,Greulich H,Gabriel S,et al.Science.2004；304:1497-1500.；PaoW,Miller V,Zakowski M,Doherty J,Politi K,Sarkaria I,et al.Proc Natl Acad SciUSA.2004；101:13306-13311.；Stephens P,Hunter C,Bignell G,Edkins S,Davies H,Teague J,et al.Nature.2004；431:525-526.；Shigematsu H,Takahashi T,Nomura M,Majmudar K,Suzuki M,Lee H,et al.Cancer Res.2005；65:1642-1646.；Shimamura T,JiH,Minami Y,Thomas RK,Lowell AM,Shah K,et al.Cancer Res.2006；66:6487-6491.；Wang SE,Narasanna A,Perez-Torres M,Xiang B,Wu FY,Yang S,et al.CancerCell.2006；10:25-38.)。
第一代小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂，诸如吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)，对在EGFR激酶结构域具有突变的肺肿瘤细胞表现出有效，所述突变最常见的是外显子19中小的框内缺失(in-frame deletion)或外显子21中L858R错义突变(JannePA,Engelman JA,Johnson BE.J Clin Oncol.2005；23:3227-3234.)。然而，尽管最初具有响应，患者几乎不可避免地对这些抑制剂产生抗性并且在数个月后复发(Riely GJ,Pao W,Pham D,Li AR,Rizvi N,Venkatraman ES,et al.Clin Cancer Res.2006；12:839-844.)。
具有活化EGFR突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者最初对EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)厄洛替尼和吉非替尼响应良好。然而，临床效力受抗性产生的限制。最常见的抗性机制是在约50％的病例中观测到的EGFR外显子20中的第二位点突变(T790M)(Kobayashi S,Ji H,Yuza Y,Meyerson M,Wong KK,Tenen DG,et al.Cancer Res.2005b；65:7096-7101.；Pao W,Miller VA,Politi KA,Riely GJ,Somwar R,Zakowski MF,et al.PLoS Med.2005a；2:e73.)。单独和外显子19或21中的主要改变组合，T790M EGFR都展现出升高的酶活性和转变活性(Mulloy R,Ferrand A,Kim Y,Sordella R,Bell DW,Haber DA,et al.CancerRes.2007；67:2325-2330.；Schiffer HH,Reding EC,Fuhs SR,Lu Q,Piu F,Wong S,etal.Mol Pharmacol.2007；71:508-518.；Vikis H,Sato M,James M,Wang D,Wang Y,WangM,et al.Cancer Res.2007；67:4665-4670；Yuza Y,Glatt KA,Jiang J,Greulich H,Minami Y,Woo MS,et al.Cancer Biol Ther.2007；6:661-667.)，这表明需要提高下一代EGFR抑制剂的治疗效力。
在基于细胞的测定中，共价修饰EGFR的不可逆抑制剂针对吉非替尼和厄洛替尼的抗性突变体展现出提高的效力(Greulich H,Chen TH,Feng W,Janne PA,Alvarez JV,Zappaterra M,et al.PLoS Med.2005；2:e313.；Kwak EL,Sordella R,Bell DW,Godin-Heymann N,Okimoto RA,Brannigan BW,et al.Proc Natl Acad Sci USA.2005；102:7665-7670.；Kobayashi S,Boggon TJ,Dayaram T,Janne PA,Kocher O,Meyerson M,et al.NEngl J Med.2005a；352:786-792.；Kobayashi S,Ji H,Yuza Y,Meyerson M,Wong KK,Tenen DG,et al.Cancer Res.2005b；65:7096-7101；Shimamura T,Ji H,Minami Y,ThomasRK,Lowell AM,Shah K,et al.Cancer Res.2006；66:6487-6491.；Yuza Y,Glatt KA,JiangJ,Greulich H,Minami Y,Woo MS,et al.Cancer Biol Ther.2007；6:661-667.)。临床前试验和早期临床试验还表明新类型panHER抑制剂在克服相对于T790M的获得性抗性中具有潜在的效力。一种此类抑制剂BIBW2992或阿法替尼(afatinib)是衍生自苯胺基-喹唑啉化学系列的新型不可逆双重特异性EGFR/HER2抑制剂，其被设计与EGFR的Cys 773和HER2的Cys805共价结合。虽然显示出临床益处，但是阿法替尼最近才被批准用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)。然而，III期试验与厄洛替尼或吉非替尼的间接对照显示阿法替尼的腹泻、皮疹和口炎发生率较高(Mok TS,Wu YL,Thongprasert S,et al.N Engl J Med 2009；361:947-57；Rosell R,Carcereny E,Gervais R,et al.Lancet Oncol 2012；13:239-46；Han JY,Park K,Kim SW,et al.J Clin Oncol 2012；30:1122-8.)。应当考虑的是，所有这些数据均表明第二代共价抑制剂的毒性可能高于用第一代化合物所观测到的毒性。对于临床中所述第一和第二代疗法，野生型EGFR抑制被认为推动了所观测到的剂量限制性毒性(诸如皮疹和腹泻)。
为了进一步改善第二代EGFR抑制剂诸如阿法替尼、达克替尼(dacomitinib)和来那替尼(neratinib)的效力并且克服它们的副作用，第三代不可逆的EGFR抑制剂已经被报道并进入临床试验。这些新型EGFR抑制剂相对于WT EGFR抑制剂对T790M具有良好的选择性。。例如，CO-1686和AZD9291为通过抑制常见活化突变(L858R,delE746-A750)和看门突变(T790M)而非野生型受体来靶向EGFR的突变体形式的不可逆激酶抑制剂。因此，CO-1686和AZD9291具有以下潜能：有效治疗具有EGFR突变的一线和二线NSCLC患者，而不引起与经批准的EGFR激酶抑制剂有关的剂量限制性毒性。
某些其它T790M EGFR激酶抑制剂也已被鉴定出来。国际专利申请公开WO 2011/162515、国际专利申请公开WO 2013/184757、国际专利申请公开WO 2013/184766、国际专利申请公开WO 2013/014448、国际专利申请公开WO 2013/042006、国际专利申请公开WO2013/118817、国际专利申请公开WO 2013/125709、国际专利申请公开WO 2014/025486。
发明内容
本发明目的在于提供抑制突变体EGFR激酶的新型5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物。
本申请披露了5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物，其相对于WT-EGFR激酶选择性抑制T790M EGFR激酶。
本申请提供了至少一种5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物、其立体异构体和药用盐，其选自式(I)化合物
Figure BDA0001210200830000031
其中
R1、R2和R3独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
R4选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
L为连接基团，其选自键、-(CR5R6)n-、S、-O-和-NR8-，其中n为整数1、2或3；
W选自芳基或杂芳基，所述芳基或杂芳基任选地被1个、2个或3个选自以下的取代基所取代：卤素、CN、NO2、OR8、NR'R”、NR'COR”、NR'SO2R”、CONR'R”、COOR'、SO2R'、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；或者
W和R4与它们所连接的氮一起形成任选地含有另一个选自NR8、O和S的杂原子的4元或5元或6元杂环，所述杂环任选地被1个、2个或3个选自以下的取代基所取代：卤素、CN、NO2、OR8、NR'R”、NR'COR”、NR'SO2R”、CONR'R”、COOR'、SO2R'、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R7，在每次出现时，独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷氧基；且其中p为整数0、1、2、3或4；
Y选自-CR5R6-和-O-；
Z选自-(CR5R6)m-、-CR5R6-O-、-O-和-NR'-，其中m为1或2的整数；
R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
R8选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
R'和R”，在每次出现时，独立地选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；且
*为手性中心。
在一些实施方案中，R1、R2和R3为氢。
在一些实施方案中，R4为氢。
在一些实施方案中，L为键，且W为芳基或杂芳基。
在另一些实施方案中，L为键，且W为苯基或吡啶基。
在一些实施方案中，L为-(CR5R6)n-，且W为芳基或杂芳基，其中n为整数1、2或3，且R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。在另一些实施方案中，L为-(CR5R6)n-，且W为苯基或吡啶基，其中n为整数1、2或3，且R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。在另一些实施方案中，L为-CH2-，且W为苯基或吡啶基。
在一些实施方案中，L为键或-(CR5R6)n-，且W和R4与它们所连接的氮一起形成含有另一个选自NR8、O和S的杂原子的4元或5元或6元杂环，所述杂环任选地被1个、2个或3个选自以下的取代基所取代：卤素、CN、NO2、OR8、NR'R”、NR'COR”、NR'SO2R”、CONR'R”、COOR'、SO2R'、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中R5、R6、R8、R'、R”和n如上文所定义。在另一些实施方案中，L为键或-(CR5R6)n-，且W和R4与它们所连接的氮一起形成选自以下的4元或5元或6元杂环：氮杂环丁基(诸如氮杂环丁-2-基(即
Figure BDA0001210200830000051
)和氮杂环丁-3-基(即
Figure BDA0001210200830000052
))、吡咯烷基(诸如吡咯烷-2-基(即
Figure BDA0001210200830000053
)和吡咯烷-3-基(即
Figure BDA0001210200830000054
))、哌啶基(诸如哌啶-2-基(即
Figure BDA0001210200830000055
)、哌啶-3-基(
Figure BDA0001210200830000056
)和哌啶-4-基(即
Figure BDA0001210200830000057
))和吗啉基(诸如吗啉-2-基(即
Figure BDA0001210200830000058
)和吗啉-3-基(即
Figure BDA0001210200830000059
))，且其中R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；且n为整数1、2或3，且其中波浪线表示与连接基团L的连接点，且氮原子上的丙烯酰基已被省略。在另一些实施方案中，L为键，且W和R4与它们所连接的氮一起形成选自以下的4元或5元或6元杂环：氮杂环丁基(诸如氮杂环丁-2-基(即
Figure BDA00012102008300000510
)和氮杂环丁-3-基(即
Figure BDA00012102008300000511
))、吡咯烷基(诸如吡咯烷-2-基(即
Figure BDA00012102008300000512
)和吡咯烷-3-基(即
Figure BDA00012102008300000513
))、哌啶基(诸如哌啶-2-基(即
Figure BDA00012102008300000514
)、哌啶-3-基(
Figure BDA00012102008300000515
)和哌啶-4-基(即
Figure BDA00012102008300000516
))和吗啉基(诸如吗啉-2-基(即
Figure BDA00012102008300000517
)和吗啉-3-基(即
Figure BDA00012102008300000518
))，且其中波浪线表示与连接基团L的连接点，且氮原子上的丙烯酰基已被省略。在另一些实施方案中，L为-CH2-，且W和R4与它们所连接的氮一起形成选自以下的4元或5元或6元杂环：氮杂环丁基(诸如氮杂环丁-2-基(即
Figure BDA00012102008300000519
)和氮杂环丁-3-基(即
Figure BDA00012102008300000520
))、吡咯烷基(诸如吡咯烷-2-基(即
Figure BDA00012102008300000521
)和吡咯烷-3-基(即
Figure BDA00012102008300000522
))、哌啶基(诸如哌啶-2-基(即
Figure BDA00012102008300000523
)、哌啶-3-基
Figure BDA00012102008300000524
和哌啶-4-基(即
Figure BDA00012102008300000525
))和吗啉基(诸如吗啉-2-基(即
Figure BDA00012102008300000526
)和吗啉-3-基(即
Figure BDA00012102008300000527
))，且其中波浪线表示与连接基团L的连接点，且氮原子上的丙烯酰基已被省略。
在一些实施方案中，Y为-O-，且Z为-O-。在一些实施方案中，Y为-O-，且Z为-NR'-，其中R'独立地选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。在一些实施方案中，Y为-CR5R6-，且Z为-NR'-，其中R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；且R'独立地选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。在一些实施方案中，Y为-CR5R6-，且Z为-CR5R6-，其中R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。在一些实施方案中，Y为-CR5R6-，且Z为-O-，其中R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。在一些实施方案中，Y为-CR5R6-，Z为-(CR5R6)2-，其中R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。在一些实施方案中，Y为-CR5R6-，且Z为-CR5R6O-，其中R5和R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基和C1-6卤代烷基。
本申请提供至少一种式(I)的5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物、其立体异构体和药用盐，所述式(I)为式(I-1)：
Figure BDA0001210200830000061
其中：
R4选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
L为连接基团，其选自键或-CH2-；
W选自苯基或吡啶基；或
R7，在每次出现时，独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷氧基；且其中p为整数0、1、2、3或4；
Y选自-CH2-和-O-；
Z选自-CH2-、-CH2CH2-、-CH2O-、-O-和-NMe-；且
*为手性中心。
本申请提供至少一种式(I)的5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物、其立体异构体和药用盐，，所述式(I)为式(I-2)：
Figure BDA0001210200830000071
其中：
L为键或-CH2-；
W和R4与它们所连接的氮一起形成选自以下的4元或5元或6元杂环：氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基和吗啉基，所述杂环任选地被1个、2个或3个选自以下的取代基所取代：卤素、CN、NO2、OR8、NR'R”、NR'COR”、NR'SO2R”、CONR'R”、COOR'、SO2R'、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R7，在每次出现时，独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷氧基；且其中p为整数0、1、2、3或4；R8选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
R8选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
R'和R”，在每次出现时，独立地选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
Y选自-CH2-和-O-；
Z选自-CH2-、-CH2CH2-、-CH2O-、-O-和-NMe-；且
*为手性中心。
在一些实施方案中，至少一种式I-2的5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物，其中
L为键或-CH2-，
W和R4与它们所连接的氮一起形成选自以下的4元或5元或6元杂环：选自
Figure BDA0001210200830000072
Figure BDA0001210200830000073
的氮杂环丁基；选自
Figure BDA0001210200830000074
的吡咯烷基；选自
Figure BDA0001210200830000075
Figure BDA0001210200830000076
的哌啶基，以及选自
Figure BDA0001210200830000077
的吗啉基，且其中波浪线表示与连接基团L的连接点，且氮原子上的丙烯酰基已被省略；
R7，在每次出现时，独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷氧基；且其中p为整数0、1、2、3或4；
Y选自-CH2-和-O-；
Z选自-CH2-、-CH2CH2-、-CH2O-、-O-和-NMe-；且
*为手性中心。
在一些实施方案中，至少一种式I-2的5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物，连接基团L经其连接至由W和R4与氮原子一起形成的4元或5元或6元杂环的碳原子为(R)或(S)构型。
本申请提供至少一种式(I)的5-氨基-4-氨甲酰基-吡唑化合物、其立体异构体和药用盐，所述式(I)为式(I-3)：
Figure BDA0001210200830000081
其中：
R7，在每次出现时，独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷氧基；且其中p为整数0、1、2、3或4；
Y选自-CH2-和-O-；
Z选自-CH2-、-CH2CH2-、-CH2O-、-O-和-NMe-；且
*为手性中心。
R9选自F、Cl、Br、OR8、NR'R”、O-(CH2)n-NR'R”；
n＝1、2、3；
R8选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
R'和R”，在每次出现时，独立地选自氢、C1-6烷基和C1-6卤代烷基；
本申请还提供了本申请所述的至少一种化合物、其立体异构体或药用盐，所述化合物选自：
Figure BDA0001210200830000101
Figure BDA0001210200830000111
Figure BDA0001210200830000121
Figure BDA0001210200830000131
Figure BDA0001210200830000141
本申请还提供了至少一种选自以下的化合物，所述化合物显示下列立体化学：
Figure BDA0001210200830000151
本申请还提供了药物组合物，其包含至少一种药用载体和选自式(I)、式(I-1)或式(I-2)化合物的至少一种化合物。
本申请还提供了本申请所述的选自式(I)、式(I-1)或式(I-2)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐在制备用于抑制EGFR-T790M激酶的药物中的用途。
本申请还提供了本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症包括但不限于卵巢癌、子宫颈癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胃癌、肺癌(包括非小细胞肺癌)、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质肿瘤(GIST)、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓性白血病(AML)、多发性骨髓瘤、黑色素瘤和间皮瘤。
具体实施方式
本申请使用的下列词语、短语和符号通常意在具有下述含义，除非使用它们的上下文有相反说明。下列缩写和术语在全文中具有指定的含义：
本申请中术语“C1-6烷基”是指选自包含1-6个碳原子的直链及支链饱和烃基的烃基。烷基的实例可选自甲基、乙基、1-丙基或正丙基("n-Pr")、2-丙基或异丙基("i-Pr")、1-丁基或正丁基("n-Bu")、2-甲基-1-丙基或异丁基("i-Bu")、1-甲基丙基或仲丁基("s-Bu")以及1,1-二甲基乙基或叔丁基("t-Bu")。
本申请中术语“C2-6烯基”是指选自包含至少一个C＝C双键和2-6个碳原子的直链及支链烃基的烃基。烯基的实例可选自乙烯基(ethenyl)或乙烯基(vinyl)(--CH＝CH2)、丙-1-烯基(--CH＝CHCH3)、丙-2-烯基(--CH2CH＝CH2)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1,3-二烯基。
本申请中术语“C2-6炔基”是指选自包含至少一个C≡C三键和2-6个碳原子的直链及支链烃基的烃基。炔基的实例包括乙炔基(--C≡CH)、1-丙炔基(-C≡CCH3)、2-丙炔基(炔丙基，-CH2C≡CH)、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。
本申请中术语“C3-8环烷基”是指选自饱和及部分不饱和的环状烃基的烃基，所述环状烃基包括单环和多环(例如，二环和三环)基团且包含3-8个碳原子，诸如3-6个、3-5个或3-4个碳原子。进一步举例而言，C3-8环烷基可选自包含3-8个(诸如3-6个)碳原子的单环。单环环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基和环辛基。
本申请中术语“芳基”是指选自以下的基团：
5元或6元碳环芳族环，例如，苯基；
二环环系统，诸如7-12元二环环系统，其中至少一个环为碳环和芳族环，例如选自萘、茚满和1,2,3,4-四氢喹啉；以及
三环环系统，诸如10-15元三环环系统，其中至少一个环为碳环和芳族环，例如芴。
本申请中术语“卤素”或“卤代”是指F、Cl、Br或I。
本申请中术语“杂芳基”是指选自以下的基团：
5-7元芳族单环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1-4个，或者在一些实施方案中为1-3个，剩余环原子为碳；
8-12元二环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1-4个，或者在一些实施方案中为1-3个，或者在其它实施方案中为1个或2个，剩余环原子为碳，且其中至少一个环为芳族的且芳族环中存在至少一个杂原子；以及
11-14元三环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1-4个，或者在一些实施方案中为1-3个，或者在其它实施方案中为1个或2个，剩余环原子为碳，且其中至少一个环为芳族的且芳族环中存在至少一个杂原子。
例如，所述杂芳基包括稠合至5-7元环烷基环的5-7元杂环芳族环。对于其中只有一个环包含至少一个杂原子的上述稠合二环杂芳基环系统来说，连接的位点可在杂芳环或在环烷基环。
当杂芳基中S和O原子的总数超过1时，所述杂原子彼此不相邻。在一些实施方案中，杂芳基中S和O原子的总数至多为2。在一些实施方案中，芳族杂环中S和O原子的总数至多为1。
杂芳基的实例包括，但不限于，(从指定为优先次序1的连接位置开始编号)，吡啶基(诸如2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基)、噌啉基、吡嗪基、2,4-嘧啶基、3,5-嘧啶基、2,4-咪唑基、咪唑并吡啶基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、四唑基、噻吩基、三嗪基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、酞嗪基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、三唑基、喹啉基、异喹啉基、吡唑基、吡咯并吡啶基(诸如1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)、吡唑并吡啶基(诸如1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)、苯并噁唑基(诸如苯并[d]噁唑-6-基)、蝶啶基、嘌呤基、1-氧杂-2,3-二唑基、1-氧杂-2,4-二唑基、1-氧杂-2,5-二唑基、1-氧杂-3,4-二唑基、1-硫杂-2,3-二唑基、1-硫杂-2,4-二唑基、1-硫杂-2,5-二唑基、1-硫杂-3,4-二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮杂萘基、呋喃并吡啶基、苯并噻唑基(诸如苯并[d]噻唑-6-基)、吲唑基(诸如1H-吲唑-5-基)和5,6,7,8-四氢异喹啉。
本申请中术语“杂环的”或“杂环”或“杂环基”是指选自4-12元(诸如4元、5元或6元)单环、二环和三环饱和及部分不饱和环的环，所述环除了至少一个(诸如1-4个、再诸如1-3个或者再诸如1个或2个)选自氧、硫和氮的杂原子之外还包含至少一个碳原子。
杂环的实例包括，但不限于，(从指定为优先次序1的连接位置开始编号)，1-氮杂环丁基、2-氮杂环丁基、3-氮杂环丁基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、2,4-咪唑烷基、2,3-吡唑烷基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2,5-哌嗪基、吡喃基、2-吗啉基、3-吗啉基、氧杂环丙基、氮杂环丙基、硫杂环丙基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、1,2-二硫杂环丁基、1,3-二硫杂环丁基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、硫吗啉基、氧硫杂环己基、哌嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、1,4-氧硫杂环己基、1,4-二氧杂环庚基、1,4-氧硫杂环庚基、1,4-氧氮杂环庚基、1,4-二硫杂环庚基、1,4-硫氮杂环庚基和1,4-二氮杂环庚基、1,4-二噻烷基、1,4-氮硫杂环己基、氧氮杂
Figure BDA0001210200830000181
基、二氮杂
Figure BDA0001210200830000182
基、硫氮杂
Figure BDA0001210200830000183
基、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1,4-二噁烷基、1,3-二氧杂环戊基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基、二硫杂环戊基、吡唑烷基、咪唑啉基、嘧啶酮基、1,1-二氧代-硫吗啉基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、3-氮杂二环[4.1.0]环庚基和氮杂二环[2.2.2]环己基。取代的杂环还包括取代有一个或多个氧代部分的环系统，诸如哌啶基N-氧化物、吗啉基-N-氧化物、1-氧代-1-硫吗啉基和1,1-二氧代-1-硫吗啉基。
本申请使用的“C1-6卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子被卤素所替代的C1-6烷基(例如，单卤代烷基、二卤代烷基和三卤代烷基)。上述基团包括但不限于，氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基和l-氯-2-氟甲基、2-氟异丁基。C1-6卤代烷基可为取代的或未取代的。
本申请使用的“C1-6烷氧基”是指其中R为C1-6烷基的式-OR。烷氧基的非限制性名单为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。C1-6烷氧基可为取代的或未取代的。
本申请使用的“C1-6卤代烷氧基”是指其中一个或多个氢原子被卤素所替代的C1-6烷氧基(例如，单卤代烷氧基、二卤代烷氧基和三卤代烷氧基)。上述基团包括但不限于，氯甲氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基和l-氯-2-氟甲氧基、2-氟异丁氧基。C1-6卤代烷氧基可为取代的或未取代的。
本申请所述化合物可含有不对称中心，并且由此可以对映异构体存在。当本申请所述化合物具有两个或更多个不对称中心时，它们还可以非对映异构体存在。对映异构体和非对映异构体均落入更宽种类的立体异构体中。本申请意在包括所有可能的立体异构体，诸如基本上纯的解析的对映异构体、它们的外消旋混合物以及非对映异构体的混合物。本申请意在包括所有本申请所述化合物的立体异构体和/或其药用盐。除非另有具体说明，否则提及一种异构体适用于任意可能的异构体。但凡未指明异构体组成时，均包括所有可能的异构体。
本申请使用的术语“基本上纯的”意指目标立体异构体含有至多35重量％，诸如至多30重量％，再诸如至多25重量％，再诸如至多20重量％的任意一种或多种其它立体异构体。在一些实施方案中，术语“基本上纯的”意指目标立体异构体含有至多10重量％，例如至多5重量％，诸如至多1重量％的任意一种或多种其它立体异构体。
可有利地从彼此和/或从起始物质中分离出反应产物。通过本领域中的常规技术将每一步或一系列步骤的期望产物分离和/或纯化(以下称为分离)至期望的均质程度。通常上述分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱。色谱可涉及许多方法，其包括例如：反相和正相色谱；尺寸排阻色谱；离子交换色谱；高、中和低压液相色谱方法和仪器；小量分析色谱；模拟移动床("SMB")色谱和制备型薄层或厚层色谱以及小量薄层和快速色谱的技术。本领域技术人员应当使用最可能实现期望分离的技术。
通过本领域技术人员熟知的方法，诸如色谱和/或分级结晶，基于非对映异构体的物理化学差异，可将非对映异构的混合物分离成它们的单独的非对映异构体。对映异构体可通过以下方式进行分离：通过与适当光学活性的化合物(例如，手性助剂诸如手性醇或Mosher's酰氯)进行反应将对映异构的混合物转化成非对映异构的混合物，分离非对映异构体，然后将单独的非对映异构体转化(例如，水解)成对应的纯的对映异构体。也可使用手性HPLC柱分离对映异构体。
单一的立体异构体，例如，基本上纯的对映异构体，可通过以下方式获得：使用诸如形成非对映异构体的方法，用光学活性的拆分剂来拆分外消旋混合物(Eliel,E.andWilen,S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York：John Wiley&Sons,Inc.,1994；Lochmuller,C.H.,et al."Chromatographic resolution of enantiomers:Selective review."J.Chromatogr.,113(3)(1975):pp.283-302)。本发明的手性化合物的外消旋混合物可通过任何合适的方法分开和离析，所述方法包括：(1)与手性化合物形成离子性非对映异构的盐，然后通过分级结晶或其它方法分离，(2)与手性衍生化试剂形成非对映异构的化合物，分离所述非对映异构体，然后转化为纯的立体异构体，(3)在手性条件下直接分离基本上纯的或富含的立体异构体。参见：Wainer,Irving W.,Ed.DrugStereochemistry:Analytical Methods and Pharmacology.New York:Marcel Dekker,Inc.,1993。
“药用盐”包括，但不限于与无机酸形成的盐，例如选自盐酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐和硝酸盐的盐；以及与有机酸形成的盐，例如选自苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、链烷酸盐(诸如乙酸盐和与HOOC-(CH2)n-COOH形成的盐，其中n选自0-4)的盐。类似地，药用阳离子的实例包括，但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵。
此外，如果本申请所述化合物以酸加成盐的形式来获得，则可通过碱化酸盐的溶液获得游离碱。相反，如果产物为游离碱，则可通过以下方式制备加成盐(诸如药用加成盐)：将游离碱溶于合适的有机溶剂中，然后按照用于由碱化合物制备酸加成盐的常规操作用酸处理该溶液。本领域技术人员应当知道可用于制备无毒药用加成盐而没有不适当实验的多种合成方法。
本申请使用的“其药用盐”包括至少一种式I化合物的盐，以及至少一种式I和II化合物的立体异构体的盐，诸如对映异构体的盐和/或非对映异构体的盐。
“治疗”、“处理”或“处置”或“减轻”是对被认为有此需要的(患有例如癌症)受试者给药本申请所述的至少一种化合物和/或其至少一种立体异构体和/或其至少一种药用盐。
术语“有效量”是指在受试者中有效“治疗”(如上文所定义)疾病或病症的本申请所述的至少一种化合物和/或其至少一种立体异构体和/或其至少一种药用盐的量。
本申请所述化合物和/或其药用盐可用本申请公开的内容由市售起始物质来合成。下列方案详细说明了一些本申请所述化合物的制备方法。
方案I
Figure BDA0001210200830000211
R＝不同的弹头(warehead)
Pg＝保护基团诸如t-Boc
R7、p、Y如上文所定义。
在该方案中，市售起始物质(3,4-二氢-1(2H)-萘酮或6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]环轮烯-5-酮)与碳酸二甲酯在碱性条件下进行反应，形成式2，在酸性条件存在下将式2还原得到酯3。然后将酯3水解，得到酸4，酸4与丙二腈偶联，然后与三甲氧基甲烷进行反应，得到式6。然后使用水合肼关环，得到关键的吡唑7。使用经保护的手性脯氨醇烷基化式7化合物，然后在酸性条件下水解氰基，形成酰胺9。将式9化合物脱保护(例如，通过用三氟乙酸进行处理，可除去BOC保护基团)。胺10与不同的弹头(warhead)进行反应，得到式I化合物。
本申请还提供了治疗对EGFR激酶的抑制具有响应的癌症的方法，其包括对需要治疗的受试者(诸如哺乳动物或人类)给药有效量的本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐。
所述选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐可单独或与至少一种其它治疗药物组合用于治疗。在一些实施方案中，所述选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐可用于与至少一种其它治疗药物组合。所述至少一种其它治疗药物可例如选自抗过度增殖药物、抗癌药物和化学治疗药物。本申请所述的至少一种化合物和/或至少一种药用盐可与至少一种其它治疗药物以单一剂量或以单独剂型形式给药。当以单独剂型给药时，所述至少一种其它治疗药物可在给药本申请所述的至少一种化合物和/或至少一种药用盐之前、同时或之后进行给药。“化学治疗药物”是用于治疗癌症的化学化合物，而不论作用机制如何。化学治疗药物包括“靶向疗法”和常规化学治疗中使用的化合物。合适的化学治疗药物可例如选自：诱导细胞凋亡的药物；多核苷酸(例如，核酶)；多肽(例如，酶)；药物；生物学模拟物；生物碱；烷化剂；抗肿瘤抗生素；抗代谢物；激素；铂化合物；与抗癌药物、毒素和/或放射性核素轭合的单克隆抗体；生物学响应修饰剂(例如，干扰素，诸如IFN-α，以及白介素，诸如IL-2)；过继性免疫治疗剂；造血生长因子；诱导肿瘤细胞分化的药物(例如，全反式维甲酸)；基因疗法试剂；反义疗法试剂和核苷酸；肿瘤疫苗；以及血管生成抑制剂。
化学治疗药物的实例包括厄洛替尼(Erlotinib)(
Figure BDA0001210200830000221
Genentech/OSIPharm.)；硼替佐米(Bortezomib)(
Figure BDA0001210200830000222
Millennium Pharm.)；氟维司群(
Figure BDA0001210200830000223
AstraZeneca)；舒尼替尼(Sunitinib)(
Figure BDA0001210200830000224
Pfizer)；来曲唑(
Figure BDA0001210200830000225
Novartis)；甲磺酸伊马替尼(
Figure BDA0001210200830000226
Novartis)；PTK787/ZK 222584(Novartis)；奥沙利铂(
Figure BDA0001210200830000227
Sanofi)；5-FU(5-氟尿嘧啶)；甲酰四氢叶酸(Leucovorin)；雷帕霉素(Sirolimus,
Figure BDA0001210200830000228
Wyeth)；拉帕替尼(Lapatinib)(
Figure BDA0001210200830000229
GSK572016,Glaxo Smith Kline)；Lonafarnib(SCH 66336)；索拉非尼(Sorafenib)(NEXAVAR,Bayer)；Irinotecan(
Figure BDA00012102008300002210
Pfizer)和吉非替尼(Gefitinib)(
Figure BDA00012102008300002211
AstraZeneca)；AG1478、AG1571(SU 5271,Sugen)；烷化剂诸如塞替派(thiotepa)和
Figure BDA00012102008300002212
环磷酰胺；磺酸烷基酯(alkyl sulfonate)诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶诸如benzodopa、卡波醌(carboquone)、meturedopa和uredopa；乙撑亚胺(ethylenimine)和甲基氨基吖啶(methylamelamine)，诸如六甲蜜胺(altretamine)、三亚胺嗪(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三亚乙基硫化磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和trimethylomelamine；番荔枝内酯(acetogenin)(诸如布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成性类似物托泊替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065及其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成性类似物；cryptophycins(诸如cryptophycin 1和cryptophycin 8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin和合成性类似物诸如KW-2189和CB1-TM1；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；硝基脲如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫斯汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素诸如烯二炔(enediyne)抗生素(例如，刺孢霉素(calicheamicin)，诸如刺孢霉素γ1I和刺孢霉素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；蒽环类抗生素(dynemicin)，诸如dynemicin A；二膦酸盐(bisphosphonate)诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新抑癌蛋白生色团(neocarzinostatinchromophore)和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团(chromoprotein enediyne antibioticchromophore)、aclacinomysin、放线菌素(actinomycin)、authramycin、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、去甲柔红霉素(carminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地拖比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、
Figure BDA0001210200830000231
(多柔比星)、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉子基-多柔比星和去氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycin)诸如丝裂霉素C、麦考酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌罗霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物诸如甲氨喋呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨喋呤、喋罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮鸟苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、伊诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；以及雄激素(rogen)诸如卡普睾酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺素(anti-adrenal)诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂(folic acid replenisher)诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；伊达曲杀(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(galliumnitrate)；羟基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登醇(maytansinoid)诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；mopidanmol；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基肼；丙卡巴肼(procarbazine)；
Figure BDA0001210200830000243
多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢菌毒素(trichothecene)(诸如T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A(roridin A)和anguidine)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；塞替派(thiotepa)；紫杉烷(taxoid)，例如
Figure BDA0001210200830000241
(紫杉醇(paclitaxel)；Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、
Figure BDA0001210200830000242
(Cremophor-free)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米微粒制剂(albumin-engineered nanoparticle formulations of paclitaxel)(AmericanPharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)和
Figure BDA0001210200830000244
(多西他赛(doxetaxel)；Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；chloranmbucil；
Figure BDA0001210200830000245
(吉西他滨)；6-硫代鸟嘌呤(6-thioguanine)；巯嘌呤(mercaptopurine)；甲氨喋呤；铂类似物诸如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；
Figure BDA0001210200830000246
(长春瑞滨(vinorelbine))；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；伊达曲杀(edatrexate)；柔红霉素(daunomycin)；氨基喋呤(aminopterin)；卡培他滨(capecitabine)
Figure BDA0001210200830000247
伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine)(DMFO)；类视黄醇(retinoid)诸如视黄酸(retinoic acid)；以及上述任何物质的药用盐、酸和衍生物。
“化学治疗药物”还可例如选自：(i)用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药物，诸如抗雌激素药物(anti-estrogen)和选择性雌激素受体调节剂(selectiveestrogen receptor modulator,SERM)，包括例如他莫昔芬(包括
Figure BDA0001210200830000248
枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和
Figure BDA0001210200830000249
(枸橼酸托米芬(toremifine citrate))；(ii)抑制芳香酶(调节肾上腺中雌激素产生)的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、
Figure BDA00012102008300002410
(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))、
Figure BDA0001210200830000251
(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、formestanie、法倔唑(fadrozole)、
Figure BDA0001210200830000253
(伏氯唑(vorozole))、
Figure BDA0001210200830000252
(来曲唑；Novartis)和
Figure BDA0001210200830000254
(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素药物(anti-androgen)，诸如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂类激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，诸如抑制异常细胞增殖中所涉及的信号转导途径中的基因表达的反义寡核苷酸，例如PKC-α、Ralf和H-Ras；(vii)核酶诸如VEGF表达抑制剂(例如，
Figure BDA0001210200830000255
)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗诸如基因治疗疫苗，例如
Figure BDA0001210200830000256
和
Figure BDA0001210200830000257
rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂诸如
Figure BDA0001210200830000258
rmRH；(ix)抗血管生成药物诸如贝伐珠单抗(bevacizumab)(
Figure BDA0001210200830000259
Genentech)；以及(x)上述任何物质的药用盐、酸和衍生物。
“化学治疗药物”还可例如选自治疗性抗体，诸如阿仑珠单抗(alemtuzumab)(Campath)、贝伐珠单抗(bevacizumab)(
Figure BDA00012102008300002510
Genentech)；西妥昔单抗(cetuximab)(
Figure BDA00012102008300002511
Imclone)；帕木单抗(panitumumab)(
Figure BDA00012102008300002512
Amgen)、利妥昔单抗(rituximab)(
Figure BDA00012102008300002513
Genentech/Biogen Idec)、培妥珠单抗(pertuzumab)(
Figure BDA00012102008300002514
2C4,Genentech)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(
Figure BDA00012102008300002515
Genentech)、托西莫单抗单抗(tositumomab)(Bexxar,Corixia)和抗体药物轭合物奥吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin)(
Figure BDA00012102008300002516
Wyeth)。
具有作为化学治疗药物的治疗潜力而与选自式(I)(诸如式(II))化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐联用的人源化单克隆抗体例如可选自：阿仑珠单抗(alemtuzumab)、阿泊珠单抗(apolizumab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、atlizumab、bapineuzumab、贝伐珠单抗(bevacizumab)、莫比伐珠单抗(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥珠单抗(cantuzumab mertansine)、西利珠单抗(cedelizumab)、赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、cidfusituzumab、cidtuzumab、达克珠单抗(daclizumab)、依库珠单抗(eculizumab)、依法珠单抗(efalizumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、奥吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin)、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、ipilimumab、拉贝珠单抗(labetuzumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊珠单抗(mepolizumab)、莫维珠单抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠单抗(natalizumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奥马珠单抗(omalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕考珠单抗(pascolizumab)、pecfusituzumab、pectuzumab、培妥珠单抗(pertuzumab)、培克珠单抗(pexelizumab)、ralivizumab、雷珠单抗(ranibizumab)、瑞利珠单抗(reslivizumab)、瑞利珠单抗(reslizumab)、resyvizumab、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西利珠单抗(siplizumab)、索土珠单抗(sontuzumab)、他珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)、tadocizumab、他利珠单抗(talizumab)、特非珠单抗(tefibazumab)、托珠单抗(tocilizumab)、托利珠单抗(toralizumab)、曲司珠单抗(trastuzumab)、西莫白介素(tucotuzumab celmoleukin)、tucusituzumab、umavizumab、乌珠单抗(urtoxazumab)、维西珠单抗(visilizumab)、Nivolumab和Lambrolizumab。
本申请还提供了组合物，其包含选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐以及至少一种药用载体。
虽然任何给定情况下最合适的途径应取决于具体主体、活性成分所要给药针对的疾病的性质和严重度，但是包含选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐的组合物可以多种已知的方式给药，诸如口服给药、表面给药、直肠给药、胃肠外给药，通过吸入喷雾给药或经由植入的贮器给药。本申请使用的术语“胃肠外”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。本申请所述组合物可方便地以单位剂型存在且可通过任一种本领域中熟知的方法来制备。
所述选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐可以下列形式来给药：固体剂型，诸如胶囊、片剂、锭剂(troche)、糖丸(dragée)、颗粒剂和粉剂；或者液体剂型，诸如酏剂、糖浆剂、乳剂、分散剂和混悬剂。本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐还可以下列形式来胃肠外给药：无菌液体剂型，诸如分散剂、混悬剂或溶液剂。还可用于给药本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐的其它剂型如用于表面给药的软膏剂、乳膏剂、滴剂、透皮贴剂或粉剂；如用于眼部给药的眼用溶液或混悬液制剂，即滴眼剂；如用于吸入或鼻内给药的气溶胶喷雾剂或粉剂组合物；或者用于直肠或阴道给药的乳膏剂、软膏剂、喷雾剂或栓剂。
还可使用明胶胶囊，其含有本申请所述的至少一种化合物和/或至少一种其药用盐以及粉状载体，诸如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。可将类似的稀释剂用于制备压制片。片剂和胶囊都可制备成为持续释放产品，以在一段时间内提供药物的持续释放。可将压制片进行糖包衣或薄膜包衣，以掩蔽任何令人不愉快的味道并保护片剂免受大气的破坏，或者进行肠溶包衣，用于在胃肠道内选择性崩解。
用于口服给药的液体剂型还可包括至少一种选自用于提高患者接受性的着色剂和矫味剂的试剂。
通常，水、合适的油、盐水、含水右旋糖(葡萄糖)和相关的糖溶液和二醇类诸如丙二醇或聚乙二醇可为用于胃肠外溶液的合适载体的实例。用于胃肠外给药的溶液可包含至少一种本申请所述的化合物、至少一种合适的稳定剂，并且如有必要，包含至少一种缓冲物质。抗氧化剂诸如亚硫酸氢钠，亚硫酸钠或抗坏血酸，其单独或组合，可为合适稳定剂的实例。还可将柠檬酸及其盐和EDTA钠用作合适稳定剂的实例。此外，胃肠外溶液还可包含至少一种防腐剂，所述防腐剂例如选自苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸乙酯以及三氯叔丁醇。
药用载体例如选自与组合物的活性成分相容(且在一些实施方案中，能够稳定活性成分)且对所要治疗的受试者无害的载体。例如，增溶剂，诸如环糊精(其可与本申请所述的至少一种化合物和/或至少一种药用盐形成特定的更易溶解的复合物)，可用作用于递送活性成分的药物赋形剂。其它载体的实例包括胶体二氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、月桂基硫酸钠和色素诸如D&C Yellow#10。合适的药用载体在本领域的标准参考文本Remington'sPharmaceutical Sciences,A.Osol中有述。
通过体内测定还可考查本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐在治疗癌症中的效力。例如，可对患有癌症的动物(例如，小鼠模型)给药本申请所述的至少一种化合物和/或至少一种其药用盐并且可得到其治疗效果。一项或多项上述测试中的阳性结果足以增加科学的知识宝库，并由此足以说明所测试化合物和/或盐的实际效用。基于所述结果，还可确定针对动物(诸如人类)的适当剂量范围和给药途径。
对于经吸入给药，本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐可方便地以气溶胶喷雾剂呈现形式从压力包装或雾化器中进行递送。本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐还可以粉剂形式进行递送，可将其进行配制，然后借助吹入式粉末吸入装置(insufflation powder inhalerdevice)可吸入粉剂组合物。一种用于吸入的示例性提送系统可为计量剂量吸入(metereddose inhalation)(MDI)气溶胶，可将其配制成本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐在至少一种合适的抛射剂(例如选自氟碳化合物和烃)中的混悬液或溶剂。
对于眼部给药，眼用制剂可与适当重量百分比的本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐在适当的眼用媒介物中的溶液或混悬液进行配制，由此使得本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐与眼表面保持接触足够的时间段，使化合物渗入眼睛的角膜和内部区域。
用于给药本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐的有用药物剂型包括，但不限于，硬和软明胶胶囊、片剂、胃肠外注射剂和口服混悬剂。
给药剂量将取决于多种因素，诸如接受者的年龄、健康状况和体重，疾病的程度，同步治疗的类型，(如果有)治疗的频率和期望效果的性质。通常，活性成分的日剂量可例如从每天0.1至2000mg变化。例如，每天一次或多次10-500mg可有效地获得期望的效果。
在一些实施方案中，许多单位胶囊可通过以下方式来制备：将标准的两件式硬明胶胶囊每个用例如100mg呈粉末形式的本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐、150mg乳糖、50mg纤维素和6mg硬脂酸镁进行装填。
在一些实施方案中，可制备本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐与食用油(诸如大豆油、棉籽油或橄榄油)的混合物，然后借助变容真空泵(positive displacement pump)注射至明胶中，形成含有100mg活性成分的软明胶胶囊。将胶囊洗涤，然后干燥。
在一些实施方案中，可通过常规操作制备多种片剂，从而使得所述剂量单位包含例如100mg选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐、0.2mg胶体二氧化硅、5mg硬脂酸镁、275mg微晶纤维素、11mg淀粉和98.8mg乳糖。可使用适当的包衣以提高适口性或延迟吸收。
在一些实施方案中，适于经注射给药的胃肠外组合物可通过以下方式来制备：将1.5重量％的本申请所述的至少一种化合物和/或至少一种对映异构体、非对映异构体或其药用盐在10体积％的丙二醇中进行搅拌。用注射用水将溶液调至期望体积，然后进行灭菌。
在一些实施方案中，可制备用于口服给药的含水混悬液。例如，可使用以下含水混悬液：每5ml含水混悬液包含100mg极细的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐、100mg羧甲基纤维素钠、5mg苯甲酸钠、1.0g山梨醇溶液U.S.P.和0.025ml香草醛。
当选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐分步给药或与至少一种其它治疗药物组合给药时，通常使用相同的剂型。当以物理组合给予药物时，根据所组合药物的相容性选择剂型和给药途径。因此，将术语“共同给药”理解为包括同时或先后或者以至少两种活性组分的固定剂量组合的形式给药至少两种药物。
本申请所述的选自式(I)化合物的至少一种化合物、其立体异构体和药用盐可作为唯一活性成分或与至少一种第二活性成分给药，所述第二活性成分例如选自已知在患者中用于治疗癌症的其它活性成分。
下文实施例意在完全是示例性的，而不应当被视为以任何方式进行限制。虽然已尽量确保所用数字/数量(例如，量、温度等)的准确性，但是仍存在一些实验性误差和偏差。除非另有说明，否则温度以摄氏度为单位。试剂购自商业供应商诸如Sigma-Aldrich、AlfaAesar或TCI，除非另有说明，否则所述试剂未经进一步纯化即使用。
除非另有说明，否则下文所述反应在正压力的氮气或氩气下或者用干燥管在无水溶剂中进行；反应烧瓶装配有用于经由注射器引入底物和试剂的橡胶垫片；并且玻璃仪器是经烘箱干燥和/或加热干燥的。
除非另有说明，否则柱色谱纯化在具有硅胶柱的Biotage系统(生产商：DyaxCorporation)或在硅胶SepPak管柱(Waters)上进行，或者在使用预装硅胶管柱的Teledyne Isco Combiflash纯化系统上进行。
在400MHz操作的Varian仪器上记录1H NMR谱。使用CDCl3、CD2Cl2、CD3OD、D2O、d6-DMSO、d6-丙酮或(CD3)2CO作为溶剂并且使用四甲基硅烷(0.00ppm)或残余溶剂(CDCl3：7.25ppm；CD3OD：3.31ppm；D2O：4.79ppm；d6-DMSO：2.50ppm；d6-丙酮：2.05；(CD3)2CO：2.05)作为参照标准获得1H-NMR谱。当报告峰多重性时，使用下列缩写：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、qn(五重峰)、sx(六重峰)、m(多重峰)、br(加宽的)、dd(双二重峰)、dt(双三重峰)。给出时，偶合常数以赫兹(Hz)为单位进行报告。除试剂外的所有化合物命名均由ChemDraw version 12.0生成。
在下列实施例中使用以下缩写：
AcOH 乙酸
Aq 水溶液
Brine 饱和氯化钠水溶液
Bn 苄基
BnBr 苄基溴
CH2Cl2 二氯甲烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
Dppf 1,1"-双(二苯基膦基)二茂铁
DBU 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
DIEA或DIPEA N,N-二异丙基乙基胺
DMAP 4-N,N-二甲基氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
Et2O或醚 乙醚
G 克
h或hr 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HCl 盐酸
HPLC 高效液相色谱
IPA 2-丙醇
i-PrOH 异丙醇
Mg mg
mL 毫升
Mmol 毫摩尔
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
Min 分钟
ms或MS 质谱
Na2SO4 硫酸钠
PE 石油醚
PPA 聚磷酸
Rt 保留时间
Rt或rt 室温
TBAF 四丁基氟化铵
TBSCl 叔丁基二甲基氯硅烷
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
μL 微升
实施例1：化合物1.1至1.67的合成
BL-1：(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000311
向(S)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(168g,0.836mol,1.0当量)在吡啶(1000mL)中的溶液中慢慢加入甲苯磺酰氯(TsCl,176g,0.92mol,1.1当量)；反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物在真空中进行浓缩，除去吡啶；将残余物溶于乙醇/H2O 1000ml/600ml中，搅拌30分钟，然后分开。将EA层用水(500ml x3)、盐水(500ml x2)洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩除去约800ml EA。加入PE(1.5L)并搅拌过夜，收集白色固体并在空气中干燥，得到期望产物(228g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79-8.81(d,J＝8.0Hz,2H),7.48-7.50(d,J＝8.0Hz,2H),4.47(s,1H),3.38-3.65(m,2H),2.93-3.06(m,1H),2.42(s,3H),1.50-1.76(m,3H),1.35(s,11H)
BL-2：(S)-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000312
向(S)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(20g,99.2mmol)在CH2Cl2(200mL)中经搅拌溶液中加入Et3N(20g,0.198mol)、DMAP(1.23g,9.92mmol)，然后将反应混合物冷却至0℃并加入甲苯磺酰氯(TsCl,28.4g,0.149mol)。加入后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物用HCl水溶液(1.0M)酸化至pH＝4～5，然后用盐水萃取，以Na2SO4干燥，浓缩并通过硅胶色谱(硅胶重量：30g,石油醚/EtOAc＝10:1～2:1)进行纯化，得到目标产物(33g,93.7％)，其为黄色糖浆状物，一天后发生固化。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(d,J＝8.4Hz,2H),4.11-4.05(m,1H),3.94(br.s,2H),3.29(dd,J＝13.2,6.0Hz,2H),2.45(s,3H),2.02-1.74(m,4H),1.41(s,9H).MS：M/e 356(M+1)+
化合物1.1：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000321
步骤A：2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)(羟基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000322
在0℃向2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-甲酸(20.0g,111mmol)在DCM(200
mL)中的溶液中先后加入草酰氯(oxalyl dichloride)(30.0g,238mmol)和0.5mlDMF。将该溶液在0℃搅拌1小时，在环境温度搅拌2h，然后浓缩至干。将所得油状物在THF(200mL)中稀释。在0℃先后加入丙二腈(11.0g,167mmol)和TEA(24.6g,167mmol)。将终溶液在环境温度搅拌16小时。将反应混合物经硅藻土过滤，向滤液中加入200mL H2O，用EA(200mL x 3)萃取。将合并的萃取物用盐水(200mL x 3)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(25.5g)，其为棕色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 229(M+1)+
步骤B：2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000323
向步骤A的产物(25.5g,111mmol)在EA(200mL)中的溶液中加入HCl水溶液(15％,100mL)并将混合物在环境温度搅拌10分钟。分离各层，将有机物以Na2SO4干燥，浓缩，然后将所得油状物溶于三甲氧基甲烷(200mL)中并在100℃加热2小时。浓缩混合物，然后将残余物通过柱色谱进行纯化，得到标题产物(17.1g,历经2步63％)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.02-6.87(m,4H),5.47(dd,J＝7.6,2.8Hz,1H),4.64(dd,J＝12.0,2.8Hz,1H),4.32(s,3H),4.10(dd,J＝12.0,7.6Hz,1H)。
步骤C：5-氨基-3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000331
在0℃，历时10分钟，向步骤B的产物(17.0g,70.2mmol)在EtOH(10mL)中的经搅拌溶液中滴加水合肼4.5g,90mmol)，然后将混合物在室温搅拌1小时。浓缩混合物，将残余物用EA(200mL)稀释，用盐水(100mL x 3)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩。将所得固体通过柱色谱进行纯化，得到标题产物(14.5g,85％)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.79(s,1H),6.97-6.82(m,4H),6.44(s,2H),5.17(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),4.47(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),4.27(dd,J＝11.6,8.0Hz,1H).MS：M/e 243(M+1)+。
步骤D：(3R)-3-(5-氨基-4-氰基-3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000332
将步骤C的产物(500mg,2.05mmol)、(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(BL-1,944mg,2.66mmol)和Cs2CO3(1.34g,4.1mmol)在DMF(10mL)中的混合物在70℃搅拌24小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，浓缩，然后通过用PE:EA＝1:1洗脱的柱色谱进行纯化，得到期望产物(700mg,36％)，其为黄色固体。MS：M/e 426(M+1)+
步骤E：(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000341
向步骤D的产物(600mg,1.41mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中先后加入DMSO(2mL)、5N NaOH水溶液(2mL)和H2O2(1mL)。将溶液在70℃搅拌1小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(400mg,64％)，其为黄色油状物。MS：M/e 444(M+1)+
步骤F：5-氨基-3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000342
向步骤E的产物(400mg,0.90mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(310mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 344(M+1)+
步骤G：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000343
将步骤F的产物(310mg,0.90mmol)和NaHCO3(454mg,5.40mmol)在CH3CN/H2O(7mL/7mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(81mg,0.90mmol)。将终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，浓缩，然后通过用DCM:MeOH＝20:1洗脱的硅胶色谱进行纯化，得到期望产物(250mg,70％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.00-6.79(m,4H),6.77-6.54(m,3H),6.35(s,2H),6.05(d,J＝17.2Hz,1H),5.63(d,J＝9.2Hz,1H),5.35(d,J＝8.0Hz,1H),4.53(d,J＝11.2Hz,1H),4.41-4.32(m,1H),4.31-3.87(m,3H),3.28-3.18(m,1H),3.02-3.01(m,1H),2.04-1.77(m,3H),1.60-1.40(m,1H)ppm。MS：M/e 398(M+1)+
化合物1.2：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.1所述的操作，制备化合物1.2。
Figure BDA0001210200830000351
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ6.98-6.78(m,4H),6.65(s,2H),6.61-6.46(m,1H),6.25(s,2H),6.22-5.95(m,1H),5.75-5.68(m,1H),5.37(d,J＝8Hz,1H),4.52(d,J＝11.6Hz,1H),4.44-4.31(m,1H),4.31-4.17(m,1H),4.15-4.02(m,1H),4.01-3.83(m,1H),3.61-3.30(m,2H),2.06-1.61(m,4H)ppm。MS：M/e 398(M+1)+
化合物1.3：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000361
步骤A：4,5-二氯苯-1,2-二醇
Figure BDA0001210200830000362
在0℃，在N2下，向SO2Cl2(27.2g,0.2mmol)中滴加焦儿茶酚(10g,91mmol)在Et2O(100mL)中的经搅拌溶液。加入后，将反应混合物搅拌3小时。浓缩反应混合物，得到残余物，将其用石油醚进行处理，然后过滤。收集滤饼，得到目标产物(11.6g,71.2％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.98(s,2H),5.13(s,2H)ppm。
步骤B：6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000363
向步骤A的产物(11.6g,61.4mmol)在丙酮(100mL)中的经搅拌溶液中加入K2CO3(19.8g,0.14mol)和2,3-二溴丙酸乙酯(19g,73.6mmol)。加入后，将反应混合物在60℃搅拌5小时。过滤反应混合物并将滤饼用EtOAc(100mL)进行洗涤。然后将滤液浓缩，得到残余物，将其通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)进行纯化，得到目标产物(13.8g,81.1％)，其为无色油状物，1小时后发生固化。MS：M/e 277(M+1)+
步骤C：6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-甲酸
Figure BDA0001210200830000371
向步骤B的产物(13.8g,49.8mmol)在THF/H2O(50mL/20mL)中的经搅拌混合物中加入LiOH.H2O(4.2g,99.6mmol)。加入后，将反应混合物搅拌过夜。在真空中除去大部分THF，用HCl水溶液将水层酸化至pH＝4～5，然后用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到目标产物(10g,80.6％)，其为浅黄色固体。MS：M/e248(M-1)-
步骤D：2-(6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-羰基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000372
向步骤C的产物(5.0g,20.1mmol)在CH2Cl2(50mL)中的经搅拌溶液中加入HOBT(3.2g,24mmol)和Et3N(4.0g,40mmol)，然后加入EDCI(4.6g,24mmol)和丙二腈(1.3g,20.1mmol)。加入后，将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物倾入H2O(200mL)中，然后用CH2Cl2(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩得到残余物，将其溶于EtOAc(150mL)中并与HCl水溶液(6.0M,50mL)搅拌2小时，然后分开。将EtOAc层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到期望化合物，将其直接用于下一步骤中。MS：M/e 297(M+1)+
步骤E：2-((6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000373
将步骤D的产物(5.97g,20.1mmol)在三甲氧基甲烷(50mL)中的溶液在90℃搅拌6小时。浓缩所得溶液得到残余物，将其用水洗涤，用EA(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，浓缩，然后通过用石油醚/EtOAc＝5:1～2:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(2.2g,35.2％)，其为白色固体。MS：M/e 311(M+1)+
步骤F：5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000381
将步骤E的产物(2.2g,7.07mmol)和水合肼(5mL)在EtOH(20mL)中的溶液在室温搅拌30分钟。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用石油醚/EtOAc＝3:1～1:1洗脱的硅胶色谱进行纯化，得到期望产物(1.5g,68.2％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),7.23(d,J＝6.8Hz,2H),6.51(s,2H),5.28(d,J＝5.2Hz,1H),4.52(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),4.34(dd,J＝9.2,5.2Hz,1H)ppm.MS：M/e 311(M+1)+
步骤G：5-氨基-3-(6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000382
将步骤F的产物(300mg,0.964mmol)在MsOH(3mL)中的混合物在70℃搅拌2小时。将反应混合物倾入H2O(30mL)中并用NaOH水溶液碱化至pH＝9～10，然后用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空中浓缩，得到目标产物(307mg,96.8％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.94(s,1H),7.24(d,J＝4.4Hz,2H),6.72(br.s,2H),6.04(s,2H),5.54(s,1H),4.60(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),4.46-4.32(m,1H)ppm。MS：M/e 329(M+1)+
步骤H：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000383
将步骤H的产物(100mg,0.304mmol)、(S)-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(BL-2,129mg.0.364mmol)和Cs2CO3(198mg,0.608mmol)在DMF(3mL)中的混合物在70℃搅拌2小时。将反应混合物倾入H2O(20mL)中并用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩，然后通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1)进行纯化，得到目标产物(90mg,57.8％)，其为白色固体。MS：M/e 512(M+1)+
步骤I：5-氨基-3-(6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1-((S)-吡咯烷-2-基甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000391
向步骤H的产物(90mg,0.176mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将溶液在室温搅拌过夜。将所得溶液浓缩，得到粗产物，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 412(M+1)+
步骤J：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000392
将步骤I的产物(0.176mmol)和NaHCO3(29mg,0.352mmol)在CH3CN/H2O(3mL/3mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(15.9mg,0.176mmol)。将终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过制备型HPLC进行纯化，得到期望产物(20mg,22％)，其为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.25-7.15(m,2H),6.73(br.s,2H),6.55(m,1H),6.33(br.s,1H),6.20-5.93(m,2H),5.68(dd,J＝10.4Hz,1H),5.53-5.43(m,1H),4.53(t,J＝12.8Hz,1H),4.35(dd,J＝11.5,8.4Hz,1H),4.15(s,1H),4.05(d,J＝14.2Hz,1H),3.96-3.82(m,2H),1.81(m,5H)ppm。MS：M/e 466(M+1)+
化合物1.4：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(6,7-二氯-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.3所述的操作，制备化合物1.4。
Figure BDA0001210200830000401
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.30-7.22(m,2H),6.94-6.33(m,5H),6.18-6.03(m,1H),5.69-5.56(m,1H),5.49(d,J＝6.4Hz,1H),4.64-4.53(m,1H),4.46-4.34(m,1H),4.29-4.12(m,2H),4.09-3.96(m,1H),3.16-2.95(m,1H),2.07-1.73(m,4H),1.57-1.36(m,1H)ppm。MS：M/e 466(M+1)+
化合物1.5：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000402
Figure BDA0001210200830000411
步骤A：2-氨基苯酚
Figure BDA0001210200830000412
将2-硝基苯酚(20g,215.66mmol)和氯化亚锡(II)二水合物(223g,1.08mol)在EtOH(500mL)中的混合物在85℃搅拌12小时。浓缩所得溶液。将残余物倾入冰水(500mL)中，用5N NaOH水溶液碱化至pH＝8，然后用EA(200mL)萃取。将混悬液经硅藻土垫过滤。将滤液用EA(200mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到期望化合物(20g,85％)，其为黑色固体。MS：M/e 110(M+1)+
步骤B：3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000413
将步骤A的产物(20g,183.24mmol)、2,3-二溴丙酸乙酯(57.16g,219.92mmol)和K2CO3(70.80g,513.08mmol)在丙酮(80mL)中的混合物回流搅拌5小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(26g,68％)，其为红棕色油状物。MS：M/e 208(M+1)+
步骤C：4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000421
向步骤B的产物(26g,125.46mmol)在HOAc(100mL)中的溶液中加入60％HCHO水溶液(25.10g,501.84mmol)。将反应混合物在室温搅拌10分钟。然后将混合物冷却至0℃，在0℃历时15min分若干份加入氰基硼氢化钠(15.77g,250.92mmol)。将终溶液在室温搅拌30分钟。将所得混合物倾入冰水(100mL)中，用5N NaOH水溶液中和至pH＝7，然后用EA(200mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(19.7g,71％)，其为黄色油状物。MS：M/e 222(M+1)+
步骤D：4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸
Figure BDA0001210200830000422
在0℃向步骤C的产物(19.7g,89.04mmol)在EtOH(40mL)中的溶液中加入6N NaOH(17.8g,445.20mmol)水溶液。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液用2N HCl水溶液中和至pH＝6。形成白色固体，然后过滤，得到期望产物(17.20g,100％)，其为白色固体，直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.83-6.52(m,4H),4.78(t,J＝4.0Hz,1H),3.32(d,J＝4.0Hz,2H),2.78(s,3H)ppm。MS：M/e 194(M+1)+
步骤E：2-(羟基(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000423
向步骤D的产物(17.20g,89.02mmol)在DCM(50mL)中溶液中先后加入HOBT(14.42g,106.83mmol)、Et3N(25.69mL,178.04mmol)和EDCI(20.48g,106.83mmol)。将溶液在室温搅拌30分钟。加入丙二腈(7.06g,106.83mmol)。将终溶液在室温搅拌2-3小时。将所得溶液浓缩，残余物在EA(100mL)中稀释，先后用饱和NaHCO3水溶液与饱和NH4Cl水溶液洗涤。有机层用6N HCl水溶液洗涤。将有机层分出，然后浓缩，得到粗产物(21.48g,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 242(M+1)+
步骤F：2-(甲氧基(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000431
将步骤E的产物(21.48g,89.04mmol)在三甲氧基甲烷(30mL)中的溶液在90℃搅拌2小时。将所得溶液浓缩，然后通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(5g,22％)，其为黄色油状物。MS：M/e 256(M+1)+
步骤G：5-氨基-3-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000432
将步骤F的产物(5g,19.59mmol)和水合肼(2mL)在EtOH(4mL)中的溶液在室温搅拌10分钟。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用DCM:MeOH＝40:1-20:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(4g,80％)，其为黄色固体。MS：M/e 256(M+1)+
步骤H：(3R)-3-(5-氨基-4-氰基-3-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000433
将步骤G的产物(581mg,2.28mmol)、(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(BL-1,970mg,2.73mmol)和Cs2CO3(1.49g,4.56mmol)在DMF(10mL)中的混合物在70℃搅拌24小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(654mg,65％)，其为黄色油状物。MS：M/e 439(M+1)+
步骤I：(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000441
向步骤H的产物(654mg,1.49mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中先后加入DMSO(2mL)、5N NaOH水溶液(2mL)和H2O2(1mL)。将溶液在70℃搅拌1小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:4洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(305mg,45％)，其为黄色油状物。MS：M/e 457(M+1)+
步骤J：5-氨基-3-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000442
向步骤I的产物(305mg,0.67mmol)在DCM(3mL)中的溶液加入TFA(1mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(238mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 357(M+1)+
步骤K：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000443
经步骤J的产物(238mg,0.67mmol)和NaHCO3(337mg,4.02mmol)在CH3CN/H2O(5mL/5mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(60mg,0.67mmol)。将终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用DCM:MeOH＝20:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(90mg,32％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ6.84(t,J＝7.6Hz,1H),6.79-6.71(m,3H),6.69(s,2H),6.57(t,J＝7.6Hz,1H),6.34(s,2H),6.12-5.99(m,1H),5.69-5.57(m,1H),5.23(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),4.28-3.98(m,3H),3.64-3.54(m,1H),3.53-3.43(m,1H),3.33-3.23(m,1H),3.16-3.03(m,1H),2.89(s,3H),2.06-1.78(m,3H),1.60-1.40(m,1H)ppm。MS：M/e 411(M+1)+
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.5所述的操作，制备化合物1.6。
化合物1.6:1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000451
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.00-6.79(m,2H),6.81-6.72(m,2H),6.67-6.55(m,2H),6.30-5.98(m,1H),5.79-5.42(m,1H),5.33-5.21(m,1H),4.45-4.16(m,1H),4.13-3.88(m,2H),3.65-3.34(m,4H),2.89(s,3H),1.98-1.71(m,4H)。MS：M/e 411(M+1)+
化合物1.7：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000461
步骤A：6-氟-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000462
向2-氨基-4-氟苯酚(12.7g,100mmol)和K2CO3(34g,250mmol)在丙酮(200mL)中的混悬液中加入2,3-二溴丙酸乙酯(28.6g,110mmol)。将所得混合物在回流温度搅拌4小时。将混合物冷却至室温，然后浓缩。将残余物用水洗涤，用EA(50mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到棕色油状物。向该油状物中加入PE/EA(30/1,60mL)并将混合物在室温搅拌30分钟。形成固体，过滤，然后干燥，得到期望产物(3.6g,16％)，其为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.71(dd,J＝8.8,5.6Hz,1H),6.36(dd,J＝10.8,3.2Hz,1H),6.31-6.26(m,1H),6.15(s,1H),4.90(t,J＝4.0Hz,1H),4.12(q,J＝7.2Hz,2H),4.41-3.39(m,2H),1.17(t,J＝6.8Hz,3H).ppm。MS：M/e 226(M+1)+
步骤B：6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000471
向步骤A的产物(3.6g,16mmol)在EtOH(40mL)中的溶液中加入40％HCHO水溶液(25mL)和Pd/C(0.5g)。将反应混合物在室温在H2气氛(气球)下搅拌16小时。然后将混合物经硅藻土垫过滤，用EtOH(40mL)洗涤。浓缩滤液，得到期望产物(5g,粗品)，其为黑色油状物，无需进一步纯化即可直接用于下一步骤中。MS：M/e 240(M+1)+
步骤C：6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸
Figure BDA0001210200830000472
向步骤B的产物(5g,粗品)在EtOH(50mL)中的溶液中加入氢氧化钠(2.56g,64mmol)在水(20mL)中的溶液。将溶液在室温搅拌3小时。浓缩混合物。将所得残余物用2NHCl水溶液中和至pH＝6。形成固体，然后过滤，得到期望产物(1.3g,历经两步38.5％)，其为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.60(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),6.41(dd,J＝12,3.2Hz,1H),6.28-6.23(m,1H),4.14-4.11(m,1H),3.45-3.39(m,1H),3.14-3.09(m,1H),2.78(s,3H)ppm。MS：M/e 212(M+1)+
步骤D：2-((6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)(羟基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000473
向步骤C的产物(1.3g,6.16mmol)在DCM(20mL)中的溶液中先后加入HOBT(1g,7.39mmol)、Et3N(1.26g,12.5mmol)和EDCI(1.4g,7.39mmol)。将溶液在室温搅拌30分钟。加入丙二腈(0.4g,6.16mmol)。将终溶液在室温搅拌16小时。浓缩所得溶液，将残余物在EA(100mL)中稀释，先后用饱和NaHCO3水溶液与饱和NH4Cl水溶液洗涤。将有机层用10％H2SO4水溶液洗涤。将有机层分出，然后浓缩，得到粗产物(1.5g,93％)，其为固体，直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.66-6.64(m,1H),6.50(dd,J＝11.6,3.2Hz,1H),6.34-6.29(m,1H),4.67(dd,J＝7.6,2.8Hz,1H),3.29-3.26(m,1H),3.20-3.15(m,1H),2.82(s,3H)ppm。MS：M/e 260(M+1)+
步骤E：2-((6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000481
将步骤D的产物(1.5g,5.8mmol)在三甲氧基甲烷(30mL)中的溶液在70℃搅拌3小时。将所得溶液浓缩，然后通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(0.25g,16％)，其为棕色油状物。MS：M/e 274(M+1)+
步骤F：5-氨基-3-(6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000482
将步骤E的产物(0.25g,0.91mmol)和水合肼(2mL)在EtOH(6mL)中的溶液在室温搅拌2小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到期望产物(0.245g,100％)，其为黄色泡沫状物。MS：M/e 274(M+1)+
步骤G：(2S)-2-((5-氨基-4-氰基-3-(6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000483
将步骤F的产物(245mg,0.9mmol)、(S)-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(BL-2,383mg,1.08mmol)和Cs2CO3(585mg,1.8mmol)在DMF(5mL)中的混合物在70℃搅拌5小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到期望产物(400mg,粗品)，其为黄色油状物。MS：M/e 457(M+1)+
步骤H：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000491
向步骤G的产物(400mg,粗品)在EtOH(5mL)中的溶液中先后加入DMSO(2mL)、5NNaOH水溶液(2mL)和H2O2(2mL)。将溶液在50℃搅拌2小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(60mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(130mg,历经三步30％)，其为黄色油状物。MS：M/e 475(M+1)+
步骤I：5-氨基-3-(6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1-((S)-吡咯烷-2-基甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000492
向步骤H的产物(130mg,0.274mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将溶液在室温搅拌3小时。将所得溶液用饱和Na2CO3水溶液处理至pH＝8，用DCM(30mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(100mg,98％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 375(M+1)+
步骤J：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6-氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向步骤I的产物(100mg,0.267mmol)在CH3CN(4mL)中的混合物中加入饱和NaHCO3水溶液(1mL)。将所得溶液冷却至0℃，然后滴加丙烯酰氯(24mg,0.267mmol)在CH3CN(1mL)中的溶液。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(30mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化，得到期望产物(53mg,46％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.83(br.s,2H),6.74-6.70(m,1H),6.64-6.51(m,2H),6.45-6.40(m,2H),6.35-6.30(m,1H),6.24-6.18(m,1H),6.05-5.71(m,1H),5.25-5.21(m,1H),4.21-3.90(m,3H),3.65-3.40(m,4H),2.90(s,3H),2.00-1.74(m,4H),ppm。MS：M/e 429(M+1)+
化合物1.8：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000502
Figure BDA0001210200830000511
步骤A：4,5-二氟-2-硝基苯酚
Figure BDA0001210200830000512
历时约2小时，向3,4-二氟苯酚(37g,0.28mol)在AcOH(200mL)中的溶液中滴加发烟HNO3(10mL)在AcOH(80mL)中的溶液，保持温度低于40℃。将混合物慢慢倾入冰水(300mL)中。形成红色固体，过滤，然后用水(1.8L)洗涤，将固体干燥，得到期望产物(36g,72％)，其为红色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.46(s,1H),8.19-8.12(m,1H),7.19-7.13(m,1H).ppm。
步骤B：2-氨基-4,5-二氟苯酚
Figure BDA0001210200830000513
向步骤A的产物(40g,228mmol)在EtOH(200mL)中的溶液中加入Pd/C(4g)。将反应混合物在室温在H2气氛(气球)下搅拌3天。然后将混合物经硅藻土垫过滤，用EtOH(100mL)洗涤。浓缩滤液，然后将残余物用PE/EA(10/1,300mL)进行处理。将混悬液在室温搅拌0.5小时。过滤固体，用PE洗涤，干燥，得到期望产物(30g,90％)，其为黑色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.39(br.s,1H),6.62-6.42(m,2H),4.68(br.s,2H).ppm。MS：M/e 146(M+1)+
步骤C：6,7-二氟-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000521
向2-氨基-4-氟苯酚(10g,69mmol)和K2CO3(23.6g,172.5mmol)在丙酮(80mL)中的混悬液中加入2,3-二溴丙酸乙酯(19.7g,76mmol)。将所得混合物在回流温度搅拌过夜。将混合物冷却至室温，然后浓缩。将残余物用水洗涤，用EA(50mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到黑色油状物。向油状物中加入PE/EA(30/1,60mL)，然后将混合物在室温搅拌30分钟。形成固体，过滤，然后干燥，得到期望产物(4.5g,26.8％)，其为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.87(dd,J＝8.4,3.6Hz,1H),6.56(dd,J＝8.4,3.6Hz,1H),5.99(s,1H),4.96(t,J＝3.6Hz,1H),4.13(q,J＝7.2Hz,2H),4.40-3.34(m,2H),1.17(t,J＝6.8Hz,3H).ppm。MS：M/e 244(M+1)+
步骤D：6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000522
向步骤C的产物(4.5g,18.5mmol)在EtOH(40mL)中的溶液中加入40％HCHO水溶液(20mL)和Pd/C(0.5g)。将反应混合物在室温在H2气氛(气球)下搅拌36小时。然后将混合物经硅藻土垫过滤，用EtOH(40mL)洗涤。浓缩滤液，得到期望产物(8g,粗品)，其为黑色油状物，无需进一步纯化即可直接用于下一步骤中。MS：M/e 258(M+1)+
步骤E：6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-甲酸
Figure BDA0001210200830000523
向步骤D的产物(8g,粗品)在EtOH(50mL)中的溶液中加入2N NaOH(25mL)。将溶液在室温搅拌4小时。浓缩混合物。将所得残余物用2N HCl水溶液中和至pH＝6。形成固体，过滤，得到期望产物(2g)，其为棕色固体。将滤液用EA(30mL x 2)萃取，用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩的，得到红色固体(0.6g)。共计得到2.6g产物(历经两步63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.87(dd,J＝8.0,3.6Hz,1H),6.76(dd,J＝8.0,5.2Hz,1H),4.96(t,J＝3.2Hz,1H),3.42-3.27(m,2H),2.78(s,3H).ppm。MS：M/e 230(M+1)+
步骤F：2-((6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)(羟基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000531
向步骤E的产物(2.6g,11.35mmol)在DCM(40mL)中的溶液中先后加入HOBT(1.83g,13.6mmol)、Et3N(2.3g,22.7mmol)和EDCI(2.6g,13.6mmol)。将溶液在室温搅拌30分钟。加入丙二腈(0.74g,11.35mmol)。将终溶液在室温搅拌3小时。浓缩所得溶液，将残余物在EA(100mL)中稀释，先后用饱和NaHCO3水溶液与饱和NH4Cl水溶液洗涤。将有机层用10％H2SO4水溶液和盐水洗涤。将有机层分出，然后浓缩，得到粗产物(3g,95％)其为棕色固体，直接用于下一步骤中。MS：M/e 278(M+1)+
步骤G：2-((6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000532
将步骤F的产物(3g,10.8mmol)在三甲氧基甲烷(50mL)中的溶液在70℃搅拌3小时。将所得溶液浓缩，然后通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(0.5g,16％)，其为棕色油状物。MS：M/e 292(M+1)+
步骤H：5-氨基-3-(6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000533
将步骤G的产物(0.5g,1.7mmol)和水合肼(2mL)在EtOH(5mL)中的溶液在室温搅拌1小时。浓缩所得溶液。向残余物中加入DCM(4mL)，形成固体。将固体过滤，然后干燥，得到产物(0.3g,60％)，其为黄色固体。MS：M/e 292(M+1)+
步骤I：(2S)-2-((5-氨基-4-氰基-3-(6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000541
将步骤H的产物(0.3g,1mmol)、(S)-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(BL-2,426mg,1.2mmol)和Cs2CO3(650mg,2mmol)在DMF(5mL)中的混合物在70℃搅拌6小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到期望产物(600mg,粗品)，其为黄色油状物。MS：M/e 475(M+1)+
步骤J：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000542
向步骤I的产物(600mg,粗品)在EtOH(6mL)中的溶液中先后加入DMSO(2mL)、5NNaOH水溶液(2mL)和H2O2(2mL)。将溶液在50℃搅拌3小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(30mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(230mg,历经两步46％)，其为白色固体。MS：M/e 493(M+1)+
步骤K：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6,7-二氟-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000551
向步骤H的产物(230mg,0.274mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将溶液在室温搅拌4小时。将所得溶液浓缩至干，然后将残余物溶于CH3CN(5mL)中。冷却至0℃后，加入饱和NaHCO3水溶液(2mL)。然后滴加丙烯酰氯(24mg,0.267mmol)在CH3CN(1mL)中的溶液。终溶液在0℃搅拌30分钟，用水淬灭，然后用EA(40mL)萃取。将有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化，得到期望产物(60mg,28％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.90(t,J＝10.0Hz,1H),6.84-6.68(m,3H),6.66-6.54(m,1H),6.37(s,2H),6.20(dd,J＝16.8,2.4Hz,1H),5.72(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),5.36-5.28(m,1H),4.40-4.20(m,1H),4.09-3.85(m,2H),3.65-3.38(m,4H),2.87(s,3H),2.00-1.70(m,4H),ppm。MS：M/e 447(M+1)+
化合物1.9：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000552
Figure BDA0001210200830000561
步骤A：喹啉-3-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000562
在室温向喹啉-3-甲酸(20g,0.12mol)在EtOH(500mL)中的经搅拌溶液中加入亚硫酰氯(sulfurous dichloride)(25.6mL,0.36mol)。将混合物在80℃搅拌4小时。在减压下浓缩反应混合物。将残余物溶于EA(500mL)中。将有机相用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。将残余物(黄色固体,22g,96％)直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.32(s,1H),8.99(s,1H),8.22(d,J＝8.4Hz,1H),8.13(d,J＝8.4Hz,1H),7.94(t,J＝7.6Hz,1H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H)ppm。MS：M/e 202(M+1)+
步骤B：1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000563
在室温向步骤A的产物(10g,0.05mol)和多聚甲醛(14.9g,0.5mol)在乙酸(200mL)中的经搅拌溶液中小心地加入氰基硼氢化钠(15.7g,0.25mol)。在减压下浓缩反应混合物。将残余物用饱和NaHCO3水溶液烯，然后用EA(100mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。将残余物(黄色固体,7.5g,69％)直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.00(t,J＝7.6Hz,1H),6.94(d,J＝7.2Hz,1H),6.62-6.52(m,2H),4.09(q,J＝7.2Hz,2H),3.45-3.30(m,1H),3.29-3.17(m,1H),3.00-2.86(m,3H),2.82(s,3H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H)ppm。MS：M/e 220(M+1)+
步骤C：1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酸
Figure BDA0001210200830000571
在室温向步骤B的产物(7.5g,0.03mol)在MeOH(150mL)中的溶液中加入2N NaOH(50mL)水溶液。溶液在60℃搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物。将残余物用水(100mL)稀释。将所得溶液用2N HCl水溶液中和至pH＝6。从混合物中沉淀出白色固体。将混合物过滤，然后将固体在60℃红外烘箱中干燥。将固体(4.8g,72.7％)直接用于下一步骤中。MS：M/e192(M+1)+
步骤D：2-(羟基(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000572
在室温向步骤C的产物(4.8g,25mmol)和HOBT(3.1g,30mmol)在DCM(40mL)中经搅拌溶液中加入三乙胺(5.1g,50mmol)。在室温加入EDCI(5.8g,30mmol)和丙二腈(1.7g,26mmol)。将混合物在室温搅拌2小时。加入水(40mL)淬灭反应。将混合物用DCM(40mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。将残余物用HCl/EA(6N)稀释。将混合物在室温搅拌0.5小时。在减压下浓缩混合物。将残余物(粗产物)直接用于下一步骤中。MS：M/e 240(M+1)+
步骤E：2-(甲氧基(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000573
将步骤D的产物(4.5g,18.8mmol)在三甲氧基甲烷(100mL)中的溶液在100℃搅拌2小时。在减压下浓缩所得溶液。将残余物用水(100mL)稀释，然后用EA(100mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。将残余物通过用EA(100％)洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(280mg,5.9％)，其为黄色固体。MS：M/e254(M+1)+
步骤F：5-氨基-3-(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000581
将步骤E的产物(280mg,1.1mmol)和水合肼(1mL)在EtOH(5mL)中的溶液在室温搅拌30分钟。在减压下浓缩所得溶液。将残余物用水(10mL)稀释，然后用EA(10mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(用MeOH/DCM 1:20洗脱)进行纯化，得到期望产物(250mg,89.3％)，其为黄色固体。MS：M/e 254(M+1)+
步骤G：(2S)-2-((5-氨基-4-氰基-3-(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000582
将步骤F的产物(250mg,0.1mmol)、(S)-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(BL-2,421mg,0.12mmol)和Cs2CO3(644mg,0.2mmol)在DMF(10mL)中的混合物在70℃搅拌过夜。在减压下浓缩所得溶液。将残余物用水(20mL)稀释，然后用EA(20mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。将黄色油状物(200mg,45.9％)直接用于下一步骤中。MS：M/e 437(M+1)+
步骤H：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000591
向步骤G的产物(200mg,0.46mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中先后加入DMSO(0.5mL),5N NaOH水溶液(0.5mL)和H2O2(0.5mL)。将溶液在60℃搅拌2小时。在减压下浓缩所得溶液。将残余物用水(5mL)稀释，然后用EA(10mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。将残余物通过用EA 100％洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(190mg,91％)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.00(t,J＝7.6Hz,1H),6.92(d,J＝7.2Hz,1H),6.68-6.57(m,3H),6.53(t,J＝7.2Hz,1H),6.02(s,2H),3.98-3.88(m,2H),3.66-3.52(m,1H),3.42-3.35(m,1H),3.25-3.10(m,3H),2.91(d,J＝8.1Hz,2H),2.85(s,3H),2.54(s,2H),1.82-1.64(m,3H),1.42(s,9H)。MS：M/e 455(M+1)+
步骤I：5-氨基-3-(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)-1-((S)-吡咯烷-2-基甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000592
向步骤H的产物(190mg,0.42mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(0.5mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(146mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 355(M+1)+
步骤J：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000601
将步骤I的产物(146mg,0.42mmol)与饱和NaHCO3水溶液(5mL)在CH3CN(5mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(37mg,0.41mmol)。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC进行纯化，得到期望产物(50mg,29％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.00(t,J＝7.6Hz,1H),6.96-6.90(m,J＝7.2Hz,1H),6.70-6.48(m,5H),6.26-6.16(m,1H),6.15-5.98(m,2H),5.76-5.44(m,1H),4.43-4.14(m,1H),4.07-3.87(m,2H),3.64-3.36(m,4H),3.24-3.10(m,1H),2.95-2.87(m,2H),2.85(t,J＝3.2Hz,3H),1.95-1.68(m,4H)。MS：M/e 409(M+1)+
化合物1.10：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000602
Figure BDA0001210200830000611
步骤A：6-氟-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830000612
向NaH(2.7g,67mmol)在碳酸二甲酯(25mL)中的溶液中加入6-氟-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(5g,30.45mmol)在碳酸二甲酯(25mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌30分钟，然后在90℃搅拌1小时。反应混合物由混悬液变成固态。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，用EA(100mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(6.8g,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15-7.70(m,1H),7.10-6.77(m,2H),3.76(s,3H),3.59(dd,J＝10.0,4.8Hz,1H),3.11-2.90(m,1H),2.78(t,J＝7.8Hz,1H),2.78-2.52(m,1H),2.52-2.30(m,1H)。MS：M/e 223(M+1)+
步骤B：6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830000613
将步骤A的产物(6.8g,30.5mmol)、HClO4(0.5mL)和Pd/C(1.0g)在HOAc(30mL)中的混合物在室温在氢气气氛下搅拌24小时。将反应混悬液经硅藻土垫过滤。浓缩滤液。将残余物用EA(150mL)稀释，用盐水(50mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(6.2g,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 209(M+1)+
步骤C：6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸
Figure BDA0001210200830000621
将步骤B的产物(6.5g,30.5mmol)和NaOH(4.9g,122mmol)在MeOH(20mL)和H2O中的溶液在室温搅拌1小时。浓缩混合物。将残余物用H2O(20mL)稀释，然后用2N HCl调至pH＝5-6。收集沉淀物，然后过滤，得到期望产物(6.0g,100％)，其为白色固体，直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.19-7.04(m,1H),6.97-6.80(m,2H),2.96-2.64(m,4H),2.60-2.51(m,1H),2.09-1.98(m,1H),1.74-1.56(m,1H)。MS：M/e 195(M+1)+
步骤D：2-((6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)(羟基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000622
在0℃向步骤C的产物(3.9g,20mmol)在DCM(20mL)中的溶液先后加入草酰氯(4mL)和2滴DMF。将溶液在室温搅拌2h，然后浓缩。将残余物在THF(20mL)中稀释。加入丙二腈(2.0g,30mmol)。冷却至0℃，滴加TEA(6mL,40mmol)。终溶液在0℃搅拌1小时。将所得溶液用水(30mL)洗涤，用EA(50mL x 3)萃取。将有机层用6N HCl水溶液(50mL x 2)和(50mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(5.0g)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 243(M+1)+
步骤E：2-((6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000623
将步骤D的产物(5g,20.60mmol)在三甲氧基甲烷(15mL)中的溶液在70℃搅拌5小时。浓缩所得溶液。将残余物用EA(100mL)稀释，用盐水(50mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(2.2g,历经2步43％)，其为黄色油状物。MS：M/e 257(M+1)+
步骤F：5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000631
将步骤E的产物(2.2g,8.6mmol)和水合肼(2mL)在EtOH(10mL)中的溶液在室温搅拌10分钟。浓缩所得溶液。将残余物用EA(100mL)稀释，用盐水(50mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(2.0g,91％)，其为黄色固体，直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),7.19-7.05(m,,1H),7.03-6.80(m,2H),6.27(s,2H),3.10-2.61(m,5H),2.16-2.02(m,1H),1.93-1.76(m,1H)。MS：M/e 257(M+1)+
步骤G：(2S)-2-((5-氨基-4-氰基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000632
将步骤F的产物(1.0g,3.9mmol)、(R)-2-(甲苯磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(BL-2,1.5g,4.2mmol)和Cs2CO3(2.5g,7.6mmol)在DMF(10mL)在70℃搅拌5小时。将混合物用EA(50mL)稀释，用盐水(20mL x 3)洗涤，干燥，浓缩，然后通过用CH2Cl2/MeOH(100:1～40:1)洗脱的柱色谱进行纯化，得到期望产物(1.02g,58％)，其为黄色油状物。MS：M/e440(M+1)+。
步骤H：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000633
在室温向步骤G的产物(1.02g,2.3mmol)在EtOH(20mL)和DMSO(1mL)中的溶液中加入5N NaOH水溶液(1mL)和H2O2(1mL)。将混合物在50℃搅拌30分钟。除去EtOH后，将残余物用EA(500mL)稀释，用NaHSO3(10mL)和盐水(20mL x 3)洗涤，以无水硫酸钠干燥，浓缩，然后通过用CH2Cl2/MeOH(100:1～40:1)洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(950mg,90％)，其为棕色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.17-7.06(m,1H),6.98-6.86(m,2H),6.59(s,2H),6.05(br.s,2H),4.07-3.86(m,3H),3.51-3.31(m,2H),3.27-3.13(m,2H),2.98-2.75(m,4H),2.17-2.04(m,1H),1.88-1.55(m,5H),1.41(s,9H)。MS：M/e 458(M+1)+。
步骤I：5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1-((S)-吡咯烷-2-基甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000641
在室温向步骤H的产物(950mg,2.08mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入TFA(5mL)，然后将溶液搅拌16小时。将混合物浓缩，得到粗产物(880mg)，其为棕色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 358(M+1)+。
步骤J：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000642
在室温向步骤I的产物(880mg,粗品)和NaHCO3(400mg,4.76mmol)在MeCN/H2O(10mL/10mL)中的混合物中滴加丙烯酰氯(160mg,1.78mmol)在MeCN(1mL)中的溶液，然后将混合物搅拌1小时。将所得混合物用EA(10mL x 3)萃取。将合并的萃取物用盐水(20mL x 2)洗涤，以无水硫酸钠干燥，浓缩，然后通过用EA洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到粗产物(560mg)，将其在PE/EA(2:1,40mL)中进行重结晶，得到期望产物(425mg,历经2步50％)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.13-7.04(m,1H),6.91-6.80(m,2H),6.54(br.s,1H),6.36(s,2H),6.16(d,J＝16.4Hz,1H),5.99(s,2H),5.75-5.35(m,1H),4.45-4.12(m,1H),4.11-3.81(m,2H),3.47(br.s,2H),3.39-3.26(m,1H),3.01-2.75(m,4H),2.18-2.03(m,1H),1.91-1.65(m,5H)。MS：M/e 412(M+1)+。
化合物1.10a或1.10b：(R或S)1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000651
步骤A：(R或S)(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000661
在室温向化合物1.10的合成中步骤G的产物(20g,46mmol)在EtOH(200mL)中的经搅拌溶液中加入DMSO(20mL)、NaOH水溶液(5.0N,20mL)和H2O2(20mL)。加入后，将反应混合物在50℃搅拌30分钟。浓缩反应混合物，得到残余物，将其用EtOAc(500mL)稀释，用盐水(200mL x 3)洗涤,以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1)进行纯化，得到期望产物(13g,62％)，其为黄色固体，通过手性HPLC进行分离，得到峰1(5.20g)和峰2(6.35g)。峰1：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)7.10(s,1H),6.97-6.85(m,2H),6.59(s,2H),6.04(s,2H),4.10-3.80(m,3H),3.40-3.34(m,1H),3.23-3.12(m,2H),3.02-2.75(m,4H),2.10(d,J＝12.0Hz,1H),1.81-1.55(m,5H),1.40(s,9H)ppm。峰2：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.17-7.05(m,1H),6.98-6.85(m,2H),6.59(s,2H),6.06(s,2H),4.09-3.78(m,3H),3.40-3.35(m,1H),3.23-3.11(m,2H),3.0-2.78(m,4H),2.11(d,J＝10.6Hz,1H),1.81-1.54(m,5H),1.41(s,9H)ppm。MS：M/e 458(M+1)+
手性分离条件如下所示：
Figure BDA0001210200830000662
步骤B：(R或S)5-氨基-1-((S)-吡咯烷-2-基甲基)-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000671
在0℃向步骤A的产物(1.0mg,2.2mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TFA(5mL)，然后将溶液在室温搅拌2小时。浓缩混合物，得到粗产物(1g)，其为棕色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 358(M+1)+
步骤C：(R或S)1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000672
在0℃向步骤B的产物(1g,粗品,2.2mmol)和NaHCO3(739mg,8.8mmol)在MeCN/H2O(25mL/25mL)中的混合物中滴加丙烯酰氯(200mg,2.2mmol)在MeCN(2mL)中的溶液，然后将混合物在0℃搅拌10分钟。将所得混合物用EA(100mL)萃取，用盐水(30mL x 2)洗涤，以无水硫酸钠干燥，浓缩，然后通过用DCM/MeOH(30:1)洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(650mg,历经2步79％)，其为白色固体。峰1(化合物1.10a,保留时间：5.219min)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.19-7.08(m,J＝8.9Hz,1H),6.99-6.85(m,J＝8.0Hz,2H),6.72-6.52(m,2H),6.28-5.98(m,3H),5.78-5.42(m,1H),4.41-4.13(m,1H),4.07-3.84(m,2H),3.60-3.35(m,3H),3.06-2.74(m,4H),2.13-2.04(m,1H),1.96-1.62(m,5H)ppm。峰2(化合物1.10b,保留时间：6.182min)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.19-7.06(m,1H),6.98-6.85(m,2H),6.68-6.47(m,2H),6.30-6.00(m,3H),5.79-5.44(m,1H),4.42-4.15(m,1H),4.09-3.82(m,2H),3.59-3.36(m,3H),3.02-2.75(m,4H),2.11(d,J＝11.2Hz,1H),1.93-1.62(m,5H)ppm。MS：M/e 412(M+1)+
手性分析条件如下所示：
Figure BDA0001210200830000681
化合物1.11：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000682
Figure BDA0001210200830000691
步骤A：(3R)-3-(5-氨基-4-氰基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000692
将5-氨基-3-(7-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈(化合物1.10的合成中步骤F的产物,1.0g,4mmol)、(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(BL-1,2.1g,6mmol)和Cs2CO3(2.6g,8mmol)在DMF(20mL)中的混合物在70℃搅拌24小时。浓缩所得溶液。将残余物用EA(100mL)稀释，用盐水(50mL x 2)洗涤，以硫酸钠干燥，浓缩，然后通过用PE:EA＝4:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到粗产物(700mg)，将其直接用于下一步骤中。MS：M/e 440(M+1)+
步骤B：(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000701
在室温向步骤A的产物(700mg,粗品,1.6mmol)在EtOH(10mL)和DMSO(2mL)中的溶液中先后加入6N NaOH水溶液(2mL)和H2O2(2mL)。将混合物在50℃搅拌30分钟。除去EtOH，将残余物用EA(100mL)稀释，用盐水(50mL x 2)洗涤，以无水硫酸钠干燥，浓缩，然后通过用PE:EA 1:2洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到粗产物(130mg,历经2步8％)，其为黄色固体。
步骤C：5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000702
在0℃向步骤B的产物(130mg,0.3mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。溶液在0℃搅拌0.5小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(150mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 358(M+1)+
步骤D：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(6-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000711
在0℃向步骤I的产物(150mg,0.28mmol)和NaHCO3(94mg,1.4mmol)在CH3CN/H2O(10mL/10mL)中的混合物中滴加丙烯酰氯(25mg,0.28mmol)。将混合物在0℃搅拌10分钟。将所得混合物用EA(80mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，浓缩，通过制备型TLC(DCM:MeOH＝12:1)进行纯化，得到期望产物(40mg,35％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.18-7.06(m,1H),6.98-6.72(m,3H),6.59(s,2H),6.34-6.16(m,2H),6.16-6.01(m,1H),5.76-5.59(m,1H),4.45-3.94(m,3H),3.50-3.30(m,2H),3.15-2.76(m,5H),2.18-2.04(m,1H),1.99-1.76(m,3H),1.75-1.59(m,1H),1.55-1.39(m,1H)。MS：M/e 412(M+1)+
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.11所述的操作，制备化合物1.12和1.13。
化合物1.12：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(7-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000712
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.14-7.02(m,1H),6.92-6.81(m,J＝8.4Hz,2H),6.77-6.64(m,1H),6.45-6.29(m,2H),6.15-5.96(m,3H),5.68-5.59(m,1H),4.22-3.93(m,3H),3.40-3.25(m,2H),3.01-2.91(m,3H),2.86-2.76(m,2H),2.17-2.05(m,1H),1.98-1.77(m,3H),1.78-1.66(m,1H),1.56-1.38(m,1H)。MS：M/e 412(M+1)+
化合物1.13：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(7-氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000721
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.12-7.05(m,1H),6.92-6.80(m,2H),6.61-6.46(m,1H),6.43-6.26(m,2H),6.21-5.90(m,3H),5.74-5.43(m,1H),4.41-4.16(m,1H),4.11-3.84(m,2H),3.54-3.30(m,3H),3.00-2.94(m,2H),2.85-2.77(m,2H),2.18-2.05(m,1H),1.90-1.70(m,5H)。MS：M/e 412(M+1)+
化合物1.14：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000722
Figure BDA0001210200830000731
步骤A：1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830000732
向NaH(6.0g,150.68mmol)在碳酸二甲酯(50mL)中的溶液中加入3,4-二氢萘-1(2H)-酮(10g,68.50mmol)在碳酸二甲酯(25mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌30分钟，然后在85℃搅拌2小时。反应混合物由混悬液变成固态。将反应混合物用水(100mL)淬灭，用EA(100mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(13.23g,95％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 205(M+1)+
步骤B：1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830000733
将步骤A的产物(13.23g,64.78mmol)、HClO4(1mL)和Pd/C(1.3g,0.1当量)在HOAc(50mL)中的混合物在室温在4大气压氢气气氛下搅拌24小时。将混合物混悬液经硅藻土垫过滤。浓缩滤液。将残余物用水洗涤，用EA(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(10g,81％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 191(M+1)+
步骤C：1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸
Figure BDA0001210200830000734
在0℃向步骤B的产物(10g,52.57mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中加入6N NaOH(10.51g,262.83mmol)水溶液。将溶液在室温搅拌2小时。将所得溶液用2N HCl水溶液中和至pH＝6。形成白色固体，然后过滤，得到期望产物(8.3g,90％)，其为白色固体，直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.13-7.01(m,4H),2.98-2.82(m,2H),2.81-2.73(m,2H),2.70-2.59(m,1H),2.13-2.03(m,1H),1.79-1.67(m,1H)ppm。MS：M/e 177(M+1)+
步骤D：2-(羟基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000741
在0℃向步骤C的产物(18g,102.15mmol)在DCM(40mL)中的溶液中先后加入草酰氯(18mL)和5滴DMF。将溶液在室温搅拌30分钟，然后浓缩。将残余物在THF(50mL)中稀释。加入丙二腈(10.11g,153.22mmol)。冷却至0℃，向溶液中滴加TEA(29mL,204.30mmol)。终溶液在0℃搅拌1小时。将所得溶液用水洗涤，用EA(50mL x 3)萃取。将有机层用6N HCl水溶液洗涤。将有机层分出，然后浓缩，得到粗产物(22.80g,100％)，其为黑色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 225(M+1)+
步骤E：2-(甲氧基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000742
将步骤D的产物(22.8g,101.66mmol)在三甲氧基甲烷(40mL)中的溶液在70℃搅拌4-5小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝10:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(16g,66％)，其为黄色固体。MS：M/e 239(M+1)+
步骤F：5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000743
将步骤E的产物(13g,54.56mmol)和水合肼(2mL)在EtOH(10mL)中的溶液在室温搅拌30分钟。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(7g,54％)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(br.s,1H),7.09-7.02(m,4H),6.27(br.s,2H),3.03-2.90(m,3H),2.88-2.79(m,2H),2.15-2.04(m,1H),1.86(s,1H)ppm。MS：M/e 239(M+1)+
步骤G：(2S)-2-((5-氨基-4-氰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000751
将步骤F的产物(200mg,0.84mmol)、(S)-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(BL-2,328mg,0.92mmol)和Cs2CO3(548mg,1.68mmol)在DMF(15mL)中的混合物在70℃搅拌2小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(354mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 422(M+1)+
步骤H：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000752
向步骤G的产物(354mg,0.84mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中先后加入DMSO(2mL)、5N NaOH水溶液(2mL)和H2O2(1mL)。将溶液在60℃搅拌2小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(254mg,69％)，其为黄色固体。MS：M/e 440(M+1)+
步骤I：5-氨基-1-((S)-吡咯烷-2-基甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000761
向步骤H的产物(254mg,0.58mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(196mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 340(M+1)+
步骤J：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000762
将步骤I的产物(196mg,0.58mmol)和NaHCO3(291mg,3.47mmol)在CH3CN/H2O(5mL/5mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(51mg,0.58mmol)。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用DCM:MeOH＝20:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(60mg,26％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.07-7.05(m,4H),6.66-6.52(m,1H),6.34(s,2H),6.18-6.14(m,1H),5.99(s,2H),5.57-5.30(m,1H),4.40-4.22(m,1H),4.06-4.04(m,1H),3.95-3.81(m,1H),3.54-3.40(m,2H),3.35-3.25(m,1H),3.02-2.71(m,4H),2.20-2.00(m,1H),1.90-1.75(m,5H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
化合物1.14a或1.14b：(R或S)1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000771
步骤A：(R或S)(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000772
向化合物1.14合成中步骤G的产物(2.0g,4.46mmol)在EtOH(50mL)中的经搅拌溶液中加入H2O2(2mL)、NaOH水溶液(5.0N,2mL)、DMSO(2mL)。加入后，将反应混合物在50℃搅拌2小时。浓缩反应混合物，得到残余物，将其用EtOAc/盐水进行纯化，用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩，然后通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1～1:1)进行纯化，得到期望产物(2.23g,100％)，其为黄色固体，通过手性HPLC进行分离，得到峰1(0.93g,在先峰)和峰2(0.89g,在后峰)。手性分离条件如下所示：
Figure BDA0001210200830000773
Figure BDA0001210200830000781
峰1：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.58(s,2H),6.04(s,2H),4.57-3.80(m,4H),3.17(s,2H),3.03-2.75(m,4H),2.12(d,J＝14.4Hz,1H),1.82-1.58(m,5H),1.40(s,9H)ppm。
峰2：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.58(s,2H),6.06(s,2H),4.51-3.81(m,4H),3.18(s,2H),3.01-2.75(m,4H),2.13(d,J＝11.6Hz,1H),1.81-1.53(m,5H),1.41(s,9H)ppm。MS：M/e 440.5(M+1)+
步骤B：(R或S)5-氨基-1-((S)-吡咯烷-2-基甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000782
将步骤A的产物(0.93g,2.12mmol)加至CH2Cl2(10mL)，然后加入TFA(2mL)。加入后，将反应混合物搅拌过夜。除去大部分溶剂，得到残余物，将其用NaOH水溶液碱化至pH＝9～10，然后用EtOAc(100mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到目标产物(538mg,74.8％)其为白色固体。MS：M/e 340.5(M+1)+
步骤C：(R或S)1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000791
将NaHCO3(267mg,3.18mmol)加至步骤B的产物(538mg,1.59mmol)在CH3CN/H2O(10mL/10mL)中的经搅拌混合物中。然后将混合物冷却至0℃，滴加丙烯酰氯(143.6mg,1.59mmol)在CH3CN(3mL)中的溶液。加入后，将反应混合物搅拌10分钟。将反应混合物用EtOAc(40mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩得到残余物，将其通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1～100％EtOAc)进行纯化，得到目标产物(440mg,70.4％)，其为浅黄色固体。峰1(化合物1.14a,保留时间：4.756min)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.74-6.44(m,2H),6.28-5.97(m,4H),5.82-5.36(m,1H),4.45-4.11(m,1H),4.09-3.83(m,2H),3.60-3.35(m,3H),3.08-2.70(m,4H),2.10(d,J＝11.2Hz,1H),2.02-1.61(m,5H)ppm。
峰2(化合物1.14b,保留时间：5.347min)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.67-6.49(m,2H),6.28-5.97(m,4H),5.76-5.43(m,1H),4.42-4.14(m,1H),4.11-3.82(m,2H),3.59-3.36(m,3H),3.05-2.72(m,4H),2.13(d,J＝12.0Hz,1H),1.95-1.64(m,5H)ppm。MS：M/e 394.5(M+1)+
手性分析条件如下所示。
Figure BDA0001210200830000792
化合物1.14a的手性合成：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000801
步骤A：(R)-4-苄基-3-(3-苯基丙酰基)噁唑烷-2-酮
Figure BDA0001210200830000802
在0℃向(R)-4-苄基噁唑烷-2-酮(16.7g,94.3mmol)、Et3N(19g,0.188mol)和DMAP(1.1g,9.43mmol)在CH2Cl2(200mL)中的经搅拌溶液中滴加3-苯基丙酰氯(17.4g,10.3mmol)在CH2Cl2(50mL)中的溶液。加入后，将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物用H2O(200mL)、HCl水溶液(2.0M,200mL)、NaHCO3水溶液和盐水洗涤，然后以Na2SO4干燥，浓缩，得到残余物，将其用THF/己烷(100mL/100mL)洗涤，然后过滤。收集滤饼，干燥，得到目标产物(24g,82.3％)，其为白色固体。MS：M/e 310(M+1)+
步骤B：(S)-3-苄基-4-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-4-氧代丁酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000811
在-70℃向步骤A的产物(24g,77.7mmol)在无水THF(200mL)中经搅拌溶液中先后滴加二异丙基氨基锂(LDA,2.0M,46.6mL,93.24mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(16.7g,85.4mmol)在THF(20mL)中的溶液。加入后，将反应混合物在室温搅拌1小时。将反应混合物用NH4Cl水溶液淬灭，然后用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到残余物，将其在-5℃与IPA/己烷(50mL/50mL)进行搅拌，然后过滤。收集滤饼，得到目标产物(16g,48.6％)其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.38-7.17(m,10H),4.65-4.52(m,1H),4.32-4.18(m,2H),4.14(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),2.97(dd,J＝13.2,4.0Hz,2H),2.89(dd,J＝13.6,7.6Hz,1H),2.69(dd,J＝16.8,10.8Hz,1H),2.57(dd,J＝13.2,9.2Hz,1H),2.25(dd,J＝16.8,4.0Hz,1H)ppm。MS：M/e 368(M-t-Bu+1)+
步骤C：(S)-3-苄基-4-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-4-氧代丁酸
Figure BDA0001210200830000821
向步骤B的产物(16g,37.8mmol)在CH2Cl2(200mL)中的经搅拌溶液中加入TFA(20mL)。加入后，将反应混合物搅拌2天。浓缩反应混合物，得到残余物，将其用NH4Cl水溶液(50mL)进行处理，然后用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到目标产物(12.9g,92.4％)，其为白色固体。MS：M/e 368(M+1)+
步骤D：(S)-2-苄基琥珀酸
Figure BDA0001210200830000822
在0℃向步骤C的产物(12.9g,34.96mmol)在THF(50mL)中的经搅拌溶液中先后滴加H2O2水溶液(30％,15mL)和LiOH(2.5g,104mmol)在H2O(20mL)中的溶液。加入后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物用Na2SO3水溶液(50mL)淬灭，除去大部分THF，得到水层，然后用EtOAc(50mL x 3)萃取。将水层用HCl水溶液(2.0M)酸化至pH＝3～4，然后用EtOAc(50mLx 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到目标化合物(7g,100％)其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.22(s,2H),7.35-7.13(m,5H),2.98-2.84(m,2H),2.81-2.67(m,1H),2.42(dd,J＝16.8,8.8Hz,1H),2.24(dd,J＝16.8,4.4Hz,1H)ppm。MS：M/e 207(M-1)-
步骤E：(S)-4-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸
Figure BDA0001210200830000823
将步骤D的产物(7g,33.6mmol)在浓H2SO4(20mL)中的混合物在60℃搅拌20分钟。将反应混合物倾入中冰-H2O(150mL)中，然后用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到目标化合物(6.3g,100％)，其为白色固体，直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.48(s,1H),7.85(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.60-7.53(m,1H),7.37(dd,J＝16.0,8.0Hz,2H),3.28-3.12(m,3H),2.79(d,J＝8.8Hz,2H)ppm。MS：M/e 191(M+1)+
步骤F：(R)-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸
Figure BDA0001210200830000831
将步骤E的产物(6.3g,33.6mmol)溶于AcOH(40mL)中，加入HClO4(0.5mL)和Pd/C(500mg)。然后将反应混合物在H2(1大气压)下搅拌过夜。过滤反应混合物，然后浓缩滤液，得到残余物，将其与H2O(50mL)一起搅拌半小时，然后过滤。收集滤饼，干燥，得到目标产物(3g,50.7％)其为白色固体。MS：M/e 177(M+1)+
步骤G：(R)-2-(羟基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000832
向步骤F的产物(3g,17mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中先后加入HOBT(2.7g,20.4mmol)、Et3N(4.4g,34mmol)和EDCI(3.9g,20.4mmol)。搅拌20min后，加入丙二腈(1.12g,17mmol)。然后将反应混合物搅拌2小时。将混合物用H2O(30mL)、盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到残余物，将其溶于EtOAc(50mL)中，用H2SO4水溶液(4M,40mL)、盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到目标产物(3.8g,99.7％)，其为黄褐色固体。MS：M/e 225(M+1)+
步骤H：(R)-2-(甲氧基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000833
将步骤G的产物(3.8g,16.96mmol)在三甲氧基甲烷(20mL)中的溶液在70℃搅拌4-5小时。浓缩所得溶液。将残余物用EtOH/己烷(5mL/10mL)洗涤，然后过滤。收集滤饼，得到目标产物(2.2g,54.5％)，其为白色固体。MS：M/e 239(M+1)+
步骤I：(R)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000841
步骤H的产物(2.2g,9.24mmol)和水合肼(2mL)在EtOH(10mL)中的溶液在室温搅拌30分钟。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到目标产物(2.3g,100％)，其为白色固体。MS：M/e 239(M+1)+
步骤J：(R)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000842
将步骤I的产物(1.0g,4.2mmol)在MsOH(5mL)中的混合物在70℃搅拌3小时。将反应混合物倾入H2O(20mL)，用NaOH水溶液碱化至pH＝8～9，然后用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到目标产物(770mg,71.6％)，其为白色固体。MS：M/e 257(M+1)+
步骤K：(S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000843
将步骤J的产物(100mg,0.39mmol)、BL-2(166mg,0.47mmol)和Cs2CO3(254mg,0.78mmol)在DMF(5mL)中的混合物在70℃搅拌24小时。将所得溶液倾入H2O(20mL)中，然后用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩，然后通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝4:1～EtOAc)进行纯化，得到目标化合物(45mg,26％)，其为黄色固体。MS：M/e 440(M+1)+
步骤L：5-氨基-1-((S)-吡咯烷-2-基甲基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000851
向步骤K的产物(45mg,0.102mmol)在CH2Cl2(5mL)中的经搅拌溶液中加入TFA(1mL)。加入后，将反应混合物搅拌2小时。浓缩反应混合物，得到残余物，无需进一步纯化将其直接用于下一步骤中。MS：M/e 340(M+1)+
步骤M：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000852
在0℃向步骤L的产物(0.102mmol)在CH3CN/H2O(3mL/3mL)中经搅拌溶液中先后加入NaHCO3(17.1mg,0.204mmol)、丙烯酰氯(9.28mg,0.102mmol)在CH3CN(1mL)中的溶液。将反应混合物用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩，然后通过制备型HPLC进行纯化，得到目标产物(12mg,29.7％)，其呈TFA盐的形式。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ7.08(s,4H),6.59(dd,J＝16.8,10.4Hz,1H),6.26-6.12(m,1H),5.79-5.40(m,1H),4.43-4.14(m,1H),4.08-3.86(m,2H),3.49-3.31(m,3H),3.05-2.73(m,4H),2.10(d,J＝11.6Hz,1H),1.98-1.61(m,5H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
化合物1.15:1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000861
步骤A：(3R)-3-(5-氨基-4-氰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000871
将化合物1.14的合成中步骤F的产物(714mg,3mmol)、(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(BL-1,1.6g,4.5mmol)和Cs2CO3(1.95g,6mmol)在DMF(6mL)中的混合物在70℃搅拌24小时。然后加入另一部分BL-1(1.6g,4.5mmol)，将所得混合物在70℃加热24小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(40mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:5洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(650mg,粗品)，其为黄色固体。MS：M/e 422(M+1)+
步骤B：(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000872
向步骤A的产物(650mg,粗品)在EtOH(5mL)中的溶液中先后加入DMSO(2mL)、5NNaOH水溶液(2mL)和H2O2(2mL)。将溶液在50℃搅拌2小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(30mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(300mg,历经2步23％)，其为黄色固体。MS：M/e 440(M+1)+
步骤C：5-氨基-1-((R)-哌啶-3-基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000881
向步骤B的产物(300mg,0.68mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。将溶液在室温搅拌2小时。将所得溶液用饱和Na2CO3水溶液处理至pH＝8，用DCM(30mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(190mg,83％)，其为黄色泡沫状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 340(M+1)+
步骤D：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000882
向步骤C的产物(160mg,0.47mmol)在CH3CN(5mL)中的混合物中加入饱和NaHCO3水溶液(1mL)。将所得溶液冷却至0℃，然后滴加丙烯酰氯(43mg,0.47mmol)在CH3CN(1mL)中的溶液。将终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后EA(30mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化，得到期望产物(68mg,37％)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.06-7.02(m,4H)，6.90-6.75(m,1H),6.60(s,2H),6.23(s,2H),6.10-5.99(m,1H),5.72-5.58(m,1H),4.44-3.90(m,3H),3.50-3.38(m,1H),3.15-2.76(m,6H),2.18-2.08(m,1H),2.00-1.79(m,3H),1.78-1.62(m,1H),1.55-1.35(m,1H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
化合物1.15a或1.15b：(R或S)1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000891
步骤A：(R或S)(3R)-3-(5-氨基-4-氰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000892
将化合物1.14的合成中步骤F的产物(4.7g,20mmol)、BL-1(8.52g,24mmol)和Cs2CO3(13g,40mmol)在DMF(50mL)中的混合物在70℃搅拌80小时。在该时间段内加入另外两份BL-1(2g,5.6mmol)。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(100mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:5洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(2.1g,25％)，其为黄色固体。MS：M/e 422(M+1)+
步骤B：(R或S)(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000901
向步骤A的产物(2.1g,5mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中先后加入DMSO(5mL)、5NNaOH水溶液(5mL)和H2O2(5mL)。将溶液在50℃搅拌4小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(40mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝1:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(1.55g,70％)，其为黄色固体。MS：M/e 440(M+1)+。将产物通过手性制备型HPLC进行分离，得到峰1和峰2。手性分离条件如下所示：
Figure BDA0001210200830000902
步骤C：(R或S)5-氨基-1-((R)-哌啶-3-基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000911
向步骤B的产物(820mg,1.86mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TFA(3mL)。将溶液在室温搅拌过夜。将所得溶液浓缩，得到粗产物直接用于下一步骤中。MS：M/e 340(M+1)+
步骤D：(R或S)1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000912
向步骤C的产物在CH3CN(15mL)和H2O(3mL)中的混合物中加入NaHCO3(1g,12mmol)。将所得溶液冷却至0℃，然后滴加丙烯酰氯(300mg,1.86mmol)在CH3CN(2mL)中的溶液。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(30mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过制备型HPLC进行纯化。通过浓缩除去从收集物除去大部分CH3CN。将所得溶液用饱和NaHCO3溶液处理至pH 8，用DCM(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩，得到期望产物(300mg,历经2步41％)，其为白色固体。
峰1(化合物1.15a,保留时间：5.85min)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.12-7.04(m,4H)，6.90-6.71(m,1H),6.59(s,2H),6.22(s,2H),6.15-6.02(m,1H),5.75-5.58(m,1H),4.44-3.94(m,3H),3.50-3.38(m,1H),3.15-2.75(m,6H),2.16-2.08(m,1H),2.00-1.79(m,3H),1.78-1.62(m,1H),1.55-1.35(m,1H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
峰2(化合物1.15b,保留时间：6.944min)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.12-7.04(m,4H)，6.90-6.71(m,1H),6.58(s,2H),6.21(s,2H),6.15-6.02(m,1H),5.75-5.58(m,1H),4.45-3.94(m,3H),3.50-3.36(m,1H),3.15-2.75(m,6H),2.18-2.06(m,1H),2.00-1.80(m,3H),1.76-1.62(m,1H),1.55-1.35(m,1H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
手性分析条件如下所示。
Figure BDA0001210200830000921
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对手性合成化合物1.14a所述的操作，制备化合物1.15a。
化合物1.15a：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，呈CF3COOH盐的形式
Figure BDA0001210200830000922
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.93-6.70(m,1H),6.59(s,2H),6.38-5.97(m,2H),5.66(dd,J＝28.8,10.4Hz,1H),4.48-3.91(m,3H),3.60-3.48(m,1H),3.15-2.75(m,6H),2.22-2.06(m,1H),2.05-1.79(m,3H),1.68(s,1H),1.45(s,1H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.15所述的操作，制备化合物1.16至1.17。
化合物1.16：1-((R)-1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000931
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.06-7.02(m,4H),6.54-6.20(m,3H),6.12-6.07(m,1H),5.25-5.15(m,2H),5.62(d,J＝9.6Hz,1H),4.87-4.80(m,1H),3.95-3.29(m,5H),3.01-2.65(m,4H),2.35-2.05(m,3H),1.80-1.69(m,1H)ppm。MS：M/e 380(M+1)+
化合物1.17：1-((S)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000932
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.06-7.02(m,4H)，6.80-6.65(m,1H),6.34(s,2H),6.10-5.97(m,1H),5.68-5.57(m,1H),4.30-3.90(m,3H),3.38-3.28(m,1H),3.06-2.75(m,6H),2.18-2.06(m,1H),2.00-1.65(m,4H),1.56-1.40(m,1H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
化合物1.18：1-(2-丙烯酰氨基苄基)-5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000941
步骤A：4-氧代色满-3-甲酸乙酯和4-羟基-2H-色烯-3-甲酸乙酯
Figure BDA0001210200830000942
在-78℃向色满-4-酮(8.8g,60mmol)在无水THF(200mL)中的溶液中加入LiHMDS(1M,72mL,72mmol)。搅拌40min后，加入氰基甲酸乙酯(4.5g,90mmol)，然后将所得混合物从-78℃至室温搅拌2小时。加入饱和NH4Cl水溶液(200mL)，用EA(200mL×3)萃取，合并有机层，以Na2SO4干燥，蒸发溶剂，然后将残余物通过柱色谱(PE/EA＝100:5)进行纯化，得到9.0g4-氧代色满-3-甲酸乙酯，产率为68％，其为互变异构体的混合物。
步骤B：色满-3-甲酸
Figure BDA0001210200830000943
向4-氧代色满-3-甲酸乙酯(7.7g,35mmol)在AcOH(40mL)和HClO4(2mL)中的溶液中加入Pd/C(770mg)，然后将所得混合物在室温在H2(0.4MPa)下搅拌6小时。过滤除去Pd/C，将滤液蒸发，用水和盐水(100mL×2)洗涤，得到粗制的色满-3-甲酸乙酯。然后用LiOH(1.5g,36mmol)在THF/H2O/MeOH(30mL/30mL/30mL)中的溶液中进行水解，在室温搅拌1小时，然后蒸发溶剂，向残余物中加入水(20mL)，用HCl(1N)酸化至pH＝1-2，经由过滤收集白色沉淀物，在真空中干燥，得到4.5g，历经2步产率为73％。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.00-7.06(m,2H),6.80(t,J＝7.6Hz,1H),6.72(d,J＝8.0Hz,1H),4.35(dd,J＝10.8Hz,1.6Hz,1H),4.08-4.13(m,1H),2.94-3.01(m,3H)。MS(ESI)m/e[M-1]+177.
步骤C：2-(色满-3-基(羟基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830000944
向色满-3-甲酸(1.5g,8.4mmol)在AcOEt(75mL)中的溶液中加入Et3N(1.02g,10.1mmol)、HOBt(1.37g,10.1mmol)、EDCI(1.935g,10.1mmol)，将混合物在室温搅拌0.5h，然后向混合物中加入丙二腈(0.665g,10.1mmol)并将所得混合物在室温搅拌2小时。加入水(100mL)，将有机层分出，然后用盐水洗涤，以Na2SO4干燥。过滤除去Na2SO4，蒸发溶剂，将残余物溶于AcOEt(100mL)中，加入H2SO4(1N,20mL)，将混合物搅拌0.5h，然后分出有机层，蒸发溶剂，得到粗产物，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+227.0。
步骤D：5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830000951
将粗制的2-(色满-3-基(羟基)亚甲基)丙二腈(8.4mmol)在三甲氧基甲烷(50mL)中的溶液在100℃加热1.5小时。然后蒸发溶剂，将残余物溶于EtOH(20mL)中，接着在0℃加入水合肼(1.5mL)，将混合物搅拌0.5小时。然后蒸发溶剂，无需进一步纯化即可将残余物用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+241.0。
步骤E：5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000952
将粗制的5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲腈(8.4mmol)在浓H3PO4(20mL)中的溶液在130℃加热20分钟。然后将混合物冷却室温，伴随剧烈搅拌将其滴至水(40mL)中，接着用NaHCO3将pH调至7-8，用EA(20mL×3)萃取，合并有机层，用盐水(50mL×2)洗涤,以Na2SO4干燥，过滤除去Na2SO4，然后蒸发滤液，得到550mg粗产物，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+259.0。
步骤F：5-氨基-3-(色满-3-基)-1-(2-硝基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000953
将5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(380mg,1.47mmol)和1-(溴甲基)-2-硝基苯(382mg,1.77mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温搅拌1小时。伴随搅拌先后向所得混合物中加入水(50mL)和NaCl(固体)，经由过滤收集棕色沉淀物，将滤饼用H2O洗涤，然后在真空中干燥，该粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+393.9
步骤G：5-氨基-1-(2-氨基苄基)-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000961
在室温向粗制的5-氨基-3-(色满-3-基)-1-(2-硝基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中加入Pd/C(100mg)，然后在H2气球下搅拌过夜。过滤除去Pd/C，蒸发溶剂，该粗制的黄色固体无需进一步纯化即可用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+364.0。
步骤H：1-(2-丙烯酰氨基苄基)-5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000962
在0℃向5-氨基-1-(2-氨基苄基)-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(135mg,0.37mmol)在CH3CN(10mL)和H2O(2mL)中的溶液中先后加入NaHCO3(62mg,0.74mmol)和丙烯酰氯(34mg,0.37mmol)，然后将所得混合物搅拌15分钟。通过用制备型HPLC进行纯化，得到产物(29mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.01(s,1H),7.63(d J＝7.6Hz,1H,),7.29(t,J＝7.6Hz,1H),7.05-7.13(m,3H),6.94(d,J＝7.2Hz,1H),6.76-6.84(m,4H).6.49-6.56(m,1H),6.29(t,J＝8.0Hz,2H),5.79(d,J＝10.8Hz,1H),5.13(s,2H),4.41(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),3.90(t,J＝10.4Hz,1H),3.68-3.76(m,1H),2.99(d,J＝8.0Hz,2H)。MS(ESI)m/e[M+1]+417.9。
化合物1.19：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000971
步骤A：(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830000972
将(5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物1.18的合成中步骤E的产物,0.50g,1.93mmol)、(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(BL-1,0.897g,2.52mmol)、碳酸铯(0.943g,2.90mmol)、DMF(10mL)中的混合物在70℃搅拌16小时，冷却。加入(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.897g,2.52mmol)、碳酸铯(0.943g,2.90mmol)，然后加热至70℃并保持4小时，冷却。加入乙酸乙酯(100mL)，与相同步骤和类似操作的另一批次(5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.107g,0.416mmol))合并，过滤。将滤液用水(10mL)、盐水(20mL x2)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，通过硅胶色谱(硅胶：30g,乙酸乙酯:石油醚＝2:3，然后是二氯甲烷:甲醇＝40:1)进行纯化，得到(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.238g,28％)，其为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.05-7.12(m,2H),6.73-6.85(m,4H),6.20-6.21(m,2H),4.39-4.42(m,1H),3.62-4.04(m,5H),3.34-3.40(m,1H),2.97-3.01(m,3H),2.75-2.85(m,1H),1.79-1.91(m,3H),1.39(s,9H)。MS(ESI)m/e[M+1]+442。
步骤B：5-氨基-3-(色满-3-基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000973
将(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.238g,0.54mmol)溶于二氯甲烷(9mL)中，加入三氟乙酸(1.5mL)，将反应混合物在室温搅拌4小时，浓缩，得到5-氨基-3-(色满-3-基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，其呈三氟乙酸盐的形式，为棕色半固体(0.452g,417％,粗品,0.54mmol)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74-8.75(m,2H),8.47-8.50(m,1H),8.31-8.32(m,1H),7.09-7.13(m,2H),6.77-6.84(m,4H),4.36-4.39(m,2H),4.04-4.06(m,1H),3.69-3.73(m,1H),3.32-3.37(m,2H),2.89-3.10(m,4H),1.65-1.91(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+342。
步骤C：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000981
将5-氨基-3-(色满-3-基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.452g,粗品,0.54mmol)、乙腈(3mL)、水(1.5mL)、NaHCO3(固体,0.36g,4.31mmol)的混合物冷却至0℃，加入丙烯酰氯的溶液(73mg,0.81mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，浓缩，然后加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取。将有机相分出，用盐水(10mL x2)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，通过制备型HPLC(仪器：gilson-281；柱：21.2×150×5uM,gemini-new；流速：20ML/MIN；UV：254nm；方法：0.1％FA/水和CH3CN，在11分钟内CH3CN从35至45，然后在3分钟内从45至90，在90保持3分钟，然后平衡2分钟。总运行时间为20分钟。单一梯度方法)进行纯化，得到1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(61mg,29％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.03-7.09(m,2H),6.68-6.83(m,3H),6.49(s,2H),6.01-6.06(m,3H),5.60-5.63(m,1H),4.38-4.41(m,1H),3.87-4.16(m,4H),3.62-3.64(m,1H),2.97-3.02(m,4H),1.84-1.97(m,3H),1.47-1.50(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+396。
化合物1.20：1-(2-丙烯酰氨基苄基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000991
步骤A：5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000992
将5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈(化合物1.14合成中步骤F的产物,1.5g,6.3mmol)在甲磺酸(5mL)中的混合物在110℃搅拌1h，然后将其倾入冰-水中，用K2CO3将混合物中和至pH 7-8。将混合物用EtOAc萃取，然后将有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下浓缩，得到期望产物(1.2g,75％)，其为黄色固体，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+257.0
步骤B：5-氨基-1-(2-硝基苄基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830000993
将5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.2g,4.68mmol)、1-(溴甲基)-2-硝基苯(1.01g,4.68mmol)和K2CO3(1.3g,9.36mmol)在DMF(10mL)中的反应混合物在室温搅拌16小时，然后将其倾入水中，然后用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(己烷/乙酸乙酯1:2至MeOH/DCM 1:50洗脱)进行纯化，得到期望产物(1g,55％)，其为黄色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+392
步骤C：5-氨基-1-(2-氨基苄基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001001
将5-氨基-1-(2-硝基苄基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1g,2.55mmol)、Fe粉(0.86g,15.3mmol)、MH4Cl(95mg,1.785mmol)在EtOH(45mL)和H2O(15mL)中的反应混合物在80℃搅拌3h，然后将其倾入水中，然后用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(己烷/乙酸乙酯1:2至MeOH/DCM 1:50洗脱)进行纯化，得到期望产物(0.41g,45％)，其为黄色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+362.0
步骤D：1-(2-丙烯酰氨基苄基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001002
向5-氨基-1-(2-氨基苄基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.41g,1.13mmol)、NaHCO3(0.19g,2.26mmol)在CH3CN(18mL)和H2O(4mL)中的混合物中加入丙烯酰氯(0.113g,1.25mmol)在CH3CN(2mL)中的溶液，然后将混合物在室温搅拌1小时。在减压下除去溶剂，然后将残余物在水与DCM之间进行分配。将有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到期望产物(0.34g,72％)，其为白色固体。1H NMR(DMSO-d6)δ10.20(s,1H),7.70(d,1H,J＝8Hz),7.30(t,1H,J＝7.6Hz),7.13(t,1H,J＝7.6Hz),7.07(s,5H),6.66(s,2H),6.54-6.47(dd,1H,J＝10.4Hz),6.35(s,2H),6.28-6.32(dd,1H,J＝1.6Hz),5.77-5.80(dd,1H,J＝1.6Hz),5.13(s,2H),3.42(m,1H),2.77-3.04(m,4H),2.13-2.16(m,1H)和1.69-1.73(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+416。分离条件如下所示：仪器：Gilson-281，柱尺寸：21.2×150 5μm Gemini-new，流速：20mL/min，UV：214nm。方法：0.1％TFA/水,CH3CN在11分钟内从42至50，然后在3分钟内从50至90，在90保持3分钟，然后平衡2分钟。总运行时间：20分钟。单一梯度方法。
通过手性制备型HPLC将化合物1.20分离成两种对映异构的立体异构体化合物1.20a(峰1，R或S，在先峰，手性分析中的保留时间为6.59分钟)和化合物1.20b(峰2，S或R，在后峰，手性分析中的保留时间为10.46分钟)。
Figure BDA0001210200830001011
手性分离条件如下所示。
Figure BDA0001210200830001012
手性分析条件如下所示。
Figure BDA0001210200830001013
Figure BDA0001210200830001021
化合物1.21:1-(3-丙烯酰氨基苯基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001022
步骤A：5-氨基-1-(3-硝基苯基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830001023
向2-(甲氧基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈(化合物1.14的合成中步骤E的产物,10g,42mmol)在EtOH(50ml)中的溶液中加入(3-硝基苯基)肼盐酸盐(9.6g,50.4mmol)和Et3N(13g,126mmol)。将混合物在90℃在下N2搅拌6小时。冷却至室温后，在真空中除去溶剂。然后溶于H2O(50ml)中，用EtOAc(50ml×3)萃取，以Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗产物，将其通过用EtOAc:PE:Et3N＝1:4:0.001洗脱的硅胶色谱柱(200g)进一步进行纯化，得到产物(2.8g,19％)，其为棕色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+360。
步骤B：5-氨基-1-(3-硝基苯基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001031
将5-氨基-1-(3-硝基苯基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈(2.8g,7.8mmol)在MeSO3H(50ml)中的溶液在85℃在N2下搅拌40分钟。LC/MS显示反应完成。然后将混合物倾入冰-水中，用NaOH碱化至pH＝10，然后用EtOAc(100ml×3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩，得到产物(2g,69％)，其为棕色油状物，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+378。
步骤C：5-氨基-1-(3-氨基苯基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001032
向5-氨基-1-(3-硝基苯基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(2g,5.3mmol)在EtOH(50ml)和H2O(10ml)中的溶液中加入铁粉(1.5g,26.5mmol)和NH4Cl(843mg,15.9mmol)。将混合物在90℃搅拌1小时。将固体过滤，然后浓缩滤液，得到粗产物。向粗产物中加入H2O(50ml)并用EtOAc(50ml×3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗产物(1.5g,83％)，其为棕色固体，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+348。
步骤D：1-(3-丙烯酰氨基苯基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001033
在0℃向5-氨基-1-(3-氨基苯基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.5g,4.3mmol)在CH3CN(20ml)和H2O(5ml)中的溶液中加入NaHCO3(1.1g,12.9mmol)和丙烯酰氯(391mg,4.3mmol)。将混合物在0℃搅拌10分钟，然后用水(20mL)淬灭，用EtOAc(20ml×3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC进一步进行纯化，得到产物(781.02mg,45％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),7.87-7.79(m,1H),7.69-7.73(m,1H),7.43-7.48(m,1H),7.24-7.28(m,1H),7.06-7.12(m,3H),6.79(s,2H),6.26-6.49(m,4H),5.77-5.81(m,1H),3.43-3.49(m,1H),2.81-3.08(m,4H),2.20-2.24(m,1H)和1.73-1.78(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+402。
化合物1.22：1-(((R)-4-丙烯酰基吗啉-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001041
步骤A：5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001042
将化合物1.14的合成中步骤F的产物(2.3g,8.8mmol)在MsOH(10mL)中的溶液在70℃搅拌6小时。将所得溶液倾入水中，用5N NaOH水溶液中和至pH＝8，然后用EA(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(3.3g)，其为白色固体。将固体用DCM(10mL)进行重结晶，得到期望产物(2.3g,100％)，其为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60(br.s,1H),7.27-6.97(m,4H),6.71(br.s,2H),5.48(br.s,2H),3.450-3.40(m,1H),3.13-2.70(m,4H),2.15-2.00(m,1H),1.90-1.70(m,1H)ppm。MS：M/e 257(M+1)+
步骤B：(R)-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001051
将(R)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2.0g,9.21mmol)、DMAP(114mg,0.92mmol)、甲苯磺酰氯(TsCl,1.93g,10.13mmol)和Et3N(2.65mL,18.42mmol)在DCM(20mL)中的混合物在室温搅拌2小时。将所得溶液用水洗涤，用萃取DCM(10mL x 3).将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE:EA＝2:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(2.62g,77％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),4.10-3.94(m,2H),3.94-3.72(m,3H),3.65-3.55(m,1H),3.53-3.38(m,1H),3.01-2.80(m,1H),2.69-2.61(m,1H),2.45(s,3H),1.45(s,9H)ppm。MS：M/e372(M+1)+
步骤C：(2R)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001052
将步骤A的产物(200mg,0.78mmol)、步骤B的产物(348mg,0.94mmol)和Cs2CO3(509mg,1.56mmol)在DMF(10mL)中的混合物在70℃搅拌4小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用EA洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(219mg,62％)，其为黄色油状物。MS：M/e 456(M+1)+
步骤D：5-氨基-1-((R)-吗啉-2-基甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001053
向步骤C的产物(219mg,0.48mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(171mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 356(M+1)+
步骤E：1-(((R)-4-丙烯酰基吗啉-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001061
将步骤D的产物(171mg,0.48mmol)和NaHCO3(242mg,32.88mmol)在CH3CN/H2O(4mL/4mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(43mg,0.48mmol)。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，然后通过用DCM:MeOH＝20:1洗脱的硅胶色谱进行纯化，得到期望产物(51mg,26％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.10-7.00(m,4H),6.66(dd,J＝16.8,10.6Hz,1H),6.37(s,2H),6.07(dd,J＝16.8,2.0Hz,1H),5.94(br.s,2H),5.64(dd,J＝10.6,2.0Hz,1H),4.20-3.85(m,5H),3.75-3.65(m,1H),3.48-3.27(m,2H),3.04-2.71(m,6H),2.20-2.05(m,1H),1.81-1.75(m,1H)ppm。MS：M/e 410(M+1)+
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.22所述的操作，制备化合物1.23至1.31。
化合物1.23：1-(((S)-4-丙烯酰基吗啉-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001062
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.12-6.99(m,4H),6.66(dd,J＝16.8,10.6Hz,1H),6.37(s,2H),6.07(dd,J＝16.8,2.2Hz,1H),5.93(s,2H),5.64(dd,J＝10.6,2.2Hz,1H),4.22-3.80(m,5H),3.77-3.64(m,1H),3.47-3.29(m,2H),3.01-2.70(m,6H),2.20-2.07(m,1H),1.85-1.68(m,1H)ppm。MS：M/e 410(M+1)+
化合物1.24：1-(((S)-1-丙烯酰基氮杂环丁-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001071
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.15-6.93(m,4H),6.37(s,2H),6.17-5.79(m,4H),5.69-5.41(m,1H),4.81-4.52(m,1H),4.37-4.12(m,2H),4.05-3.69(m,2H),3.47-3.24(m,1H),3.02-2.70(m,4H),2.41-2.21(m,1H),2.19-1.95(m,2H),1.87-1.64(m,1H)ppm。MS：M/e 380(M+1)+
化合物1.25：1-(((R)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001072
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.17-6.93(m,4H),6.66-6.42(m,1H),6.35(s,2H),6.16(d,J＝17.2Hz,1H),5.99(s,2H),5.78-5.35(m,1H),4.48-4.14(m,1H),4.14-3.97(m,1H),3.99-3.78(m,1H),3.64-3.24(m,3H),3.04-2.71(m,4H),2.23-2.02(m,1H),1.98-1.64(m,5H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
化合物1.26：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001081
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.18-6.93(m,4H),6.60-6.40(m,1H),6.34(s,2H),6.08-6.03(m,3H),5.62(d,J＝10.0Hz,1H),3.95-3.79(m,2H),3.67-3.08(m,5H),3.04-2.52(m,5H),2.21-2.05(m,1H),2.01-1.40(m,3H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
化合物1.27：1-(((R)-1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001082
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.18-6.93(m,4H),6.60-6.40(m,1H),6.34(s,2H),6.10-6.03(s,2H),5.60(d,J＝10.0Hz,1H),3.95-3.74(m,2H),3.67-3.08(m,5H),3.04-2.50(m,5H),2.28-2.05(m,1H),2.01-1.50(m,3H)ppm。MS：M/e 394(M+1)+
化合物1.28：1-((1-丙烯酰基氮杂环丁-3-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001091
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.15-6.98(m,4H),6.35(s,2H),6.29-6.16(m,1H),6.13-5.97(m,3H),5.60(d,J＝10.4Hz,1H),4.31-3.63(m,6H),3.42-3.27(m,1H),3.05-2.68(m,5H),2.17-2.03(m,1H),1.86-1.67(m,1H)ppm。MS：M/e 380(M+1)+
化合物1.29：1-(1-丙烯酰基氮杂环丁-3-基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001092
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.20-6.99(m,4H),6.72(s,2H),6.47-6.31(m,1H),6.26(s,2H),6.13(d,J＝16.8Hz,1H),5.69(d,J＝10.4Hz,1H),5.25-5.06(m,1H),4.59-4.55(m,1H),4.50-4.40(m,1H),4.37-4.12(m,2H),3.50-3.35(m,1H),3.11-2.68(m,4H),2.25-2.07(m,1H),1.86-1.62(m,1H)ppm。MS：M/e 366(M+1)+
化合物1.30：1-(((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001093
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.85-6.51(m,3H),6.20(s,2H),6.10-5.98(m,1H),5.60(dd,J＝27.6,10.0Hz,1H),4.29-4.02(m,1H),3.95-3.72(m,3H),3.47-3.35(m,2H),3.04-2.73(m,5H),2.13(d,J＝11.8Hz,1H),2.00-1.59(m,4H),1.40-1.08(m,2H)ppm。MS：M/e 408(M+1)+
化合物1.31：1-(((S)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001101
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.89-6.47(m,3H),6.20(s,2H),6.03(d,J＝16.4Hz,1H),5.60(dd,J＝27.6,10.8Hz,1H),4.30-4.02(m,1H),3.95-3.68(m,3H),3.45-3.34(m,2H),3.06-2.72(m,5H),2.17-2.07(m,1H),1.99-1.56(m,4H),1.39-1.08(m,2H)ppm。MS：M/e 408(M+1)+
化合物1.32：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(色满-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.19所述的操作，制备化合物1.32。
Figure BDA0001210200830001102
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.05-7.08(m,2H),6.74-6.83(m,2H),6.48-6.50(m,3H),5.96-6.18(m,3H),5.48-5.68(m,1H),4.37-4.41(m,1H),3.90-4.21(m,4H),3.47-3.66(m,3H),2.98-3.02(m,2H),1.81-1.82(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+396。
化合物1.33：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.10所述的操作，制备化合物1.33。
Figure BDA0001210200830001111
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.19-7.21(dd,J＝2.0Hz,1H),7.05-7.12(m,2H),6.25-6.61(m,3H),6.07-6.14(m,1H),5.99(s,2H),5.44-5.67(m,1H),4.16-4.36(m,1H),3.85-4.08(m,2H),3.31-3.47(m,3H),2.97-3.05(m,2H),2.85-2.90(m,1H),2.75-2.80(m,1H),2.17-2.20(m,1H),1.74-1.86(m,5H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
通过手性制备型HPLC将化合物1.33分成两种对映异构的立体异构体化合物1.33a(峰1，R或S，在先峰，手性分析中的保留时间为4.68分钟)和化合物1.33b(峰2，S或R，在后峰，手性分析中的保留时间为5.30分钟)。
Figure BDA0001210200830001112
分离条件如下所示：
Figure BDA0001210200830001113
Figure BDA0001210200830001121
手性分析条件如下所示。
Figure BDA0001210200830001122
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.7所述的操作，制备化合物1.34至1.36。
化合物1.34
Figure BDA0001210200830001131
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.90(br.s,2H),6.83-6.76(m,1H),6.64-6.48(m,4H),6.30–6.16(m,2H),5.75-5.71(m,1H),5.35-5.31(m,1H),4.26-4.20(m,1H),4.11-4.05(m,1H),3.97-3.92(m,1H),3.70-3.38(m,4H),2.96-2.91(m,3H),1.96-1.75(m,4H)ppm。MS：M/e429(M+1)+
化合物1.35
Figure BDA0001210200830001132
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.90-6.56(m,7H),6.31-6.16(m,2H),5.75–5.71(m,1H),5.20-5.16(m,1H),4.28-4.18(m,1H),4.12-3.90(m,2H),3.65-3.28(m,4H),2.91(s,3H),2.01-1.75(m,4H)ppm。MS：M/e 429(M+1)+
化合物1.36
Figure BDA0001210200830001133
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ6.80-5.89(m,9H),5.80-5.40(s,1H),5.34(dd,J＝8.0,2.8Hz,1H),4.50-3.80(m,3H),3.65-3.30(m,4H),2.87(s,3H),1.95-1.75(m,4H),ppm。MS：M/e 429(M+1)+。
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.10所述的操作，制备化合物1.37至1.45。
化合物1.37
Figure BDA0001210200830001141
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.17-7.05(m,1H),6.97-6.84(m,2H),6.70-6.54(m,3H),6.27-5.95(m,3H),5.79-5.41(m,1H),4.42-3.87(m,4H),3.84-3.75-3.62(m,2H),3.51-3.23(m,4H),3.04-2.72(m,4H),2.19-1.98(m,2H),1.96-1.62(m,2H)。MS：M/e 442(M+1)+
化合物1.38
Figure BDA0001210200830001142
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.15-7.02(m,,4H),6.71-6.53(m,2H),6.28-5.98(m,3H),5.79-5.42(m,1H),4.44-3.87(m,4H),3.81-3.65(m,2H),3.48-3.40-3.35(m,1H),3.30-3.25(m,3H),3.05-2.73(m,4H),2.20-1.97(m,2H),1.96-1.62(m,2H)。MS：M/e 424(M+1)+
化合物1.39
Figure BDA0001210200830001151
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.19-7.06(m,1H),6.99-6.87(m,2H),6.69-6.50(m,3H),6.27-5.98(m,3H),5.77-5.43(m,1H),4.48-4.20(m,1H),4.16-3.85(m,2H),3.79-3.60(m,1H),3.57-3.38(m,3H),3.23-3.12(m,3H),3.04-2.75(m,4H),2.14-2.04(m,1H),1.98-1.90(m,1H),1.90-1.63(m,2H)。MS：M/e 442(M+1)+
化合物1.40
Figure BDA0001210200830001152
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.74-6.45(m,3H),6.25-5.98(m,3H),5.78-5.41(m,1H),4.52-4.22(m,1H),4.15-3.85(m,2H),3.79-3.60(m,1H),3.58-3.36(m,3H),3.22-3.14(m,3H),3.06-2.74(m,4H),2.17-2.03(m,1H),2.01-1.82(m,2H),1.78-1.63(m,1H)。MS：M/e 424(M+1)+
化合物1.40a：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-甲氧基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对手性合成化合物1.14a所述的操作，制备化合物1.40a。
Figure BDA0001210200830001161
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.66-6.49(m,3H),6.25-5.98(m,3H),5.75-5.43(m,1H),4.48-4.21(m,1H),4.13-3.85(m,2H),3.80-3.60(m,1H),3.58-3.35(m,3H),3.22-3.14(m,3H),3.06-2.74(m,4H),2.16-2.04(m,1H),2.02-1.83(m,2H),1.78-1.66(m,1H)。MS：M/e 424(M+1)+
化合物1.41
Figure BDA0001210200830001162
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.09(d,J＝6.0Hz,1H),6.95-6.75(m,2H),6.60-6.25(m,3H),6.25-6.04(m,1H),5.90(s,2H),5.79-5.43(m,1H),4.76-4.40(m,1H),4.23-3.95(m,3H),3.78(s,1H),3.46-3.23(m,1H),3.02-2.54(m,5H),2.47-2.29(m,1H),2.18-1.99(m,1H),1.86-1.65(m,1H)ppm。MS：M/e 448(M+1)+
化合物1.42：1-(((S)-1-丙烯酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001171
步骤A：5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001172
将5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈(2.1g,8.8mmol)在甲磺酸(10mL)中的溶液在70℃搅拌4小时。将所得溶液倾入水中，用5N NaOH水溶液中和至pH＝8，然后用EA(50mL x 3)萃取。将合并的有机层以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到3.3g白色固体，将其通过DCM进行重结晶，得到期望产物(2.3g,99％)，其为白色固体。MS：M/e 257(M+1)+
Figure BDA0001210200830001181
步骤A：(S)-4,4-二氟吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯
Figure BDA0001210200830001182
在-78℃，在氮气气氛下，历时30分钟，向(S)-4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(5g,20.55mmol)在无水DCM(100mL)中的经搅拌溶液中滴加二乙基氨基三氟化硫(DAST,8.5mL,61.66mol)。将反应混合物在该温度搅拌1稀释，然后在室温搅拌16小时。将反应混合物倾入碎冰与饱和NaHCO3水溶液的混合物中直至pH＝8。分离各层，然后将水层用DCM(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水Na2SO4干燥，然后浓缩，得到粗产物(4.7g,黄色油状物)，将其直接用于下一步骤中。MS：M/e 210(M-55)+。
步骤B：(S)-4,4-二氟-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001183
向步骤A的产物(4.7g,17.72mmol)在THF(20mL)中的溶液中先后加入NaBH4(1.88g,44.30mmol)和LiCl(1.48g,38.98mmol)。将混合物溶液冷却至0℃，滴加EtOH(30mL)。将终溶液在室温搅拌15小时。然后将溶液冷却至0℃，用4N HCl中和至pH＝4，然后浓缩。将残余物用水洗涤，用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层以无水Na2SO4干燥，然后浓缩，得到粗产物(3.7g,88％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 182(M-55)+。
步骤C：(S)-4,4-二氟-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001191
将步骤B的产物(3.7g,15.6mmol)、TsCl(3.27g,17.2mmol)、DMAP(193mg,1.56mmol)和Et3N(4.5mL,31.2mmol)在DCM(15mL)中的混合物在室温搅拌4小时。将所得溶液用水洗涤，用DCM(20mL×3)萃取。将合并的有机层以Na2SO4干燥，浓缩，然后通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(5.2g,85％)，其为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.77(d,J＝7.8Hz,2H),7.36(d,J＝7.8Hz,2H),4.33-3.92(m,3H),3.89-3.67(m,1H),3.64-3.41(m,1H),2.58-2.24(m,5H),1.47(s,9H)ppm。MS：M/e 292(M-100+1)+
步骤D：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-4,4-二氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001192
将步骤C的产物(4.58g,11.7mmol)、5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.0g,7.8mmol)和Cs2CO3(5.08g,15.6mmol)在DMF(20mL)中的混合物在70℃搅拌15小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用EA洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(1.8g,49％)，其为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.17-6.98(m,4H),6.61(s,2H),6.10(s,2H),4.41-4.18(m,1H),4.13-3.95(m,2H),3.89-3.65(m,1H),3.55-3.34(m,2H),3.09-2.70(m,4H),2.43-2.24(m,1H),2.20-2.05(m,1H),1.81-1.59(m,1H),1.40(s,9H)ppm。MS：M/e 476(M+1)+
步骤E：5-氨基-1-(((S)-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001201
向步骤D的产物(414mg,0.87mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(326mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 376(M+1)+
步骤F：1-(((S)-1-丙烯酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001202
将步骤E的产物(326mg,0.86mmol)和NaHCO3(289mg,3.44mmol)在CH3CN/H2O(8mL/8mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(78mg,0.86mmol)在CH3CN(1mL)中的溶液。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE/EA＝1/1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(200mg,54％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.17-6.89(m,4H),6.52-6.27(m,3H),6.25-6.04(m,1H),5.95(s,2H),5.78-5.46(m,1H),4.71-4.41(m,1H),4.24-3.91(m,3H),3.89-3.62(m,1H),3.44-3.23(m,1H),3.01-2.70(m,4H),2.70-2.52(m,1H),2.44-2.28(m,1H),2.21-2.01(m,1H),1.87-1.65(m,1H)ppm。MS：M/e 430(M+1)+
化合物1.42a或1.42b：(R或S)1-(((S)-1-丙烯酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001211
步骤A：(R或S)(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-4,4-二氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001212
将(S)-4,4-二氟-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.58g,11.7mmol)、5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.0g,7.8mmol)和Cs2CO3(5.08g,15.6mmol)在DMF(20mL)中的混合物在70℃搅拌15小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用EA洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(1.4g,38％)，其为黄色油状物，将其通过手性HPLC进行分离，得到峰1(600mg,在先峰)和峰2(600mg,在后峰)。
手性分离条件如下所示：
Figure BDA0001210200830001221
步骤B：(R或S)5-氨基-1-(((S)-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001222
向步骤A的产物(600mg,1.26mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(5mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(473mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 376(M+1)+
步骤C：(R或S)1-(((S)-1-丙烯酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001231
将步骤B的产物(473mg,1.26mmol)和NaHCO3(423mg,5.04mmol)在CH3CN/H2O(12mL/12mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(113mg,1.26mmol)在CH3CN(1mL)中的溶液。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE/EA＝1/1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(372mg,69％)，其为白色固体。峰1(化合物1.42a,保留时间：5.391min)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.18-6.96(m,4H),6.58-6.27(m,3H),6.26-6.07(m,1H),5.97(s,2H),5.82-5.46(m,1H),4.73-4.44(m,1H),4.22-3.96(m,3H),3.90-3.64(m,1H),3.47-3.25(m,1H),3.00-2.73(m,4H),2.68-2.54(m,1H),2.45-2.35(m,1H),2.19-2.01(m,1H),1.86-1.67(m,1H)ppm。MS：M/e 430(M+1)+。ee：100％。峰2(化合物1.42b,保留时间：6.044min)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.20-6.93(m,4H),6.55-6.29(m,3H),6.25-6.05(m,1H),5.97(s,2H),5.76-5.31(m,1H),4.80-4.38(m,1H),4.23-3.92(m,3H),3.91-3.61(m,1H),3.47-3.22(m,1H),3.01-2.70(m,4H),2.64-2.53(m,1H),2.43-2.27(m,1H),2.23-2.00(m,1H),1.91-1.67(m,1H)ppm。MS：M/e 430(M+1)+。ee：100％。
手性分析条件如下所示。
Figure BDA0001210200830001232
化合物1.42a：1-(((S)-1-丙烯酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001241
步骤A：(S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-4,4-二氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001242
将(S)-4,4-二氟-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(229mg,0.58mmol)、(R)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(100mg,0.39mmol)和Cs2CO3(254mg,0.78mmol)在DMF(10mL)中的混合物在70℃搅拌15小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用EA洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(100mg,54％)，其为黄色油状物。MS：M/e 476(M+1)+
步骤B：5-氨基-1-(((S)-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001251
向步骤A的产物(100mg,0.21mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(79mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 376(M+1)+
步骤C：1-(((S)-1-丙烯酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001252
将步骤B的产物(79mg,0.21mmol)和NaHCO3(70mg,0.84mmol)在CH3CN/H2O(2mL/2mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(19mg,0.21mmol)。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE/EA＝1/1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(45mg,50％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.18-6.96(m,4H),6.58-6.27(m,3H),6.26-6.07(m,1H),5.97(s,2H),5.82-5.46(m,1H),4.73-4.44(m,1H),4.22-3.96(m,3H),3.90-3.64(m,1H),3.47-3.25(m,1H),3.00-2.73(m,4H),2.68-2.54(m,1H),2.45-2.35(m,1H),2.19-2.01(m,1H),1.86-1.67(m,1H)ppm。MS：M/e 430(M+1)+。ee：100％。
化合物1.43：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001261
步骤A：(2S,4R)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯
Figure BDA0001210200830001262
历时30分钟向冷却至-78℃的(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(10g,40.77mmol)在无水DCM(100mL)中的经搅拌溶液中滴加二乙基氨基三氟化硫(9.5mL,77.47mol)。将反应混合物在该温度搅拌1小时，然后在室温搅拌16小时。将反应混合物倾入碎冰与饱和NaHCO3水溶液的混合物中直至pH＝8。分离各层，然后将水层用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水Na2SO4干燥，然后浓缩，得到粗产物(10g,黄色油状物)，将其直接用于下一步骤中。MS：M/e 148(M-100+1)+。
步骤B：(2S,4R)-4-氟-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001271
向步骤A的产物(10g,40.44mmol)在THF(100mL)中的溶液中先后加入NaBH4(4.3g,101.10mmol)和LiCl(3.3g,88.98mmol)。将混合物溶液冷却至0℃，滴加EtOH(100mL)。将终溶液在室温搅拌15小时。然后将该溶液冷却至0℃，用4N HCl中和至pH＝4，然后浓缩。将残余物用水洗涤，用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到粗产物(8.86g,黄色油状物)，将其直接用于下一步骤中。MS：M/e 164(M-55)+.
步骤C：(2S,4R)-4-氟-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001272
将步骤B的产物(8.86g,40.44mmol)、TsCl(8.48g,44.50mmol)、DMAP(496mg,4mmol)和Et3N(8.7mL,60.67mmol)在DCM(40mL)中的混合物在室温搅拌4小时。将所得溶液用水洗涤，用DCM(20mL×3)萃取。将合并的有机层以Na2SO4干燥，浓缩，然后通过用PE:EA＝5:1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(6.0g,历经3步40％)，其为黄色油状物。MS：M/e 274(M-100+1)+
步骤D：(2S,4R)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001273
将步骤C的产物(3.26g,8.74mmol)、5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.6g,6.24mmol)和Cs2CO3(4.0g,12.48mmol)在DMF(20mL)中的混合物在70℃搅拌15小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用EA洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(800mg,28％)，其为黄色油状物。MS：M/e 458(M+1)+
步骤E：5-氨基-1-(((2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001281
向步骤D的产物(525mg,1.14mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(410mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 358(M+1)+
步骤F：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001282
将步骤E的产物(410mg,1.15mmol)和NaHCO3(386mg,4.6mmol)在CH3CN/H2O(10mL/10mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(103mg,1.15mmol)。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE/EA＝1/1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(240mg,51％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.13-6.98(m,4H),6.60-6.42(m,1H),6.36(s,2H),6.25-6.04(m,1H),5.93(s,2H),5.79-5.40(m,1H),5.32-4.97(m,1H),4.58-4.30(m,1H),4.30-3.65(m,3H),3.60-3.24(m,2H),3.01-2.62(m,4H),2.29-1.99(m,3H),1.87-1.68(m,1H)ppm。MS：M/e 412(M+1)+
化合物1.43a或1.43b：(R或S)1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001291
步骤A：(R或S)(2S,4R)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001292
将(2S,4R)-4-氟-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.26g,8.74mmol)、5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.6g,6.24mmol)和Cs2CO3(4.0g,12.48mmol)在DMF(20mL)中的混合物在70℃搅拌15小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用洗EA脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(1.2g,42％)，其为黄色油状物，通过手性HPLC进行分离，得到峰1(0.37g,在先峰)和峰2(0.37g,在后峰)。手性分离条件如下所示：
Figure BDA0001210200830001301
步骤B：(R或S)5-氨基-1-(((2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001302
向步骤B的产物(370mg,0.81mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(5mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(291mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 358(M+1)+
步骤C：(R或S)1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001311
将步骤B的产物(291mg,0.81mmol)和NaHCO3(272mg,3.24mmol)在CH3CN/H2O(7mL/7mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(73mg,0.81mmol)。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE/EA＝1/1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(213mg,64％)，其为白色固体。峰1(化合物1.43a,保留时间：5.456min)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.22-6.94(m,4H),6.64-6.44(m,1H),6.36(s,2H),6.22-6.06(m,1H),5.91(s,2H),5.79-5.44(m,1H),5.35-4.90(m,1H),4.64-4.31(m,1H),4.20-3.71(m,3H),3.54-3.26(m,2H),3.02-2.67(m,4H),2.34-1.97(m,3H),1.89-1.69(m,1H)ppm。MS：M/e 412(M+1)+。ee：100％。峰2(化合物1.43b,保留时间：6.985min)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.13-6.97(m,4H),6.59-6.43(m,1H),6.36(s,2H),6.23-6.05(m,1H),5.93(s,2H),5.77-5.46(m,1H),5.32-4.99(m,1H),4.63-4.31(m,1H),4.28-3.66(m,3H),3.58-3.22(m,2H),3.00-2.69(m,4H),2.26-1.96(m,3H),1.89-1.69(m,1H)ppm。MS：M/e 412(M+1)+。ee：100％。
手性分析条件如下所示。
Figure BDA0001210200830001312
化合物1.43a：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001321
步骤A：(2S,4R)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001322
将(2S,4R)-4-氟-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(219mg,0.58mmol),(R)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(100mg,0.39mmol)和Cs2CO3(254mg,0.78mmol)在DMF(10mL)中的混合物在70℃搅拌15小时。浓缩所得溶液。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用EA洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(90mg,51％)，其为黄色油状物。MS：M/e 458(M+1)+
步骤B：5-氨基-1-(((2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001331
向步骤B的产物(90mg,0.20mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。将溶液在室温搅拌1小时。将所得溶液浓缩，得到粗产物(70mg,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 358(M+1)+
步骤C：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001332
将步骤B的产物(70mg,0.20mmol)和NaHCO3(67mg,0.80mmol)在CH3CN/H2O(2mL/2mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(18mg,0.20mmol)。终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用PE/EA＝1/1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(30mg,37％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.13-6.95(m,4H),6.62-6.43(m,1H),6.35(s,2H),6.22-6.06(m,1H),5.92(s,2H),5.78-5.39(m,1H),5.32-4.94(m,1H),4.61-4.32(m,1H),4.26-3.70(m,3H),3.57-3.22(m,2H),3.00-2.70(m,4H),2.27-1.97(m,3H),1.88-1.66(m,1H)ppm。MS：M/e 412(M+1)+。ee：100％。
化合物1.43a的替代路线：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-氟吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001341
步骤A：(2S,4R)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁酯)·2-甲酯
Figure BDA0001210200830001342
将(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁酯)·2-甲酯(10g,40.77mmol)在DCM(100mL)中的溶液冷却至-78℃，搅拌5分钟。然后历时约10分钟滴加DAST(9.5mL,77.47mmol)。将终溶液在-78℃至室温搅拌48h。将所得溶液倾入具有2g NaHCO3的冰-水中并搅拌15分钟，然后用DCM(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(10g)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS:M/e248(M+1)+
步骤B：(2S,4R)-4-氟-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001343
向步骤A的粗产物(10g,40mmol)在THF(100mL)中的溶液中先加入NaBH4(4.3g,100mmol)和LiCl(3.3g,88mmol)。将溶液冷却至0℃，然后滴加EtOH(100mL)。将终溶液在0℃至室温搅拌15小时。将所得溶液冷却至0℃，加入4N HCl直至pH＝4，然后浓缩。将残余物用水洗涤，用DCM(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(8.86g,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS:M/e 220(M+1)+
步骤C：(2S,4R)-4-氟-2-甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001351
将草酰氯(4mL,47.43mmol)在无水DCM(100mL)中的溶液冷却至-78℃。历时约30分钟在-78℃向该溶液中先后滴加DMSO(3.6mL,51.07mmol)在DCM(10mL)中的溶液和步骤B的粗产物(8g,36.48mmol)在DCM(25mL)中的溶液，然后加入三乙胺(20mL,145.92mmol)。将终溶液在-78℃搅拌30分钟，然后在0℃搅拌1h。将所得溶液用水洗涤，用DCM(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(8g,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS:M/e 218(M+1)+
步骤D：(2S,4R)-2-((2-(叔丁氧基羰基)肼基)肼基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001352
将步骤C的粗产物(8g,36.82mmol)和肼基甲酸叔丁酯(4.86g,36.82mmol)在MeOH(10mL)中的混合物在室温搅拌2小时。然后将溶液冷却至0℃，先后加入HOAc(10mL)和NaBH3CN(2.36g,36.82mmol)。将溶液在0℃再搅拌1h。将所得溶液浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)中，用5N NaOH溶液碱化至pH＝8，然后用水洗涤，用DCM(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(8.5g,69％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS:M/e 334(M+1)+
步骤E：(2S,4R)-4-氟-2-(肼基肼基)吡咯烷
Figure BDA0001210200830001361
向步骤D的粗产物(8.5g,25.49mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入TFA(10mL)。将溶液在室温搅拌2h。将所得溶液浓缩。将残余物溶于MeOH/DCM＝1/20的混合溶剂中。向该溶液中加入K2CO3直至pH＝8。将混合物溶液搅拌30分钟，过滤。将滤液浓缩，得到粗产物(3.39g,100％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS:M/e 134(M+1)+
步骤F：5-氨基-1-(((2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-基)肼基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830001362
将步骤E的粗产物(3.39g,25.45mmol)和(R)-2-(甲氧基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈(3g,12.72mmol)在EtOH(5mL)中的混合物在室温搅拌4小时。将残余物用水洗涤，用EA(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用EA洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(3.4g,79％)，其为黄色油状物。MS:M/e340(M+1)+。
步骤G：5-氨基-1-(((2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-基)肼基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001363
将步骤F的产物(3.4g,10mmol)在MsOH(15mL)中的溶液在70℃搅拌4小时。将所得溶液冷却至室温，用5N NaOH水溶液中和至pH＝8，然后用DCM(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物(2.8g,80％)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS:M/e 358(M+1)+
步骤H：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-氟吡咯烷-2-基)肼基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001371
将步骤G的粗产物(2.8g,7.83mmol)和NaHCO3(1.3g,15.66mmol)在CH3CN/H2O(20mL/20mL)中的混合物在0℃搅拌5分钟。在0℃滴加丙烯酰氯(705mg,7.83mmol)。将终溶液在0℃搅拌5分钟，用水淬灭，然后用EA(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，以无水硫酸钠干燥，然后浓缩，通过用T PE/EA＝1/1洗脱的硅胶柱色谱进行纯化，得到期望产物(1.8g,56％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.13–6.95(m,4H),6.62–6.43(m,1H),6.35(s,2H),6.22–6.06(m,1H),5.92(s,2H),5.78–5.39(m,1H),5.32–4.94(m,1H),4.61–4.32(m,1H),4.26–3.70(m,3H),3.57–3.22(m,2H),3.00–2.70(m,4H),2.27–1.97(m,3H),1.88–1.66(m,1H)ppm.MS:M/e 412(M+1)+。ee:100％。
化合物1.44
Figure BDA0001210200830001372
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.17-7.02(m,1H),6.95-6.77(m,2H),6.67-6.23(m,3H),6.21-5.80(m,3H),5.75-5.40(m,1H),5.30-4.98(m,1H),4.67-4.32(m,1H),4.27-3.68(m,3H),3.62-3.25(m,2H),3.01-2.70(m,4H),2.29-1.95(m,3H),1.87-1.57(m,1H)ppm。MS：M/e 430(M+1)+
化合物1.45
Figure BDA0001210200830001381
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.13-6.86(m,4H),6.72-6.27(m,3H),6.26-5.59(m,4H),5.52-5.14(m,1H),4.73-3.46(m,5H),3.41-3.24(m,1H),3.04-2.68(m,4H),2.38-1.97(m,3H),1.91-1.66(m,1H)ppm。MS：M/e 412(M+1)+
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.20所述的操作，制备化合物1.46至1.49。
化合物1.46
Figure BDA0001210200830001382
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),7.70-7.73(dd,J＝2.0,11.2Hz,1H),7.21-7.25(dd,J＝7.2,8.8Hz,1H),7.06-7.09(m,4H),6.99-7.02(m,1H),6.68(s,2H),6.49-6.55(m,1H),6.40(s,2H),6.30-6.35(m,1H),5.80-5.83(m,1H),5.14(s,2H),3.39-3.45(m,1H),2.98-3.03(m,1H),2.85-2.94(m,2H),2.77-2.82(m,1H),2.13-2.16(m,1H),1.67-1.76(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+434。
化合物1.47
Figure BDA0001210200830001391
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.56(s,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(dd,J＝14.8,8.2Hz,1H),7.16-6.94(m,5H),6.69(s,2H),6.51-6.45(m,1H),6.39-6.17(m,3H),5.81(d,J＝11.4Hz,1H),5.19(t,J＝16.8Hz,2H),3.42-3.40(m,1H),2.99(dd,J＝16.4,4.0Hz,1H),2.94-2.68(m,3H),2.12(d,J＝10.6Hz,1H),1.70-1.63(m,1H)。(ESI)m/e[M+1]+434。
化合物1.48
Figure BDA0001210200830001392
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),7.67(dd,J＝8.8,5.5Hz,1H),7.15(td,J＝8.6,3.0Hz,1H),7.07(s,4H),6.76(dd,J＝9.6,2.9Hz,1H),6.69(s,2H),6.49(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.36(s,2H),6.30(dd,J＝17.0,1.7Hz,1H),5.80(dd,J＝10.2,1.6Hz,1H),5.12(s,2H),3.51-3.38(m,1H),3.02(dd,J＝16.5,3.9Hz,1H),2.97-2.84(m,2H),2.81(dd,J＝9.6,6.8Hz,1H),2.14(d,J＝10.9Hz,1H),1.71-1.66(m,1H)。(ESI)m/e[M+1]+434。
化合物1.49
Figure BDA0001210200830001401
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),7.32-7.15(m,2H),7.07(s,4H),6.65(s,2H),6.58(d,J＝7.6Hz,1H),6.51(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.31(s,1H),6.26(s,2H),5.81(d,J＝11.1Hz,1H),5.07(s,2H),3.40(d,J＝11.9Hz,1H),3.01(dd,J＝16.6,4.3Hz,1H),2.96-2.68(m,3H),2.14(d,J＝11.2Hz,1H),1.72-1.66(m,1H)。(ESI)m/e[M+1]+434。
化合物1.50
Figure BDA0001210200830001402
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),7.68-7.70(d,J＝11.2Hz,1H),7.24-7.26(d,J＝7.6Hz,1H),7.07-7.19(m,3H),6.96-7.01(m,1H),6.68(s,2H),6.49-6.56(m,1H),6.40(s,2H),6.30-6.35(m,1H),5.82-5.85(m,1H),5.13(s,2H),3.37-3.45(m,1H),3.01-3.06(m,1H),2.86-2.94(m,2H),2.67-2.79(m,1H),2.20-2.23(m,1H),1.70-1.75(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+468。
化合物1.51：1-(2-丙烯酰氨基-4-氟苄基)-5-氨基-3-(8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001411
步骤A：N-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺
Figure BDA0001210200830001412
在0℃，历时16小时，将5,6,7,8-四氢萘-1-胺(12.7g,86.2mmol)在EtOH(40mL)中的溶液滴至乙酸酐(17.6g,172.4mmol)在无水EtOH(200mL)中的溶液中。在旋转蒸发仪上真空除去溶剂，得到N-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(16.3g,100％)，其为白色固体且该粗品无需进一步纯化即可用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+190
步骤B：N-(8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺
Figure BDA0001210200830001413
将15％MgSO4(1.68g在10mL H2O中的溶液)加至N-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(1.9g,10mmol)在丙酮(30mL)中的混悬液中，然后分若干份加入KMnO4(4.74g,30mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，经硅藻土过滤，然后用DCM和水洗涤。将有机层分出，用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(用己烷/乙酸乙酯1:5洗脱)进行纯化，得到N-(8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(1.2g,60％)，其为黄色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+204
步骤C：8-氯-3,4-二氢萘-1(2H)-酮
Figure BDA0001210200830001421
在65℃将CuCl2和特戊腈(tert-butyl nitrile)(495mg,4.8mmol)在CH3CN(15mL)中的混合物用N-(8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(484mg,3mmol)在CH3CN(5mL)中的溶液进行处理。10分钟后，将混合物冷却至室温，然后在真空下除去溶剂。将残余物在水与EtOAc之间进行分配，将有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(用己烷/乙酸乙酯1:10洗脱)进行纯化，得到8-氯-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(0.36g,67％)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.32-7.33(m,2H),7.16(t,J＝5.2Hz,1H),2.97(t,J＝6.4Hz,2H),2.69(t,J＝6.4Hz,2H),2.07-2.13(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+181。
步骤D：8-氯-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830001422
将NaH(176mg,4.4mmol)加至原甲酸甲酯(5mL)中，然后向其中加入8-氯-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(0.36g,2mmol)在原甲酸甲酯(5mL)中的溶液。将混合物在100℃搅拌1稀释，冷却至室温，倾入水中，用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(用己烷/乙酸乙酯1:15洗脱)进行纯化，得到8-氯-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯(0.28g,59％)，其为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.94(s,1H),7.29-7.31(dd,J＝1.2,8Hz,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.08-7.10(dd,J＝1.2,7.2Hz,1H),3.83(s,3H),2.73-2.77(m,2H),2.46-2.50(m,2H)。MS(ESI)m/e[M+1]+239。
步骤E：8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830001423
将三乙基硅烷(2mL)加至8-氯-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯(0.28g,1.17mmol)在三氟乙酸(5mL)中的溶液，然后将反应混合物在室温搅拌16小时。在真空下除去溶剂，将与甲苯共沸混合物进行浓缩，得到8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯(0.31g,>100％)，其为黄色油状物。粗品无需进一步纯化即可用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+225。
步骤F：8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸
Figure BDA0001210200830001431
将NaOH(0.28g,6.9mmol)在H2O(5mL)中的溶液加至8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸甲酯(0.31g,1.38mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中，然后经反应混合物在室温搅拌1小时。在真空下除去有机物，用HCl水溶液将剩余的水层酸化至pH 2-3。经由过滤收集固体，在真空下干燥，得到8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸(200mg,69％)，其为米色固体。该固体无需进一步纯化即可用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M-1]+209。
步骤G：2-((8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)(羟基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830001432
向8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-甲酸(200mg,0.95mmol)在DCM(10mL)中的混合物中加入HOBT(154mg,1.14mmol)、EDCI(220mg,1.14mmol)和Et3N(192mg,1.9mmol)，在室温搅拌10分钟后，向其中加入丙二腈(63mg,0.95mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。在真空下除去溶剂，将残余物在EtOAc与饱和NaHCO3水溶液之间进行分配。将有机层用NH4Cl水溶液、1.25N H2SO4、盐水洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下浓缩，得到2-((8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)(羟基)亚甲基)丙二腈(200mg,81％)，其为黄色固体。MS(ESI)m/e[M-1]+257。
步骤H：2-((8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830001433
将2-((8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)(羟基)亚甲基)丙二腈(200mg,0.77mmol)在原甲酸三甲酯(5mL)中的反应混合物在100℃搅拌1小时，然后将其冷却至室温，在真空下除去溶剂。将粗品用MeOH进行重结晶，得到2-((8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(120mg,57％)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.22(d,J＝7.6Hz,1H),7.09(t,J＝7.2Hz,1H),7.01(d,J＝7.6Hz,1H),4.43(s,3H),3.24-3.29(m,1H),3.05-3.11(m,1H),2.90-2.93(m,2H),2.73-2.80(m,1H),2.01-2.04(m,1H),1.81-1.87(m,1H)。
步骤I：5-氨基-3-(8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830001441
将水合肼(0.84g,16.8mmol)加至2-((8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(2.3g,8.4mmol)在EtOH(20mL)中的混悬液中，然后将反应混合物在室温搅拌16小时。在真空下除去溶剂，将残余物用MeOH进行重结晶，得到5-氨基-3-(8-氯-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈(2g,87％)，其为白色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+273。
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.20所述的操作，使用步骤I的产物，制备化合物1.51。
Figure BDA0001210200830001442
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),7.67-7.71(dd,J＝2.4,11.6Hz,1H),7.19-7.25(m,2H),7.09-7.16(m,2H),6.97-7.02(m,1H),6.72(s,2H),6.46-6.53(m,1H),6.33(s,2H),6.28-6.33(m,1H),5.75-5.78(m,1H),5.15(s,2H),3.44-3.50(m,1H),3.14-3.19(m,1H),2.80-2.95(m,2H),2.67-2.74(m,1H),2.08-2.12(m,1H),1.65-1.72(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+468。
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.10所述的操作，制备化合物1.52。
Figure BDA0001210200830001451
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23-7.25(d,J＝7.6Hz,1H),7.08-7.15(m,2H),6.52-6.64(m,3H),6.00-6.23(m,3H),5.44-5.72(m,1H),4.18-4.36(m,1H),3.89-4.06(m,2H),3.39-3.55(m,3H),3.07-3.15(m,1H),2.67-2.94(m,3H),2.07(m,1H),1.66-1.94(m,5H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.11所述的操作，制备化合物1.53。
Figure BDA0001210200830001452
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.22-7.25(m,1H),7.11-7.15(m,2H),6.73-6.88(m,1H),6.60(s,2H),6.24(s,2H),6.04-6.14(m,1H),5.61-5.71(m,1H),4.24-4.42(m,1H),3.96-4.05(m,2H),2.71-3.11(m,5H),2.19-2.22(m,1H),1.69-1.92(m,5H),1.42-1.47(m,1H),1.23-1.25(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
通过手性制备型HPLC将化合物1.53分成两种对映异构的立体异构体化合物1.53a(峰1，R或S，在先峰)和化合物1.53b(峰2，S或R，在后峰)。
Figure BDA0001210200830001461
化合物1.53a：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23-7.25(dd,J＝2.8,6.4Hz,1H),7.10-7.15(m,2H),6.73-6.88(m,1H),6.60(s,2H),6.24(s,2H),6.04-6.14(m,1H),5.61-5.71(m,1H),4.16-4.42(m,1H),3.96-4.05(m,2H),3.37-3.44(m,1H),2.71-3.07(m,6H),2.20(m,1H),1.42-1.92(m,5H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
化合物1.53b：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23-7.25(dd,J＝2.0,7.6Hz,1H),7.10-7.15(m,2H),6.73-6.88(m,1H),6.60(s,2H),6.24(s,2H),6.04-6.10(m,1H),5.62-5.71(m,1H),4.16-4.42(m,1H),3.96-4.05(m,2H),3.37-3.44(m,1H),2.71-3.07(m,6H),2.20(m,1H),1.42-1.92(m,5H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
分离条件如下所示。
Figure BDA0001210200830001462
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.14所述的操作，制备化合物1.54至1.60。
化合物1.54
Figure BDA0001210200830001471
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23-7.25(d,J＝7.2Hz,1H),7.08-7.15(m,2H),6.51-6.63(m,2H),6.01-6.20(m,3H),5.47-5.72(m,1H),4.23-4.43(m,1H),3.88-4.14(m,2H),3.38-3.78(m,4H),3.16-3.19(m,3H),2.67-3.05(m,4H),1.75-2.23(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+458。
化合物1.55
Figure BDA0001210200830001472
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23-7.25(d,J＝6.4Hz,1H),7.08-7.15(m,2H),6.51-6.62(m,2H),6.03-6.21(m,3H),5.49-5.74(m,1H),5.08-5.33(m,1H),4.34-4.59(m,1H),3.82-4.21(m,3H),3.35-3.47(m,3H),2.67-3.04(m,4H),1.71-2.20(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+446。
化合物1.56
Figure BDA0001210200830001481
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23-7.25(d,J＝6.8Hz,1H),7.08-7.15(m,2H),6.43-6.63(m,2H),6.21-6.25(m,1H),6.12(s,1H),6.03-6.08(s,1H),5.47-5.79(m,1H),4.49-4.67(m,1H),3.73-4.17(m,4H),3.35-3.42(m,1H),2.66-3.05(m,5H),2.32-2.49(m,1H),2.17-2.29(m,1H),1.68-1.77(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+464。
化合物1.57
Figure BDA0001210200830001482
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.20-7.07(m,3H),6.81(m,1H),6.59(s,2H),6.21(s,2H),6.18-5.97(m,1H),5.77-5.54(m,1H),4.50-3.90(m,3H),3.43(s,1H),3.15-2.71(m,6H),2.17-2.01(m,1H),1.99-1.77(m,3H),1.77-1.59(m,1H),1.44(s,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
化合物1.58
Figure BDA0001210200830001491
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.21-7.05(m,3H),6.82(m,1H),6.59(s,2H),6.21(s,2H),6.17-5.98(m,1H),5.74-5.53(m,1H),4.46-3.89(m,3H),3.48-3.33(m,1H),3.14-2.73(m,6H),2.19-2.03(m,1H),2.01-1.79(m,3H),1.79-1.62(m,1H),1.44(s,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
化合物1.59
Figure BDA0001210200830001492
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38(s,1H),7.18-6.92(m,4H),6.57(s,2H),6.23-5.93(m,3H),5.57(dd,J＝8.8,3.6Hz,1H),4.22-4.02(m,2H),3.34-3.26(m,1H),3.06-2.68(m,4H),2.12(d,J＝13.2Hz,1H),1.69(m,1H),0.74(m,2H),0.65-0.55(m,2H)。MS(ESI)m/e[M+1]+380。
化合物1.60
Figure BDA0001210200830001493
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.07(s,4H),6.58(s,2H),6.24-6.05(m,2H),5.91(s,2H),5.57(dd,J＝10.0,2.3Hz,1H),4.21(s,2H),3.38-3.36(m,1H),3.02-2.77(m,4H),2.28-2.26(m,2H),2.19-1.99(m,3H),1.91-1.52(m,3H)。MS(ESI)m/e[M+1]+394。
化合物1.61：1-((1-(丙烯酰氨基甲基)环丙基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001501
步骤1：(1-(羟基甲基)环丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001502
在0℃向1-氰基环丙烷甲酸乙酯(200mg,1.4mmol)在THF(10ml)中的溶液中加入氢化铝锂(273mg,7.2mmol)。将反应混合物加热至65℃并保持4小时，然后冷却至0℃。加入水(10ml)，过滤并用THF洗涤，加入(Boc)2O(1.1当量)，在室温搅拌2小时。通过制备型TLC(P/E＝2:1)将其纯化，得到白色固体(50mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.11(s,1H),3.50(s,1H),3.38(s,2H),3.11(d,J＝6.4Hz,2H),1.44(d,J＝8.7Hz,9H),0.44(d,J＝6.0Hz,4H)。
步骤2：((1-((5-氨基-4-氰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丙基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001503
在0℃，历时1小时，向(1-(羟基甲基)环丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(200mg,1.01mmol)在DCM (10ml)中的溶液中加入TEA (0.3ml, 2.0mmol)和MsCl (126mg,1.1mmol)。加入10mlNaHCO3，然后用EA(10ml)萃取，以Na2SO4干燥，在真空中浓缩，得到无色油状物，将其直接用于下一步骤中。在60℃将粗产物溶于DMF(5ml)中，加入5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈(190mg,0.8mmol)，然后将混合物60℃在搅拌1小时。TLC显示起始物质(SM)完全消耗。加入25ml水，然后用EA(20ml)萃取，将合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下蒸发，得到无色油状物(400mg)，将其通过制备型TLC(P/E＝1:1)进行纯化，得到白色固体(290mg)。MS(ESI)m/e[M+1]+422。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.11(m,4H),6.80(s,1H),6.56(s,1H),3.87(s,2H),3.05-2.90(m,5H),2.84(dd,J＝9.1,5.4Hz,2H),2.10(d,J＝13.9Hz,1H),1.84(dd,J＝12.9,8.6Hz,1H),1.37(m,9H),1.31(s,2H),0.43(dd,J＝23.2,3.6Hz,4H)。
步骤3：5-氨基-1-((1-(氨基甲基)环丙基)甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001511
将
((1-((5-氨基-4-氰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)环丙基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(290mg)溶于CH3SO3H(6ml)中。将反应混合物加热至110℃并保持40分钟。LC-MS显示SM完全消耗。将混合物冷却至5℃，加入NaHCO3调至pH 7～8，用EA(10ml)萃取，将合并的有机层以Na2SO4干燥，在真空下蒸发，得到黄色固体(280mg)。MS(ESI)m/e[M+1]+340。
步骤4：1-((1-(丙烯酰氨基甲基)环丙基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001521
在0℃向5-氨基-1-((1-(氨基甲基)环丙基)甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(280mg,0.83mmol)在CH3CN(10ml)和水(10ml)中的溶液中加入NaHCO3(208mg,2.48mmol)和丙烯酰氯(89mg,0.99mmol)。将反应混合物在0℃搅拌20分钟。加入10ml水，用EA(10ml)萃取，以Na2SO4干燥，然后在真空下浓缩。将残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝8:1)进行纯化，得到白色固体(37mg)。MS(ESI)m/e[M+1]+394。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(d,J＝5.1Hz,1H),7.07(s,2H),6.61(s,2H),6.27(dd,J＝17.0,10.0Hz,1H),6.09(d,J＝17.0Hz,1H),5.61(d,J＝10.2Hz,1H),3.89(s,2H),3.38(s,1H),3.17(d,J＝4.6Hz,2H),3.04-2.72(m,4H),2.12(d,J＝13.7Hz,1H),1.81-1.66(m,1H),0.53(s,2H),0.40(s,2H)。
化合物1.62：1-((R)-2-丙烯酰氨基-3-环丙基丙基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001522
步骤1：(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-环丙基丙酸
Figure BDA0001210200830001523
将(R)-2-氨基-3-环丙基丙酸(0.5g,3.9mmol)混悬在乙醇(8ml)和水(4ml)中，然后加入1N NaOH(5ml)。将反应混合物冷却至10℃，加入(Boc)2O(950mg,4.3mmol)在THF(4ml)中的溶液，然后在室温搅拌过夜。加入15ml水，用叔丁基甲基醚(MTBE,10ml)洗涤，将水层用3M HCl酸化调至pH 4，用EA(15ml)萃取。将合并的有机层以Na2SO4干燥，在真空下蒸发，得到无色油状物(640mg)。
步骤2：(R)-1-环丙基-3-羟基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001531
在0℃向(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-环丙基丙酸(780mg,3.4mmol)在THF(15ml)中的溶液中加入TEA(0.6ml,4.1mmol)和氯甲酸异丙酯(513mg)。将反应混合物在室温搅拌0.5小时，过滤并用THF洗涤，然后冷却至0℃，加入NaBH4(260mg,6.8mmol)在水(1.5ml)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌2小时。加入20ml水，然后用EA(20ml)萃取，将合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，以Na2SO4干燥，在真空下蒸发，得到白色固体(809mg)。
步骤3：(R)-1-(5-氨基-4-氰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)-3-环丙基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001532
在0℃向(R)-1-环丙基-3-羟基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(809mg,3.8mmol)在DCM(20ml)中的溶液中加入TEA(1.0ml,7.5mmol)和MsCl(0.32ml,4.1mmol)。反应混合物在0℃搅拌1小时。加入NaHCO3(20ml)，然后用DCM(20ml)萃取，以Na2SO4干燥，将其直接用于下一步骤中。将粗产物溶于DMF(6ml)中，然后加入Cs2CO3(1.8g,7.5mmol)和5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈(716mg,3.0mmol)。将反应混合物加热至60℃并保持2小时。将残余物通过制备型TLC(P/E＝1:1)进行纯化，得到白色固体(33mg)。MS(ESI)m/e[M+1]+436。
步骤4：5-氨基-1-((R)-2-氨基-3-环丙基丙基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈盐酸盐
Figure BDA0001210200830001541
将(R)-1-(5-氨基-4-氰基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)-3-环丙基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(500mg)溶于HCl/二噁烷(5ml)。反应混合物在室温搅拌2小时。TLC显示SM完全消耗。在真空下除去溶剂，得到白色固体(460mg)。MS(ESI)m/e[M+1]+336。
步骤5：5-氨基-1-((R)-2-氨基-3-环丙基丙基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001542
向5-氨基-1-((R)-2-氨基-3-环丙基丙基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈盐酸盐(460mg)在甲醇(15ml)中的溶液中加入5M NaOH(5ml)。将反应混合物冷却至10℃，然后加入DMSO(1ml)和30％H2O2(2ml)。将混合物加热至50℃并保持2小时。TLC显示SM完全消耗。在真空下除去溶剂，用水(10ml)稀释，过滤，用水洗涤，在真空下干燥，得到黄色固体(270mg)。MS(ESI)m/e[M+1]+354。
步骤6：1-((R)-2-丙烯酰氨基-3-环丙基丙基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001551
在0℃向5-氨基-1-((R)-2-氨基-3-环丙基丙基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(170mg,0.48mmol)在CH3CN(10ml)和水(8ml)中的溶液中加入NaHCO3(81mg,0.96mmol)和丙烯酰氯(48mg,0.53mmol)。反应混合物在0℃搅拌15分钟。加入10ml水，过滤，然后用水洗涤，得到白色固体，将其通过制备型TLC(DCM/MeOH＝8:1)进行纯化，得到白色固体(80mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21-8.09(m,1H),7.16(d,J＝2.8Hz,4H),6.65(s,2H),6.37-6.10(m,4H),5.67(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.25(dd,J＝8.5,4.7Hz,1H),4.00-3.91(m,2H),3.49-3.42(m,1H),3.10-2.80(m,4H),2.19(d,J＝10.4Hz,1H),1.89-1.70(m,1H),1.54-1.30(m,2H),0.78(d,J＝6.5Hz,1H),0.51-0.37(m,2H),0.21-0.13(m,1H),0.01(dt,J＝8.7,4.8Hz,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+408。
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对合成化合物1.62所述的操作，制备化合物1.63。
Figure BDA0001210200830001552
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(dd,J＝8.3,4.3Hz,1H),7.16(d,J＝2.9Hz,4H),6.65(s,2H),6.34-6.11(m,4H),5.67(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.30-4.20(m,1H),3.96(d,J＝6.1Hz,2H),3.50-3.43(m,1H),3.10-2.81(m,4H),2.19(d,J＝13.1Hz,1H),1.88-1.71(m,1H),1.54-1.30(m,2H),0.79(s,1H),0.51-0.38(m,2H),0.22-0.12(m,1H),0.05-0.04(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+408。
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对合成化合物1.11所述的操作，制备化合物1.64。
Figure BDA0001210200830001561
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23-7.25(d,J＝7.2Hz,1H),7.08-7.15(m,2H),6.59-6.68(m,4H),6.23(s,2H),3.94-4.39(m,3H),3.32-3.51(m,2H),2.71-3.19(m,8H),2.21(s,6H),1.45-1.91(m,5H)。MS(ESI)m/e[M+1]+485。
化合物1.65：1-(((2S,4S)-1-丙烯酰基-4-(二甲基氨基)吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001562
Figure BDA0001210200830001571
步骤A：(2S,4S)-4-(二甲基氨基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001572
在0℃向(2S,4S)-4-(二甲基氨基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(4.9g,18mmol)在THF中的经搅拌溶液中加入NaBH4(1.7g,45mmol)和LiCl(1.67g,40mmol)，接着滴加EtOH。加入后，将混合物在室温搅拌16小时。将混合物浓缩，然后加入50mL NaHCO3水溶液，用CH2Cl2(50mL x 3)萃取。将合并的萃取物用盐水(50mL x 2)洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩，得到2.9g粗产物。将1.6g粗产物通过用CH2Cl2/MeOH(100:1～40:1)洗脱的柱色谱进行纯化，得到标题产物(810mg,产率：32％)，其为浅黄色固体。MS：M/e 245(M+1)+。
步骤B：(2S,4S)-4-(二甲基氨基)-2-甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001573
在-78℃，在N2下，将DMSO(400mg,5.1mmol)在2mL CH2Cl2中的溶液滴加至草酰氯(510mg,4mmol)在2mL CH2Cl2中的溶液中。搅拌10分钟后，在-60℃以下慢慢加入步骤A的产物(250mg,1mmol)在2mL CH2Cl2中的溶液。混合物搅拌4小时。注射Et3N(800mg,8mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液，然后将混合物温热至室温并再搅拌1小时。将混合物用20mL CH2Cl2稀释，用盐水(20mL x 3)洗涤，干燥，浓缩至干，得到粗产物(280mg)，其为浅黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 243(M+1)+。
步骤C：(2S,4S)-2-((E)-(2-(叔丁氧基羰基)亚肼基)甲基)-4-(二甲基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001581
将步骤B的产物(280mg,粗品)和肼基甲酸叔丁酯(160mg,1.2mmol)在MeOH(5mL)中的混合物在室温搅拌5小时。将混合物浓缩至干，得到标题产物(380mg,粗品)，其为浅黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 357(M+1)+。
步骤D：(2S,4S)-2-((2-(叔丁氧基羰基)肼基)甲基)-4-(二甲基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001582
在室温向步骤C的产物(380mg,粗品)在混合溶剂AcOH/H2O(1:1,5mL)中的经搅拌溶液中加入NaBH3CN(160mg,2.6mmol)，然后将混合物搅拌5小时。将混合物浓缩，然后加入10mL NaOH水溶液(2M)，用CH2Cl2(10mL x 5)萃取。将合并的萃取物用盐水(10mL x 3)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩至干并通过用CH2Cl2/MeOH(50:1～30:1,0.3％NH3/MeOH)洗脱的柱色谱进行纯化，得到标题产物(105mg,历经步产率：29％)，其为无色油状物。MS：M/e 359(M+1)+。
步骤E：(3S,5S)-5-(氰基甲基)-N,N-二甲基吡咯烷-3-胺
Figure BDA0001210200830001591
在室温向步骤D的产物(105mg,0.29mmol)在EA(1mL)中的经搅拌溶液中加入HCl/EA(5mL,5M)，然后将混合物搅拌5小时。将混合物浓缩至干，加入20mL EA，然后将混合物再次浓缩，除去残余HCl，得到标题产物(86mg,产率：96％)，其为白色固体。MS：M/e 159(M+1)+。
步骤F：5-氨基-1-(((2S,4S)-4-(二甲基氨基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830001592
在室温向步骤E的产物(86mg,0.28mmol)和2-(甲氧基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈(68mg,0.29mmol)在EtOH(2mL)中的混合物中加入Et3N(200mg,2mmol)，然后将混合物搅拌3小时。将混合物浓缩至干，得到标题产物(158mg,粗品)，其为暗棕色固体，直接用于下一步骤中。MS：M/e 365(M+1)+。
步骤G：5-氨基-1-(((2S,4S)-4-(二甲基氨基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001593
将步骤F的产物(158mg,粗品)在MeSO3H(5mL)中的溶液在70℃加热3小时。将混合物冷却至室温，然后滴加NaOH水溶液至pH～9。将混合物用CH2Cl2(20mL x 5)萃取。将合并的萃取物用盐水(20mL x 3)洗涤，干燥，浓缩至干，得到粗产物(145mg)，其为棕色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 383(M+1)+。
步骤H：1-(((2S,4S)-1-丙烯酰基-4-(二甲基氨基)吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001601
在室温向步骤G的产物(145mg,粗品)和NaHCO3(100mg,1.2mmol)在混合溶剂MeCN/H2O(1:1,4mL)中的混合物中滴加丙烯酰氯(25mg,0.28mmol)在MeCN(1mL)中的溶液。混合物搅拌2小时。加入EA(10mL)，将混合物用盐水(5mL x 3)洗涤，干燥，浓缩至干，然后将所得残余物通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝12:1,0.5％的NH3/MeOH)和制备型HPLC进行纯化，得到标题产物(18mg,历经3步产率：15％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.10-6.98(m,4H),6.65-6.25(m,3H),6.20-6.02(m,1H),5.92(s,2H),5.65(s,1H),4.34-3.69(m,4H),3.41-3.25(m,1H),3.01-2.72(m,5H),2.65-2.52(m,1H),2.15(s,6H),2.13-1.90(m,2H),1.83-1.71(m,2H)。MS：M/e 437(M+1)+。
化合物1.65a：1-(((2S,4S)-1-丙烯酰基-4-(二甲基氨基)吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001611
步骤A：5-氨基-1-(((2S,4S)-4-(二甲基氨基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830001612
在室温向(3S,5S)-5-(氰基甲基)-N,N-二甲基吡咯烷-3-胺(190mg,0.63mmol)和(R)-2-(甲氧基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈(165mg,0.69mmol)在EtOH(5mL)中的混合物加入Et3N(600mg,2mmol)，然后将混合物搅拌3小时。浓缩混合物。将残余物用10mLCH2Cl2稀释，用盐水(50mL x 3)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到标题产物(280mg,粗品)，其为暗棕色固体，直接用于下一步骤中。MS：M/e 365(M+1)+。
步骤B：5-氨基-1-(((2S,4S)-4-(二甲基氨基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001621
将步骤A的产物(280mg,粗品)在MeSO3H(5mL)中的溶液在70℃加热3小时。将混合物冷却至室温，然后滴加NaOH水溶液至pH～9。将混合物用CH2Cl2(20mL x 5)萃取。将合并的萃取物用盐水(20mL x 3)洗涤，干燥，然后浓缩，得到粗产物(170mg)，其为棕色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 383(M+1)+。
步骤C：1-(((2S,4S)-1-丙烯酰基-4-(二甲基氨基)吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001622
在室温向步骤B的产物(170mg,粗品)和NaHCO3(180mg,1.2mmol)在混合溶剂MeCN/H2O(1:1,5mL)中的混合物中滴加丙烯酰氯(40mg,0.45mmol)在MeCN(1mL)中的溶液。将混合物搅拌2小时。加入EA(20mL)，将混合物用盐水(10mL x 3)洗涤，干燥，然后浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到标题产物(45mg,历经3步产率：16％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ7.05(s,4H),6.75-6.25(m,3H),6.20-6.02(m,1H),5.92(s,2H),5.75-5.45(m,1H),4.45-3.69(m,4H),3.45-3.25(m,1H),3.01-2.72(m,5H),2.66-2.50(m,1H),2.15(s,6H),2.13-1.90(m,2H),1.83-1.71(m,2H)。MS：M/e 437(M+1)+。ee：100％,保留时间：9.662分钟。
手性分析条件如下所示。
Figure BDA0001210200830001631
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对合成化合物1.65a所述的操作，制备化合物1.66a。
Figure BDA0001210200830001632
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.70-6.50(m,3H),6.27-5.98(m,3H),5.81-5.40(m,1H),4.47-4.20(m,1H),4.06-3.84(m,2H),3.80-3.49(m,1H),3.31-3.15(m,2H),3.08-2.72(m,4H),2.61-2.52(m,1H),2.19-2.06(m,7H),2.04-1.93(m,1H),1.84-1.63(m,2H)ppm。MS：M/e 437(M+1)+。
化合物1.67a：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001641
步骤A：2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐
Figure BDA0001210200830001642
在0℃向2-(二甲基氨基)乙醇(2.0g,22.5mmol)在DCM(20mL)中的溶液中滴加亚硫酰氯(3.5g,29.3mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌过夜。除去溶剂，将残余物与PE:EA10:1(50mL)一起混悬。过滤混合物，然后收集固体并干燥，得到产物(3.2g,产率：100％)
步骤B：(2S,4R)-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯
Figure BDA0001210200830001643
在0℃向(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(4.3g,17.5mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入NaH(1.75g,43.8mmol)。将反应混合物在0℃搅拌15分钟。然后在0℃加入步骤A的产物(3.0g,21mmol)。温热至室温，将混合物在室温搅拌过夜。在0℃将反应混合物用H2O(20mL)淬灭。将混合物用H2O(50mL)稀释，然后用DCM(50mL x 3)萃取。将合并的萃取物用盐水(50mL x 2)洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩，得到产物，将其通过用CH2Cl2/MeOH(10:1)洗脱的柱色谱进行纯化，得到标题产物(650mg,产率：12％)，其为浅黄色固体。MS：M/e 317(M+1)+。
步骤C：(2S,4R)-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001651
在0℃向步骤B的产物(650mg,2.0mmol)在THF(6mL)中的经搅拌溶液中加入
NaBH4(190g,5.0mmol)和LiCl(187g,4.4mmol)，接着滴加EtOH(4mL)。加入后，加工混合物在室温搅拌2天。浓缩混合物，然后将混合物与DCM(50mL)一起混悬。过滤混合物，然后将滤液浓缩，得到粗产物，将其通过用CH2Cl2/MeOH(20:1)洗脱的柱色谱进行纯化，得到标题产物(300mg,产率：50％)，其为黄色油状物。MS：M/e 289(M+1)+。
步骤D：(2S,4R)-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-2-甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001652
在-78℃，在N2下，向草酰氯(635mg,5mmol)在2mL CH2Cl2中的溶液中滴加DMSO(468mg,6mmol)在2mL CH2Cl2中的溶液。搅拌10分钟，在-60℃下慢慢加入步骤C的产物(300mg,1mmol)在2mL CH2Cl2中的溶液。混合物搅拌2小时。注射Et3N(800mg,8mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液，将混合物温热至室温，然后再搅拌1小时。将混合物用10mL H2O稀释，用DCM(15mL x 5)萃取，干燥，浓缩至干，得到粗产物(410mg)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 287(M+1)+。
步骤E：(2S,4R)-2-((E)-(2-(叔丁氧基羰基)亚肼基)甲基)-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001661
将步骤D的产物(410mg,粗品)和肼基甲酸叔丁酯(132mg,1.0mmol)在MeOH(5mL)中的混合物在室温搅拌5个过夜。将混合物浓缩吱嘎，得到标题产物(500mg,粗品)，其为黄色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 401(M+1)+。
步骤F：(2S,4R)-2-((2-(叔丁氧基羰基)肼基)甲基)-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001662
在室温向步骤E的产物(500mg,粗品)在混合溶剂AcOH/H2O(1:1,4mL)中的经搅拌溶液中加入NaBH3CN(95mg,1.5mmol)，然后将混合物搅拌3小时。浓缩混合物，用NaOH水溶液(2M)将残余物调至pH＝8-9。然后将混合物用CH2Cl2(10mL x 5)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(10mL)洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩至干，然后通过用CH2Cl2/MeOH(25:1,0.3％的NH3/MeOH)洗脱的柱色谱进行纯化，得到标题产物(260mg,历经3步产率：65％)，其为无色油状物。MS：M/e 403(M+1)+。
步骤G：2-(((3R,5S)-5-(氰基甲基)吡咯烷-3-基)氧基)-N,N-二甲基乙胺盐酸盐
Figure BDA0001210200830001663
在室温向步骤D的产物(260mg,0.65mmol)在EA(1mL)中的经搅拌溶液中加入HCl/EA(5mL,5M)，然后将混合物搅拌2小时。将混合物浓缩至干，得到标题产物(360mg,产率：100％)，其为白色固体。MS：M/e 203(M+1)+。
步骤H：5-氨基-1-(((2S,4R)-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830001671
在室温向步骤E的产物(360mg,0.65mmol)和(R)-2-(甲氧基(1,2,3,4-四氢萘-2-基)亚甲基)丙二腈(155mg,0.65mmol)在EtOH(5mL)中的混合物中加入Et3N(0.5)，然后将混合物搅拌1小时。将混合物浓缩至干，然后通过用CH2Cl2/MeOH(10:1,0.3％的NH3/MeOH)洗脱的柱色谱进行纯化，得到标题产物(150mg,粗品)，其为黄色固体。MS：M/e 409(M+1)+。
步骤I：5-氨基-1-(((2S,4R)-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001672
将步骤H的产物(150mg,粗品)在MeSO3H(5mL)中的溶液在70℃加热3小时。将混合物冷却室温，然后在0℃滴加NaOH水溶液(2N)调至pH～8。将混合物用CH2Cl2(15mL x 5)萃取。将合并的萃取物用盐水(10mL)洗涤，干燥，浓缩至干，得到粗产物(110mg,粗品)，其为棕色油状物，直接用于下一步骤中。MS：M/e 427(M+1)+。
步骤J：1-(((2S,4R)-1-丙烯酰基-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-((R)-1,2,3,4-四氢萘-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001681
在0℃向步骤I的产物(110mg,粗品)和NaHCO3(87mg,1.0mmol)在混合溶剂MeCN/H2O(1:1,4mL)中的混合物中滴加丙烯酰氯(24mg,0.26mmol)在MeCN(1mL)中的溶液。混合物搅拌10分钟。加入EA(50mL)，将混合物用盐水(10mL)洗涤，干燥，浓缩至干，然后将所得残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到标题产物(5mg,历经3步产率：2％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.07(s,4H),6.71-6.50(m,2H),6.26-5.99(m,3H),5.76-5.42(m,1H),4.51-4.22(m,1H),4.13-4.02(m,1H),3.98-3.82(m,1H),3.64-3.49(m,1H),3.46-3.37(m,3H),3.04-2.76(m,4H),2.39-2.28(m,2H),2.15-1.65(m,12H)。MS：M/e 481(M+1)+。
实施例2：化合物2.1至2.11的合成
化合物2.1：1-(2-丙烯酰氨基苄基)-5-氨基-3-(6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]环轮烯-6-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.20所述的操作，制备化合物2.1。
Figure BDA0001210200830001682
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(br.s,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.25(t,J＝7.8Hz,1H),7.19-7.02(m,6H),6.78-6.50(m,3H),6.29(d,J＝18.4Hz,1H),5.79(d,J＝10.4Hz,1H),4.31(s,2H),3.18(d,J＝9.2Hz,2H),2.88-2.71(m,3H),2.17-1.78(m,3H),1.40(d,J＝14.0Hz,1H)ppm。MS：M/e 430(M+1)+
化合物2.2：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]环轮烯-6-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.14所述的操作，制备化合物2.2。
Figure BDA0001210200830001691
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.16-7.00(m,4H),6.56(br.s,1H),6.43-5.95(m,3H),5.80-5.38(m,2H),4.45-4.18(m,1H),4.12-3.85(m,2H),3.49(br.s,2H),3.16-2.68(m,5H),2.13-2.01(m,2H),1.84(s,5H),1.53-1.33(m,1H)ppm。MS：M/e 408(M+1)+
化合物2.3：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]环轮烯-6-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.15所述的操作，制备化合物2.3。
Figure BDA0001210200830001692
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23-7.00(m,4H),6.95-6.72(m,1H),6.48(br.s,2H),6.21-6.01(m,1H),5.77-5.60(m,1H),4.41-3.97(m,3H),3.44-2.67(m,7H),2.16(d,J＝12.4Hz,1H),2.06-1.72(m,5H),1.45-1.36(m,2H)ppm。MS：M/e 408(M+1)+
化合物2.4：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001701
步骤A：4-(2-甲酰基苯氧基)丁酸乙酯
Figure BDA0001210200830001702
在室温向2-羟基苯甲醛(122g,1.0mol)和4-溴丁酸乙酯(195g,1.0mol)在DMF(500mL)中的溶液中加入Cs2CO3(325g,1.0mol)，将反应混合物在室温搅拌3小时。将混合物用H2O(1500mL)淬灭，加入EA(1500mL)，将有机层用盐水(500mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到黄色油状物(W＝224g,Y＝95％)，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),7.62-7.70(m,2H),7.22(d,1H,J＝8.4Hz),7.07(t,1H,J＝7.2Hz),4.16(t,2H,J＝6.0Hz),4.05(q,2H,J＝7.2Hz),2.50-2.51(m,2H),1.99-2.08(m,2H)和1.15-1.19(q,3H,J＝7.2Hz)。MS(ESI)m/e[M+1]+237
步骤B：2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830001703
在50℃向4-(2-甲酰基苯氧基)丁酸乙酯(32g,135mmol)在碳酸二甲酯(600mL)中的溶液中滴加CH3ONa(5.4M在MeOH中的溶液)(30mL,162mmol)，将其在50℃再搅拌2小时。将混合物用H2O(600mL)淬灭，加入EA(600mL；将有机层用盐水(200mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物溶于EA/MeOH(100mL/100mL)中，然后加入10％钯/碳(含水50％,5.0g)，将反应混合物与H2在1.5Mpa氢化过夜。经由过滤除去催化剂，浓缩滤液。将残余物通过使用PE/EA(1:5-1:10)作为洗脱剂的硅胶色谱进行纯化，得到19.0g(Y＝68％)产物，其为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.13-7.22(m,2H),6.92-7.01(m,2H),4.18-4.23(m,1H),3.74-3.79(m,2H),3.61(s,3H),2.96-2.97(m,2H)和1.99-2.13(m,2H)。MS(ESI)m/e[M+1]+207
步骤C：2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸
Figure BDA0001210200830001711
在5℃-10℃向2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸甲酯(19.0g,92.2mmol)在MeOH/H2O(150mL/50mL)中的溶液中加入氢氧化锂(13.8g,276.6mmol)，将混合物在室温搅拌5小时。然后减压除去溶剂。用1N HCl将残余物酸化调至pH＝3-4，过滤沉淀物，得到白色固体，将其以红外箱进行干燥(W＝17.0g,Y＝96％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.36(s,1H),7.12-7.22(m,2H),6.92-7.00(m,2H),4.14-4.24(m,1H),3.73-3.78(m,2H),2.90-2.99(m,2H)和1.99-2.13(m,2H)。MS(ESI)m/e[M+1]+193
步骤D：2-(羟基(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830001712
将2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸(24.6g,128mmol)混悬在EA(200mL)中，然后加入HOBt(19.0g,141mmol)，将混合物在室温搅拌0.5小时，然后加入Et3N(38.8g,384mmol)，将反应混合物再搅拌0.5小时，然后加入EDCI(27.09g,141mmol)，将混合物再搅拌0.5小时，然后滴加丙二腈(9.3g,141mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物用H2O淬灭，加入EA(200mL)，用NaHCO3水溶液(500mL)洗涤，然后将有机层与H2SO4水溶液(25g/200mL H2O)搅拌3小时，然后将其直接浓缩，得到黄色油状物，其为粗产物(w＝27.0g,Y＝88％)。MS(ESI)m/e[M+1]+241。
步骤E：5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲腈
Figure BDA0001210200830001713
将2-(羟基(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)亚甲基)丙二腈(27.0g,112.5mmol)溶于三甲氧基甲烷(600mL)中，将反应混合物加热至100℃并保持5小时。减压除去溶剂，得到粗产物，将其溶于EtOH(100mL)中，然后在5℃-10℃加入水合肼(6.12g,123.75mmol)并保持0.1小时。反应混合物在室温搅拌过夜，然后减压除去溶剂。将残余物通过使用EA(V＝1.0L)作为洗脱溶剂的硅胶色谱进行纯化，得到21.0g(Y＝73％)产物，其为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),7.14-7.20(m,2H),6.94-7.01(m,2H),6.30(s,2H),4.37-4.40(m,1H),3.66-3.71(m,1H),3.35(m,1H),2.85-2.89(m,2H)和2.06-2.23(m,2H)。
步骤F：5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001721
将5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲腈(4.7g,18.5mmol)在H3PO4(60mL)中的溶液在130℃搅拌1小时。LC/MS显示反应完全。将混合物倾入冰-水中，然后用NaOH水溶液调节pH>8。将混合物用EtOAc(100mL×3)萃取，用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩的，饿到粗产物，将其通过用EtOAc(3L)洗脱的硅胶(150g)柱色谱进行纯化，得到产物(2g,40％)，其为棕色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+273。
步骤G：(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001722
向5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(600mg,2.21mmol)在DMF(30mL)中的溶液中加入(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(BL-1,1.6g,4.42mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)。将混合物在70℃搅拌过夜。冷却至室温后，在真空中除去溶剂。向残余物中加入H2O(50mL)，用EtOAc(50mL×3)萃取。将有机层通过用EtOAc(1L)洗脱的硅胶(50g)柱色谱进行纯化，得到产物(200mg,20％)，其为棕色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+456。
步骤H：5-氨基-1-((R)-哌啶-3-基)-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001731
向(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]-氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.44mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入CF3CO2H(2mL)，然后搅拌30分钟。TLC显示反应完成。用饱和NaHCO3调节混合物pH>8。将水层用DCM(20mL)萃取，用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩，得到产物(390mg,250％)，其为棕色油状物，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。
步骤I：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001732
在0℃向5-氨基-1-((R)-哌啶-3-基)-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(390mg,1.1mmol)和Et3N(2ml)在DCM中的溶液中慢慢滴加丙烯酰氯(99mg,1.1mmol)。将混合物在0℃搅拌2分钟，用H2O(30ml)淬灭，用DCM(30ml×2)萃取，用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC进行纯化，得到产物(46.32mg,10％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.11-7.18(m,2H),6.92-6.99(m,2H),6.73-6.89(m,1H),6.56(s,2H),6.20(s,2H),6.04-6.15(m,1H),5.61-5.71(m,1H),4.35-4.40(m,1H),3.94-4.27(m,2H),3.69-3.74(m,1H),3.27-3.45(m,2H),2.80-3.12(m,4H),1.83-2.12(m,5H),1.34-1.47(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+410。
通过手性制备型HPLC将化合物2.4分成两种立体异构体(在先峰化合物2.4a和在后峰化合物2.4b)。手性分离条件如下所示：
Figure BDA0001210200830001741
Figure BDA0001210200830001742
化合物2.5：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物2.4所述的操作，制备化合物2.5。
Figure BDA0001210200830001751
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.11-7.16(m,2H),6.92-6.99(m,2H),6.55-6.93(m,1H),6.36(s,2H),6.17-6.19(m,1H),6.96(s,2H),5.64-5.69(m,1H),4.36-4.41(m,1H),4.21-4.23(m,1H),4.04-4.07(m,1H),3.89-3.94(m,1H),3.72-3.79(m,1H),3.45-3.47(m,2H),3.24-3.29(m,1H),2.87-2.93(m,1H),2.12-2.15(m,1H)和1.76-1.83(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+410。
化合物2.6：1-(2-丙烯酰氨基苄基)-5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物1.20所述的操作，制备化合物2.6。
Figure BDA0001210200830001752
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(t,J＝7.6Hz,1H),7.11-7.17(m,3H),6.93-7.00(m,3H),6.49-6.64(m,3H),6.29-6.34(m,3H),5.81(d,J＝10.0Hz,1H),5.13(s,2H),4.36-4.40(m,1H),3.69-3.75(m,1H),3.29-3.32(m,1H),2.89-3.07(m,2H),2.06-2.15(m,2H)。MS(ESI)m/e[M+1]+432。
化合物2.7：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001761
步骤A：4-氟-2-羟基苯甲醛
Figure BDA0001210200830001762
向3-氟苯酚(5mL,51mmol)、无水氯化镁(14.1g,372mmol)在250mL乙腈中的混合物中加入三乙胺(34mL,190mmol)和多聚甲醛(11g,372mmol)。然后将混合物加热至回流并保持5小时。冷却至室温后，加入250mL 5％HCl水溶液，用EA(100mL×2)萃取。将合并的有机层用5％HCl水溶液(100mL×2)、盐水洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩，通过柱色谱进行纯化，得到期望产物(2.7g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.36(s,1H),9.84(s,1H),7.54-7.58(m,1H),6.65-6.75(m,2H)
步骤B：4-(5-氟-2-甲酰基苯氧基)丁酸乙酯
Figure BDA0001210200830001763
将4-氟-2-羟基苯甲醛(2.7g,19.3mmol)、4-溴丁酸乙酯(4.0g,20.5mmol)和K2CO3(3.5g,25.4mmol)在DMF(30mL)中的混合物加热至80℃并保持2小时，冷却至室温后，将混合物倾入水(200mL)中，用EA(100mL×2)萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，浓缩，然后通过柱色谱进行纯化，得到产物(4.8g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.26(s,1H),7.76(dd,J＝8.8,7.2Hz,1H),7.15(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),6.91(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.17(t,J＝6.4Hz,2H),4.06(q,J＝7.2Hz,2H),2.49-2.51(m,2H),2.04-2.06(m,2H),1.17(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ESI)m/e[M+1]+255。
步骤C：(E)-8-氟-2,3-二氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830001771
在50℃向4-(5-氟-2-甲酰基苯氧基)丁酸乙酯(3.81g,15mmol)在碳酸二甲酯(30mL)中溶液中加入CH3ONa(5.4M在MeOH中的溶液)(3.0mL,15mmol)。反应混合物在50℃搅拌3小时。冷却至室温后，将混合物用EA(100mL)和H2O(100mL)淬灭，将有机层用盐水(100mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到黄色油状物，其为粗产物(w＝3.0g,Y＝90％)。MS(ESI)m/e[M+1]+223。
步骤D：8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830001772
(E)-8-氟-2,3-二氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸甲酯(3.0g,13.5mmol)溶于MeOH(30mL)中，然后加入10％钯/碳(含水50％，5.0g)，将反应混合物与H2气在1.5Mpa氢化过夜。除去催化剂，浓缩滤液，得到黄色油状物，其为粗产物(w＝2.8g,Y＝93％)。MS(ESI)m/e[M+1]+225。
步骤E：8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸
Figure BDA0001210200830001773
在5℃-10℃向8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸甲酯(2.8g,12.5mmol)在MeOH/H2O(20mL/20mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1.76g,62.5mmol)，将混合物在室温搅拌3小时。然后减压除去溶剂。用1N HCl将残余物酸化调至pH＝2-4，收集沉淀物，得到白色固体，将其用红外箱进行干燥(W＝1.8g,Y＝69％)。MS(ESI)m/e[M+1]+211.
步骤F：2-((8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)(羟基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830001774
将8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸(1.8g,8.6mmol)混悬在EA(50mL)中，然后加入HOBt(1.16g,8.6mmol)，将混合物在室温搅拌0.5小时，然后加入Et3N(1.74g,17.2mmol)，将反应混合物再搅拌0.5小时，然后加入EDCI(1.65g,8.6mmol)。将混合物再搅拌0.5小时后，加入丙二腈(577mg,8.6mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物用EA(150mL)淬灭，用H2O(100mL)萃取，然后将有机层与H2SO4水溶液(10g/100mLH2O)搅拌3小时，然后直接浓缩，得到黄色油状物，其为粗产物(w＝2.7g,Y＝100％)。MS(ESI)m/e[M+1]+259。
步骤G：2-((8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830001781
将2-((8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)(羟基)亚甲基)丙二腈(2.70g,10.5mmol)溶于三甲氧基甲烷(30mL)中，在N2气氛下将反应混合物加热至100℃并保持3小时。减压除去溶剂。将残余物通过用EA/PE(1:5-1:2)作为洗脱溶剂的硅胶色谱进行纯化，得到产物(1.5g,Y＝53％)，其为黄色油状物。MS(ESI)m/e[M+1]+273。
步骤H：5-氨基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001782
将2-((8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(1.5g,5.5mmol)溶于EtOH(10mL)中，然后历时0.1小时在5℃-10℃加入水合肼(1.38g,27.5mmol)。反应混合物在室温搅拌4小时。减压除去溶剂，得到粗产物，然后将其混悬在甲磺酸(10mL)中，将反应混合物加热至85℃并保持0.5小时，用冰/H2O(100mL)淬灭，然后用NaOH水溶液中和调至pH＝7-9，用EA(50mL×2)萃取，然后用盐水(100mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到产物，其为白色固体(800mg,Y＝50％)。MS(ESI)m/e[M+1]+291。
步骤I：(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯：
Figure BDA0001210200830001791
将5-氨基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(290mg,1mmol),(S)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(710mg.2mmol)和Cs2CO3(650mg,2mmol)混悬在DMF(10mL)中，然后将反应混合物加热至70℃并保持过夜。冷却至室温后，将反应混合物用EA(100mL)/H2O(50mL)淬灭，将有机层用盐水(50mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过用EA作为洗脱溶剂的硅胶色谱进行纯化，得到期望产物(200mg,Y＝42％)，其为白色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+474。
步骤J：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001792
将(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.42mmol)混悬在DCM/TFA(3mL/1mL)中，将反应混合物在室温搅拌2小时，然后减压除去溶剂。将残余物溶于CH3CN/H2O中，然后加入NaHCO3(84mg,1.26mmol)和丙烯酰氯(38mg,0.42mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后用EA(50mL)/H2O(50mL)淬灭，将有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到白色固体(w＝30mg,Y＝17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.16-7.20(m,1H),6.78-6.83(m,3H),6.60(s,2H),6.05-6.10(m,3H),5.63-5.71(m,1H),4.38-4.41(m,1H),3.74-4.06(m,3H),3.27-3.29(m,1H),2.67-2.83(m,4H),1.83-2.11(m,5H)和1.23(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
化合物2.8：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001801
步骤A：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001802
将5-氨基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物2.7合成中步骤H的产物,500mg,1.72mmol)、(S)-2-(甲苯磺酰基氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(BL-2,1.22g.3.44mmol)和Cs2CO3(1.22g,2mmol)混悬在DMF(10mL)中，然后将混合物加热至70℃并保持过夜。冷却至室温后，将反应混合物用EA(100mL)/H2O(50mL)淬灭，将有机层用盐水(50mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过用EA:PE(1:1-50:1)作为洗脱溶剂的硅胶色谱进行纯化，得到产物(250mg,Y＝31％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.16-7.20(br.s,1H),6.78-6.83(m,2H),6.56(s,2H),6.04(s,2H),4.3-4.42(m,1H),3.74-3.95(m,3H),3.27-3.29(m,2H),2.94-3.18(m,4H),2.10(m,2H),1.72(m,3H)和1.23(m,9H)。MS(ESI)m/e[M+1]+474。
步骤B：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001803
将(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(8-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(250mg,0.53mmol)混悬在DCM/TFA(3mL/1mL)中，将混合物在室温搅拌2小时。然后减压除去溶剂。将残余物溶于CH3CN/H2O中，加入NaHCO3(89mg,1.06mmol)和丙烯酰氯(48mg,0.53mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后用EA(50mL)/H2O(50mL)萃取，将有机层用盐水(50mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到产物(w＝80mg,Y＝35％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.15-7.18(m,1H),6.70-6.83(m,2H),6.51-6.62(m,3H),6.05-6.22(m,3H),5.48-5.74(m,1H),4.38-4.41(m,1H),3.77-4.17(m,4H),3.31-3.49(m,3H),2.95-3.01(m,2H),2.08-2.11(m,2H)和1.78-1.79(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
化合物2.9：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001811
步骤A：4-(4-氟-2-甲酰基苯氧基)丁酸甲酯
Figure BDA0001210200830001812
在室温，历时1小时，向5-氟-2-羟基苯甲醛(42g,0.3mol)和4-溴丁酸乙酯(58.5g,0.3mol)在DMF(500mL)中的溶液加入Cs2CO3(117g,0.36mol)，将反应混合物在室温搅拌3小时。将反应混合物用EA(600mL)和H2O(1500mL)淬灭，将有机层用盐水(500mL×2)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到产物，其为黄色油状物(W＝75g,Y＝98％)，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+241。
步骤B：7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸甲酯
Figure BDA0001210200830001813
在50℃向4-(4-氟-2-甲酰基苯氧基)丁酸甲酯(75g,135mmol)在碳酸二甲酯(1000mL)中的溶液中加入CH3ONa(5.4M在MeOH中的溶液)(60mL,325mmol)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。将混合物用EA(500mL)和H2O(500mL)淬灭，将有机层用盐水(500mL)洗涤，然后浓缩。将残余物用MeOH(500mL)进行溶解，加入10％钯/碳(含水50％,6.5g)。将反应混合物与H2气在1.5Mpa氢化过夜。除去催化剂，浓缩滤液，得到产物(50.0g,Y＝68％)，其为黄色油状物，无需进一步纯化即可将其用于下一步骤中。MS(ESI)m/e[M+1]+225。
步骤C：7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸
Figure BDA0001210200830001821
在5℃-10℃向7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸甲酯(50g,223mmol)在MeOH/H2O(500mL/100mL)中的溶液中加入氢氧化锂(17.86g,446mmol)，将混合物在室温搅拌过夜。然后减压除去溶剂。将残余物用6N HCl酸化调至pH＝3-4，用EA(500mL×2)萃取，将有机层用盐水(500mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩，得到粗产物(W＝31g,Y＝67％)，其为白色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+211。
步骤D：2-((7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)(羟基)亚甲基)丙二腈
Figure BDA0001210200830001822
将7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-甲酸(31g,147.6mmol)混悬在EA(200mL)中，然后加入HOBt(19.9g,147.6mmol)。将混合物在室温搅拌0.5小时，然后加入Et3N(44.7g,443mmol)。将反应混合物在搅拌0.5小时，然后加入EDCI(28.3g,147.6mmol)。将混合物再搅拌0.5小时后，加入丙二腈(9.74g,147.6mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物用EA(200mL)淬灭，用H2O(100mL)洗涤，将有机层与H2SO4水溶液(40g/400mL H2O)搅拌3小时，然后直接浓缩，得到粗产物(w＝21g,Y＝55％)，其为黄色油状物。MS(ESI)m/e[M+1]+259。
步骤E：5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001831
将2-((7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)(羟基)亚甲基)丙二腈(21g,81.4mmol)溶于三甲氧基甲烷(150mL)中，将反应混合物在N2气氛下加热至100℃并保持4小时。冷却至室温后，减压除去溶剂。将残余物通过用EA:PE(1:5-1:2)作为洗脱溶剂的硅胶色谱进行纯化，得到中间体化合物(18g,Y＝82％)，其为白色固体。然后将该混合物溶于EtOH(100mL)中，历时0.1小时，在5℃-10℃加入水合肼(8.14g,162.8mmol)。将反应混合物在室温搅拌4小时。减压除去溶剂，得到产物(16g,两步Y＝73％)，其为黄色固体。MS(ESI)m/e[M+1]+273。
步骤F：5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001832
经5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(16g,59mmol)混悬在甲磺酸(60mL)中，将反应混合物加热至85℃并保持0.5小时。冷却至室温后，将反应混合物用冰/H2O(500mL)淬灭，然后用NaOH水溶液中和调至pH＝7-9，用EA(250mL×2)萃取，然后用盐水(200mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过用EA:MeOH(100:1-50:1)作为洗脱溶剂的硅胶色谱进行纯化，得到产物(9.0g,Y＝57％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.59(br.s,1H),6.91-7.04(m,3H),6.60(s,2H),5.49(br.s,2H),4.36-4.39(m,1H),3.60-3.65(m,1H),3.04-3.10(m,1H),2.80-2.91(m,1H),2.06-2.16(m,2H)和0.82-0.85(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+291。
步骤G：(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯：
Figure BDA0001210200830001833
将5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.5g,5.17mmol)、(s)-3-(甲苯磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(BL-1,3.67g.10.34mmol)和Cs2CO3(3.38g,10.34mmol)混悬在DMF(20mL)中。在N2气氛下将反应混合物加热至80℃并保持过夜。冷却至室温后，将混合物用EA(100mL)/H2O(100mL)淬灭，将有机层用盐水(100mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过用EA:MeOH(100:1-50:1)作为洗脱溶剂的硅胶色谱进行纯化，得到产物(800mg,Y＝33％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.94-7.00(m,3H),6.58(s,2H),6.21(s,2H),4.32-4.35(m,1H),4.04-4.08(m,1H),3.70-3.89(m,3H),3.30-3.34(m,1H),2.67-3.03(m,3H),1.83-2.11(m,5H)和1.36-1.39(m,11H)。MS(ESI)m/e[M+1]+474。
步骤H：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001841
经(3R)-3-(5-氨基-4-氨甲酰基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(800mg,1.69mmol)混悬在DCM/TFA(3mL/1mL)中，将反应混合物在室温搅拌2小时。减压除去溶剂。将残余物溶于CH3CN/H2O(12mL/12mL)中，然后加入NaHCO3(286mg,3.4mmol)和丙烯酰氯(183mg,2.02mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后用EA(50mL)/H2O(50mL)淬灭，将有机层用盐水洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到白色固体(w＝200mg,Y＝28％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.73-7.03(m,4H),6.59(s,2H),6.05-6.21(m,3H),5.61-5.71(m,1H),3.95-4.36(m,3H),3.68-3.70(m,1H),3.27-3.42(m,2H),2.82-3.11(m,4H),1.83-2.09(m,5H)和1.23(m,1H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428
化合物2.10：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001851
步骤A：(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0001210200830001852
将5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物2.9合成中步骤F的产物,1.5g,5.17mmol)、(s)-2-(甲苯磺酰基氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.67g,10.34mmol)和Cs2CO3(3.36g,10.34mmol)混悬在DMF(20mL)中，将反应混合物加热至70℃并保持过夜。将反应混合物用EA(100mL)/H2O(50mL)淬灭，将有机层用盐水(50mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过用EA:Pet(1:1-50:1)作为洗脱溶剂的硅胶色谱进行纯化，得到产物(900mg,Y＝37％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.93-6.95(m,3H),6.58(s,2H),6.03(s,2H),4.34-4.46(m,2H),3.71-3.86(m,3H),2.89-3.07(m,5H),1.71-1.93(m,6H)和1.23(m,9H)。MS(ESI)m/e[M+1]+474。
步骤B：1-(((S)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0001210200830001853
经(2S)-2-((5-氨基-4-氨甲酰基-3-(7-氟-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-1-基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(900mg,1.9mmol)混悬在DCM/TFA(5mL/2mL)中，将反应混合物在室温搅拌2小时。减压除去溶剂。将残余物溶于CH3CN/H2O(12mL/12mL)中，然后加入NaHCO3(319mg,3.8mmol)和丙烯酰氯(206mg,2.28mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后用EA(50mL)/H2O(50mL)淬灭，将有机层用盐水(50mL)洗涤，以Na2SO4干燥，然后浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到产物(w＝300mg,Y＝37％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.91-7.01(m,3H),6.50-6.70(m,3H),6.02-6.23(m,3H),5.49-5.74(m,1H),4.33-4.39(m,2H),3.27-3.91(m,6H),2.87-3.04(m,2H),2.08-2.11(m,2H)和1.78-1.79(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+428。
化合物2.11：1-(((R)-1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基)-5-氨基-3-(2,3,4,5-四氢苯并[b]氧杂环庚烯-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在本领域技术人员已知的适当条件下，按照针对化合物2.5所述的操作，制备化合物2.11。
Figure BDA0001210200830001861
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.11-7.16(m,2H),6.92-6.99(m,2H),6.57-6.60(m,3H),6.14-6.23(m,3H),5.65-5.74(m,1H),4.37-4.41(m,1H),4.17-4.18(m,1H),3.89-4.03(m,2H),3.71-3.74(m,1H),3.26-3.43(m,3H),2.89-3.02(m,2H),2.10-2.13(m,2H)和1.79-1.83(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+410
EGFR酶测定法
在基于时间分辨荧光共振能量转移方法学(time-resolved fluorescence-resonance energy transfer methodology)的测定法中针对WT EGFR激酶结构域(669-1210位氨基酸,Carna Biosciences,08-115)、EGFR T790M/L858R激酶结构域(669-1210位氨基酸,Carna Biosciences,08-510)和EGFR L858R激酶结构域(669-1210位氨基酸,CarnaBiosciences,08-502)测试本发明化合物。该测定在384孔低容量黑色板中在反应混合物(含EGFR激酶、20μM ATP(对于EGFR WT和T790M/L858R)、125μM(对于EGFR L858R)、生物素-TK底物和0-0.5μM化合物)在缓冲液(含50mM HEPES pH 7.5、10mM MgCl2、1mM EGTA、0.01％Brij-35、2.5mM DTT、0.1％BSA)中的溶液中进行。将激酶与本发明化合物在室温温育120分钟，然后通过加入ATP和生物素-TK底物启动反应。在室温反应40分钟后，按照厂商说明书(CisBio Bioassays)加入等体积的终止/检测溶液。终止/检测溶液含有TK-抗体-穴状化合物和抗生蛋白链菌素-XL665在含有25mM Tris pH7.4、400mM KF、50mM EDTA、0.01％BSA、0.01％Triton X-100的缓冲液中的溶液。将测定板密封并在室温温育1小时，然后在在BMGPHERAstar FS仪器上读取TR-FRET信号。通过Graphpad Prism软件将每个化合物浓度处的％抑制数据与四参数逻辑方程进行拟合，得到抑制剂的IC50。
化合物1.1至1.67和2.1-2.11抑制EGFR激酶的IC50值范围为0.01nM至1μM。
表1：IC50(nM)
Figure BDA0001210200830001871
Figure BDA0001210200830001881
Figure BDA0001210200830001891
Figure BDA0001210200830001901
Figure BDA0001210200830001911
出于清楚和理解目的，已经通过示例和实例详细描述了上述发明。对本领域技术人员显而易见的是，可在本发明所附权利要求的范围内，进行更改和变化。因此，应当理解的是，上述描述旨在示例性而非限制性的。因此，本发明的范围不应当参考上述描述确定，而是参考所附权利要求以及所述权利要求等同的全部范围来确定。
如同单独的专利、专利申请或公开文本被单独指出那样，将本申请中所引用的所有专利和专利申请的全部内容引入作为参考。

Claims (10)

1.一种化合物、其立体异构体或药用盐，所述化合物选自：
Figure FDA0002354928330000011
Figure FDA0002354928330000021
Figure FDA0002354928330000031
Figure FDA0002354928330000041
Figure FDA0002354928330000051
2.权利要求1的化合物或药用盐，所述化合物选自：
Figure FDA0002354928330000061
3.化合物或其药用盐，所述化合物为
Figure FDA0002354928330000071
4.药物组合物，其包含至少一种药用载体和至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或其药用盐。
5.至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或其药用盐在制备用于抑制EGFR-T790M激酶的药物中的用途。
6.至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或其药用盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症选自卵巢癌、子宫颈癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝细胞癌、胃肠道间质肿瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、多发性骨髓瘤和间皮瘤。
7.至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或其药用盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症选自急性髓性白血病、非霍奇金氏淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤和非小细胞肺癌。
8.至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或其药用盐在制备用于治疗对T790M-EGFR激酶的抑制具有响应的癌症的药物中的用途。
9.至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或其药用盐在制备用于治疗对T790M-EGFR激酶的抑制具有响应的癌症的药物中的用途，所述癌症选自卵巢癌、子宫颈癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝细胞癌、胃肠道间质肿瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、多发性骨髓瘤和间皮瘤。
10.至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或其药用盐在制备用于治疗对T790M-EGFR激酶的抑制具有响应的癌症的药物中的用途，所述癌症选自急性髓性白血病、非霍奇金氏淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤和非小细胞肺癌。
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