CN106636116B - 基因突变序列及其在鉴定膀胱癌干细胞中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基因突变序列，与表1中的任意一个突变所在的基因序列相比，该基因突变序列包括存在该任意一个突变的基因序列。本发明还公开一种包含能够检测出所列基因突变序列的试剂的试剂盒和一种鉴定膀胱癌干细胞的方法。利用本发明的基因突变序列能够将膀胱癌干细胞从膀胱癌细胞和膀胱组织细胞中准确的区分出来。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学领域，具体的，本发明涉及一种基因突变序列、基因突变序列的用途、一种试剂盒、试剂盒的用途和一种鉴定膀胱癌干细胞的方法。
背景技术
世界范围内，膀胱癌每年有430,000个病例新增和150,300个死亡病例(Chavan etal.,2014)。膀胱癌干细胞最早在2008年被分选鉴定(Ning et al.,2009；She et al.,2008)，当初所采用的方法是侧群细胞分选法(Side-Population,SP)。随着研究的深入，科学家们陆续使用CD44v6(Yang and Chang,2008)，67LR(He et al.,2009)，CD44(Chan etal.,2009)，ALDH1A1(Su et al.,2010)和CD90/CK14(Volkmer et al.,2012)等分离并鉴定了膀胱癌干细胞。
膀胱癌干细胞具有干性维持能力和肿瘤起始的能力，负责膀胱癌的复发和耐药(Ho et al.,2012；Tran et al.,2010)。根据先前的报道，人的膀胱癌干细胞可能起源于正常膀胱粘膜中表达CK5和CK17的基底层细胞(He et al.,2009)。随后连续两篇文章利用BBN诱导的方法获得了小鼠膀胱癌模型，并发现了小鼠原位膀胱癌和浸润型膀胱癌起源于正常膀胱粘膜中表达CK5和分泌蛋白shh的基底层细胞(Shin et al.,2014；Van Batavia etal.,2014)；另外，Van Batavia等人还证明了乳头状膀胱癌起源于正常膀胱粘膜中表达CK2的中间层细胞，而鳞状细胞膀胱癌的祖先是表达CK5的基底层干细胞(Van Batavia etal.,2014)。
发明内容
依据本发明的第一方面，本发明提供一种基因突变序列，与表1中的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述突变的所述基因序列。所称的基因突变序列可以为一条序列，也可以是多条序列的组合，例如，所称的基因突变序列为存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列，再例如，所称的基因突变序列包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列和存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列。
表1
| 基因 | 核酸突变(基因组HG19) |
| ARID1A | chr1:27093001G>A |
| ATM | chr11:108186754C>A |
| CREBBP | chr16:3790519C>A |
| ERCC2 | chr19:45867687T>C |
| ETS1 | chr11:128333418A>G |
| FAT4 | chr4:126329890T>C |
| GPRC5A | chr12:13061979T>G |
| LRP2 | chr2:170096229G>A |
| MAP3K6 | chr1:27687466G>T |
| MKL1 | chr22:40807506G>A |
| MLL2 | chr12:49420183C>G |
| PAWR | chr12:79990409G>T |
| PITX2 | chr4:111542524C>G |
| RNF213 | chr17:78293189A>T |
| SIN3A | chr15:75664469C>T |
| STAG2 | chrX:123220567C>G |
| TP53 | chr17:7577100T>C |
| USP24 | chr1:55638075G>A |
| ZBTB17 | chr1:16270382G>T |
表1所示的19个基因对应的19个突变是未报道过的单核苷酸突变，且是经发明人鉴定过的膀胱癌干细胞特有的。表1中的任意一个或者多个都能够用于判定细胞是否是膀胱癌干细胞，待测细胞中的核酸序列上存在表1中的任意一个基因突变，能够判定该细胞为膀胱癌干细胞。表1所示的19个膀胱癌特有突变，是发明人利用单细胞测序方法，对来自三个膀胱癌患者的四类59个单细胞进行了单细胞测序、数据分析获得的，并且经过其它单细胞样本的验证。来自膀胱组织或者膀胱癌组织的细胞，一般可能为分化的膀胱细胞、分化的膀胱癌细胞、膀胱干细胞或者膀胱癌干细胞。需要说明的是，表1中的SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代与表1一样的SNP位点或SNP组合，都仍旧是本发明公开的表1中的SNP，属于本发明范围，比如表1中MKL1基因序列上的基因组序列上的突变chr22:40807506G>A，与其cDNA上的c.C2684T，属于同一突变，都能致使发生多肽突变p.S895L。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞中存在表1中的任意一个突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，而不能推定膀胱癌干细胞一定具有表1中的任意一个或者表1中的至少一个突变。
依据本发明的第二方面，本发明提供一种基因突变序列，与ARID1A基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列还包括其它序列。存在chr1:27093001G>A突变的ARID1A基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ARID1A基因序列上是否存在chr1:27093001G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组ARID1A基因序列上的chr1:27093001G>突变，与其cDNA上的c.G2932A突变，为同一突变，都能致使发生多肽突变p.A978T。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第三方面，本发明提供一种基因突变序列，与ATM基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列还包括其它序列。存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ARID1A基因序列上是否存在chr1:27093001G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组ATM基因序列上的chr11:108186754C>A突变，与其cDNA上的c.C6112A突变，指代同一突变，都能致使发生多肽突变p.H2038N。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第四方面，本发明提供一种基因突变序列，与CREBBP基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列还包括其它序列。存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其CREBBP基因序列上是否存在chr16:3790519C>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组CREBBP基因序列上的chr16:3790519C>A突变，与其cDNA上的c.G3900T突变，指代同一突变，都能致使发生多肽突变p.L1300F。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第五方面，本发明提供一种基因突变序列，与ERCC2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列还包括其它序列。存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ERCC2基因序列上是否存在chr19:45867687T>C突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第六方面，本发明提供一种基因突变序列，与ETS1基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列还包括其它序列。存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ETS1基因序列上是否存在chr11:128333418A>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组ETS1基因序列上的chr11:128333418A>G突变，与其cDNA上的c.T448C突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.S150P。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第七方面，本发明提供一种基因突变序列，与FAT4基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列还包括其它序列。存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其FAT4基因序列上是否存在chr4:126329890T>C突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第八方面，本发明提供一种基因突变序列，与GPRC5A基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列还包括其它序列。存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其GPRC5A基因序列上是否存在chr12:13061979T>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组GPRC5A基因序列上的chr12:13061979T>G突变，与其cDNA上的c.T796G突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.W266G。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第九方面，本发明提供一种基因突变序列，与LRP2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列还包括其它序列。存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其LRP2基因序列上是否存在chr2:170096229G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组LRP2基因序列上的chr2:170096229G>A突变，与其cDNA上的c.C4102T突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.P1368S。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十方面，本发明提供一种基因突变序列，与MAP3K6基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列还包括其它序列。存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其MAP3K6基因序列上是否存在chr1:27687466G>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十一方面，本发明提供一种基因突变序列，与MKL1基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列还包括其它序列。存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列是新发现的、未见报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其MKL1基因序列上是否存在chr22:40807506G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组MKL1基因序列上的chr22:40807506G>A突变，与其cDNA上的c.C2684T突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.S895L。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十二方面，本发明提供一种基因突变序列，与MLL2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列还包括其它序列。存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列是新发现的、未见报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其MLL2基因序列上是否存在chr12:49420183C>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组MLL2基因序列上的chr12:49420183C>G突变，与其cDNA上的c.G15566C突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.G5189A。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十三方面，本发明提供一种基因突变序列，与PAWR基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列还包括其它序列。存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其PAWR基因序列上是否存在chr12:79990409G>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组PAWR基因序列上的chr12:79990409G>T突变，与其cDNA上的c.C713A突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.S238X。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十四方面，本发明提供一种基因突变序列，与PITX2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列还包括其它序列。存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其PITX2基因序列上是否存在chr4:111542524C>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组PITX2基因序列上的chr4:111542524C>G突变，与其cDNA上的c.G207C突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.E69D。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十五方面，本发明提供一种基因突变序列，与RNF213基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列还包括其它序列。存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列是新发现的、未见报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其RNF213基因序列上是否存在chr17:78293189A>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十六方面，本发明提供一种基因突变序列，与SIN3A基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列还包括其它序列。存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列是新发现的、未见报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其SIN3A基因序列上是否存在chr15:75664469C>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组SIN3A基因序列上的chr15:75664469C>T突变，与其cDNA上的c.G2052A突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.L684L。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十七方面，本发明提供一种基因突变序列，与STAG2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列还包括其它序列。存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列是新发现的、未见报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其STAG2基因序列上是否存在chrX:123220567C>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十八方面，本发明提供一种基因突变序列，与TP53基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列还包括其它序列。存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其TP53基因序列上是否存在chr17:7577100T>C突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组TP53基因序列上的chr17:7577100T>C突变，与其cDNA上的c.A442G突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.R148G。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第十九方面，本发明提供一种基因突变序列，与USP24基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列还包括其它序列。存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其USP24基因序列上是否存在chr1:55638075G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第二十方面，本发明提供一种基因突变序列，与ZBTB17基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列。该基因突变序列可以是一条序列——存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列，也可以为序列组合，即除了存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列还包括其它序列。存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ZBTB17基因序列上是否存在chr1:16270382G>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
依据本发明的第二十方面，本发明提供上述任一方面的基因突变序列在鉴定膀胱癌干细胞中的用途。表1中的19个基因对应的19个突变是未报道过的单核苷酸突变，且是经发明人鉴定过的膀胱癌干细胞特有的。表1中的任意一个或者多个都能够用于判定细胞是否是膀胱癌干细胞，待测细胞中的核酸序列上只要存在表1中的任意一个基因突变，就能够判定该细胞为膀胱癌干细胞。表1所示的19个膀胱癌特有突变，是发明人利用单细胞测序方法，对来自三个膀胱癌患者的四类59个单细胞进行了单细胞测序、数据分析比较获得的，并且经过其它单细胞样本的验证。需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞中存在表1中的任意一个突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，而不能推定膀胱癌干细胞一定具有表1中的任意一个或者表1中的至少一个突变。
依据本发明的第二十一方面，本发明提供一种试剂盒，其包括能够检测出上述本发明任一方面的基因突变序列的试剂。本领域技术人员可以理解，检测SNP突变，可以利用SNP突变所在的位置的参考序列设计引物，扩增出该位置的序列，对该序列进行测序进而确定该位置的碱基；也可以利用SNP突变所在的位置的参考序列设计扩增引物和延伸引物，利用质谱检测该位置的碱基。所以，所称的试剂包括但不限于引物、扩增体系、测序相关试剂和/或质谱检测试剂。该试剂盒能够用来检测膀胱癌干细胞。利用该试剂盒检测一个细胞是否是膀胱癌干细胞时，通过检测该细胞是否存在试剂盒能检出的任一基因突变序列来判定该细胞是否为膀胱癌干细胞。较佳的，待测细胞来自膀胱组织或者膀胱癌组织，一般的，来自膀胱组织的细胞可能为分化的膀胱细胞、分化的膀胱癌细胞、膀胱干细胞和膀胱癌干细胞。
依据本发明的第二十二方面，本发明提供一种鉴定膀胱癌干细胞的方法，该方法包括：检测待测细胞的基因组中是否存在表1中的任意一个突变，若存在，则判定所述待测细胞为膀胱癌干细胞。较佳的，待测细胞来自膀胱组织包括膀胱癌组织，一般的，来自膀胱/膀胱癌组织的细胞可能为分化的膀胱细胞(differentiated normal bladder cells,DNBCs)、分化的膀胱癌细胞(differentiated bladder cancer cells,DBCCs)、膀胱干细胞(normal bladder stem cells,NBSCs)和膀胱癌干细胞(bladder cancer stem cells,BCSCs)。一个细胞中存在表1中的至少一个突变是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞中存在表1中的任意一个突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定具有表1中的任意一个或者表1中的至少一个突变。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施方式的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1是本发明的一个实施例中的正常膀胱细胞和膀胱癌细胞的流式分选结果示意图；图1A显示正常膀胱细胞和膀胱癌细胞的流式分选策略；图1B显示BCS2、BCS3和BCS5的流式分选结果。
图2是本发明的一个实施例中的从BCS2、BCS3和BCS5中获得的59个单细胞DNA样品的电泳检测结果。
图3是本发明的一个实施例中的单细胞测序数据的评估结果图；图3A显示从BCS2、BCS3和BCS5中分离的单细胞的平均测序深度，图3B显示59个单细胞的测序覆盖度。
图4是本发明的一个实施例中的BCS2、BCS3和BCS5中膀胱癌干细胞和分化的膀胱癌肿瘤细胞中特有突变和共有突变的维恩图。
图5是本发明的一个实施例中的膀胱癌干细胞特有的19个基因突变的频率分析结果示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中，自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。需要说明的，本文中所使用的术语“第一”、“第二”或者“第一部分”等仅为方便描述，不能理解为指示或暗示相对重要性，也不能理解为之间有先后顺序关系。在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与表1中的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述突变的所述基因序列。
所称的基因突变序列可以为其上存在表1中的一个突变对应的基因序列，也可以是表1中任意多个突变或者全部19个突变对应的多条基因序列的组合。例如，所称的基因突变序列为存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列、为存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列、为存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列、为存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列、为存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列、为存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列、为存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列、为存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列、为存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列、为存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列、为存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列、为存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列、为存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列、为存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列、为存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列、为存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列、为存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列、为存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列或者为存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列。
所称的基因突变序列也可以为上述任意两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个或者全部十九个带相应突变的基因序列的组合。例如，所称的基因突变序列为存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列和存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列的组合，或者所称的基因突变序列为存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列和存在其它任意一个或多个突变的基因序列的组合。再例如，所称的基因突变序列包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列和存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列，任选的，还包括一个或多个其它带有相应突变的基因序列。
表1所示的19个基因对应的19个突变是发明人新发现的、未见报道过的单核苷酸突变，且是经发明人鉴定过的膀胱癌干细胞特有的。表1中的任意一个或者多个都能够用于判定细胞是否是膀胱癌干细胞，待测细胞中的核酸序列上存在表1中的任意一个基因突变，能够判定该细胞为膀胱癌干细胞。表1所示的19个膀胱癌特有突变，是发明人利用单细胞测序方法，对来自三个膀胱癌患者的四类59个单细胞进行了单细胞测序、数据分析获得的，并且经过其它单细胞样本的验证。来自膀胱组织或者膀胱癌组织的细胞，一般可能为分化的膀胱细胞、分化的膀胱癌细胞、膀胱干细胞或者膀胱癌干细胞。需要说明的是，表1中的SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代与表1一样的SNP位点或SNP组合，都仍旧是本发明公开的表1中的SNP，属于本发明范围，比如表1中MKL1基因序列上的基因组序列上的突变chr22:40807506G>A，与其cDNA上的c.C2684T，属于同一突变，都能致使发生多肽突变p.S895L。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞中存在表1中的任意一个突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，而不能推定膀胱癌干细胞一定具有表1中的任意一个或者表1中的至少一个突变。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与ARID1A基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列。存在chr1:27093001G>A突变的ARID1A基因序列是新发现的、未见报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ARID1A基因序列上是否存在chr1:27093001G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组ARID1A基因序列上的chr1:27093001G>突变，与其cDNA上的c.G2932A突变，为同一突变，都能致使发生多肽突变p.A978T。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列，也可以为序列组合，即所称基因突变序列除了包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr1:27093001G>A以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列还包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr1:27093001G>A以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与ATM基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列。存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ARID1A基因序列上是否存在chr1:27093001G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组ATM基因序列上的chr11:108186754C>A突变，与其cDNA上的c.C6112A突变，指代同一突变，都能致使发生多肽突变p.H2038N。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列，也可以为序列组合，即所称的基因突变序列除了包括存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr11:108186754C>A以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变对应的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr11:108186754C>A以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与CREBBP基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列。存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其CREBBP基因序列上是否存在chr16:3790519C>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组CREBBP基因序列上的chr16:3790519C>A突变，与其cDNA上的c.G3900T突变，指代同一突变，都能致使发生多肽突变p.L1300F。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列，也可以为序列组合，即所称的基因突变序列除了包括存在chr16:3790519C>的CREBBP基因序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr16:3790519C>A以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr16:3790519C>A以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与ERCC2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列。存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ERCC2基因序列上是否存在chr19:45867687T>C突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列，也可以为序列组合，即所称基因突变序列除了包括存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr19:45867687T>C以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr19:45867687T>C以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与ETS1基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列。存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ETS1基因序列上是否存在chr11:128333418A>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组ETS1基因序列上的chr11:128333418A>G突变，与其cDNA上的c.T448C突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.S150P。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列，也可以为序列组合，即所称基因突变序列除了包括存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr11:128333418A>G以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr11:128333418A>G以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与FAT4基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列。存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其FAT4基因序列上是否存在chr4:126329890T>C突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列，也可以为序列组合，即该基因突变序列除了包括存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr4:126329890T>C以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr4:126329890T>C以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与GPRC5A基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列。存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其GPRC5A基因序列上是否存在chr12:13061979T>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组GPRC5A基因序列上的chr12:13061979T>G突变，与其cDNA上的c.T796G突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.W266G。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列，也可以为序列组合，即该基因突变序列除了包括存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr12:13061979T>G以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr12:13061979T>G以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与LRP2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列。存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其LRP2基因序列上是否存在chr2:170096229G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组LRP2基因序列上的chr2:170096229G>A突变，与其cDNA上的c.C4102T突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.P1368S。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列，也可以为序列组合，即所称基因突变序列除了存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr2:170096229G>A以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr2:170096229G>A以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与MAP3K6基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列。存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其MAP3K6基因序列上是否存在chr1:27687466G>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列，也可以为序列组合，即该基因突变序列除了存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr1:27687466G>T以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr1:27687466G>T以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与MKL1基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列。存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其MKL1基因序列上是否存在chr22:40807506G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组MKL1基因序列上的chr22:40807506G>A突变，与其cDNA上的c.C2684T突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.S895L。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列，也可以为序列组合，即该基因突变序列除了包括存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，30.权利要求29的基因突变序列，其特征在于，与表1中的chr22:40807506G>A以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr22:40807506G>A以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与MLL2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列。存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其MLL2基因序列上是否存在chr12:49420183C>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组MLL2基因序列上的chr12:49420183C>G突变，与其cDNA上的c.G15566C突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.G5189A。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列，也可以为序列组合，即所称基因突变序列除了包括存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列，还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr12:49420183C>G以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr12:49420183C>G以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与PAWR基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列。存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其PAWR基因序列上是否存在chr12:79990409G>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组PAWR基因序列上的chr12:79990409G>T突变，与其cDNA上的c.C713A突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.S238X。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列，也可以为序列组合，即除了包括存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列，该基因突变序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr12:79990409G>T以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr12:79990409G>T以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与PITX2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列。存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其PITX2基因序列上是否存在chr4:111542524C>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组PITX2基因序列上的chr4:111542524C>G突变，与其cDNA上的c.G207C突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.E69D。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列，也可以为序列组合，即包括除了存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列，该基因突变序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr4:111542524C>G以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr4:111542524C>G以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与RNF213基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列。存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列是新发现的、未见报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其RNF213基因序列上是否存在chr17:78293189A>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，也可以为序列组合，即除了包括存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，该基因突变序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr17:78293189A>T以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr17:78293189A>T以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与SIN3A基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列。存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其SIN3A基因序列上是否存在chr15:75664469C>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组SIN3A基因序列上的chr15:75664469C>T突变，与其cDNA上的c.G2052A突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.L684L。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列，也可以为序列组合，即除了包括存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列，该基因突变序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr15:75664469C>T以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr15:75664469C>T以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与STAG2基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列。存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其STAG2基因序列上是否存在chrX:123220567C>G突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，也可以为序列组合，即除了包括存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列，该基因突变序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chrX:123220567C>G以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chrX:123220567C>G以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与TP53基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列。存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其TP53基因序列上是否存在chr17:7577100T>C突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围，基因组TP53基因序列上的chr17:7577100T>C突变，与其cDNA上的c.A442G突变，指代同一非同义突变，都能致使发生多肽变异p.R148G。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列，也可以为序列组合，即除了包括存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列，该基因突变序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr17:7577100T>C以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr17:7577100T>C以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与USP24基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列。存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其USP24基因序列上是否存在chr1:55638075G>A突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列，也可以为序列组合，即除了包括存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列，该基因突变序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr1:55638075G>A以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr1:55638075G>A以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例公开的基因突变序列，与ZBTB17基因序列相比，所述基因突变序列包括存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列。存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列是新发现的未报道过的突变序列，该突变序列是膀胱癌干细胞特有的，可以用来鉴定一个细胞是否为膀胱癌干细胞。特别是对来自膀胱/膀胱癌组织的细胞，通过检测其ZBTB17基因序列上是否存在chr1:16270382G>T突变，能准确判断该细胞是否为膀胱癌干细胞。需要说明的是，该SNP突变的表示方式是根据HGVS命名法标注该位点在参考基因组DNA(gDNA，HG19版本)上的位置来显示的，本领域技术人员能够知道，一个SNP位点还可以有其它表示方式，例如以GenBank SNP数据库的命名方法——以rs加7位阿拉伯数字来表示一个SNP，例如以该SNP在参考cDNA上的位置来标注指代一样的SNP位点或SNP组合，仍属于本发明公开的范围。还需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞的核酸序列上存在该突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定存在该突变序列。
该基因突变序列可以是一条序列——存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列，也可以为序列组合，即除了包括存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列，该基因突变序列还包括带有表1中其它的任意一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个或者十八个突变对应的一条或多条基因序列。在本发明的一些实施例中，与表1中的chr1:16270382G>T以外的任意一个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括存在所述任意一个突变的所述基因序列。在本发明的一些实施例中，分别与表1中的chr1:16270382G>T以外的任意多个突变所在的基因序列相比，所述基因突变序列包括分别存在所述多个突变的所述基因序列。
依据本发明的一些实施例，提供了上述任一实施例中的基因突变序列在鉴定膀胱癌干细胞中的用途。表1中的19个基因对应的19个突变是发明人新发现的、未见报道过的单核苷酸突变，且是经发明人鉴定过的膀胱癌干细胞特有的。表1中的任意一个或者多个都能够用于判定细胞是否是膀胱癌干细胞，待测细胞中的核酸序列上只要存在表1中的任意一个基因突变，就能够判定该细胞为膀胱癌干细胞。表1所示的19个膀胱癌特有突变，是发明人利用单细胞测序方法，对来自三个膀胱癌患者的四类59个单细胞进行了单细胞测序、数据分析比较获得的，并且经过其它单细胞样本的验证。需要说明的是，一个细胞中存在所称的基因突变序列是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞中存在表1中的任意一个突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，而不能推定膀胱癌干细胞一定具有表1中的任意一个或者表1中的至少一个突变。因为表1中的19个突变是基于比较这四类细胞，排除其它三类细胞中存在的突变，而确定下来的、只发现存在膀胱癌干细胞的，即膀胱癌干细胞特有，所以较佳的，待测细胞来自膀胱组织或者膀胱癌组织，一般的，膀胱/膀胱癌组织的细胞一般包括四类：分化的膀胱细胞、分化的膀胱癌细胞、膀胱干细胞和膀胱癌干细胞，。
依据本发明的一些实施例，提供一种包括能够检测出上述本发明任一实施例的基因突变序列的试剂的试剂盒。本领域技术人员可以理解，检测SNP突变，可以利用SNP突变所在的位置的参考序列设计引物，扩增出该位置的序列，对该序列进行测序进而确定该位置的碱基；也可以利用SNP突变所在的位置的参考序列设计扩增引物和延伸引物，利用质谱检测该位置的碱基。所以，所称的试剂包括但不限于引物、扩增体系、测序相关试剂和/或质谱检测试剂。该试剂盒能够用来检测膀胱癌干细胞。利用该试剂盒检测一个细胞是否是膀胱癌干细胞时，通过检测该细胞是否存在试剂盒能检出的任一基因突变序列来判定该细胞是否为膀胱癌干细胞。因为表1中的19个突变是基于比较膀胱/膀胱癌组织中的四类细胞，排除大量的其它三类细胞中存在的突变，而确定下来的、只可能存在于膀胱癌干细胞的，所以较佳的，待测细胞来自膀胱组织和/或膀胱癌组织，一般的，来自膀胱/膀胱癌组织的细胞可能为分化的膀胱细胞、分化的膀胱癌细胞、膀胱干细胞和膀胱癌干细胞。
依据本发明的一个实施例公开的鉴定膀胱癌干细胞的方法，该方法包括：检测待测细胞的基因组中是否存在表1中的任意一个突变，若存在，则判定所述待测细胞为膀胱癌干细胞。因为表1中的19个突变是基于比较膀胱/膀胱癌组织中的四类细胞，排除大量的其它三类细胞中存在的突变，而确定下来的、只可能存在于膀胱癌干细胞的，所以较佳的，待测细胞来自膀胱组织，一般的，来自膀胱组织的细胞可能为分化的膀胱细胞、分化的膀胱癌细胞、膀胱干细胞和膀胱癌干细胞。需要说明的是，一个细胞中存在表1中的至少一个突变是判断该细胞是膀胱癌干细胞的必要非充分条件，即待测细胞中存在表1中的任意一个突变序列，则判定该细胞为膀胱癌干细胞，反之，不能推定膀胱癌干细胞一定具有表1中的任意一个或者表1中的至少一个突变。
以下结合具体实施例对本发明的基因突变序列和检测膀胱癌干细胞的方法进行详细的描述。除另有交待，以下实施例中涉及的未特别交待的试剂、序列(接头、标签和引物)、软件及仪器，都是常规市售产品或者开源的。
实施例一
1.组织样本处理获得单细胞样本
膀胱组织或者膀胱癌组织样本获自深圳市第二人民医院。
原代的膀胱癌组织和正常的膀胱组织取自膀胱全切的膀胱癌患者，获得新鲜的组织经过无菌剪碎和胶原酶消化，过滤获得单细胞悬液。
利用CD31、CD45、CD44和Pan-CK抗体，对三例膀胱癌患者的膀胱癌组织和正常的膀胱组织进行染色标记。然后通过流式分选的方法，分选出正常膀胱干细胞(normal bladderstem cells,NBSCs,pan-CK+CD44+)，分化的膀胱细胞(differentiated normal bladdercells,DNBCs,pan-CK+CD44-)，膀胱癌干细胞(bladder cancer stem cells,BCSCs,CD31-CD45-CD44+)和分化的膀胱癌细胞(differentiated bladder cancer cells,DBCCs,CD31-CD45-CD44-)四类不同的细胞，图1显示正常膀胱细胞和膀胱癌细胞的流式分选结果。图1A显示正常膀胱细胞和膀胱癌细胞的流式分选策略：正常膀胱干细胞(normal bladder stemcells,NBSCs,pan-CK+CD44+)，分化的膀胱细胞(differentiated normal bladder cells,DNBCs,pan-CK+CD44-)，膀胱癌干细胞(bladder cancer stem cells,BCSCs,CD31-CD45-CD44+)和分化的膀胱癌细胞(differentiated bladder cancer cells,DBCCs,CD31-CD45-CD44-)。CD31为内皮细胞标志物，CD45为造血谱系细胞标志物，CD44为干细胞标志物，pan-CK为上皮细胞标志物；图1B显示膀胱癌全切的患者BCS2,BCS3和BCS5的流式分选结果。
2.单细胞的基因组提取和鉴定
为了在单细胞水平获得不同类型细胞的基因背景和它们之间的进化关系，我们对分选的细胞进行了单细胞化，并通过多重置换扩增(MDA:multiple displacementamplification)的方法对单细胞的基因组进行了DNA的提取和扩增。经过PCR鉴定，共获得了59个合格的单细胞DNA样品，如表2和图2所示。表2显示原代膀胱癌BCS2,BCS3和BCS5中获得的59个单细胞DNA样品。图2显示原代膀胱癌BCS2,BCS3和BCS5中获得的59个单细胞DNA样品的电泳检测结果，这些样本的DNA样品均通过了管家基因的质量检测，合格的DNA样品需要扩增出至少6个管家基因。
表2
3.单细胞DNA样品的外显子测序
对上述59个合格的单细胞DNA样品，进行了建库和外显子测序。在外显子区域的的平均测序深度有43×，平均覆盖度有95.21％，如图3所示。图3显示单细胞测序数据的评估结果，图3A显示原代膀胱癌BCS2,BCS3和BCS5中分离的单细胞的平均测序深度(Depth，×)，图3B显示59个单细胞的测序覆盖度(Coverage，％)。
4.膀胱癌单细胞测序的突变分析
首先，对测序的数据进行生物信息学分析(Hou et al.,2012；Xu et al.,2012)。在获得了可靠的单个核苷酸的变异数据库后，保留了那些在正常细胞中相同基因型、并且在两个以上肿瘤细胞中相同的突变。如此，在三个样本中分别获得了757、499和166这样的个体突变。过滤掉上述突变位点中与单个核苷酸多态性数据库(The Single NucleotidePolymorphism database,dbSNP)相同的位点以及同义突变的位点，在三个样本中分别筛选到147、253和6个非同义突变的基因，在所有的突变中，随机挑选了200基因做技术验证，通过大量的Sanger测序验证，测序的准确率是97.22％(1188/1222)。
然后，分析膀胱干细胞和分化膀胱肿瘤细胞相同的突变和互斥的突变基因，结果如图4所示。图4的维恩图同时也能说明膀胱癌干细胞中基因突变的数量更多。进一步分析发现，来自BCS2和BCS3的膀胱癌干细胞共有的遗传突变基因包括BRF1,ETS1,LTBP3和USH2A；BCS2和BCS5的膀胱癌干细胞共有MUC2和RGS9BP基因突变；来自BCS2和BCS5的分化膀胱肿瘤细胞共有的突变基因是LAMA5。然而，我们并没有发现三例不同膀胱癌患者的膀胱癌干细胞和分化膀胱肿瘤细胞共有的遗传突变，这可能是肿瘤的异质性和病理分期分级的不同所导致。
为了找到那些能够决定干细胞形成和重编程的关键基因突变，我们关注了那些在膀胱癌干细胞中的特有突变，尤其是那些具有转录调控，染色质重塑调节和细胞自我更新/细胞发育调节的关键基因。从满足以上功能的基因中，验证筛选到19个膀胱癌干细胞特有突变，如表1所示。19个膀胱癌特有突变所在的基因为：CREBBP,ETS1,GPRC5A,MKL1,MLL2,PAWR,PITX2,STAG2,RNF213,USP24,ARID1A,ATM,ERCC2,FAT4,LRP2,SIN3A,TP53,MAP3K6和ZBTB17。对以上19个膀胱癌干细胞特有的突变基因进行了突变频率分析，突变频率小于50％的为MAP3K6，RNF213，USP24和ZBTB17四个基因，余下15个突变基因的特有突变的突变频率不小于50％，如图5所示。图5显示膀胱癌干细胞特有19个基因突变的频率分析，19个基因按照字母表的顺序在横坐标依次排开，纵坐标显示每个基因的体突变频率，圆的大小代表发生基因突变的细胞数目的相对多寡。
实施例二
为了验证上述发现确定的表1中的19个突变基因可以用于鉴定区分出膀胱癌干细胞，发明人收集了另外45例膀胱癌组织样本和100例正常膀胱组织样本，按照实施例一的方法分离鉴定得249个膀胱癌干细胞、782个正常膀胱干细胞、750个分化的正常膀胱细胞和278个分化的膀胱癌细胞单细胞样本。检测各类细胞基因组存在上述表1所列的19个突变基因的情况，统计结果显示：782个正常膀胱干细胞中有1个细胞的基因组检测存在表1中的突变FAT4基因chr4:126329890T>C，750个分化的正常膀胱细胞的基因组均为被检测到19个突变基因中的任何一个，278个分化的膀胱癌细胞中有两个细胞的基因组各存在表1中的一个不同突变基因，而249个膀胱癌干细胞中有206个的基因组被检测到存在表1中的1个或多个突变基因。
实施例三
为了进一步验证上述发现确定的19个突变基因中的ARID1A，GPRC5A和MLL2突变基因可以用来检测鉴定膀胱癌干细胞，发明人收集分离了另外51例膀胱癌样本，对其进行了膀胱癌干细胞的分选，从每个病例样本分离鉴定共获得51个膀胱癌干细胞。提取每个病例的膀胱癌干细胞的DNA，再利用检测ARID1A，GPRC5A和MLL2三个基因的引物来确定膀胱癌干细胞中的这三个基因是否存在表1中的突变，突变检测引物可以基于突变所在位置的参考基因序列设计合成。经过统计，在51例膀胱癌干细胞单细胞样本中，有12个膀胱癌干细胞具有ARID1A(23.53％)突变，10个膀胱癌干细胞具有GPRC5A(19.61％)突变，11个膀胱癌的干细胞具有MLL2(21.57％)突变，如表3所示。
表3
| 基因(gene) | 突变率(Mutation rate) |
| ARID1A | 12/51＝23.53％ |
| GPRC5A | 10/51＝19.61％ |
| MLL2 | 11/51＝21.57％ |
通过对每个样本的突变情况进行了仔细的分析，发现有三个样本同时具有ARID1A和GPRC5A上的表1中的突变(3/51＝5.88％)；有另外三个样本同时具有GPRC5A和MLL2上的表1中的突变(3/51＝5.88％)；有4四个样本同时具有ARID1A和MLL2上的表1中的突变(4/51＝7.84％)；有2两个样本同时具有ARID1A，GPRC5A和MLL2上的表1中的突变(2/51＝3.92％)。
实施例四
为了进一步验证上述发现确定的19个突变基因中可以用来检测鉴定膀胱癌干细胞，发明人收集了485例正常膀胱组织样本和45例膀胱癌组织样本，参照实施例一从所说的组织样本中分离鉴定得到2051个分化的膀胱细胞、179个膀胱癌干细胞、205个分化的膀胱癌细胞和889个膀胱干细胞。
利用表1中的突变所在的基因的参考序列设计合成各个突变的检测引物，检测上述各类单细胞样本的基因组是否存在表1中的19个突变基因，统计结果。
统计结果表明，在上述2051个正常膀胱细胞未检测到表1中的19个突变基因中的任一个，205个分化的膀胱癌细胞中检测到1个细胞的基因组存在表1所列的1个突变基因，899个膀胱干细胞中检测到两个细胞的基因组分别存在表1所列的不同的1个突变基因。179个膀胱癌干细胞中有148个细胞的基因组检测到存在一个或几个表1所列的19个突变基因，其中有35个检测到只存在19个突变基因中的一个，113个膀胱癌干细胞检测到存在多个表1中的突变基因，而且，在这拨膀胱癌干细胞的基因组中均未检测到表1中的带有USP24基因chr1:55638075G>A的USP24突变基因序列。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (1)
1.试剂在制备用于鉴定膀胱癌干细胞的试剂盒中的用途，其特征在于，对表1的所有的基因突变序列进行检测，所述试剂能够检测出基因突变序列，其中与表1中的任意一个突变所在的基因序列相比，至少存在ARID1A、GPRC5A和MLL2基因突变序列，
表1：
。
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2015
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| rs556141979;Submitter:1000GENOMES,Submission ID:ss1290136655;《Genbank SNP》;20140821;Reference SNP(rs) Report，Genomic regions，transcripts，and products部分 * |
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