CN106610404B - 采用hplc法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法 - Google Patents

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本发明涉及一种采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，属于医药技术领域。本发明采用HPLC法实现盐酸西那卡塞同分异构体的检测，HPLC法测定盐酸西那卡塞中异构体的色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose‑3柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相：乙腈和0.01mol/L的缓冲盐水溶液，流速：0.8‑1.2ml/min，柱温：25‑35℃,检测波长：222nm，进样量：10μL。通过高效液相色谱法，检测合成终产物中盐酸西那卡塞的两种异构体，对盐酸西那卡塞质量进行精确控制，有利于优化工艺，提高产品质量和安全性。

Description

采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法
技术领域
本发明涉及一种采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，属于医药技术领域。
背景技术
盐酸西那卡塞由美国NPS Pharmaceuticals公司研发的拟钙剂，2004年3月8日FDA批准Amgen公司(NPS制药公司该产品的许可权受让人)生产的盐酸西那卡塞上市，商品名为Sensipar；2007年10月，麒麟制药公司生产的盐酸西那卡塞在日本上市，商品名为REGPARA，规格为25mg、75mg(以西那卡塞计)。西那卡塞是被称为拟钙剂(calcimimetics)的新一类化合物中第一个药物，能激活甲状旁腺中的钙受体，从而降低甲状旁腺素(PTH)的分泌。它调节甲状旁腺钙受体的行为，通过增强受体对血流中钙水平的敏感性，降低甲状旁腺激素、钙、磷和钙-磷复合物的水平。西那卡塞盐酸化合成的盐酸西那卡塞终产物中会产生两个同分异构体，即异构体A和异构体B，三者的结构式分别如下：
盐酸西那卡塞的结构式为：
盐酸西那卡塞异构体A的结构式为：
盐酸西那卡塞异构体B的结构式为：
由于异构体A和异构体B的存在，会影响盐酸西那卡塞含量的检测，目前尚无有效的分析方法，该方法的建立弥补了这一空缺。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，对于控制产品质量提供了一种简单、高效的检测方法。
本发明的技术方案为：
一种采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，所述HPLC法测定盐酸西那卡塞中异构体的色谱条件为：
色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱(250mm×4.6mm,5um)，
流动相：乙腈和0.01mol/L的缓冲盐水溶液，所述缓冲盐优选无水磷酸二氢钠；
流速：0.8-1.2ml/min，优选1ml/min；
柱温：25-35℃，优选30℃；
检测波长：222nm；
进样量：10μL；
流动相梯度洗脱体积比见表1：
表1：流动相梯度洗脱体积比A
流速 乙腈(v％) 缓冲盐(v％) 时间
1ml/min 28-32 68-72 0
1ml/min 33-38 62-67 15
1ml/min 38-42 58-62 40
优选表2中的梯度洗脱：
表2：流动相梯度洗脱体积比B
流速 乙腈(v％) 缓冲盐(v％) 时间
1ml/min 30 70 0
1ml/min 35 65 15
1ml/min 40 60 40
与现有技术相比，本发明的有益效果为：通过高效液相色谱法，同时检测盐酸西那卡塞中的两种异构体，对盐酸西那卡塞合成终产物的质量进行控制，有利于优化工艺，提高产品质量和安全性。
附图说明
图1是实施例1的色谱图，
图2是实施例2的色谱图，
图3是实施例3的色谱图，
图4是实施例4的色谱图，
图5是实施例5的色谱图，。
具体实施方式
以下结合实施例和附图对本发明进行详细的阐述。
实施例1：
(1)实验材料与实验条件：
色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相：乙腈和0.01mol/L的无水磷酸二氢钠水溶液，流速：1ml/min，柱温：30℃，检测波长：222nm，进样量：10μL；采用流动相进行梯度洗脱，其梯度洗脱体积比如表2。
(2)实验步骤：
取异构体A，用甲醇溶解、稀释，制成每1ml溶液中约含5.0mg异构体A的供试液A；
精取供试液A 10μL，注入色谱仪，记录色谱图，见图1。
(3)实验结果分析
图1中，西那卡塞同分异构体A具有保留时间为20.9min左右的色谱峰。
实施例2：
(1)实验材料与实验条件：
色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相：乙腈和0.01mol/L的无水磷酸二氢钠水溶液，流速：1ml/min，柱温：30℃，检测波长：222nm，进样量：10μL；采用流动相进行梯度洗脱，其梯度洗脱体积比如表2。
(2)实验步骤：
取异构体B，用甲醇溶解、稀释，制成每1ml溶液中约含5.0mg异构体B的供试液B；
精取供试液B 10μL，注入色谱仪，记录色谱图，见图2。
(3)实验结果分析
图2中，西那卡塞同分异构体B具有保留时间为30.4min左右的色谱峰。
实施例3：
(1)实验材料与实验条件：
色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相：乙腈和0.01mol/L的无水磷酸二氢钠水溶液，流速：1ml/min，柱温：30℃，检测波长：222nm，进样量：10μL；采用流动相进行梯度洗脱，其梯度洗脱体积比如表2。
(2)实验步骤：
取盐酸西那卡塞(不含异构体)，用甲醇溶解、稀释，制成每1ml溶液中约含5.0mg盐酸西那卡塞的供试液C；
精取供试液C 10μL，注入色谱仪，记录色谱图，见图3。
(3)实验结果分析
图3中，盐酸西那卡塞具有保留时间为22.3min左右的色谱峰。
实施例4：
(1)实验材料与实验条件：
色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相：乙腈和0.01mol/L的无水磷酸二氢钠水溶液，流速：1ml/min，柱温：30℃，检测波长：222nm，进样量：10μL；采用流动相进行梯度洗脱，其梯度洗脱体积比如表2。
(2)实验步骤：
各取异构体A，异构体B和盐酸西那卡塞适量，按照1：1：1的质量比例混合，得混合物，用甲醇溶解、稀释，制成每1ml溶液中约含5.0mg混合物的供试液D；
精取供试液D 10μL，注入色谱仪，记录色谱图，见图4。
(3)实验结果分析
图4中，异构体A具有保留时间为20.0min左右的色谱峰，盐酸西那卡塞具有保留时间为22.3min左右的色谱峰，异构体B具有保留时间为30.4min左右的色谱峰。结果表明：在实施例4的条件下，三者色谱峰分离度良好(分离度均大于1.5)，该检测方法可用于西那卡塞合成反应监控及其质量控制。
实施例5：(对比例)
(1)实验材料与实验条件：
色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相：乙腈和0.01mol/L的无水磷酸二氢钠水溶液，流速：1ml/min，柱温：30℃，检测波长：222nm，进样量：10μL；采用流动相进行梯度洗脱，其梯度洗脱体积比如表3：
表3：流动相梯度洗脱体积比C
流速 乙腈(v％) 缓冲盐(v％) 时间
1ml/min 35 65 0
1ml/min 40 60 15
1ml/min 50 50 35
(2)实验步骤：
各取异构体A，异构体B和盐酸西那卡塞适量，按照1：1：1的质量比例混合，得混合物，用甲醇溶解、稀释，制成每1ml溶液中约含5.0mg混合物的供试液E；
精取供试液E 10μL，注入色谱仪，记录色谱图，见图5。
(3)实验结果分析
图5中，异构体A和盐酸西那卡塞的色谱峰交错，表明：在实施例5的条件下，三者色谱峰分离度效果不好，因此不能用于西那卡塞合成反应监控及其质量控制。
值得注意的是，本实施例中仅仅是洗脱梯度发生了很小的变化，就已经造成色谱峰分离效果不好；如果其他参数也发生相应偏离变化，产生的影响则会更大；因此选择本发明提供的参数对于测量盐酸西那卡塞中的异构体是很重要的，是很好的选择。
实施例6：
在其他条件相同的情况下(即色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相：乙腈和0.01mol/L的无水磷酸二氢钠水溶液，流速：1ml/min，检测波长：222nm，进样量：10μL，梯度洗脱体积比如表2)，本实施例针对色谱柱的柱温的变化进行了一系列的实验筛选，结果发现，柱温在25-35℃之间均有较好的分析结果，尤其是柱温在30℃时，色谱条件最佳。
表4中分别为25℃、30℃和35℃时，异构体A、盐酸西那卡塞和异构体B三者的色谱的分离度、选择性和对称因子的实验结果参数，与得出的实验结论相符。
表4：柱温变化影响表
实施例7：
在其他条件相同的情况下(即色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相：乙腈和0.01mol/L的无水磷酸二氢钠水溶液，柱温：30℃，检测波长：222nm，进样量：10μL，梯度洗脱体积比如表2)，本实施例针对色谱柱的流速的变化进行了一系列的实验筛选，结果发现，流速在0.8-1.2ml/min之间均有较好的分析结果，尤其是流速在1ml/min时，色谱条件最佳。
表5中是流速分别为0.8ml/min、1.0ml/min和1.2ml/min时，异构体A、盐酸西那卡塞和异构体B三者的色谱的分离度、选择性和对称因子的实验结果参数，与得出的实验结论相符。
表5：流速变化影响表
同时，本发明提供的洗脱梯度选择也是在进行了大量的实验基础上得出的，其余实验条件，如样品浓度，检测波长等均是在实验基础上得出的比较理想的条件。

Claims (5)

1.一种采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，其特征在于：用于检测盐酸西那卡塞中的异构体A和异构体B，其中，
所述异构体A的结构式为：
所述异构体B的结构式为：
所述HPLC法测定盐酸西那卡塞中异构体的色谱条件为：
色谱柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-3柱，250mm×4.6mm,5um，
流动相：乙腈和0.01mol/L的缓冲盐水溶液，
柱温：25-35℃，
检测波长：222nm，
进样量：10μL，
流动相梯度洗脱体积比见表1：
表1
流速 乙腈(v％) 缓冲盐(v％) 时间 1ml/min 28-32 68-72 0 1ml/min 33-38 62-67 15 1ml/min 38-42 58-62 40
。
2.根据权利要求1所述的采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，其特征在于：所述流动相中缓冲盐选择无水磷酸二氢钠。
3.根据权利要求1所述的采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，其特征在于：所述柱温选择30℃。
4.根据权利要求1所述的采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，其特征在于：所述流动相梯度洗脱体积比见表2：
表2
5.根据权利要求1-4任一所述的采用HPLC法检测盐酸西那卡塞同分异构体的方法，其特征在于：配制供试液时，将供试品用甲醇溶解、稀释，制成每1ml溶液中含5.0mg供试品的供试液。
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