CN106581012A - 一种抗癌药物组合物及其制剂和制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗癌药物组合物及其制剂，该抗癌药物组合物包括紫杉醇(PTX)和具有式(I)所示结构的可释放硫化氢的阿司匹林衍生物(HS‑ASP)。本发明通过将不同作用机理的PTX和HS‑ASP联用，协同提高抗癌疗效，同时能够减少PTX的剂量，从而降低PTX的毒副作用，在临床上可提高患者的治疗指数，改善患者的依从性。本发明还同时提供了该抗癌药物组合物的制剂及其制备方法，利用增溶剂可将PTX和HS‑ASP同时溶解于注射用水中，制备成可静脉注射或滴注的制剂，从而大大提高药物的生物利用度。

Description

一种抗癌药物组合物及其制剂和制备方法
技术领域
本发明涉及抗肿瘤药物研究领域，特别涉及一种抗癌药物组合物及其制剂和制备方法。
背景技术
紫杉醇(PTX)作为晚期非小细胞肺癌的一线化疗药物，以及在乳腺癌、白血病、胃肠癌及介入治疗后的血管再狭窄等治疗中显示令人鼓舞的疗效。目前，在我国紫杉醇主要有3种制剂应用于临床：一种是聚氧乙烯蓖麻油-无水乙醇1∶1的静脉注射液(如泰素)，该注射液可增加紫杉醇溶解度，但聚氧乙烯蓖麻油已被证明会导致严重的过敏反应，骨髓抑制，神经毒性，心血管毒性，肝肾毒性等，给药前还需要进行繁琐的抗过敏处理；另一种紫杉醇制剂是美国生物科学公司紫杉醇纳米-清蛋白混悬液(凯素)，与传统的紫杉醇制剂相比具有更明显的骨髓抑制作用，且呈剂量依赖型，其神经毒性作用也较强；第三种是注射用紫杉醇脂质体(力扑素)，于2004年在我国上市，该制剂利用卵磷脂等将紫杉醇进行包裹，去除了原来的溶媒，具有改善药物的溶解性，在一定程度上延长药物的半衰期，提高药物靶向性和降低药物不良反应等优点，但由于其被动靶向作用，对肿瘤的选择性并未显著提高，抗肿瘤疗效与传统剂型没有明显差异，仅减轻了由原溶媒引起的变态反应，其他不良反应与原剂型相当。
据文献报道，非甾体抗炎药(NSAIDs)在体外实验和动物模型试验中具有抗癌作用，在啮齿类动物模型上可抑制由致癌物质或基因引起的癌变，降低大肠癌癌前病变和结肠癌发病率，故有预防癌症的作用，因此可能成为癌症的辅助治疗手段之一。NSAIDs已广泛用于治疗感冒，发热，炎症等，并且显示出较小的毒副作用，但其对上消化道的副作用，如胃肠道不适及溃疡等仍然是临床应用上的一个主要问题。于是，人们期望能够找到一种替代的药物，使频繁和长期的药物治疗更加安全。据报道，在对啮齿类动物的结肠炎模型研究中，美沙拉嗪的硫化氢释放衍生物与美沙拉嗪分子相比表现出更优异的抗炎和抗损伤效果；而双氯芬酸的硫化氢释放衍生物可抑制脂多糖诱导的炎症，与双氯芬酸相比，显著降低对胃的毒性，同时，它可降低血浆中的IL-1β/TNF-a并升高血浆中的IL-10。以上研究说明，可释放硫化氢的NSAIDs(HS-NSAIDs)不仅可以提高疗效，还可以减轻NSAIDs的胃肠道副作用，因此更适合于临床应用。Mitali Chattopadhyay等人报道了可释放硫化氢的NSAIDs(HS-NSAIDs)通过抑制增殖，诱导凋亡和将细胞周期阻滞在G0/G1期，从而抑制多种肿瘤细胞的生长，包括肺癌，人结肠癌，乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌，肺癌和白血病的肿瘤细胞。其中可释放硫化氢的阿司匹林衍生物4-(3-硫代-3H-1，2-二硫-5-基)-苯基-2-乙酰氧基苯甲酸酯(HS-ASP)其抗癌效果最强，且明显高于阿司匹林(28-＞3000倍)，这可能与释放的H2S能够增强药物对细胞毒性有关。还有研究显示，HS-ASP可以抑制真核转录因子NF-kB和硫氧还蛋白还原酶TrxR活性，诱导活性氧ROS，从而引起肿瘤细胞凋亡和细胞周期改变，抑制人乳腺癌MDA-MB-231荷瘤小鼠模型的肿瘤生长。Chattopadhyay，M.等人报道HS-ASP可以上调Nrf2，NQ01，UGT和GST水平，HS-ASP同时诱导多种II相代谢酶，这一机制进一步显示HS-ASP是一种效果好的癌症的化学预防剂。综上，HS-ASP是一种安全和有效的抗癌辅助治疗剂或癌症预防剂。
在肿瘤的药物治疗中，由于化疗单一用药使人体对特定药物产生耐药性的几率较大，疗效不理想，故常采用多种抗肿瘤药物进行联合化疗。不同作用机制的抗肿瘤药合用，往往能增强疗效。例如NSCLC常用的一线方案包括铂类，加用长春瑞滨、紫杉醇、吉西他滨、培美曲塞、伊立替康或多西他赛；骨髓抑制毒性是多数抗瘤药物的主要毒性，联合应用一些骨髓抑制作用小的抗瘤药，如泼尼松、长春新碱、博来霉索等，往往可起到提高疗效降低毒性的作用。于是，我们设想将紫杉醇(PTX)与HS-ASP联用，一方面紫杉醇通过影响微管聚合与解聚的动态平衡，导致细胞周期停滞于G2/M期，诱导肿瘤细胞凋亡；另一方面HS-ASP通过抑制NF-kB和TrxR活性，诱导ROS和多种II相代谢酶，而引起肿瘤细胞凋亡和细胞周期改变，抑制肿瘤生长，两种药物通过不同作用机制共同对抗肿瘤，将很有可能提高治疗指数疗效；同时，由于HS-ASP毒副作用很小，联用可以在同样的治疗指数下减少紫杉醇的剂量，从而降低主要由紫杉醇引起的毒副作用。这两个药物的联用将有可能成为一种更安全和更有效的临床治疗方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述不足，提供一种抗癌药物组合物及其制剂。通过将不同作用机理的PTX和HS-ASP联用，协同提高抗癌疗效，同时能够减少PTX的剂量，从而降低PTX的毒副作用，在临床上可提高患者的治疗指数，改善患者的依从性。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
一种抗癌药物组合物，包括紫杉醇和具有式(I)所示结构的可释放硫化氢的阿司匹林衍生物。
该药物组合物含有抗癌成分紫杉醇(PTX)和可释放硫化氢的阿司匹林衍生物(HS-ASP)，可添加其他药学尚可接受的成分，也可不添加其他成分。
紫杉醇的结构式为：
紫杉醇英文名为Paclitaxel(PTX)，化学名为5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基异丝氨酸酯，分子量为853.92，分子式为C47H51NO14。
可释放硫化氢的阿司匹林衍生物的结构式为：
可释放硫化氢的阿司匹林衍生物的英文名为4-(3-thioxo-3H-1，2-dithiol-5-yl)phenyl 2-acetoxybenzoate，简称HS-ASP，化学名为4-(3-硫代-3H-1，2-二硫-5-基)-苯基-2-乙酰氧基苯甲酸酯，分子量为388.47，分子式为C18H12O4S3。
本发明的发明思路为将紫杉醇(PTX)与HS-ASP联用，一方面紫杉醇通过影响微管聚合与解聚的动态平衡，导致细胞周期停滞于G2/M期，诱导肿瘤细胞凋亡；另一方面HS-ASP通过抑制NF-kB和TrxR活性，诱导ROS和多种II相代谢酶，而引起肿瘤细胞凋亡和细胞周期改变，抑制肿瘤生长，两种药物通过不同作用机制共同对抗肿瘤，提高治疗指数疗效；同时，由于HS-ASP毒副作用很小，联用可以在同样的治疗指数下减少紫杉醇的剂量，从而降低主要由紫杉醇引起的毒副作用。
优选地，紫杉醇和阿司匹林衍生物的重量比为1∶1～1∶15，当重量比大于1∶1时，药物组合物中紫杉醇的剂量过大，导致药物组合物的毒副作用增大，不利于临床治疗，同时提高了药物组合物的成本；当重量比小于1∶15时，药物组合物不能起到影响微管聚合与解聚的动态平衡，促使细胞周期停滞于G2/M期，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长的作用，其协同增效发挥的抗肿瘤效果降低。更优选地，紫杉醇和阿司匹林衍生物的重量比为1∶5。
在本发明提供的一些实施例中，PTX与HS-ASP的重量比为1∶7。
在本发明提供的一些实施例中，PTX与HS-ASP的重量比为1∶10。
在本发明提供的一些实施例中，PTX与HS-ASP的重量比为1∶15。
本发明的另一目的在于提供上述抗癌药物组合物的应用，所述抗癌药物组合物可应用于治疗肺癌、卵巢癌、乳腺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤或脑瘤。
本发明的再一目的在于提供一种抗癌药物组合物的制剂，所述制剂为静脉注射或滴注制剂，由紫衫醇、可释放硫化氢的阿司匹林衍生物、增溶剂和注射用水制成。
优选地，增溶剂为聚乙二醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸、失水山梨醇脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠和聚氧乙烯蓖麻油中的一种或几种。
优选地，紫杉醇、可释放硫化氢的阿司匹林衍生物、增溶剂和注射用水的重量比为(0.1～0.4)∶(0.1～6)∶(10～100)∶(200～2000)。该重量比例范围内制备的制剂具有优异的抗肿瘤效果，更优选地，紫杉醇、可释放硫化氢的阿司匹林衍生物、增溶剂和注射用水的重量比为0.4∶2∶100∶1000，通过进一步地优选制剂各组分的重量配比，保证其协同增效效果更佳。
上述制剂的制备方法，包括以下步骤：将紫衫醇、可释放硫化氢的阿司匹林衍生物和增溶剂混合均匀，加入有机溶剂溶解，真空旋转蒸发除去有机溶剂后，加入注射用水，搅拌溶解，0.22-0.45微米滤膜过滤即得到所述制剂。
优选地，上述有机溶剂为丙酮、乙醇、甲醇、氯仿或二氯甲烷中任意一种或几种的组合。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
1、本发明通过将紫杉醇(PTX)和可释放硫化氢的阿司匹林衍生物(HS-ASP)联合使用时可提高对肿瘤细胞有丝分裂周期的阻滞效果，从而提高抗肿瘤效果，降低紫杉醇的IC50，从而可在临床使用时减少紫杉醇的单药剂量，从而减轻其毒副作用，减少用药量，节省治疗成本。
2、本发明通过将紫杉醇(PTX)和可释放硫化氢的阿司匹林衍生物(HS-ASP)联合使用时相比现有技术可提高单药诱导肿瘤细胞凋亡的能力，从而提高抗肿瘤效果。
3、本发明通过将紫杉醇(PTX)和可释放硫化氢的阿司匹林衍生物(HS-ASP)与增溶剂和水组合制备成静脉注射或滴注制剂，可显著提高PTX和HS-ASP的水溶性，从而大大提高药物的生物利用度和成药性。
4、本发明提供的抗癌药物组合物的制剂，不含有机溶剂等容易引起过敏和毒副作用的辅料，从而提高了药物的安全性和患者的依从性.
附图说明
图1为本发明实施例PTX和HS-ASP单用或合用，分别对路易斯肺癌细胞LL/2的生长抑制曲线。
图2为本发明实施例PTX和HS-ASP单用或合用，分别对路易斯肺癌细胞LL/2的凋亡率的影响。
具体实施方式
下面结合试验例及具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1 抗癌药物组合物A的制备
可释放硫化氢的阿司匹林衍生物的合成：
如上述反应式(a)所示，将5.6克化合物1与5.8克化合物2分别加入到240毫升二氯甲烷中，然后再加入0.25克DMAP，在室温下搅拌反应6小时后真空旋转蒸发除去溶剂，随后通过柱层析提纯，得到10.9克化合物3。
将紫杉醇与上述合成的化合物3按重量比1∶5混合即得到抗癌药物组合物A。
实施例2 抗癌药物组合物B的制备
可释放硫化氢的阿司匹林衍生物的合成：
如上述反应式(a)所示，将10.2克化合物1与9.8克化合物2分别加入到420毫升二氯甲烷中，然后再加入0.48克DMAP，在室温下搅拌反应6小时后真空旋转蒸发除去溶剂，随后通过柱层析提纯，得到18.6克化合物3。
将紫杉醇与上述合成的化合物3按重量比1∶1混合即得到抗癌药物组合物B。
实施例3 抗癌药物组合物C的制备
可释放硫化氢的阿司匹林衍生物的合成：
如上述反应式(a)所示，将7.6克化合物1与7.2克化合物2分别加入到360毫升二氯甲烷中，然后再加入0.36克DMAP，在室温下搅拌反应6小时后真空旋转蒸发除去溶剂，随后通过柱层析提纯，得到15.4克化合物3。
将紫杉醇与上述合成的化合物3按重量比1∶10混合即得到抗癌药物组合物C。
实施例4 抗癌药物组合物D的制备
将紫衫醇与实施例1中合成的化合物3按重量比1∶15混合得到抗癌药物组合物D。
实施例5 制备抗癌药物组合物A的静脉注射制剂
将0.4g紫衫醇、2.0g HS-ASP和100g吐温-80混合均匀，加入100ml有机溶剂二氯甲烷溶解，随后真空旋转蒸发除去有机溶剂，加入1000g注射用水，搅拌溶解，0.22微米滤膜过滤即得到所述抗癌药物组合物A的静脉注射制剂。
实施例6 制备抗癌药物组合物B的滴注制剂
将0.4g紫衫醇、0.4g HS-ASP和50g聚氧乙烯蓖麻油混合均匀，加入50ml有机溶剂二氯甲烷溶解，随后真空旋转蒸发除去有机溶剂，加入1000g注射用水，搅拌溶解，0.32微米滤膜过滤即得到所述抗癌药物组合物B的滴注制剂。
实施例7 制备抗癌药物组合物C的静脉注射制剂
将0.2g紫衫醇、2.0g HS-ASP和100g聚乙二醇400混合均匀，加入100ml有机溶剂二氯甲烷溶解，随后真空旋转蒸发除去有机溶剂，加入1000g注射用水，搅拌溶解，0.45微米滤膜过滤即得到所述抗癌药物组合物C的静脉注射制剂。
实验例
实验例1 本发明抗癌药物组合物对路易斯肺癌细胞LL/2的生长抑制实验
1.目的：观察测试PTX和HS-ASP单用或合用分别对路易斯肺癌细胞LL/2的生长抑制作用
2.材料
PTX，进口分析纯样品购自美国Sigma公司；HS-ASP，实施例1制备的可释放硫化氢的阿司匹林衍生物；实施例1制备的抗癌药物组合物A；DMEM、胎牛血清(FBS)购自美国GibieoBRL公司；小鼠路易斯肺癌细胞系LL/2购自American Type Culture Collection(ATCC)，加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基，放入37℃饱和湿度下、5％CO2培养箱中培养。
3.方法
LL/2单细胞悬液接种于96孔培养板中，每孔100μL(3000细胞)，培养24h之后，加入用培养基稀释的不同浓度的PTX、HS-ASP、抗癌药物组合物A至终浓度分别为5、10、20、40μg/mL作为实验组，对照组加入等量的培养基作为对照(每组设置4个复孔，实验重复3次)。培养48h，在结束培养前4h，加入MTT 20μL，继续培养4h。最后彻底弃去培养上清液，每孔加入150μL DMSO，37℃下摇床低速晃动10min，使结晶物充分溶解。在酶标仪上，设定570nm波长下检测每孔细胞的吸光度A570值，按下列公式计算细胞存活率：细胞存活率(％)＝实验组A570值/对照组A570值×100％。以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出样品的半数杀伤浓度IC50。
4.实验结果表1所示
表1
从表1可以看出单用的PTX溶液的IC50为8.16±0.63μg/ml，而单用的HS-ASP溶液的IC50高达25.62±1.88μg/ml，，而采用PTX和HS-ASP按质量比1∶5配比的本发明实施例1制备的抗癌药物组合物A的IC50仅为0.53±0.07μg/ml(按PTX计算)，抗癌效果显著提高。
实验例2 本发明抗癌药物组合物对路易斯肺癌细胞LL/2的剂量依赖毒性实验
1.目的：观察测试PTX单用以及PTX/HS-ASP合用分别对路易斯肺癌细胞LL/2的剂量依赖毒性。
2.材料
PTX，进口分析纯样品购自美国Sigma公司；HS-ASP，实施例2制备的可释放硫化氢的阿司匹林衍生物；实施例2制备的抗癌药物组合物B；DMEM、胎牛血清(FBS)购自美国GibieoBRL公司；小鼠路易斯肺癌细胞系LL/2购自American Type Culture Collection(ATCC)，加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基，放入37℃饱和湿度下、5％CO2培养箱中培养。
3.方法
LL/2单细胞悬液接种于96孔培养板中，每孔100μL(3000细胞)，培养24h之后，加入用培养基稀释的不同浓度的PTX、抗癌药物组合物B至终浓度分别为5、10、20、40μg/mL作为实验组，对照组加入等量的培养基作为对照(每组设置4个复孔，实验重复3次)。培养48h，在结束培养前4h，加入MTT 20μL，继续培养4h。最后彻底弃去培养上清液，每孔加入150μLDMSO，37℃下摇床低速晃动10min，使结晶物充分溶解。在酶标仪上，设定570nm波长下检测每孔细胞的吸光度A570值，按下列公式计算细胞存活率：细胞存活率(％)＝实验组A570值/对照组A570值×100％。以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制曲线。
4、实验结果如附图1所示，从附图1可以看出本发明实施例2制备的抗癌药物组合物B对路易斯肺癌细胞LL/2的剂量依赖毒性均远远强于单用的PTX。
实验例3 本发明抗癌药物组合物对路易斯肺癌细胞LL/2的凋亡率和细胞周期的影响测试
1.目的：观察测试PTX和HS-ASP单用或合用分别对路易斯肺癌细胞LL/2的凋亡率和细胞周期的影响
2.材料
PTX，进口分析纯样品；HS-ASP，实施例3制备的可释放硫化氢的阿司匹林衍生物；实施例3制备的抗癌药物组合物C；其他试剂均为进口或国产分析纯产品；DMEM、胎牛血清(FBS)购自美国GibieoBRL公司；小鼠路易斯肺癌细胞系LL/2购自American Type CultureCollection(ATCC)，加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基，放入37℃饱和湿度下、5％CO2培养箱中培养。
3.方法
取对数生长期的LL/2细胞，按细胞密度为105孔接种于6孔板内，待24h细胞贴壁后，分别加入PTX、HS-ASP和抗癌药物组合物C 30μg/ml，对照组加入等量的培养基作为对照(每组设置4个复孔，实验重复3次)，处理细胞48h后，收集细胞，1800r/min离心3min，弃上清，PBS清洗2次，用0.2ml PBS将细胞沉淀混匀，70％冷乙醇固定24h，1mL碘化丙啶(PI)染液(含50mg/ml PI，10％Triton X-100和10mg/L RNaseA)，4℃避光染色30min，用ESP型流式细胞仪(美国Coulter公司)检测凋亡率与细胞周期。
4.实验结果
一般认为恶性转化的肿瘤细胞是因为失控生长，过度增殖，从细胞凋亡的角度看则认为是肿瘤的凋亡机制受到抑制不能正常进行细胞死亡清除的结果。
上述路易斯肺癌细胞LL/2的凋亡率实验测试结果如附图2所示，其中空白对照组细胞凋亡率为4.01％，单独使用HS-ASP组细胞凋亡率为31.4，单独使用PTX组细胞凋亡率为36.97％，而抗癌药物组合物C组细胞凋亡率为45.3％，明显高于其他三个组。从附图2的结果可以看出本发明实施例3制备的抗癌药物组合物C对诱导路易斯肺癌细胞LL/2的凋亡的效果远远强于单用的PTX。
细胞周期指从细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。现代分子生物学研究表明，肿瘤是一种细胞周期疾病，即恶性肿瘤的本质在于细胞周期调节失控，细胞呈无限制增殖和分裂，即机体细胞增殖失控与肿瘤的发生有密切的关系，而细胞的增殖失控又是细胞周期调控异常的结果。抗肿瘤药物常常通过干扰正常的细胞周期进程，使肿瘤细胞不能完成正常的细胞增殖来达到抗肿瘤的目的，而凡是通过影响细胞周期的生化条件或细胞周期调控机制，干扰细胞周期进程，使肿瘤细胞不能完成正常的细胞增殖或致肿瘤细胞死亡的药物，都可发挥抗肿瘤作用。
本发明实施例3制备的抗癌药物组合物C及单独使用PTX，分别对路易斯肺癌细胞LL/2的细胞周期的影响测试结果如附表2所示。
表2.PTX以及HS-ASP、PTX合用对路易斯肺癌细胞LL/2的细胞周期影响
Data as mean±SD，n＝3.*p＜0.05，HS-ASP vs Control；**p＜0.005，PTX，HS-ASP/PTX vs Control.
从表2可以看出，本发明实施例3制备的药物组合物在本次测试实验中使肿瘤细胞主要阻滞于G2/M期，进入S期的细胞数明显减少，DNA复制受阻，从而肿瘤细胞不能增殖，甚至死亡。周期阻滞效果明显优于单独使用PTX。

Claims (10)

1.一种抗癌药物组合物，其特征在于，包括紫杉醇和具有式(I)所示结构的可释放硫化氢的阿司匹林衍生物。
2.根据权利要求1所述的抗癌药物组合物，其特征在于，所述紫杉醇和所述可释放硫化氢的阿司匹林衍生物的重量比为1∶1～1∶15。
3.根据权利要求2所述的抗癌药物组合物，其特征在于，所述紫杉醇和所述可释放硫化氢的阿司匹林衍生物的重量比为1∶5。
4.根据权利要求1-3任一项所述的抗癌药物组合物的应用，其特征在于，所述抗癌药物组合物可应用于治疗肺癌、卵巢癌、乳腺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤或脑瘤。
5.一种抗癌药物组合物的制剂，其特征在于，所述制剂为静脉注射或滴注制剂，由紫衫醇、可释放硫化氢的阿司匹林衍生物、增溶剂和注射用水制成。
6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，所述增溶剂为聚乙二醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸、失水山梨醇脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠和聚氧乙烯蓖麻油中的一种或几种。
7.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，所述紫杉醇、可释放硫化氢的阿司匹林衍生物、增溶剂和注射用水的重量比为(0.1～0.4)∶(0.1～6)∶(10～100)∶(200～2000)。
8.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述紫杉醇、可释放硫化氢的阿司匹林衍生物、增溶剂和注射用水的重量比为0.4∶2∶100∶1000。
9.制备权利要求5-8任一项所述的制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：将紫衫醇、可释放硫化氢的阿司匹林衍生物和增溶剂混合均匀，加入有机溶剂溶解，真空旋转蒸发除去有机溶剂后，加入注射用水，搅拌溶解，0.22-0.45微米滤膜过滤即得到所述制剂。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为丙酮、乙醇、甲醇、氯仿或二氯甲烷中任意一种或几种的组合。
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