CN106544274A - 一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法 - Google Patents

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李爽
姜虎生
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明涉及一种筛选方法，具体是一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法，包括：取油泥污染场地土壤置于容器中，加入去离子水搅拌均匀后静置；取无机盐培养基置于锥形瓶中，加入1~5mL 0#柴油，再加入10~30mL上一步骤中静置后的上清液后，置于恒温震荡培养箱中在15~25℃、40~120rpm条件下培养3~6天；取无机盐培养基置于锥形瓶中，加入1~5mL 0#柴油，再加入5~20mL上一步骤中经培养后的混合液后，置于恒温震荡培养箱中在15~25℃、40~120rpm条件下培养3~6天；重复上一步骤，经4~7次培养后即可得到目标菌群。与现有技术相比，筛选步骤简单；实施简便；筛选后的菌群对0#柴油降解效果显著。

Description

一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法
技术领域
本发明涉及一种筛选方法，具体是一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法。
背景技术
石油污染是指石油开采、运输、装卸、加工和使用过程中，由于泄漏和排放石油引起的污染。石油污染防治，除控制污染源，防止意外事故发生外，可通过围油栏、吸收材料、消油剂等进行处理。尤其是，在20世纪80年代以前，治理石油烃污染土壤还仅限于物理和化学方法，即热处理和化学浸出法。热处理法是通过焚烧或煅烧，可净化土壤中大部分有机污染物，但同时亦破坏土壤结构和组分，且价格昂贵而很难实施。化学浸出和水洗也可以获得较好的除油效果，但所用的化学试剂的二次污染问题限制了其应用。
早在20世纪70年代，为了解决输油管线和储油罐发生故障漏油和溢油时土壤被石油污染的问题，美国埃索研究和工程公司就已经开始寻找清洁的生物解决方法，并且其实验室研究找到一种有效的“细菌播种法”开了生物修复石油污染土壤先河。上世纪80年代以来，污染土壤的生物修复技术越来越引起人们的关注．生物修复技术也取得了很大进步，正在逐渐成熟。
生物修复是利用生物的生命代谢活动减少土壤环境中有毒有害物的浓度，使污染土壤恢复到健康状态的过程，但目前的筛选方法存在着技术繁琐的问题，很多学者为了追求单菌降解的效果，往往要经过一系列微生物分离等步骤，造成了筛选时间的延长，且筛选出的单菌降解效果一般，甚至不足以对目标污染物实现完全降解。
发明内容
本发明提供了一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法，该方法有助于采用生物的方法来修复石油污染，实施简便，效果显著。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法，包括：
取油泥污染场地土壤置于容器中，加入去离子水搅拌均匀后静置；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入1~5mL 0#柴油，再加入10~30mL上一步骤中静置后的上清液后，置于恒温震荡培养箱中在15~25℃、40~120rpm条件下培养3~6天；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入1~5mL 0#柴油，再加入5~20mL上一步骤中经培养后的混合液后，置于恒温震荡培养箱中在15~25℃、40~120rpm条件下培养3~6天；
重复上一步骤，经4~7次培养后即可得到具有降解0#柴油功能的菌液，菌液内的有效成分即为具有降解0#柴油功能的菌群。
优选的步骤为：
取油泥污染场地土壤置于容器中，加入去离子水搅拌均匀后静置；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入3mL 0#柴油，再加入20mL上一步骤中静置后的上清液后，置于恒温震荡培养箱中在20℃、100rpm条件下培养5天；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入3mL 0#柴油，再加入10mL上一步骤中经培养后的混合液后，置于恒温震荡培养箱中在20℃、100rpm条件下培养5天；
重复上一步骤，经7次培养后即可得到具有降解0#柴油功能的菌液，菌液内的有效成分即为具有降解0#柴油功能的菌群。
所述的取油泥污染场地土壤的取样点应在油泥污染场地的不同位置，至少选取5个取样点。
所述的无机盐培养基配方为每1L去离子水包含： K2HPO4 1550mg，NaH2PO4 850mg，(NH4)2SO4 2000 mg，MgCl2•6H2O 100 mg；EDTA 10 mg，ZnSO4•7H2O 2.0 mg，CaCl2•2H2O1.0 mg，FeSO4•7H2O 5.0 mg，NaMoO4•2H2O 0.2，mg CuSO4•5H2O 0.2 mg，CoCl2•6H2O 0.4mg，MnCl2•2H2O 1.0 mg。
与现有技术相比，比本发明具有以下优点：
(1)筛选步骤操作简单，实施简便、筛选时间较短；
(2)筛选过程所用材料取材方便；
(3)筛选后的菌群对0#柴油具有高效的降解性能。
具体实施方式
下面结合实例和实验例对本发明做进一步详细说明。
实施例1：
取油泥污染场地土壤置于容器中，加入去离子水搅拌均匀后静置；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入1mL 0#柴油，再加入10mL上一步骤中静置后的上清液后，置于恒温震荡培养箱中在15℃、40rpm条件下培养3天；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入1mL 0#柴油，再加入5mL上一步骤中经培养后的混合液后，置于恒温震荡培养箱中在15℃、40rpm条件下培养3天；
重复上一步骤，经7次培养后即可得到具有降解0#柴油功能的菌液，菌液内的有效成分即为具有降解0#柴油功能的菌群。
所述的取油泥污染场地土壤的取样点应在油泥污染场地的不同位置，至少选取5个取样点。
所述的无机盐培养基配方为每1L去离子水包含： K2HPO4 1550mg，NaH2PO4 850mg，(NH4)2SO4 2000 mg，MgCl2•6H2O 100 mg；EDTA 10 mg，ZnSO4•7H2O 2.0 mg，CaCl2•2H2O1.0 mg，FeSO4•7H2O 5.0 mg，NaMoO4•2H2O 0.2，mg CuSO4•5H2O 0.2 mg，CoCl2•6H2O 0.4mg，MnCl2•2H2O 1.0 mg。
将20mL具有降解0#柴油功能的菌液加入含0#柴油1mL/100 mL无机盐培养基中，置于恒温震荡培养箱中在20℃，120rpm条件下培养5天后可见，0# 柴油全部消失，即筛选出的具有降解0#柴油功能的菌液中的菌群有高效的降解效果。
实施例2：
取油泥污染场地土壤置于容器中，加入去离子水搅拌均匀后静置；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入5mL 0#柴油，再加入30mL上一步骤中静置后的上清液后，置于恒温震荡培养箱中在25℃、120rpm条件下培养6天；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入5mL 0#柴油，再加入20mL上一步骤中经培养后的混合液后，置于恒温震荡培养箱中在25℃、120rpm条件下培养5天；
重复上一步骤，经4次培养后即可得到具有降解0#柴油功能的菌液，菌液内的有效成分即为具有降解0#柴油功能的菌群。
所述的取油泥污染场地土壤的取样点应在油泥污染场地的不同位置，至少选取5个取样点。
所述的无机盐培养基配方为每1L去离子水包含： K2HPO4 1550mg，NaH2PO4 850mg，(NH4)2SO4 2000 mg，MgCl2•6H2O 100 mg；EDTA 10 mg，ZnSO4•7H2O 2.0 mg，CaCl2•2H2O1.0 mg，FeSO4•7H2O 5.0 mg，NaMoO4•2H2O 0.2，mg CuSO4•5H2O 0.2 mg，CoCl2•6H2O 0.4mg，MnCl2•2H2O 1.0 mg。
将20mL具有降解0#柴油功能的菌液加入含0#柴油4mL/100 mL无机盐培养基中，置于恒温震荡培养箱中在25℃，120rpm条件下培养5天后可见，0#柴油全部消失，即筛选出的具有降解0#柴油功能的菌液中的菌群有高效的降解效果。
实施例3：
取油泥污染场地土壤置于容器中，加入去离子水搅拌均匀后静置；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入4mL 0#柴油，再加入15mL上一步骤中静置后的上清液后，置于恒温震荡培养箱中在18℃、80rpm条件下培养4天；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入2mL 0#柴油，再加入12mL上一步骤中经培养后的混合液后，置于恒温震荡培养箱中在18℃、80rpm条件下培养5天；
重复上一步骤，经6次培养后即可得到具有降解0#柴油功能的菌液，菌液内的有效成分即为具有降解0#柴油功能的菌群。
所述的取油泥污染场地土壤的取样点应在油泥污染场地的不同位置，至少选取5个取样点。
所述的无机盐培养基配方为每1L去离子水包含： K2HPO4 1550mg，NaH2PO4 850mg，(NH4)2SO4 2000 mg，MgCl2•6H2O 100 mg；EDTA 10 mg，ZnSO4•7H2O 2.0 mg，CaCl2•2H2O1.0 mg，FeSO4•7H2O 5.0 mg，NaMoO4•2H2O 0.2，mg CuSO4•5H2O 0.2 mg，CoCl2•6H2O 0.4mg，MnCl2•2H2O 1.0 mg。
将20mL具有降解0#柴油功能的菌液加入含0#柴油5mL/100 mL无机盐培养基中，置于恒温震荡培养箱中在20℃，120rpm条件下培养5天后可见，0#柴油全部消失，即筛选出的具有降解0#柴油功能的菌液中的菌群有高效的降解效果。

Claims (4)

1.一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法，包括：
取油泥污染场地土壤置于容器中，加入去离子水搅拌均匀后静置；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入1~5mL 0#柴油，再加入10~30mL上一步骤中静置后的上清液后，置于恒温震荡培养箱中在15~25℃、40~120rpm条件下培养3~6天；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入1~5mL 0#柴油，再加入5~20mL上一步骤中经培养后的混合液后，置于恒温震荡培养箱中在15~25℃、40~120rpm条件下培养3~6天；
重复上一步骤，经4~7次培养后即可得到具有降解0#柴油功能的菌液，菌液内的有效成分即为具有降解0#柴油功能的菌群。
2.如权利要求1所述的一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法，其特征在于包括：
取油泥污染场地土壤置于容器中，加入去离子水搅拌均匀后静置；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入3mL 0#柴油，再加入20mL上一步骤中静置后的上清液后，置于恒温震荡培养箱中在20℃、100rpm条件下培养5天；
取无机盐培养基置于锥形瓶中，向锥形瓶中加入3mL 0#柴油，再加入10mL上一步骤中经培养后的混合液后，置于恒温震荡培养箱中在20℃、100rpm条件下培养5天；
重复上一步骤，经7次培养后即可得到具有降解0#柴油功能的菌液，菌液内的有效成分即为具有降解0#柴油功能的菌群。
3.如权利要求1、2任一项所述的一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法，其特征在于所述的取油泥污染场地土壤的取样点应在油泥污染场地的不同位置，至少选取5个取样点。
4.如权利要求1、2任一项所述的一种可降解0#柴油的微生物菌群的简易筛选方法，其特征在于所述的无机盐培养基配方为每1L去离子水包含： K2HPO4 1550mg，NaH2PO4 850mg，(NH4)2SO4 2000 mg，MgCl2•6H2O 100 mg；EDTA 10 mg，ZnSO4•7H2O 2.0 mg，CaCl2•2H2O1.0 mg，FeSO4•7H2O 5.0 mg，NaMoO4•2H2O 0.2，mg CuSO4•5H2O 0.2 mg，CoCl2•6H2O 0.4mg，MnCl2•2H2O 1.0 mg。
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CN101696445A (zh) * 2009-10-26 2010-04-21 哈尔滨工业大学 用于处理煤化工废水的微生物菌群的筛选方法
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