CN106479913B - 戈登氏菌及其用途 - Google Patents

戈登氏菌及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明提出一种戈登氏菌(Gordoniaterrae),于2016年9月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC No.60075。该菌株是发明人首次从雨生红球藻的共生微生物中分离获得的,该菌株具有产类胡萝卜素的能力,且产生的类胡萝卜素的抗氧化能力强,在高温和低浓度氧化剂存在下,具有强的稳定性。

Description

戈登氏菌及其用途
技术领域
本发明涉及生物领域,具体地,本发明涉及戈登氏菌、用途及生产类胡萝卜素的方法。
背景技术
类胡萝卜素是常见的一类天然色素家族,包含多种类型,目前已鉴定的超过600种。因其具有单线态氧及自由基清除能力而表现出明显的抗氧化能力,在延缓和预防动脉粥样硬化、癌症、老化和眼部疾病等均表现出了显著的效果。做为类胡萝卜素的一种,虾青素具有极高的研究价值,特别是在自由基清除能力方面,其比β-胡萝卜素强38倍,比维生素E强500倍。因此,虾青素也能够降低与年龄性退行性疾病和局部缺血性疾病的发病风险,并可预防部分癌症并提高免疫能力。在获取虾青素的来源中,角黄素是为虾青素合成的重要前体,同样具有较强的抗氧化性而得到广泛关注。
目前,类胡萝卜素的生产主要来源于细菌、真菌及微藻。
然而,为了丰富抗氧化色素的来源途径,新型类胡萝卜素表达物种仍有待进一步开发。
发明内容
本申请是发明人基于对如下问题和事实的发现而提出的:
发明人从雨生红球藻的共生微生物中进行了菌株的单克隆筛选,成功分离到一株阳性菌株,该菌株具有产类胡萝卜素等色素的能力。发明人进一步通过16S分子鉴定确认该菌株为戈登氏菌(Gordonia terrae)。为了进一步获取其产物信息,发明人对其产物进行了高效液相色谱的化学分析,并优化了产物的表达条件,同时对菌株的特性和产物的抗氧化性进行了综合评估,发现该菌株的代谢产物具有很好的抗氧化性,且在高温及低浓度氧化剂存在下具有较强的稳定性。
由此,在本发明的第一方面,本发明提出了一种戈登氏菌(Gordoniaterrae),于2016年9月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC No.60075,分类命名为:戈登氏菌(Gordonia terrae),保藏地址为:广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所。该菌株是发明人首次从雨生红球藻的共生微生物中分离获得的,该菌株具有产类胡萝卜素的能力,且产生的类胡萝卜素的抗氧化能力强,在高温和低浓度氧化剂存在下,具有强的稳定性。
在本发明的第二方面,本发明提出了前面所述的戈登氏菌在生产类胡萝卜素中的用途。发明人通过高效液相色谱(UPLC)的化学分析对前面所述的戈登氏菌的代谢产物进行了分析,发现,此株戈登氏菌的代谢产物中含有丰富的类胡萝卜素。利用前面所述的戈登氏菌在生产类胡萝卜素,具有生产周期短、成本低、易于基因工程改造等优势。
根据本发明的实施例,上述用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一:
根据本发明的实施例,所述类胡萝卜素包括选自虾青素、角黄素、σ-胡萝卜素的至少之一。发明人通过比对上述菌株的代谢产物和类胡萝卜标准品的UPLC分析结果,发现,上述菌株的代谢产物中含有少量的角黄色、微量的虾青素和σ-胡萝卜素,以及大量的其它类胡萝卜素或其衍生物。
在本发明的第三方面,本发明提出了一种生产类胡萝卜素的方法。根据本发明的实施例,所述方法包括:在适于类胡萝卜素表达的条件下,培养前面所述的戈登氏菌,以便获得含有所述类胡萝卜素的培养物,可选地,所述类胡萝卜素包括选自虾青素、角黄素、σ-胡萝卜素的至少之一。利用根据本发明实施例的生产类胡萝卜素的方法,能够高效、高产地获得类胡萝卜素。
根据本发明的实施例,上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一:
根据本发明的实施例,所述培养是在LB培养基中进行的,所述LB培养基中含有0.05~1%NaCl、0.025~0.5%酵母粉和0.05~1%蛋白胨。其中,前面的百分比表示质量体积比,即0.05~1%NaCl表示100mlLB培养基中含有0.05~1g的NaCl,0.025~0.5%酵母粉表示100mlLB培养基中含有0.025~0.5g的酵母粉,0.05~1%蛋白胨表示100mlLB培养基中含有0.05~1g的蛋白胨。发明人通过实验发现,在上述LB培养基中,所述戈登氏菌的生物量较高,代谢产物-类胡萝卜素的单位产量较高,并且所述戈登氏菌的生物量随营养成分的提高而提高,类胡萝卜素的单位含量在低营养浓度条件下相对较高。
根据本发明的实施例,所述LB培养基中含有1%NaCl、0.5%酵母粉和1%蛋白胨。发明人通过实验发现,LB培养基中的营养成分在上述浓度下,类胡萝卜素总产量相对最高。
根据本发明的实施例,所述培养是在低氧胁迫下进行的。需要说明的是,“低氧胁迫”是指环境中的氧气含量低于正常水平。发明人发现,在低氧胁迫环境下,对该株戈登氏菌的生物量不会产生显著的影响,但会刺激代谢产物的合成,总体代谢产物的合成量在低氧胁迫环境下有所提高。
根据本发明的实施例,所述LB培养基中进一步含有225μMFeSO4和22.5mM SA。发明人通过实验发现,当培养基中中含有225μMFeSO4和22.5mM SA时,可以营造一个较低的低氧胁迫环境,发明人发现,在此环境下,该株戈登氏菌的代谢产物的单位含量显著提高,代谢产物的总产量显著提高。
根据本发明的实施例,所述培养基的pH为5~9。发明人在实验中发现,培养基的pH在5~9时,该株戈登氏菌的生物量较高,代谢产物的单位含量较高。
根据本发明的实施例,所述培养基的pH为9。发明人通过培养基pH的优化实验发现,当pH为9时,该株株戈登氏菌的代谢产物的单位含量显著提高,代谢产物的总产量显著提高。
根据本发明的实施例,所述培养是在30~37℃下进行的。发明人通过实验发现,在30~37℃下,该株戈登氏菌的生物量较高,代谢产物的单位含量较高,且在此温度范围内,戈登氏菌的生物量随温度的升高而升高,代谢产物的单位含量随温度的升高而降低。
根据本发明的实施例,所述培养优选在30℃下进行。发明人发现,在30℃下培养该株戈登氏菌,其代谢产物的单位含量显著提高,其代谢产物的总含量显著提高。
根据本发明的实施例,所述培养的时间是3天。发明通过实验发现,培养3天是积累类胡萝卜素的最适时间,培养3天类胡萝卜素的单位含量达到最大值。
根据本发明的实施例,所述培养是通过如下方式实现的:将所述戈登氏菌与培养基在30℃的条件下进行3小时接触,其中,所述培养基为包含1%NaCl、0.5%酵母粉、1%蛋白胨、225μMFeSO4和22.5mM SA的LB培养基,所述LB培养基的pH为9。根据本发明的实施例,在上述培养方式下,所述戈登氏菌的代谢产物-类胡萝卜的总产量显著提高。
另外,根据本发明的实施例,所述生产类胡萝卜素的方法进一步包括:从获得的含有所述类胡萝卜素的培养物中分离和提取类胡萝卜素。分离和提取类胡萝卜素的方法不受特别限制,本领域技术人员可根据常规技术手段,依据实验室或工业生产的需求,进行选择。
附图说明
图1是根据本发明实施例1的从雨生红球藻藻际微生物中分离得到的阳性菌种的图;
图2是根据本发明实施例2的UPLC鉴定结果图;
图3是根据本发明实施例3的不同营养梯度对生物量和主要成分单位含量的影响图;
图4是根据本发明实施例3的不同温度对菌种生物量和主要成分单位含量的影响图;
图5是根据本发明实施例3的不同pH对菌种生物量和主要成分单位含量的影响图;
图6是根据本发明实施例3的不同培养时间对菌种生物量和主要成分单位含量的影响图;
图7是根据本发明实施例3的不同氧胁迫条件下对菌种生物量和主要成分单位含量的影响图;
图8是根据本发明实施例4的菌株抗氧化能力的检测结果图;
图9是根据本发明实施例5的对菌种提取物进行紫外吸收全波长扫描的结果图;
图10是根据本发明实施例5的高温对产物稳定性的影响图;以及
图11是根据本发明实施例5的氧化剂H2O2对提取物稳定性的影响图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
在本实施例中,发明人详细介绍了戈登氏菌分离和鉴定过程。
1.1实验材料
戈登氏菌(Gordonia terrae),分离自雨生红球藻的共生微生物。
1.2实验方法
1.2.1藻际微生物筛选
取1mL藻液,10000rpm离心1min。无菌水清洗2次后加入1mL无菌水超声震荡1min;10000rpm离心1min。取100μL上清液涂布于LB固体培养基,37℃培养24h。挑取菌落在LB固体培养基划线培养,37℃培养24h后,挑取单克隆保种,图1显示了从雨生红球藻藻际微生物中分离得到的阳性菌种的图。
1.2.2菌种鉴定
利用16SrDNA进行菌种鉴定,并采用微量生化鉴定管(广东环凯微生物科技有限公司)对该菌种进行生理生化功能方面的鉴定。
菌种的16SrDNA如SEQ ID NO:1所示,
TGGCACGGCGGACAGTAATCGATAAAAGCTTACCTCCCACAAGGGGTTTAGGCCACCGGCTTTCGGGTGTTACCGACTTAAATGACGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCGTTGCTGATCTGCGATTACTAGCGACTCCGACTTCATGGGGTCGAGTTGCAGACCCCAATCCGAACTGAGACTGGCTTTAAGGGATTCGCTCCACCTCACGGTATCGCAGCCCTCTGTACCAGCCATTGTAGCATGTGTGAAGCCCTGGACATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCAGTCTCCTGCAAGTCCCCGGCATAACCCGCTGGCAATACAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTACACCAACCACAAGGGAACGACTATCTCTAGCCGCGTCTGGTGTATGTCAAACCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCACATGCTCCGCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGTACTTAATGCGTTAGCTACGCACGGATCCCGTGAAAAGGAACCCACACCTAGTACCCACCGTTTACGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACTACCCAGAGACCCGCCGTCGCCACCGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTTCACCGCTACACCAGAAATTCCAGTCTCCCCTGTAGTACTCAAGTCTGCCCGTATCGCCTGCACGCCTGCAATTGAGTTGCAGAATTTCACAGACGACGCGACAAACCGCCTACGAGCTCTTTACGCCCAGTAATTCCGGACAACGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTGGCCGGTGCTTCTTCTCCAGGTACCGTCACTCACGCTTCGTCCCTGGTGAAAGAGGTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCCCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACCCGTCGTCGCCTTGGTAGGCCATTACCCCACCAACAAGCTGATAGGCCGCGGGCCCATCCCACACCGCAAAAGCTTTCCACCAACCACCATGCGACAGTTGGTCATATCCGGTATTAGACCCAGTTTCCCAGGCTTATCCCAGAGTGCAGGGCAGATCACCCACGTGTTACTCACCCGTTCGCCACTCGGAGTACCCAAGCAAGCTGGGCCTTTCCGTTCGAACTTGCAATTGGGTGCCACCGGACCTCGAC(SEQ ID NO:1)。
上述序列经NCBI比对,相似性为99%,确认为戈登氏菌(Gordonia terrae)。菌株生理生化结果如表1所示,其中,阳性用“+”,阴性用“-”表示。
表1
实验 结论 实验 结论
葡萄糖生化鉴定 + 醋酸盐生化鉴定 -
乳糖生化鉴定 - 尿素生化鉴定试剂 -
麦芽糖生化鉴定 + 丙二酸盐生化鉴定 -
甘露醇生化鉴定 - β-半乳糖苷(ONPG)生化鉴定 -
蔗糖生化鉴定 + 葡萄糖酸盐生化鉴定 -
果糖生化鉴定 - 苯丙氨酸生化鉴定 -
木糖生化鉴定 - 葡萄糖铵生化鉴定 -
半乳糖生化鉴定 - 鸟氨酸脱羧酶生化鉴定 -
山梨醇生化鉴定 - 赖氨酸脱羧酶生化鉴定 -
肌醇生化鉴定 - 精氨酸脱羧酶生化鉴定 -
水杨素生化鉴定 - 蛋白胨水生化鉴定 -
硝酸盐还原生化鉴定 + 葡萄糖磷酸盐胨水生化鉴定 +
从表1结果可以看出该菌株可以利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖作为碳源;并具有脲酶活性,可分解利用尿素。同时,根据葡萄糖磷酸盐胨水生化鉴定实验表明该菌种在代谢过程可以产酸,使甲基红试剂变红。另一方面,该菌种也具有硝酸盐还原性。该结果为菌种培养基的改良,特别是在碳源、氮源方面的调控提供了指导意义。
实施例2
在本实施例中,发明人详细介绍了菌株的培养物的提取和鉴定过程。
将实施例1所得菌种接入LB液体培养基,37℃培养24h。15000g离心5min,冷冻干燥后称重。加入有机溶剂(甲醇:二氯甲烷=3:1)超声破碎20min,离心,取上清。上清液40℃条件下真空旋蒸,加入乙腈定容。
采用超高效液相色谱仪(UPLC,Waters)对提取物进行检测。同时与虾青素、角黄素、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素和σ-胡萝卜素的标准品的UPLC色谱图进行对比鉴定。UPLC的色谱条件如下所述:Waters BEH C18柱(2.1×50mm,1.7μm),流动相为甲醇(A)与乙腈(B),洗脱条件:10%A,90%B;20%A,80%B;30%A,70%B,线性洗脱,流速为0.4mL/min;柱温为35℃;紫外检测450nm。
UPLC鉴定结果如图2所示,其中,A为提取物样品的色谱图,B为标准品的色谱图,峰1.虾青素,峰2.角黄素,峰3.σ-胡萝卜素,峰4.α-胡萝卜素,峰5.β-胡萝卜素。
从UPLC检测结果中可以看出,在保留时间上,样品中峰1与虾青素标准品一致,峰2与角黄素标准品一致,峰3与σ-胡萝卜素一致。表明该株戈登氏菌种可以合成少量的角黄素以及微量的虾青素和σ-胡萝卜素。样品中峰4为菌种提取物中含量最高的物质,其为某种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物。
实施例3
在本实施例中,发明人设置不同的营养浓度、温度梯度、PH梯度、培养时间以及氧胁迫浓度等培养条件,从而在不同培养条件下对菌种进行培养,进而考察不同条件对生物量及主要产物含量的影响,优选出最佳的发酵表达条件。其中以天平连续称取3次恒重为生物量测定值。
3.1营养浓度
实验以LB培养基(1%NaCl、0.5%酵母粉、1%蛋白胨)为基础,分别设置0.01倍、0.05倍、0.1倍、0.5倍、1倍和2倍浓度梯度。不同营养梯度对生物量和主要成分单位含量的影响如图3所示。
从图3可以看出,随着营养浓度的升高,菌种生物量显著增加。但图3表明,低营养浓度(0.05倍、0.1倍)条件下主要产物的单位含量高于高浓度营养实验组,说明在低营养浓度产生的应激环境下会诱导该株戈登氏菌合成类胡萝卜素。但综合考虑到菌种生物量,适宜采用正常浓度的LB培养基(1%NaCl、0.5%酵母粉、1%蛋白胨)进行培养。
3.2温度
实验设置30℃、37℃和45℃三种温度梯度,考察结果如图4所示。图4结果显示,温度的升高促进了菌种生物量的增加,但主要产物的单位含量随着温度的升高而降低,呈现出显著性差异(P<0.05)。综合考虑后,适宜采用30℃条件下培养该菌株,以获得最大量的代谢产物。
3.3pH值
实验设置了从酸性到碱性的培养条件(即pH3、pH5、pH7、pH9和pH11五种梯度),考察结果如图5所示。从图5结果显示,在PH为7时,生物量达到最大,当培养条件偏离中性环境(变酸或变碱)时,生物量显著降低,表明酸性或碱性条件不利于细菌的生长。但在偏酸(PH=5)或偏碱(PH=9)条件下,主要产物的单位含量却显著升高,特别是在PH=9条件下达到最大值(P<0.05)。综合考虑后,适宜采用PH=9条件下培养该菌株,以获得最大量的代谢产物。
3.4培养时间
实验设置了1d、3d、5d和7d四种时间梯度,考察结果如图6所示。随着培养时间的增加,菌种生物量逐渐增加。但在培养3天时,主要产物的单位含量达到最大值(P<0.05),表明培养3天是该菌种积累类胡萝卜素的最适时间;而随着时间的推移,主要产物的单位含量下降,可能是菌种已失去最适生理状态,类胡萝卜素合成过程中所需酶失活,从而导致含量降低。
3.5氧胁迫
实验向培养基中加入450μM FeSO4和45mM SA以制造氧胁迫条件,设置0.5倍、1倍和2倍浓度实验组,以不加入氧胁迫试剂作为对照组,考察结果如图7所示。图7结果表明,氧胁迫对于菌种生物量没有显著影响,但在225μM FeSO4和22.5mM SA的条件下,主要产物的单位含量显著升高(P<0.05),表明在较低氧胁迫条件会明显刺激其代谢产物的合成。
实施例4产物抗氧化能力鉴定
根据Dong等人的方法(Dong S,Huang Y,Zhang R,et al.Four differentmethods comparison for extraction of astaxanthin from green algaHaematococcuspluvialis.[J].TheScientificWorldJournal,2014:694305),采用DPPH自由基清除率方法检测菌株提取物的抗氧化性,以雨生红球藻提取物及虾青素标准品(1mg/L)作为对照。结果如图8所示。图8可以看出,相同湿重的菌种提取物与雨生红球藻提取物的抗氧化能力相当,DPPH自由基清除率在20%左右;但显著低于1mg/L的虾青素标准品(P<0.05)。实验证明该菌种提取物具有较强的抗氧化能力。
实施例5产物稳定性鉴定
对菌种提取物进行紫外吸收全波长扫描,结果如图9所示,结果显示该提取物在470nm处有最大吸收值。
进行稳定性检测时,以470nm处的紫外吸收值的变化作为定量标准。
考察产物在高温条件(50℃、60℃、70℃)和高氧化剂环境中的稳定性(设置终浓度为0.1%、0.2%、0.5%、1%、2%的H2O2)。操作中将提取的菌株产物分别与上述条件中放置0.5h、1h、1.5h、2h和4h,检测产物吸光度的变化。每个浓度设置3个重复。
5.1高温对产物稳定性的影响
实验设置了50℃、60℃、70℃三个温度梯度,分别在0.5h、1h、1.5h、2h和4h时取样检测470nm处的吸收值,考察结果如图10所示。从图10中可以看出产物的吸光度随着温度的升高而降低,特别是在70℃的条件下放置4h后,其吸光度仍具有初始值的92.3%,表明该产物在高温下具有很强的稳定性。
5.2氧化剂H2O2对提取物稳定性的影响
实验设置了0.1%、0.2%、0.5%、1%、2%五个H2O2浓度梯度,分别在0.5h、1h、1.5h、2h和4h时取样检测470nm处的吸收值,并计算每个实验组相对以加入超纯水作为对照的百分比。结果如图11所示。结果显示,当H2O2的浓度在0.1%-1%时,产物的吸光度未见显著变化,而当H2O2的浓度达到2%时,产物的吸光度显著下降,表明在较高浓度的氧化剂存在下,产物的稳定性遭到破坏。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (7)

1.一种生产类胡萝卜素的方法,其特征在于,包括:
在适于类胡萝卜素表达的条件下,培养戈登氏菌,以便获得含有所述类胡萝卜素的培养物,所述培养是在LB培养基中进行的,所述LB培养基中含有0.05~1%NaCl、0.025~0.5%酵母粉和0.05~1%蛋白胨;
所述戈登氏菌于2016年9月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCCNo.60075;
其中,所述类胡萝卜素包括选自虾青素、角黄素、σ-胡萝卜素的至少之一;
所述培养是在低氧胁迫下进行的。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述LB培养基中含有1%NaCl、0.5%酵母粉和1%蛋白胨。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述培养基的pH为5~9。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述培养基的pH为9。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述培养是在30~37℃下进行的。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述培养是在30℃下进行的。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述培养的时间是3天。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Ability of Gordonia alkanivorans strain 1B for high added value carotenoids production;Tiago P. Silva等;《RSC Adv.》;20160610;58055-58063 *
Analysis of Canthaxanthin and Related Pigments from Gordonia jacobaea Mutants;Trinidad de Miguel等;《J. Agric. Food Chem.》;20010210;1200-1202 *
Carotenoids in a Corynebacterineae, Gordonia terrae AIST-1: Carotenoid Glucosyl Mycoloyl Esters.;Shinichi TAKAICHI等;《Biosci. Biotechnol. Biochem》;20081007;2615-2622 *
Shinichi TAKAICHI等.Carotenoids in a Corynebacterineae, Gordonia terrae AIST-1: Carotenoid Glucosyl Mycoloyl Esters..《Biosci. Biotechnol. Biochem》.2008,2615-2622. *

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