CN106359206A

CN106359206A - 一种大型溞保种培养方法

Info

Publication number: CN106359206A
Application number: CN201610868920.4A
Authority: CN
Inventors: 李祥英; 李志鸿; 于丽娜; 谢俊婷; 张宏涛; 吴妍; 彭斯慧; 谭建仪; 陈浩华
Original assignee: FOSHAN ENVIRONMENT HEALTH AND SAFETY EVALUATION AND RESEARCH CENTER; SOLID WASTE AND CHEMICALS MANAGEMENT CENTER MEP; Guangdong Zhongke Yinghai Technology Co Ltd
Current assignee: FOSHAN ENVIRONMENT HEALTH AND SAFETY EVALUATION AND RESEARCH CENTER; SOLID WASTE AND CHEMICALS MANAGEMENT CENTER MEP; Guangdong Zhongke Yinghai Technology Co Ltd
Priority date: 2016-09-30
Filing date: 2016-09-30
Publication date: 2017-02-01
Anticipated expiration: 2036-09-30
Also published as: CN106359206B

Abstract

本发明属于枝角类浮游动物培养领域，涉及一种实验室内大型溞保种培养方法。该方法可保证大型溞在该体系中长期稳定的生长，除定期补充蒸发掉的水分外，无需添加额外的饵料。采用该简易的试验体系进行保种，操作简单，费用少，大型溞能稳定生长和繁殖，无需经常性的野外采种，免去一般培养中频繁的人工换水、投喂饵料、清除杂质废物的麻烦，达到简便的实验室长期保种的目的。

Description

一种大型溞保种培养方法

技术领域

本发明属于枝角类浮游动物培养领域，具体涉及的是一种生态型大型溞保种培养方法。

背景技术

大型溞（Daphnia magna）是淡水生态系统中常见的浮游甲壳动物，是淡水食物链中重要的组成成分，生活于自然水域。具有生活周期短、繁殖快、经济、对毒物敏感等优点，在水域生态系统中具有重要的作用，可以用于综合评价工业废水的毒性、农药毒性及新化学物质毒性等。大型溞是国际公认的标准试验生物，被广泛应用于水生生物毒理试验。随着大型溞在毒理领域应用的不断增加，各国相继建立了大型溞毒性测定的标准方法，对试验大型溞的培养条件做了相关的规定，而针对于大型溞的保种培养却未有提及。

试验溞的来源可以从实验室已有的纯培养中挑选、引种，也可以从野外采集。野外采集的溞要经分离、鉴定、纯化，耗时费力。如何简便地在实验室进行保种培养，免去野外采集的烦琐工作，是亟待解决的问题。

大型溞的适宜繁殖的条件为温度18℃～22℃、pH＝6.5～8.5、培养用水可选用经自然曝气三天以上的自来水或人工配置的稀释水。在该条件下，大型溞能健康快速繁殖，因此需频繁投喂料，更换水源，定期移除过量的大型溞。然而，经单一藻类饲喂的大型溞，在长期的繁殖过程中，较容易出现种群活力退化的现象。另外，这种大型溞的培养育种方法也长期占用培养箱的空间资源。此外，通常情况下大型溞采用单性孤雌生殖方式，在适宜条件下培养的大型溞会大量繁殖，造成培养液中密度太大，导致孤雌生殖停止而进行有性生殖。根据国际标准组织 ISO规定，进行毒性实验的大型溞必需是敏感纯种的生物株，因此大型溞的繁殖需约束在孤雌生殖的状态下。大型溞的实验室保种若采用试验培养的方法，操作繁琐，工作量较大，且不利于纯种的保存。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简便、费用少、水质稳定的实验室内大型溞保种培养方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种大型溞保种培养方法，其特征在于，包含如下步骤：

（1）准确称取无农药、化学物质等污染的新鲜土壤100g；

（2）准确称取经充分发酵的牛粪10g；

（3）采集无污染的禾本科杂草，洗净晾干后，准确称取10g，将称取的杂草置于500 mL烧杯中，加入300 mL纯净水，沸腾后，继续煮10分钟，然后将杂草过滤，弃去溶液；

（4）分别将步骤（1）、（2）、（3）中的新鲜土壤、牛粪、禾本科杂草置于同一容器中，加入5L曝气过滤自来水，继续曝气24 h；

（5）静置待悬浮物沉淀后，加入100只各龄期大型溞，放置于培养箱中。

进一步的，步骤（1）中的土壤应保证无农药、重金属或无机污染，土壤称取前需去除大颗粒沙子或进行简单过筛，所述土壤应为新采集土壤，以保证土壤中微生物群的丰富度和活力。

进一步的，步骤（2）中所述牛粪经过充分发酵，经充分发酵的牛粪有机质含量高，氮、磷、钾及微量元素含量齐全，且有大量的有益微生物群落。

进一步的，步骤（3）中所述杂草应保证未喷洒农药，未经重金属等污染，新鲜采集。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1、该大型溞保种培养方法能在室内条件下长年保种大型溞，为实验室提供充足的健康纯种大型溞。

2、本发明的保种培养方法操作简单、费用少，材料来源广泛，无需特殊技术和设备。

3、本发明的保种培养方法持续时间长，所述的大型溞培养半年内，无需处理更换，可以随时提供健康的试验材料，免去前期烦琐的选育工作，节约时间，减少工作量，保证试验顺利进行。

4、本发明的保种培养方法可以免去一般培养中频繁的人工换水、投喂饵料、清除杂志废物的麻烦，从而达到长期保存的目的。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，本发明用以下具体实施例进行说明，但本发明绝非限于这些例子。以下所述仅为本发明较好的实施例，仅仅用于解释本发明，但不能因此理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内，因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

一、具体实施例

1、试验材料：过2 mm筛的新鲜土壤300g、充分发酵的牛粪30g、洗净晾干的杂草10g（2份）、10 L方形玻璃鱼缸5个、100只左右的各龄期大型溞（5份）、过滤曝气自来水（pH为7.6，溶解氧为82%，硬度为102.4mg/L，TOC为1.9mg/L）、曝气泵。

2、试验处理：

A组：100g土壤+10g牛粪+10g煮过的杂草+5L过滤曝气自来水;

B组：100g土壤+20g牛粪+10g煮过的杂草+5L过滤曝气自来水;

C组：100g土壤+5L过滤曝气自来水；

D组：10g牛粪+5L过滤曝气自来水；

E组：10g煮过的杂草+5L过滤曝气自来水

3、试验过程

时间：2016年2月4日-2016年8月4日；

温度：21℃；

试验步骤：

（1）将称量好的杂草分别置于2个烧杯中，加300mL纯净水，煮沸10min，稍微冷却后，弃去水溶液。

（2）5个10 L方形玻璃鱼缸依次编号：A、B、C、D、E，A缸中依次加入100g土壤、10g牛粪、10g煮过的杂草和5L过滤曝气自来水；B缸依次加入100g土壤、20g牛粪、10g煮过的杂草和5L过滤曝气自来水；C缸中加入100g土壤和5L过滤曝气自来水；D缸中加入10g牛粪和5L过滤曝气自来水；E缸中加入10g煮过的杂草和5L过滤曝气自来水。

（3）4缸混合液同时曝气24h，然后置于21℃培养箱中，24h后分别接入100只左右的各龄期大型溞。

（4）标记5L水位线，每隔1个月补充自然蒸发掉的水分，观察和记录大型溞的生长情况。

4、试验结果

（1）分别在大型溞接种后3d、7d、30d、60d、120d和180d记录大型溞的数量，结果如下：

组别	3d	7d	30d	60d	120d	180d
							A组	167	249	386	378	383	345
B组	107	85	158	189	201	186
							C组	162	207	185	20	0	0
D组	156	209	197	30	0	0
							E组	153	136	84	0	0	0

（2）在为期半年的试验过程中，5组试验均未出现水质恶化现象，其中B组大型溞在接种前期，不能较好适应新环境，种群数量一只维持在较低水平，C组和D组大型溞在60d是观察到有越冬卵产生，D组大型溞在30d时观察到有越冬卵产生，A组大型溞种群数量较高，能保持孤雌生殖，可达到为实验室长期提供优良纯种的目的。

综上，本发明的保种培养方法相比较常规的方法，可以较大程度的提高大型溞的保种培养效率，值得在实验室中推广应用。

Claims

1.一种大型溞的保种培养方法，其特征在于，包含如下步骤：

（1）准确称取无农药、化学物质等污染的新鲜土壤100g；

（2）准确称取经充分发酵的牛粪10g；

（3）采集无污染的杂草，洗净晾干后，准确称取10g，将称取的杂草置于500 mL烧杯中，加入300 mL纯净水，沸腾后，继续煮10分钟，然后将杂草过滤，弃去溶液；

（4）分别将步骤（1）、（2）、（3）中的新鲜土壤、牛粪、杂草置于同一容器中，加入5 L曝气过滤自来水，继续曝气24 h；

2.根据权利要求1所述的保种培养方法，其特征在于，所述杂草优选为禾本科杂草。

3.一种大型溞保种培养方法的培养溶液，其特征在于，所述培养溶液包含牛粪、新鲜土壤和杂草。