CN106336447A - 南蛇藤素的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药技术领域，特别涉及南蛇藤素的应用。本发明提供了南蛇藤素在制备流感病毒抑制剂以及预防和/或治疗流感病毒性疾病的药物中的应用，本发明实验结果表明南蛇藤素明显减少流感病毒感染所致的小鼠死亡，延长小鼠的平均存活时间；能够明显抑制流感病毒感染所致小鼠肺部感染，有效缓解小鼠的肺部感染症状，具有治疗流感病毒所致的流行性感冒、肺炎等呼吸道感染疾病；并可预防病毒在体内的增殖和扩散，保护正常组织免受损伤，起到预防病毒感染性疾病发生的作用。

Description

南蛇藤素的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及南蛇藤素的应用。
背景技术
流行性感冒(简称流感)是流感病毒引起的急性呼吸道感染，也是一种传染性强、传播速度快的疾病。其主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播。典型的临床症状是：急起高热、全身疼痛、显著乏力和轻度呼吸道症状。一般秋冬季节是其高发期，所引起的并发症和死亡现象非常严重。该病是由流感病毒引起，可分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，甲型病毒经常发生抗原变异，传染性大，传播迅速，极易发生大范围流行。甲型H1N1就是甲型一种。流感具有自限性，但在婴幼儿、老年人和存在心肺基础疾病的患者容易并发肺炎等严重并发症而导致死亡。
目前，常见的抗流感药物有金刚烷胺类药物、利巴韦林、奥司他韦等，但是这些药副作用较强。
近年来，中药抗流感病毒的研究逐渐引起人们的关注，而且由于很多中药组分属于天然提取药物，具有副作用小等优点。
南蛇藤素(celastrol)又名雷公藤红素(tripterine),是从南蛇藤(Celastrusorbiculatus Thunb)、雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F)中提取的三萜类单体成分,研究表明南蛇藤素具有抗炎症、抗氧化、调节免疫、调节细胞增殖和凋亡等作用，已广泛应用于治疗自身免疫性疾病、慢性炎症和肿瘤。
目前未见南蛇藤素在制备预防和/或治疗流感病毒性疾病的药物中应用的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明提供南蛇藤素的应用。南蛇藤素能够明显减少流感病毒感染所致的小鼠死亡，延长小鼠的平均存活时间；能够明显抑制流感病毒感染所致小鼠肺部感染，有效缓解小鼠的肺部感染症状。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了南蛇藤素在制备流感病毒抑制剂中的应用。
在本发明的一些具体实施方案中，所述流感病毒包括甲型流感病毒。
在本发明的一些具体实施方案中，所述流感病毒包括H1N1型流感病毒和/或H3N2型流感病毒。
在本发明的一些具体实施方案中，所述流感病毒为流感病毒株A/PuertoRico/8/1934(H1N1)或A/hong kong/498/97(H3N2)。
在本发明的一些具体实施方案中，所述南蛇藤素的有效抗流感病毒的浓度为0.025～0.4μM。
本发明还提供了南蛇藤素在制备预防和/或治疗流感病毒性疾病的药物中的应用。作为优选，所述流感病毒包括甲型流感病毒。作为优选，所述流感病毒包括H1N1型流感病毒和/或H3N2型流感病毒。作为优选，所述流感病毒为流感病毒株A/PuertoRico/8/1934(H1N1)或A/hong kong/498/97(H3N2)。
在本发明的一些具体实施方案中，所述流感病毒性疾病为呼吸道感染。
在本发明的一些具体实施方案中，所述药物包括南蛇藤素和药学上可接受的辅料；作为优选，所述药物的剂型包括胃肠道给药剂型或注射剂型。优选的，所述胃肠道给药剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或滴丸剂。
在本发明的一些具体实施方案中，所述胃肠道给药剂型中，南蛇藤素的质量分数为17.5～88％。
在本发明的一些具体实施方案中，所述药物的给药剂量为10～40mg/kg小鼠体重；所述药物的胃肠道给药剂型的剂量为1.1～4.4mg南蛇藤素/kg人体体重。
本发明提供了南蛇藤素在制备流感病毒抑制剂以及预防和/或治疗流感病毒性疾病的药物中的应用，本发明实验结果表明南蛇藤素明显减少流感病毒感染所致的小鼠死亡，延长小鼠的平均存活时间；能够明显抑制流感病毒感染所致小鼠肺部感染，有效缓解小鼠的肺部感染症状，具有治疗流感病毒所致的流行性感冒、肺炎等呼吸道感染疾病；并可预防病毒在体内的增殖和扩散，保护正常组织免受损伤，起到预防病毒感染性疾病发生的作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示本发明实施例1中南蛇藤素对MDCK狗肾细胞的毒性；
图2示本发明实施例2中南蛇藤素对流感病毒株H1N1的抑制活性；
图3示本发明实施例2中南蛇藤素对流感病毒株H3N2的抑制活性。
具体实施方式
本发明公开了南蛇藤素的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供了南蛇藤素在制备流感病毒抑制剂以及预防和/或治疗流感病毒性疾病的药物中的应用。
在本发明中，南蛇藤素又名雷公藤红素,所述南蛇藤素具有式Ⅰ所示结构，属于三萜类单体成分，药理学研究表明南蛇藤素具有抗炎症、抗氧化、调节免疫、调节细胞增殖和凋亡等作用，已广泛应用于治疗自身免疫性疾病、慢性炎症和肿瘤。所述南蛇藤素优选为南蛇藤素化合物单体和/或南蛇藤素提取物，所述南蛇藤素提取物中，单体南蛇藤素的含量优选在90％以上，本发明可按照常规方法从含有南蛇藤素的中药材或者中药饮片中提取得到，如南蛇藤或雷公藤；也可购买南蛇藤素的市售商品。具体的，在本发明的实施例中，可采用中国药品生物制品检定所提供的南蛇藤素。
在本发明中，所述流感病毒优选包括甲型流感病毒，更优选包括H1N1型流感病毒和/或H3N2型流感病毒，具体的，在本发明的实施例中，可采用如下流感病毒株：A/PuertoRico/8/1934(H1N1)或A/hong kong/498/97(H3N2)。
在本发明中，所述抗流感病毒药物包括南蛇藤素和药学上可接受的辅料。在本发明中，所述药学上可接受的辅料优选包括淀粉、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁、淀粉浆、蔗糖、糊精、羧甲基淀粉钠、滑石粉、聚山梨酯、聚乙二醇、注射用大豆磷脂和注射用甘油中的一种或几种；所述抗流感病毒药物的剂型优选包括胃肠道给药剂型或注射剂型，所述胃肠道给药剂型优选包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或滴丸剂。在所述胃肠道给药剂型的抗流感药物中，南蛇藤素的质量分数为17.5.0～88.0％，更优选为20～80％，最优选为25～75％；在本发明中，所述抗流感病毒药物每天的口服剂量优选为1.1～4.4mg南蛇藤素/kg体重，更优选为2.5～4.0mg南蛇藤素/kg体重。
本发明对所述包含南蛇藤素的抗流感病毒药物的制备方法没有特殊的限制，按照本领域技术人员常用的制药方法即可。
本发明提供了南蛇藤素在制备预防和/或治疗流感病毒性疾病的药物中的应用，本发明采用测定流感病毒神经氨酸酶(NA)活性来检测病毒的复制水平，测定了南蛇藤素对甲型流感病毒的抑制活性，结果表明，南蛇藤素对流感病毒株A/PuertoRico/8/1934(H1N1)和A/hong kong/498/97(H3N2)的抑制活性较好，在0.4μM时对H1N1抑制率可达82％。
本发明以灌胃(口服)进行了南蛇藤素对甲型流感病毒所致小鼠感染的疗效测试，结果表明，南蛇藤素在剂量10/20/40mg/kg/day时灌胃给药5天，小鼠的存活率分别为30％、60％和80％，平均存活天数分别为8.8天、11.3天和12.5天，阳性对照奥司他韦的小鼠存活率为90％，平均存活时间为13.3天；与模型组比较，阳性对照药奥司他韦、南蛇藤素组高、中、低剂量组小鼠肺湿重及肺病毒滴度均显著下降；由此可见，南蛇藤素与阳性对照药奥司他韦对甲型流感病毒的抑制效果相似，南蛇藤素能够明显减少流感病毒感染所致的小鼠死亡，延长小鼠的平均存活时间；能够明显抑制流感病毒感染所致小鼠肺部感染，有效缓解小鼠的肺部感染症状。
本发明提供的南蛇藤素的应用中所用原料及试剂均可由市场购得。
实验材料：
细胞与病毒：流感病毒A/PuertoRico/8/1934(H1N1)株，流感病毒A/hong kong/498/97(H3N2)株，均由中国科学院武汉病毒研究所提供；MDCK狗肾细胞，购于美国ATCC细胞库；
药物：奥司他韦羧酸盐购于上海佰世凯化学科技有限公司；南蛇藤素购于中国药品生物制品检定所；
动物：BALB/c小鼠，18～20g，雌雄各半，南京市江宁区青龙山动物繁殖场。
仪器：CO2培养箱，美国Thermo Fisher Scientific；酶标仪，Molecular Devices；生物安全柜，购自Heal Force公司。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1南蛇藤素的细胞毒性
方法步骤：MDCK细胞接种于96孔细胞培养板中，细胞贴壁后加入含药培养基。加药培养后，光镜下观察药物引起的细胞病变效应(CPE)，加入37℃孵育2h，荧光检测的还原情况，激发光540nm，发射光595nm。
细胞活性(％)＝(样品孔-空白对照)/(细胞对照-空白对照)*100％
表1南蛇藤素细胞毒性实验数据
结果如表1所示，图1为本发明实施例1中南蛇藤素对MDCK狗肾细胞的毒性。由图1可知，南蛇藤素在0.41μM时对MDCK细胞无细胞毒性。
实施例2南蛇藤素对甲型流感病毒的抑制活性
方法步骤：MDCK细胞接种于96孔细胞培养板中，37℃培养过夜后备用。MDCK细胞用PBS洗两遍后同时加入流感病毒液及梯度稀释浓度的药物。置于37℃细胞培养箱培养24h后，显微镜观察细胞病变(CPE)；取培养液上清液进行神经氨酸酶活力检测。
实验设空白对照孔(正常细胞)，病毒对照孔(病毒感染后未加药物)，阳性药物对照孔(感染后加利巴韦林)。
抑制率(％)＝100-(样品孔-空白对照)/(病毒对照-空白对照)*100％
表2南蛇藤素对流感病毒株H1N1的抑制活性结果
表3南蛇藤素对流感病毒株H3N2的抑制活性结果
表4南蛇藤素对甲型流感病毒的抑制活性结果
结果如表2～4所示，图2为本发明实施例2中南蛇藤素对流感病毒株H1N1的抑制活性；图3为本发明实施例2中南蛇藤素对流感病毒株H3N2的抑制活性。由图2和图3可以看出，南蛇藤素对流感病毒株A/PuertoRico/8/1934(H1N1)和A/hong kong/498/97(H3N2)的抑制活性较好，在0.4μM时对H1N1抑制率可达82％.
实施例3南蛇藤素灌胃(口服)给药对甲型流感病毒所致小鼠感染的治疗效果
首先做预实验测定流感病毒A/PuertoRico/8/1934(H1N1)的LD50。80只小鼠随机分为4组，每组20只。分别为：(1)正常对照组：灌胃给予蒸馏水，(2)模型组：灌胃给予蒸馏水，(3)阳性组：灌胃给予奥司他韦水溶液(20mg/kg)，(4)南蛇藤素组：灌胃给予南蛇藤素水溶液(20mg/kg)。分别于接种病毒前4h及接种病毒后连续给药5天，每天1次。乙醚麻醉后，10LD50剂量鼻腔接种流感病毒50μL。每组取10只连续观察14天，记录小鼠死亡情况(计算死亡率及平均生存时间)，另外10只分别于首次给药后4、8天将小鼠处死，无菌取肺，测定鼠肺湿重，鼠肺研磨成肺悬液后测定TCID50，鼠肺经甲醛固定后做组织切片，HE染色，光镜下观察肺组织形态学变化。结果用SPSS统计学软件处理。
实验结果及分析：
(1)染毒后小鼠生存状况
表5南蛇藤素灌胃给药对H1N1感染小鼠生存率和平均生存时间的影响(n＝10)
**P<0.01，与模型组比较。
结果如表5所示，表5为本发明实施例3中南蛇藤素灌胃给药对H1N1感染对小鼠生存率和平均生存时间的影响。与模型组相比，南蛇藤素高、中、低剂量组均能减少流感病毒感染所致的小鼠的死亡，极显著(P＜0.01)延长小鼠的平均存活时间。
(2)染毒后小鼠肺内病变情况
表6南蛇藤素对10LD50流感病毒(H1N1)染毒小鼠的保护作用
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
结果如表6所示，表6为本发明实施例3中南蛇藤素对10LD50流感病毒(H1N1)染毒小鼠的保护作用。本试验结果表明，与模型组比较，南蛇藤素组中、低剂量组小鼠肺湿重及肺病毒滴度均显著下降(P＜0.05)；南蛇藤素组高剂量组小鼠肺湿重及肺病毒滴度均极显著下降(P＜0.01)；能明显抑制流感病毒所致小鼠肺部感染，有效缓解肺部感染症状。
以上结果显示南蛇藤素在体内具有抗甲型流感病毒(H1N1)活性，可用于治疗流感病毒所致的流行性感冒、肺炎等呼吸道感染疾病；并可预防病毒在体内的增殖和扩散，保护正常组织免受损伤，起到预防病毒感染性疾病发生的作用。
实施例4南蛇藤素在制备胶囊剂药物中的应用
将350g南蛇藤素和32g淀粉、6g低取代羟丙基纤维素、4.5g微粉硅胶、1.5g硬脂酸镁及适量10％淀粉浆混合，装入胶囊，得到南蛇藤素的胶囊制剂1000粒。每日3次，每次1粒。
实施例5南蛇藤素在制备颗粒剂药物中的应用
将350g南蛇藤素和1000g蔗糖及500g糊精混合，按照常规方法制成1000包南蛇藤素颗粒剂。每日3次，每次1粒。
实施例6南蛇藤素在制备片剂药物中的应用
将350g南蛇藤素和50g淀粉、7.5g羧甲基淀粉钠、0.8g滑石粉、50g糊精、0.8g硬脂酸镁及适量10％淀粉浆适混合，按照常规方法制成南蛇藤素片剂1000片。每日3次，每次1片。
实施例7南蛇藤素在制备丸剂药物中的应用
将350g南蛇藤素和12g聚乙二醇-6000、80.5g聚山梨酯-80、适量液状石蜡混合，按照常规方法制成南蛇藤素丸剂1000粒。每日3次，每次1粒。
实施例8南蛇藤素在制备注射剂药物中的应用
将200g南蛇藤素和15g注射用大豆磷脂、25g注射用甘油，注射用水定容至1000mL，按照常规方法制成南蛇藤素注射剂1000支。每日1次，每次1支，至少采用250mL 5％葡萄糖注射液稀释后静脉滴注。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.南蛇藤素在制备流感病毒抑制剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述流感病毒包括甲型流感病毒。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述流感病毒包括H1N1型流感病毒和/或H3N2型流感病毒。
4.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于，所述流感病毒为流感病毒株A/PuertoRico/8/1934(H1N1)或A/hong kong/498/97(H3N2)。
5.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，所述南蛇藤素的有效抗流感病毒的浓度为0.025～0.4μM。
6.南蛇藤素在制备预防和/或治疗流感病毒性疾病的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述流感病毒性疾病为呼吸道感染。
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述药物包括南蛇藤素和药学上可接受的辅料；
所述药物的剂型包括胃肠道给药剂型或注射剂型；
所述胃肠道给药剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或滴丸剂。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述胃肠道给药剂型中，南蛇藤素的质量分数为17.5～88％。
10.根据权利要求6至9任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的给药剂量为10～40mg/kg小鼠体重；所述药物的胃肠道给药剂型的剂量为1.1～4.4mg南蛇藤素/kg人体体重。
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