CN106336295A - 一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂及其制备方法 - Google Patents

一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物制剂领域，本发明公开了一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂，按下列重量份的原料制成，蜡质芽孢杆菌0.1～1份；硫酸锰0.1～1份；聚谷氨酸0.001～0.1份，还公开了上述肥料增效剂的制备方法，本发明具有良好的促生、防病作用，对土壤中的根结线虫病、纹枯病、枯萎病具有良好的防治能力；本发明在聚谷氨酸、蜡质芽孢杆菌和硫酸锰复配后具有明显的协同增产、防病、抗逆效果，抗病型肥料增效剂可与肥料配合使用，提高肥料的利用率。同时，本发明具有生产简便、成本低廉和效果显著等优点，适合规模化生产，推动生态农业进程。

Description

一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料 增效剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物制剂技术领域，特别涉及一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂及其制备方法。
背景技术
化肥和农药在现代农业生产中发挥至关重要的作用。但过度依赖化肥和农药已经成为农业可持续发展的瓶颈。长期大量使用化肥、农药不仅造成了大量经济损失，同时也给我们的生存环境带来诸多不良后果，如土壤板结、农产品污染、水质污染、破坏生态平衡、危害人类健康等问题。如何有效提高肥料利用率，减少化肥和农药使用量，发展绿色生态农业已成为我国农业发展中迫切需要解决的重点课题。生物技术的发展以及肥料增效剂的出现，正好迎合了这一需求。
微生物用于农作物防病、增产，具有生产简便、成本低廉、效果显著、环境友好等优点，利用微生物处理农作物以达到防病增产的目的已有大量研究。
从而减少肥料和农药的用量，起到效果好且绿色生态的作用。
发明内容
为了弥补以上不足，本发明提供了一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂及其制备方法，以解决上述背景技术中的问题。
本发明的技术方案为：
一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂，包括下列重量份的原料制成：
蜡质芽孢杆菌0.1～1份；
硫酸锰0.1～1份；
聚谷氨酸0.001～0.1份。
作为一种优化的技术方案，包括下列重量份的原料制成：
蜡质芽孢杆菌1份；
硫酸锰0.4份；
聚谷氨酸0.05份。
作为一种优化的技术方案，还包括辅料，所述的辅料重量占组合抗病型肥料增效剂总重量的5％-40％，所述的辅料为膨润土、黄腐酸、白云石、钾长石粉、磷酸钙和碳酸钙粉中的任意一种或几种的组合。
作为一种优化的技术方案，所述的聚谷氨酸平均分子量为5-3000kDa，所述聚谷氨酸为聚谷氨酸纯品、聚谷氨酸盐纯品、包含聚谷氨酸的发酵培养物、聚谷氨酸溶液、含有聚谷氨酸发酵液的可湿性粉剂中的任意一种或几种的组合。
作为一种优化的技术方案，还包括肥料，所述肥料为氮肥、钾肥、磷肥、复合肥和有机肥其中的一种。
本发明还提供一种制备所述含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂的方法，本发明的方案是：
(1)将蜡质芽孢杆菌按如下方法制备成菌剂：
将斜面保存的蜡质芽孢杆菌活化，接种于活化培养基上；挑取活化培养基上的菌种，接种于发酵培养基组中培养，得发酵液菌数达到50亿-1000亿；将菌液在冷藏箱内放置24小时，冷藏箱内温度为4℃，然后加入碳酸钙和海藻糖作为保护剂，板框压滤后得到滤饼，70℃烘干，制得蜡质芽孢杆菌菌剂；
(2)取步骤(1)得到的菌剂中0.1-1重量份的蜡质芽孢杆菌菌剂与0.1-1重量份的硫酸锰和0.001-0.1重量份的聚谷氨酸混匀，得含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型增效剂。
作为一种优化的技术方案，步骤(2)中添加辅料，所述的辅料重量占组合抗病型肥料增效剂总重量的5％-40％，所述的辅料为膨润土、黄腐酸、白云石、钾长石粉、磷酸钙和碳酸钙粉中的任意一种或几种组合。
作为一种优化的技术方案，所述的发酵培养基组由下列重量份的原料制成，碳源10-100份；氮源1-40份；无机盐0.01-50份；水1000份。
作为一种优化的技术方案，所述发酵培养基的PH值5.0-9.0。
作为一种优化的技术方案，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、木糖、果糖、乳酸、柠檬酸、甘油、淀粉和糖蜜中的任意一种或几种的组合；
作为一种优化的技术方案，所述的氮源为酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、棉籽饼粉、尿素、(NH4)2SO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4和NH4NO3中的任意一种或几种的组合；
作为一种优化的技术方案，所述的无机盐为硫酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐、磷酸氢二盐和盐酸盐中的一种或几种的组合。
作为一种优化的技术方案，所述步骤(2)中添加肥料，所述肥料为氮肥、钾肥、磷肥、复合肥和有机肥其中的一种。
一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型增效剂的使用方式：冲施、灌根、撒施或穴施。
其中：蜡质芽孢杆菌，其分类命名为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，菌株号为XK-4，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.12648，保藏日期为2016年6月23日，保藏单位地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
蜡质芽孢杆菌具有下述性质：
1、菌落形态学特征：
菌体直杆状、成链、光镜下长2.5-3.5微米，宽1微米、革兰氏反应阳性，芽孢椭圆或柱状，中生，孢囊不膨大，原生质内含有不着色颗粒，平板培养，菌落圆形，直径0.2cm，边缘整齐，稍隆起，无光泽，不透明，蜡质；液体培养，形成菌膜。
2、生理与生化特性：
(1)培养温度：15～45℃，最适温度为27～32℃；
(2)在pH6.0～7.5范围内生长；
(3)革兰氏染色：阳性；
(4)VP反应：阳性；
(5)淀粉水解试验：阳性；
(6)硝酸盐还原反应：阳性；
(7)柠檬酸利用：阳性；
(8)明胶液化：阳性；
(9)苯丙酸脱氨酶试验：阴性；
(10)M.R.：阴性；
(11)脲酶试验：阴性；
(12)丙酸盐利用：阴性；
3、16S rDNA序列分析：
对菌株进行生理生化特征分析，并通过分子生物学技术，获得16S rRNA基 因序列。将所测序列从GeneBank数据库中的相关种进行比较，构建16S rDNA全序列为基础的系统发育树。
本发明有如下有益效果：蜡质芽孢杆菌：英文名称：Bacillus cereus，属微生物制剂，作用机理是产生大量的拮抗蛋白，能通过体内的SOD酶，调节作物细胞生长环境，维护细胞正常的生理代谢和生化反应，抑制有害病菌生长，提高抗逆性，促进作物生长，试验示范证明其对根结线虫病有良好的防治效果，并可兼治纹枯病，对枯萎病、青枯病等土传病害有较强的防治效果，蜡质芽孢杆菌的分泌物具有多种促生因子，活化土壤，能够转化有机氮、磷，分泌有机酸，降解土壤中的难溶性无机盐，分泌抗菌物质，能够改善土壤的酸碱度，一定程度上对聚谷氨酸降解酶的产生起到抑制作用，缓解了聚谷氨酸的降解速度。
聚谷氨酸是一种新型肥料增效剂，由微生物发酵合成的水溶性高分子量多肽，具有良好的生物可降解性、保水性、阳离子螯合性，能够缓慢的为作物生长提供营养，能为蜡质芽孢杆菌的生存提供更为良好的生长环境，诱导芽孢的生成，促进蜡质芽孢杆菌的定殖，使菌体活性更高。
Mn是蜡质芽孢杆菌生长的必需元素，适当的Mn2+浓度能够调节微生物的生理活性，可以诱导芽孢生成，并且能够调节植株SOD酶，适当Mn离子的引入，能够影响菌体生长曲线，促进芽孢的形成，使菌体活性更高。
聚谷氨酸含有末端胺和多个COO-基团，氮肥的NH4 +，磷肥中的PO4 3+、钾肥中的K+，元素肥料的Ca2+、Mg2+、Zn2+等可以直接和聚谷氨酸的羧基位点与酰胺基位点键合，形成水溶性的、稳定的聚谷氨酸盐，缓慢的为作物生长提供营养。
本发明发挥聚谷氨酸作为肥料增效剂和土壤调理剂的作用，改良土壤结构，提高微生物成活率，提高肥料利用率，同时发挥蜡质芽孢杆菌防病、抗逆能力，通过聚谷氨酸与蜡质芽孢杆菌以及硫酸锰复合后产生协同互作效应，增产、抗病、保肥、保水、绿色无污染。
本发明所述蜡质芽孢杆菌对根结线虫病有良好的防治效果，并可兼治纹枯病，对枯萎病、青枯病等土传病害有较强的防治效果，降低用药成本，减少环境污染。
聚谷氨酸是微生物发酵产生的，由D-谷氨酸和L-谷氨酸单体通过谷氨酰胺键均聚而成，具有保肥、保水、无毒、生物可降解和环境友好等优点，具有提高植物对养分的吸收等功效。
本发明的蜡质芽孢杆菌与聚谷氨酸以及硫酸锰复合后可产生协同互作效应，蜡质芽孢杆菌的使用可以降低聚谷氨酸的降解，聚谷氨酸的使用可以促进蜡质的存活和定殖。这种组合抗病型肥料增效剂可与肥料配合使用，促进农作物叶绿素的生成，提高农作物的品质，提高肥料的利用率，也可以作为菌肥直接施用。
本发明对辣椒茄子青枯病、水稻稻瘟病、姜瘟病、黄瓜根结线虫病等有很好的防治效果。可以明显提高小麦、玉米、水稻等粮食作物和油菜、小青菜等叶菜、甜瓜、西瓜、苹果等瓜果类以及秋茶等经济作物的产量25-65％。在保证作物产量不减产的情况下，可以减少施用20-40％质量的肥料。还可以明显提高瓜果类作物中各种糖分的含量，改变茶叶中风味物质含量，提高作物品质，提高粮食作物籽粒中蛋白、淀粉的含量和叶菜类作物中Vc含量，降低硝酸盐的含量。同时也提高了植物抗氧化酶及抗逆相关基因的表达量，增强了植物的抗逆能力，从而促进植物的生长。
具体实施方式
一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂，包括下列重量份的原料制成：
蜡质芽孢杆菌0.1～1份；
硫酸锰0.1～1份；
聚谷氨酸0.001～0.1份。
作为一种优化的技术方案，包括下列重量份的原料制成：
蜡质芽孢杆菌1份；
硫酸锰0.4份；
聚谷氨酸0.05份。
作为一种优化的技术方案，还包括辅料，所述的辅料重量占组合抗病型肥料增效剂总重量的5％-40％，所述的辅料为膨润土、黄腐酸、白云石、钾长石粉、磷酸钙和碳酸钙粉中的任意一种或几种的组合。
作为一种优化的技术方案，所述的聚谷氨酸平均分子量为5-3000kDa，所述聚谷氨酸为聚谷氨酸纯品、聚谷氨酸盐纯品、包含聚谷氨酸的发酵培养物、聚谷氨酸溶液、含有聚谷氨酸发酵液的可湿性粉剂中的任意一种或几种的组合。
作为一种优化的技术方案，还包括肥料，所述肥料为氮肥、钾肥、磷肥、复合肥和有机肥其中的一种。
本发明还提供一种制备所述含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂的方法，本发明的方案是：
(1)将蜡质芽孢杆菌按如下方法制备成菌剂：
将斜面保存的蜡质芽孢杆菌活化，接种于活化培养基上；挑取活化培养基上的菌种，接种于发酵培养基组中培养，得发酵液菌数达到50亿-1000亿；将菌液在冷藏箱内放置24小时，冷藏箱内温度为4℃，然后加入碳酸钙和海藻糖作为保护剂，板框压滤后得到滤饼，70℃烘干，制得蜡质芽孢杆菌菌剂；
(2)取步骤(1)得到的菌剂中0.1-1重量份的蜡质芽孢杆菌菌剂与0.1-1重量份的硫酸锰和0.001-0.1重量份的聚谷氨酸混匀，得含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型增效剂。
作为一种优化的技术方案，步骤(2)中添加辅料，所述的辅料重量占组合抗病型肥料增效剂总重量的5％-40％，所述的辅料为膨润土、黄腐酸、白云石、钾长石粉、磷酸钙和碳酸钙粉中的任意一种或几种组合。
作为一种优化的技术方案，所述的发酵培养基组下列重量份的原料制成，碳源10-100；氮源1-40；无机盐0.01-50；水1000。
作为一种优化的技术方案，所述发酵培养基的PH值5.0-9.0。
作为一种优化的技术方案，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、木糖、果糖、乳酸、柠檬酸、甘油、淀粉和糖蜜中的任意一种或几种的组合；
作为一种优化的技术方案，所述的氮源为酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、棉籽饼粉、尿素、(NH4)2SO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4和NH4NO3中的任意一种或几种的组合；
作为一种优化的技术方案，所述的无机盐为硫酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐、磷酸氢二盐和盐酸盐中的一种或几种的组合。
作为一种优化的技术方案，所述步骤(2)中添加肥料，所述肥料为氮肥、钾肥、磷肥、复合肥和有机肥其中的一种。
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例一、
将斜面保存的蜡质芽孢杆菌活化，接种于活化培养基上；挑取活化培养基上的菌种，接种于发酵培养基组中培养，得发酵液菌数达到50亿-1000亿；将菌液在冷藏箱内放置24小时，冷藏箱内温度为4℃，然后加入碳酸钙和海藻糖作为保护剂，板框压滤后得到滤饼，70℃烘干，制得蜡质芽孢杆菌菌剂；
(2)取步骤(1)得到的菌剂中1重量份的蜡质芽孢杆菌菌剂与0.4重量份的硫酸锰和0.05重量份的聚谷氨酸混匀，得含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型增效剂。
实施例二、
将斜面保存的蜡质芽孢杆菌活化，接种于活化培养基上；挑取活化培养基上的菌种，接种于发酵培养基组中培养，得发酵液菌数达到50亿-1000亿；将菌液在冷藏箱内放置24小时，冷藏箱内温度为4℃，然后加入碳酸钙和海藻糖作为保护剂，板框压滤后得到滤饼，70℃烘干，制得蜡质芽孢杆菌菌剂；
(2)取步骤(1)得到的菌剂中0.1重量份的蜡质芽孢杆菌菌剂与0.1重量份的硫酸锰和0.001重量份的聚谷氨酸混匀，得含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型增效剂。
实施例三、
将斜面保存的蜡质芽孢杆菌活化，接种于活化培养基上；挑取活化培养基上的菌种，接种于发酵培养基组中培养，得发酵液菌数达到50亿-1000亿；将菌液在冷藏箱内放置24小时，冷藏箱内温度为4℃，然后加入碳酸钙和海藻糖作为保护剂，板框压滤后得到滤饼，70℃烘干，制得蜡质芽孢杆菌菌剂；
(2)取步骤(1)得到的菌剂中1重量份的蜡质芽孢杆菌菌剂与1重量份的硫酸锰和0.1重量份的聚谷氨酸混匀，得含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型增效剂。
实施例四、
将斜面保存的蜡质芽孢杆菌活化，接种于活化培养基上；挑取活化培养基上的菌种，接种于发酵培养基组中培养，得发酵液菌数达到50亿-1000亿；将菌液在冷藏箱内放置24小时，冷藏箱内温度为4℃，然后加入碳酸钙和海藻糖作为保护剂，板框压滤后得到滤饼，70℃烘干，制得蜡质芽孢杆菌菌剂；
(2)取步骤(1)得到的菌剂中1重量份的蜡质芽孢杆菌菌剂与0.4重量份的硫酸锰和0.05重量份的聚谷氨酸混匀，得抗病型增效剂。
(3)将步骤(2)中的抗病型增效剂内添加占组合抗病型肥料增效剂总重量5％的辅料混合均匀，所述辅料由白云石和碳酸钙粉按1:1比重混合而成，配制成含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型增效剂。
本发明的方案是：为此取实施例一制成的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂参与以下四项实验进一步证明本发明具有实质性特点和显著的进步。
实验一、
本实施例中蜡质芽孢杆菌剂制备同实施例一，所用抗病型肥料增效剂的制备同实施例1。
以水稻为实验对象进行小区试验，本试验选择在历年纹枯病比较严重的水稻种植地块中进行，本试验设四个处理，三次重复，小区面积30m2，各校区随机排列，设置保护行。各处理均作为基肥施用，普通复合肥为450kg/hm2，处理如下：
T1：常规施肥；
T2：常规施肥+聚谷氨酸；
T3：常规施肥+蜡质芽孢杆菌；
T4：常规施肥+含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂。
实验结果见下表1：
表1各处理对水稻的产量及其构成因素与发病率的影响
聚谷氨酸与普通肥料混施和蜡质芽孢杆菌剂与普通肥料混施均能提高水稻有效穗数、千粒重和水稻产量，与仅施普通肥料对比，分别增产19.3％、4.5％。当施用组合抗病型肥料增效剂时，可以显著提高水稻产量35.1％。这说明组合抗 病型肥料增效剂比其中所有增效成分单独施用后的叠加增产效果差异显著。蜡质芽孢杆菌与普通肥料混施能降低发病率9.4％，施用组合抗病型肥料增效剂时，能够降低发病率21.3％。
实验二、
本实施例中蜡质芽孢杆菌剂制备同实施例一，所用抗病型肥料增效剂的制备同实施例1。
以盆栽小青菜为实验对象，所施加的肥料为每千克土150mg。试验设3个处理：
T1：普通肥料；
T2：普通肥料+含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂；
T3：减施30％质量的普通肥料+含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合组合抗病型肥料增效剂。
试验结果见下表2：
表2抗病型肥料增效剂对盆栽小青菜生长特性及产量的影响
本发明中抗病型肥料增效剂与肥料混施，能够促进小青菜根部增粗、增大，对小青菜地上、底下部鲜重、植株株高都有明显的促进作用，可增产26.9％。当减施30％质量的肥料时，依然可以提高产量10.9％，这说明本发明的抗病型肥料增效剂可以有效的减少化肥的使用量，抗病型肥料增效剂可以减少施用的化肥。
实验三、
本实施例中蜡质芽孢杆菌剂制备同实施例一，所用抗病型肥料增效剂的制备同实施例1。
以小麦为实验对象，进行小区小麦试验。小区长8m，宽2.5m，小区面积20m2，小区四周设置保护行。各小区肥料用量为900kg/hm2，抗病型肥料增效剂的用量为30kg/hm2。处理如下：
T1：不施肥；
T2：普通复合肥；
T3：普通肥料+含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂。
试验结果见下表3：
表3抗病型肥料增效剂对肥料利用率的影响
通过对比小麦收获后植株氮、磷、钾的吸收量与播种前氮肥、磷肥、钾肥的施入量，计算本发明中抗病型肥料增效剂对肥料的利用率。本发明中抗病型肥料增效剂与普通复合肥相比，对小麦N、P、K的利用率分别提高了29.8％、10.3％、11.2％。因此本发明中抗病型肥料增效剂能显著促进粮食作物增产，抗病型肥料增效剂显著提高肥料利用率。
实验四、
本实施例中蜡质芽孢杆菌剂制备同实施例一，所用抗病型肥料增效剂的制备同实施例1。
以西瓜为试验对象，试验共设2个处理，3次重复。
T1：普通复合肥(450kg/hm2)；
T2：施加普通复合肥(450kg/hm2)+含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂。
试验结果见下表4：
表4抗病型肥料增效剂对西瓜Vc和硝酸盐含量的影响
与T1相比，含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂可以提高西瓜Vc含量36.3％，降低硝酸盐含量19.5％。降低西瓜根结线虫病发病率为26.4％，试验结果表明，本发明中的抗病型肥料增效剂不但可以提高西瓜的产量，而且还能显著降低西瓜根结线虫病的发病率，抗病型肥料增效剂显著提高农作物的品质。
以上所述仅是描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界。

Claims (10)

1.一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂，其特征在于，包括下列重量份的原料制成：
蜡质芽孢杆菌 0.1～1份；
硫酸锰 0.1～1份；
聚谷氨酸 0.001～0.1份。
2.如权利要求1所述的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂，其特征在于：所述的蜡质芽孢杆菌，其分类命名为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，菌株号为XK-4，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.12648。
3.如权利要求1所述的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂，其特征在于：还包括辅料，所述的辅料重量占组合抗病型肥料增效剂总重量的5％-40％，所述的辅料为膨润土、黄腐酸、白云石、钾长石粉、磷酸钙和碳酸钙粉中的任意一种或几种的组合。
4.如权利要求1所述的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂，其特征在于：所述的聚谷氨酸平均分子量为5-3000kDa，所述聚谷氨酸为聚谷氨酸纯品、聚谷氨酸盐纯品、聚谷氨酸的发酵培养物、聚谷氨酸溶液、含有聚谷氨酸发酵液的可湿性粉剂中的任意一种或几种的组合。
5.如权利要求1所述的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂，其特征在于：还包括肥料，所述肥料为氮肥、钾肥、磷肥、复合肥和有机肥其中的一种。
6.一种制备如权利要求1至5任一项所述的含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂的方法，其特征在于：
(1)将蜡质芽孢杆菌按如下方法制备成菌剂：
将斜面保存的蜡质芽孢杆菌活化，接种于活化培养基上；挑取活化培养基上的菌种，接种于发酵培养基组中培养，得发酵液菌数达到50亿-1000亿；将菌液先在冷藏箱内放置24小时，冷藏箱内温度为4℃，然后加入碳酸钙和海藻糖作为保护剂，板框压滤后得到滤饼，70℃烘干，制得蜡质芽孢杆菌菌剂；
(2)取步骤(1)得到的菌剂中0.1-1重量份的蜡质芽孢杆菌菌剂与0.1-1重量份的硫酸锰和0.001-0.1重量份的聚谷氨酸混匀，得含蜡质芽孢杆菌、硫 酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型增效剂。
7.如权利要求6所述的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂的制备方法，其特征在于，所述的发酵培养基组由下列重量份的原料制成：
碳源 10-100份；
氮源 1-40份；
无机盐 0.01-50份；
水 1000份。
8.如权利要求7所述的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂的制备方法，其特征在于：所述发酵培养基的PH值5.0-9.0。
9.如权利要求6所述的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中添加辅料，所述的辅料重量占含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂总重量的5％-40％，所述的辅料为膨润土、黄腐酸、白云石、钾长石粉、磷酸钙和碳酸钙粉中的任意一种或几种组合。
10.如权利要求6所述的一种含蜡质芽孢杆菌、硫酸锰和聚谷氨酸的组合抗病型肥料增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中添加肥料，所述肥料为氮肥、钾肥、磷肥、复合肥和有机肥其中的一种。
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