CN106290205A - 一种面粉中糖脂含量的测定方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种面粉中糖脂含量的测定方法及其应用,该测定方法包括以下步骤:(1)采用比色法测定面粉中相应组分的总糖含量;(2)结合步骤(1)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x‑0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(1)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x‑1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量。该方法测量简便、快捷,能够准确地测定面粉或淀粉中极性糖脂含量。
Description
技术领域
本发明属于食品技术领域,具体涉及到一种面粉中糖脂含量的测定方法及其应用。
背景技术
植物半乳糖脂是指广泛存在于植物体内含有半乳糖残基的极性脂类。半乳糖脂广泛分布于植物界 ,是植物组织中最主要的糖脂成分,主要成分是单半乳糖脂和双半乳糖脂。面粉中含有0.5%-3%的脂质,其中糖脂占26.4%。而单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂又占糖脂的69%。面粉中极性脂类能改善面团的持气性,对增加面包体积起良好作用。脂类和碳水化合物都存在于小麦籽粒中,它们的互作对食品的烘烤品质起着重要作用。脂类影响了淀粉凝胶的流变学特性,拖延面包心纹理结构的形成,使面包膨胀时间延长。同时,在对小麦籽粒的硬度研究中发现面粉中极性脂,尤其是淀粉表面极性脂与籽粒硬度紧密相关。软质蛋白Friabilin其类脂结合区域是一个富含色氨酸结构域,和淀粉表面易于结合,从而影响小麦硬度。色氨酸区d-螺旋间形成膜固着环与淀粉表面双分子极性脂紧密结合,软麦淀粉表面束缚态极性脂(糖脂和磷脂)含量明显高于硬麦。
在半乳糖脂定量分析方面,多数是先通过柱层析和薄层析(TLC)分离纯化得到半乳糖脂, 然后进行甲基化酸水解,再利用气液色谱技术析脂肪酸甲酯含量,最后换算成半乳糖脂的含量。但操作繁琐,技术要求高,结果重现性差,成功率低。也有用高分辨质谱ESI-QTOF/MS来定量分析,但是这种方法所使用的仪器比较昂贵,不能大批量和大范围条件下应用。另外,也有利用半乳糖脂含有大量的多不饱和脂肪酸,在200nm波长左右处有光吸收高峰的特点,用反相高效液相色谱法(HPLC)来分析测定;这种测定方法快捷方便,但设备费用较高,限制了其应用的范围。为了快速方便的测量面粉和淀粉中的糖脂含量,也有人提出直接测定总糖含量的方法来估算其糖脂含量,但这种方法不够精确,误差较大。因此,建立一种准确、快速、且成本低的测定面粉和淀粉中糖脂含量的方法十分必要。
发明内容
本发明目的在于提供一种面粉中糖脂含量的测定方法及其应用,该方法能够快速准确地测定面粉或淀粉中极性糖脂含量。
为实现以上目的,本发明采用的技术方案是:
本发明提供了一种面粉中糖脂含量的测定方法,包括以下步骤:
(1)采用比色法测定面粉中相应组分的总糖含量;
(2)结合步骤(1)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(1)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量。
上述的面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40~80目的小麦粉加水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,小麦粉与水饱和的正丁醇溶液的质量比为1:(6~7),浸渍时间为1~2h;然后将混合物a于温度30~40℃下振荡浸提48~72 h,接着于3000~4000 rpm离心15~20 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度35~40℃浓缩至4~5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2~4次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5~2.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2~3次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于0.8~2mL甲醇中得到粗脂;
(8)取200~500μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部1~3cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,分别找出目的物单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于离心管中,用10~20mL溶解液g于温度40℃下溶解5~10min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)用差量法分别计算出目的物的总重量;
(14)将目的物分别溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:(1~2),接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3~4mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5~14mL 1mol/L KOH;
(15)移取2~6ml的步骤(14)得到溶液中的上清液置于不同离心管中,于温度在60~80℃下蒸干,分别用3~4ml蒸馏水洗涤,向每一个离心管中均加入3~4ml菲林试剂,于温度99℃保温10min,加入4mL硫酸-钼酸铵显色剂,分别定容至10 mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值按照半乳糖标线计算不同离心管中总糖含量;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量。
本发明与与其他方法相比优点在于:
本发明方法测量简便、快捷、准确,提供一种简便快速准确的测定糖脂含量的方法。
具体实施方式
实施例1
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40~80 目10.000 g小麦品种天民198面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000 rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度35℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,分别找出目的物单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂所在条带,挖下;
(10)将目的物所在的条带分别置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)用差量法分别计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)分别移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;天民198中双半乳糖甘油二脂的糖含量为3.040 mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.7483 mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的不同组分总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;根据公式计算出天民198中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0536mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.5603mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(25Omm×4.6mm),进样量为10 uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量;天民198中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0588 mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.6005 mg/g。
实施例2
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种周麦32面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)分别用差量法计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10 mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;周麦32中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.271mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.8617 mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;周麦32中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0327 mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.8276 mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量。周麦32中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0301mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.8215 mg/g。
实施例3
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种百农207面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)用差量法分别计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10 mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;百农207中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.234mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.7937 mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;百农207中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0317 mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.6673 mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量;百农207中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0204 mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.6508 mg/g。
实施例4
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种丰德存1号面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)分别用差量法计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;丰德存1号中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.088mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.8390mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;丰德存1号中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0278mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.7741mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量。丰德存1号中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0263mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.7821 mg/g。
实施例5
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种郑麦21面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)分别用差量法计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;郑麦21中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.271mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.5669mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;郑麦21中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0327 mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.1328 mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量。郑麦21中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0310mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.1203 mg/g。
实施例6
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种郑麦113面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)分别用差量法计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;郑113中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.821mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.839 mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;郑麦113中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0476mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.7741mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量。郑113中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0443mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.7601 mg/g。
实施例7
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种贵农257面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)分别用差量法计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;贵农257中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.564mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.802 mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;贵农257中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0407 mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.6869 mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量。贵农257中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0431mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.7022mg/g。
实施例8
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种扬麦158面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)分别用差量法计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;扬麦158中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.125mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.615mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;扬麦158中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0288mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.247mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量。扬麦158中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0306mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.225 mg/g。
实施例9
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种绵麦11面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)分别用差量法计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;绵麦11中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.967mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.8163 mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;绵麦11中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0516mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.7206 mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量。绵麦11中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0608mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.7115 mg/g。
实施例10
一种面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,具体步骤如下:
(1)先将40 目10.000 g小麦品种中育12面粉加60mL水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,浸渍时间为1.5h;然后将混合物a于温度35℃下振荡浸提48 h,接着于4000rpm离心15 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度40℃浓缩至5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂;
(8)取400μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部2cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;在距离层析板边缘0.5 cm处,停止层析,取出薄层层析板放置在实验台上,用吹风机吹干;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,找出单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂目的物所在条带,挖下;
(10)分别将目的物所在的条带置于不同离心管中,用15mL溶解液g于温度40℃下溶解5min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)分别用差量法计算出不同目的物的总重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:2,接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液;
(15)移取步骤(14)中溶液2ml上清液,在80℃下蒸干,用3 ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3ml菲林试剂,99℃水浴10 min,加入4 ml硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值,按照半乳糖标线计算糖含量;中育12中双半乳糖甘油二脂的糖含量为2.564mg/g,单半乳糖甘油二脂的糖含量为0.7937 mg/g;
(18)结合步骤(17)中得到的总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为双半乳糖甘油二脂的糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中0.7937得到的总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为单半乳糖甘油二脂的糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量;中育12中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0407 mg/g,单乳糖甘油二脂的含量为0.6672 mg/g;
(19)重复步骤(1)到(11),将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干;
(20)将步骤19中获得物质溶于800 ul甲醇中,在检测波长为 205 nm,流动相95%的甲醇,5%的0.2%乙酸溶剂系统,流速1mL/min,柱温为室温,Symmetry®c18(250mm×4.6mm),进样量为10uL的条件下,对样品进行高效液相测定,用外标法进行定量分析,分别得出极性脂单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂的含量。中育12中双半乳糖甘油二脂的含量为0.0361mg/g,单半乳糖甘油二脂的含量为0.6865 mg/g。
表1 该方法的单半乳糖甘油二脂计算值与实际测量值结果对比
表2 该方法的双半乳糖甘油二脂计算值与实际测量值结果对比
Claims (2)
1.一种面粉中糖脂含量的测定方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)采用比色法测定面粉中的相应组分的总糖含量;
(2)结合步骤(1)中得到的各组分总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(1)中得到的各组分总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量。
2.如权利要求1中所述的面粉中糖脂含量的测定方法在小麦粉中的应用,其特征在于具体步骤如下:
(1)先将40~80目的小麦粉加水饱和的正丁醇溶液中搅拌浸渍得到混合物a,小麦粉与水饱和的正丁醇溶液的质量比为1:(6~7),浸渍时间为1~2h;然后将混合物a于温度30~40℃下振荡浸提48~72 h,接着于3000~4000 rpm离心15~20 min,得到黄色透明的上清液;
(2)将步骤(1)得到的上清液于温度35~40℃浓缩至4~5mL,得到浓缩液b;
(3)将步骤(2)得到的浓缩液b用萃取剂c进行萃取,萃取剂c是由氯仿、甲醇和水按照体积比为2:1:0.75混合配置而成,萃取后分为上相层和下相层,取下相层黄色溶液备用;
(4)步骤(3)中上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取分相,下相层黄色溶液,上相层的混合液接着采用萃取剂c进行萃取,重复用萃取剂c操作2~4次,合并下相层黄色溶液得到混合液d,接着使用氮气将混合液d吹干得到混合物e;
(5)取1.5~2.5 mL氯仿溶液洗涤混合物e,氮气吹干;
(6)重复步骤(5)操作2~3次,得到物质f;
(7)将步骤(6)得到的物质f溶于0.8~2mL甲醇中得到粗脂;
(8)取200~500μL步骤(7)中得到的粗脂,在规格200mm * 200mm的硅胶板上距离底部1~3cm处点样,在展开剂的作用下展板,展开剂是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照体积比为10:2:2:2:1配置而成;
(9)在紫外灯254 nm波长照射下能看到不同的斑点,在标准品的对照下,分别找出目的物单半乳糖甘油二脂和双半乳糖甘油二脂所在条带,挖下;
(10)将目的物所在的条带分别置于不同离心管中,分别用10~20mL溶解液g于温度40℃下溶解5~10min,溶解液g是由氯仿与甲醇按照体积比为2:1配置而成,然后过滤,将滤液置于称重后的不同离心管中;
(11)重复步骤(10),然后分别合并滤液;
(12)将步骤(11)中得到的滤液用氮气吹干,对离心管进行称重;
(13)用差量法分别计算出目的物单半乳糖甘油二脂及双半乳糖甘油油二脂的重量;
(14)分别将目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物与1 M KOH-乙醇溶液的质量比为1:(1~2),接着于温度70℃保温20~30 min,然后加入3~4mL 1 mol/L 盐酸,接着于温度99℃保温15 min,最后加入7.5~14mL 1mol/L KOH;
(15)分别移取2~6ml步骤(14)得到溶液中的上清液置于不同离心管中,于温度在60~80℃下蒸干,用3~4ml蒸馏水洗涤,向离心管中加入3~4ml菲林试剂,于温度99℃保温10min,加入4mL硫酸-钼酸铵显色剂,定容至10 mL;
(16)将步骤(15)的溶液分别在600nm波长下测定吸光值;
(17)根据步骤(16)测定的吸光值按照半乳糖标线计算不同离心管中总糖含量;
(18)结合步骤(17)中得到的各组分总糖含量,根据方程y1=0.0271x-0.0288计算出双半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y1为双半乳糖甘油二脂含量;结合步骤(17)中得到的各组分总糖含量,根据方程y2=2.3567x-1.2032计算出单半乳糖甘油二脂的含量,其中x为总糖含量,y2单半乳糖甘油二脂含量。
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Publication number | Publication date |
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CN106290205B (zh) | 2018-11-20 |
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