CN106282306A - 一种用于检测抗菌不锈钢长期抗菌效果的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于检测抗菌不锈钢长期抗菌效果的检测方法，它由抗菌不锈钢试样片浸泡、不同浸泡时间后样片表面和浸出液收集、抗菌实验步骤三部分组成；它可以有效弥补现有抗菌检测方法存在的不足，极大促进抗菌不锈钢材料在各种环境中的合理应用；适用于各消毒检验部门、科研院所的实验室、企业的研发部门和质控部门、社会公共检测机构，依据此方法开展抗菌不锈钢长期抗菌性能的检测工作；又适用于各类企业的抗菌效果评价；且还适用于不同抗菌不锈钢类型；还能够更清晰地辨明抗菌不锈钢的杀菌机制，对抗菌不锈钢的实际产品应用具有重要的指导意义。

Description

一种用于检测抗菌不锈钢长期抗菌效果的检测方法

技术领域

本发明属于检测抗菌不锈钢长期抗菌效果的技术领域，具体涉及一种用于检测抗菌不锈钢表面抗菌和离子溶出抗菌效果的检测方法。

背景技术

抗菌不锈钢是指在钢中添加抗菌元素如Cu、Ag或稀土元素，通过合适的热处理析出富集抗菌元素的第二相，当抗菌不锈钢与溶液介质接触时，抗菌元素可以通过表面接触和离子溶出的方式参与细菌杀灭过程。主流观点认为离子溶出是主要的抗菌机制，但仍缺乏直接有力的证据。

传统的抗菌检测方法主要有：日本的JIS2801，国际标准ISO22196以及我国的GB21551.2。这些标准所采用的抗菌方法一般称为覆膜法或贴膜法。它是把稀释好的细菌悬液与实验样品均匀接触后，在一定环境培养一定时间后测算抗菌率的检测方法。该方法虽然能比较客观的反映样品本身的抗菌性能，但存在如下缺陷：

1.不能反映样品本身的抗菌机制是表面接触杀菌，还是离子溶出杀菌。覆膜法实际上涵盖了表面接触和离子溶出杀菌的方法。也就是说，在覆膜法过程中，既有可能是样品表面接触细菌悬液造成的杀菌，也可能是细菌悬液在与样品作用时溶出的抗菌元素离子造成的杀菌。因此，覆膜法无法弄清哪种抗菌机制在起主要杀菌作用。当面临不同的应用环境时，也就无法就抗菌不锈钢应适用的使用条件进行指导。

2.不能反映样品本身抗菌性能是否具有长效性。传统抗菌检测方法只负责静态的样品的抗菌检测，本身不包含检测样品状态随着使用时间的增加而带来的可能的抗菌效果差异评价。而抗菌不锈钢的长效性无疑是至关重要的，它能直接关系抗菌产品的实际使用功效。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种用于检测抗菌不锈钢长期抗菌效果的检测方法，它可以有效弥补现有抗菌检测方法存在的不足，极大促进抗菌不锈钢材料在各种环境中的合理应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种用于检测抗菌不锈钢长期抗菌效果的检测方法，它由抗菌不锈钢试样片浸泡、不同浸泡时间后样片表面和浸出液收集、抗菌实验步骤三部分组成。

具体检测操作步骤如下：

1)抗菌不锈钢试样片浸泡：选取10mm×10mm×1mm试样片若干块，将表面抛光无锈斑，放置于100mL的溶液中，浸泡溶液可以为生理盐水、自来水，根据检测抗菌性能需要确定浸泡时间节点和浸泡时间；

2)不同浸泡时间后样片表面和离子浸出液收集：在选定溶液中浸泡不同时间节点后，分别收集至少5块样片和样片浸出溶液1μL，在进行第三步抗菌实验步骤前，保持样片表面状态不变，并放置在干燥无菌的绝缘环境中；

3)菌悬液制备：试验菌可以为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌用PBS或生理盐水洗下24h斜面培养物，并依次做10倍递增稀释液，选择菌液浓度为(5.0～10.0)×105cfu/mL的稀释液作为试验用菌液；

4)抗菌不锈钢样片表面抗菌试验：试验开始前试样表面做灭菌处理，滴加适量的稀释菌液至不同浸泡时间后的试样片表面，依靠样片表面的表面张力吸附菌液液滴；在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h；

5)抗菌不锈钢浸出液抗菌实验：提取1μL不同浸泡时间后的浸出液，与50μL稀释菌液在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h；

6)抗菌不锈钢抗菌率的对比参照空白对照，也即是稀释菌液在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h培养环境下，细菌自然的生长状态；抗菌率计算公式为：

R(％)＝(A－B)/A×100

式中：

R—抗菌率(％)；

A—空白对照样品平均回收菌数(cfu/片)；

B—抗菌不锈钢样片表面和离子溶出液平均回收菌数(cfu/片)。

本发明有益效果为：

1、方法使用范围广，不但适用于各消毒检验部门、科研院所的实验室、企业的研发部门和质控部门、社会公共检测机构，依据此方法开展抗菌不锈钢长期抗菌性能的检测工作；又适用于各类企业的抗菌效果评价；且还适用于不同抗菌不锈钢类型，如表面涂层型和本体一体化抗菌不锈钢的长期抗菌效果评价。

2、该方法的建立将有助于用户企业全面评估评估抗菌不锈钢是否适合本企业产品使用环境，可信度高。

3、该法能够更清晰地辨明抗菌不锈钢的杀菌机制，对抗菌不锈钢的实际产品应用具有重要的指导意义。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例：以304型抗菌不锈钢为例，细菌选择为大肠杆菌，浸泡介质为生理盐水环境，拟考察抗菌效果时间为30天。

具体检测操作步骤如下：

1)选取10mm×10mm×1mm的304型抗菌不锈钢试样片30块，表面抛光无锈斑，放置于100mL的生理盐水溶液中，抗菌效果时间节点选择：5天、10天、15天、20天、25天和30天；

2)不同浸泡时间后样片表面和离子浸出液收集，在溶液中浸泡不同时间节点后，分别收集5块样片和样片浸出溶液1μL，在进行第三步抗菌实验步骤前，放置样片和浸出液于真空灭菌环境手套箱中；

3)大肠杆菌菌悬液制备。用PBS洗下24h斜面培养物，并依次做10倍递增稀释液，选择菌液浓度为5.0×10⁵cfu/mL的稀释液作为试验用菌液；

4)304型抗菌不锈钢样片表面抗菌试验，试验开始前试样表面做灭菌处理。滴加适量的稀释菌液至不同浸泡时间后的试样片表面，依靠样片表面的表面张力吸附菌液液滴；在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h；

5)304型抗菌不锈钢浸出液抗菌实验，提取1μL不同浸泡时间后的浸出液，与50μL稀释菌液在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h；

6)抗菌效果评价：304型抗菌不锈钢抗菌率的对比参照空白对照，也即是稀释菌液在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h培养环境下，细菌自然的生长状态；抗菌率计算公式为：

R(％)＝(A－B)/A×100

式中：

R—抗菌率(％)；

A—空白对照样品平均回收菌数(cfu/片)；

B—抗菌不锈钢样片表面和离子溶出液平均回收菌数(cfu/片)。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (1)

1.一种用于检测抗菌不锈钢长期抗菌效果的检测方法，它由抗菌不锈钢试样片浸泡、不同浸泡时间后样片表面和浸出液收集、抗菌实验步骤三部分组成；其特征在于具体检测操作步骤如下：

1)抗菌不锈钢试样片浸泡：选取10mm×10mm×1mm试样片若干块，将表面抛光无锈斑，放置于100mL的溶液中，浸泡溶液可以为生理盐水、自来水，根据检测抗菌性能需要确定浸泡时间节点和浸泡时间；

2)不同浸泡时间后样片表面和离子浸出液收集：在选定溶液中浸泡不同时间节点后，分别收集至少5块样片和样片浸出溶液1μL，在进行第三步抗菌实验步骤前，保持样片表面状态不变，并放置在干燥无菌的绝缘环境中；

3)菌悬液制备：试验菌可以为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；用PBS或生理盐水洗下24h斜面培养物，并依次做10倍递增稀释液，选择菌液浓度为(5.0～10.0)×105cfu/mL的稀释液作为试验用菌液；

4)抗菌不锈钢样片表面抗菌试验：试验开始前试样表面做灭菌处理，滴加适量的稀释菌液至不同浸泡时间后的试样片表面，依靠样片表面的表面张力吸附菌液液滴；在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h；

5)抗菌不锈钢浸出液抗菌实验：提取1μL不同浸泡时间后的浸出液，与50μL稀释菌液在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h；

6)抗菌不锈钢抗菌率的对比参照空白对照，即是稀释菌液在(37±1)℃、相对湿度RH＞90％条件下培养24±1h培养环境下，细菌自然的生长状态；抗菌率计算公式为：

R(％)＝(A－B)/A×100

式中：

R—抗菌率(％)；

A—空白对照样品平均回收菌数(cfu/片)；

B—抗菌不锈钢样片表面和离子溶出液平均回收菌数(cfu/片)。