CN106279352A - 海兔毒素10的衍生物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种海兔毒素10的衍生物及其应用。所述海兔毒素10的衍生物是结构如式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ所示的化合物。

Description

海兔毒素10的衍生物及其应用
技术领域
本发明涉及海兔毒素10(Dolastatin 10)衍生物类细胞毒性药物的设计合成，及其在抗体药物偶联物(Antibody-drug Conjugates,ADCs)中的应用。
背景技术
作为新型的靶向治疗药物，抗体药物偶联物(ADC)近年来得到快速的发展，目前已有三个ADC药物(Mylotarg，Adcetris，和Kadcyla)通过了美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市，另外还有超过30个ADC药物处于临床试验阶段。
抗体药物偶联物通常由三部分组成：抗体或抗体类配体，高活性细胞毒性药物，和将配体与细胞毒性药物偶联起来的连接子。其作用机制如下：抗体或抗体类配体特异性地识别细胞表面抗原并与之结合；形成的结合物以内吞的方式进入细胞内，同时将高活性细胞毒性药物带入；抗体被酶解或连接子自身断裂，高活性细胞毒性药物以适当的活性成分形式释放出来，杀死目标细胞。
抗体药物偶联物采用的细胞毒性药物活性非常高，通常比目前在一线应用的化疗药物活性高10-1000倍以上。用于抗体药物偶联物的细胞毒性药物主要作用于细胞微管蛋白和DNA靶点。作用于微管蛋白的细胞毒性药物抑制细胞的有丝分裂进而导致细胞凋亡，这一类细胞毒性要素主要包括美登素类(Maytansinoids,EP 0425235；US 5208020,5416064；7276497,7473796,7851432；US 2007/0269447,2011/0158991；WO 2004/103272,2012/061590)和耳抑素肽类(Auristatins,海兔毒素10的衍生物，US 6884869,7498298)。作用于DNA的细胞毒性药物通过抑制DNA合成，DNA小沟络合烷基化及断裂等机制导致细胞凋亡，主要包括阿霉素类(Doxorubicins,Bioconjugate Chem.2002,13,855-869)，卡奇霉素类(Calicheamicins,US 5606040,5770710)，苯并二吡咯类抗生素类(Duocarmycins和CC-1065类,US 7129261),以及吡咯并苯二氮卓二聚体类(PBD dimers,WO 2005/040170)等。
目前上市及临床试验阶段的抗体药物偶联物中，大约70-80％选用耳抑素肽类和美登素类高活性细胞毒性药物作为弹头。美登素类药物的主要原料，安丝菌素(Ansamitocin P-3)，是通过细菌发酵的方式生产的，对菌株和发酵生产的条件要求较高。耳抑素肽类药物可以通过全合成的方式制备，因而更适合规模化生产和推广。
耳抑素肽类代表药物是单甲基耳抑素肽E(MMAE，US 6884869)和单甲基耳抑素肽F(MMAF，US 7498298)，两者都是基于dolastatin 10化合物进行结构改造得到的五肽类衍生物，而后者是从一种海洋生物海兔体内提取出来的一种具有高活性细胞毒性的化合物。除了上述广泛应用的MMAE，MMAF以外，针对dolastatin 10结构进行的其它改造也有见诸报道。WO 2006/132670公开了一种在N端用氨基苯甲酸取代缬氨酸的衍生物。WO 2007/008603，WO2007/008848，US 2013/0123456，和WO 2013/173393公开了一系列针对C端苯丙氨酸侧链改造的衍生物。WO 2011/154359和WO 2012/041805公开了一系列针对MMAF化合物N端和C端进行结构改造的衍生物。
由于细胞毒性药物的高活性要求，目前应用于抗体偶联药物领域的候选细胞毒性药物分子的种类和数量比较少，在一定程度上制约了抗体偶联药物的发展。因此，本领域迫切需要提供更多具有高活性的细胞毒性药物。在现有细胞毒性药物的基础上，开发新型的细胞毒性药物，具有非常重要的意义和应用前景。
发明内容
本发明旨在提供新的海兔毒素10(Dolastatin 10)衍生物类细胞毒性药物及其在抗体药物偶联物中的应用。
在本发明的第一方面，提供了一种如式Ⅰ所示的化合物，
其中：
R1,R2选自H,-C1-C8烷基,或者R1,R2连接成环,具有-(CR14R15)n-Z-(CR16R17)m-的结构，其中R14，R15，R16，和R17选自H，-C1-C8烷基；Z选自O,NR18，CR19R20,其中R18，R19，R20选自H,-C1-C8烷基；n，m分别选自0-8范围内的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8。
R3，R4，R6选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R5，R9，R10，R11选自H，-C1-C8烷基；
R7，R8选自H，-OH，-C1-C8烷基，或-O-(C1-C8烷基)；
R12,R13选自H,-C1-C8烷基,-OR21,-R22X,或者R12,R13连接成环,具有-(CR23R24)p-W-(CR25R26)q-,其中W选自O,NR27,CR28R29；X选自-OH,-NR30R31；p，q分别选自0-8范围内的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8；
R21选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R22选自亚烷基，亚烯基，亚炔基，亚芳基，-(CH2CH2O)r-(CH2)s-，或其中任意组合；
r，s分别选自0-8范围内的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8；
R23，R24，R25，R26，R27，R28，R29和R30选自H，-C1-C8烷基；
R31选自H，-C1-C8烷基，-OR32；其中R32选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基。
在另一优选例中，提供了一种如式Ⅱ所示的化合物,
其中：
R1,R2选自H,-C1-C8烷基,或者R1,R2连接成环,具有-(CR14R15)n-Z-(CR16R17)m-的结构，其中R14，R15，R16，和R17选自H，-C1-C8烷基；Z选自O,NR18，CR19R20,其中R18，R19，R20选自H,-C1-C8烷基；n，m分别选自0-8范围内的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8。
R12,R13选自H,-C1-C8烷基,-OR21,-R22X,或者R12,R13连接成环,具有-(CR23R24)p-W-(CR25R26)q-,其中W选自O,NR27,CR28R29；X选自-OH,-NR30R31；p，q分别选自0-8范围内的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8；
R21选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R22选自亚烷基，亚烯基，亚炔基，亚芳基，-(CH2CH2O)r-(CH2)s-，或其中任意组合；
r，s分别选自0-8范围内的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8；
R23，R24，R25，R26，R27，R28，R29和R30选自H，-C1-C8烷基；
R31选自H，-C1-C8烷基，-OR32；其中R32选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基。
在另一优选例中，提供了一种如以下结构式所示的化合物：
在另一优选例中，提供了一种如以下结构式所示的化合物：
在本发明的第二方面，提供了一种如式Ⅲ所示的化合物，
其中：
R1，R2，R3，R4选自H，-C1-C8烷基；
n，m分别选自2-4范围内的整数，包括2，3和4。
R5，R6，R8选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R7，R11，R12选自H，-C1-C8烷基；
R9，R10选自H，-OH，-C1-C8烷基，或-O-(C1-C8烷基)；
R13，R14选自H，-OH，-OR16，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R16选自H，-C1-C8烷基；
P选自1-8范围内的整数，包括1，2，3，4，5，6，7和8；
R15选自-C3-C8烷基，芳基，-C3-C8杂环基，-COOH，-C(＝O)NR17R18；
R17,R18选自H,-C1-C8烷基,-OH，-OR19，或者R1,R2连接成环,具有-(CR20R21)p-Z-(CR22R23)q-的结构，其中R19，R20，R21，R22和R23选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；Z选自O,NR24，CR25R26,其中R24，R25和R26选自H,-C1-C8烷基；p，q分别选自0-8范围内的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8。
在另一优选例中，提供了一种如式Ⅳ所示的化合物，
其中：
n，m分别选自2-4范围内的整数，包括2，3和4。
R1选自H，-C1-C8烷基；
R2，R3选自H，-OH，-OR5，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R5选自H，-C1-C8烷基；
p选自1-8范围内的整数，包括1，2，3，4，5，6，7和8；
R4选自-C3-C8烷基，芳基，-C3-C8杂环基，-COOH，-C(＝O)NR6R7；
R6,R7选自H,-C1-C8烷基,-OH，-OR8，或者R6,R7连接成环,具有-(CR9R10)p-Z-(CR11R12)q-的结构，其中R8，R9，R10，R11和R12选自H，-C1-C8烷基，H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；Z选自O,NR13，CR14R15,其中R13，R14和R15选自H,-C1-C8烷基；p，q分别选自0-8范围内的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8。
在另一优选例中，提供了一种如以下结构式所示的化合物，
在另一优选例中，提供了一种如以下结构式所示的化合物，
在另一优选例中，提供了一种如以下结构式所示的化合物，
在本发明的第三方面，提供了一种如上所述的本发明提供的化合物所形成的药学上可接受的盐，溶剂合物，或盐的溶剂合物。
在本发明的第四方面，提供了一种药物，其组成包括如上所述的本发明提供的化合物化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物和药学上可接受的载体。
在本发明的第五方面，提供了一种抗体药物偶联物，其结构如式Ⅴ所示，
L-(A-D)n Ⅴ
其中，L是抗体，抗体片段或蛋白；A是连接子部分；D是如上所述的本发明提供的化合物；n是一个范围在0-8的整数，包括0，1，2，3，4，5，6，7和8。
在本发明的第六方面，提供了如上所述的本发明提供的抗体药物偶联物在肿瘤，自身免疫疾病和抗炎症的领域中的应用。
据此，本发明提供了新型的具有高活性的细胞毒性药物。
具体实施方式
发明人在现有耳抑素肽类细胞毒性药物分子(AE，MMAE，MMAF等)基础上，分别针对N端和C端进行创新性的结构改造，从而得到新的高活性的细胞毒性药物。在此基础上，完成了本发明。
有些结构上带有羧基的细胞毒性分子，在体外实验中由于带有电荷的原因，较难通过细胞膜进入细胞，从而造成其细胞毒性数据失真，无法与其他不带电荷的细胞毒性分子活性进行对比。鉴于以上原因，本发明中所有的细胞毒性分子活性检测都通过抗体药物偶联物(相同的抗体，例如抗体H；相同的可断裂连接子，例如vc连接子)的方式，进行体外细胞增殖抑制试验，进而间接比较其细胞毒性。在此基础上，也考察了采用不可断裂连接子(例如MC连接子)时，其抗体药物偶联物的细胞毒性。
抗体药物偶联物H-vc-D,H-MC-D
缩略语(Abbreviation)
Ab 抗体
Ac 乙酰基
ACN 乙腈
BOC(Boc) 叔丁氧羰基
BrOP 溴化三(二甲基氨基)膦六氟磷酸
Bu 丁基
t-Bu 叔丁基
℃ 摄氏度
DCM 二氯甲烷
DEA 二乙胺
DEPC 腈基磷酸二乙酯
DIEA 二异丙基乙基胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DTT 二硫苏糖醇
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
Eq 当量
Fmoc 9-芴甲氧羰酰基
g 克
h 小时
HATU 2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
HOBt 1-羟基苯并三唑
HOSu N-羟基琥珀酰亚胺
HPLC 高效液相色谱
LC-MS 液相色谱-质谱联用
Linker 连接子
Me 甲基
MeOH 甲醇
mAb 单克隆抗体
min 分钟
mL 毫升
μL 微升
PE 石油醚
prep-RP-HPLC 制备级反相-高效液相色谱
rt 室温
Rt 保留时间
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
TsCl 对甲苯磺酰氯
定义
本文所用术语“烷基”是指含有伯、仲、叔或环碳原子的饱和烃基，例如甲基，乙基，1-丙基，2-丙基(异丙基)，环己基等。
“烯基”是含有伯、仲、叔或环碳原子的不饱和烃基，其中至少含有一个碳-碳sp2双键(C＝C)，如乙烯基，烯丙基等。
“炔基”是含有伯、仲、叔或环碳原子的不饱和烃基，其中至少含有一个碳-碳sp三键(C≡C)，如乙炔基，炔丙基等。
“芳基”是指去除母体芳环系统的一个碳原子上一个氢原子所产生的6-12个碳原子的单价芳族烃基，如苯基，萘基，蒽基，联苯基等。
“杂芳基”是指上述“芳基”骨架上的1个或多个碳原子被杂原子N,O,P和S取代所形成的，如吡啶，噻吩，呋喃等。
“杂环”是指母体芳环或非芳环系统中的1个或多个碳原子被杂原子N,O,P和S取代所形成的，如吡啶，噻吩，呋喃，六氢吡啶(哌啶)，四氢呋喃等。
“杂环基”指去除上述“杂环”骨架上的一个碳原子或杂原子上的氢原子所形成的烃基，如吡啶基，噻吩基，呋喃基，六氢吡啶基(哌啶基)，四氢呋喃基等。
“芳烷基”指连接于末端或sp3碳原子的一个氢原子被芳基取代的脂肪族烷基，如苄基，3-苯基丙基等。芳烷基的烷基部分也可以包括烯基或炔基。
“杂芳烷基”指连接于末端或sp3碳原子的一个氢原子被杂芳基取代的脂肪族烷基，如2-吡啶基乙基，3-呋喃基丙基等。杂芳烷基的烷基部分也可以包括烯基或炔基。
“亚烷基”是含有直链，支链或碳环的饱和烃基，因去除母体烷烃的同一或两个不同碳原子上的两个氢原子而产生了两个单价基中心。如亚甲基(-CH2-)，1,2-亚乙基(-CH2CH2-)，1,3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)等。
“亚烯基”是含有直链，支链或碳环的不饱和烃基，因去除母体烯烃的同一或两个不同碳原子上的两个氢原子而产生了两个单价基中心。如1,2-亚乙烯基(-CH＝CH-)，1,3-亚丙烯基(-CH2CH＝CH-)等。
“亚炔基”是含有直链，支链或碳环的不饱和烃基，因去除母体炔烃的两个不同碳原子上的两个氢原子而产生了两个单价基中心。如亚乙炔基(-CH≡CH-)，1,3-亚丙炔基(-CH2C≡CH-)等。
“亚芳基”是指6-12个碳原子芳族烃基，因去除母体芳环系统的两个不同碳原子上的两个氢原子而产生了两个单价基中心，如1,2-亚苯基，1,3-亚苯基，1,4-亚苯基等。
“取代烷基”、“取代烯基”、“取代炔基”、“取代芳基”、“取代杂芳基”、“取代杂环基”、“取代芳烷基”、“取代杂芳烷基”分别指相应“烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”、“杂芳基”、“杂环基”、“芳烷基”、“杂芳烷基”中一个或多个氢原子各自独立地被取代基所取代。取代基一般包括但不限于：-X、-OR、-NR2、-NO2、-CN、-SO3R、-CO2R等，其中X是卤原子；R是H,烷基，芳基，杂环基，保护基团或前药部分。上述亚烷基，亚烯基，和亚炔基也可以被类似地取代。
“其中任意组合”是指两种或多种取代基团以一定的连接方式组合而形成的一个新的取代基，如苄基(苯基+亚甲基)，3-苯基丙基(苯基+1,3-亚丙基)，2-环己基丙基(环己基+1,2-亚丙基)，3-(3-吡啶基)丙基(3-吡啶基+1,3-亚丙基)等。
本文所述术语“药学上可接受的盐”是指示范性化合物的药学上可接受的有机盐或无机盐。示范性化合物含有至少一个氨基可与酸成盐。示范性盐包括但不限于，盐酸盐，草酸盐，柠檬酸盐，硫酸盐等。药学上可接受的盐可以具有一个或多个带电原子，因此可具有一个或多个抗衡离子，后者可以是能稳定母体化合物上电荷的任意有机或无机部分。
“药学上可接受的溶剂合物”或“溶剂合物”是指一种或多种溶剂分子和本发明化合物形成的结合物。形成药学上可接受的溶剂合物的溶剂例子包括但不限于水，乙醇，异丙醇，乙酸等。
“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。
如本文所用，“抗体”或“抗体单元”在其所属的范围内，包括抗体结构的任何部分。这一单元可以结合，反应性关联，或者络合一个受体，抗原，或者靶向细胞群体具有的其他受体单元。抗体可以是任何蛋白或蛋白类分子，它可以结合，络合，或者与待治疗或生物改造的细胞群体的一部分发生反应。
本发明中组成抗体药物偶联物的抗体最好保持其原有野生状态时的抗原结合能力。因此，本发明中的抗体能够，最好专一性地，与抗原结合。涉及的抗原包括，例如，肿瘤相关抗原(TAA)，细胞表面受体蛋白和其他细胞表面分子，细胞存活调节因子，细胞增殖调节因子，与组织生长与分化相关的分子(如已知或预知的具有功能性的)，淋巴因子，细胞因子，参与细胞循环调节的分子，参与血管生成的分子，以及与血管生成有关的分子(如已知或预知的具有功能性的)。肿瘤相关因子可以是簇分化因子(如CD蛋白)。与本发明中所述抗体结合的抗原可以是上述分类中一个或一个子集，而其它的子集则包含其它的具有特殊性质的分子/抗原(与目标抗原相比)。
应用在抗体药物偶联物中的抗体包括，但不局限于，针对细胞表面受体和肿瘤相关抗原的抗体。这样的肿瘤相关抗原是业内所熟知的，可以通过业内熟知的抗体制备方法和信息来制备。为了开发可用于癌症诊断与治疗的有效的细胞水平目标物，研究人员力图找寻跨膜或其他肿瘤相关多肽。这些目标物能够特异性地表达在一种或多种癌症细胞表面，而在一种或多种非癌细胞表面表达很少或不表达。通常，相对于非癌细胞表面而言,这样的肿瘤相关多肽在癌细胞表面更加过度表达。确认这样的肿瘤相关因子，可大大提高基于抗体治疗癌症的专一靶向特性。
肿瘤相关抗原包括，但不局限于，以下列出的肿瘤相关抗原(1)-(36)。为方便起见，为业内所熟知的抗原相关信息标示如下，包括名称，其它名称，基因库登录号。与肿瘤相关抗原对应的核酸和蛋白序列可参见公开数据库，例如Genbank。抗体靶向对应的肿瘤相关抗原包括所有的氨基酸序列变种和同种，与参考文献中确认的序列具有至少70％，80％，85％，90％，或95％的同源性，或者具备与引用文献中的肿瘤相关抗原序列具有完全一致的生物性质和特征。
肿瘤相关抗原(1)-(36)：
(1)BMPR1B(骨形态发生蛋白受体-IB型，Genbank登录号NM_001203)；
(2)E16(LAT1，SLC7A5，Genbank登录号NM_003486)；
(3)STEAP1(六次跨膜的前列腺上皮抗原，Genbank登录号NM_012449)；
(4)0772P(CA125，MUC16，Genbank登录号AF361486)；
(5)MPF(MPF，MSLN，SMR、巨核细胞强化因子，间皮素，Genbank登录号NM_005823)；
(6)Napi3b(NAPI-3B，NPTIIb，SLC34A2，溶质载运体家族34(磷酸钠)成员2，II型钠依赖型磷酸转运子3b，Genbank登录号NM_006424)；
(7)Sema 5b(FLJ10372，KIAA1445，Mm.42015，SEMA5B，SEMAG，脑信号蛋白5b Hlog，sema结构域，七个血小板反应蛋白重复序列(1型和类1型)，跨膜结构域(TM)和短胞质结构域，(脑信号蛋白)5B，Genbank登录号AB040878)；
(8)PSCA hlg(2700050C12Rik,C530008016Rik,RIKEN cDNA 2700050C12,RIKEN cDNA 2700050C12基因，Genbank登录号AY358628)；
(9)ETBR(内皮缩血管肽B型受体，Genbank登录号AY275463)；
(10)MSG783(RNF124,假拟蛋白FLJ20315,Genbank登录号NM_017763)；
(11)STEAP2(HGNC_8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前列腺癌相关基因1，前列腺癌相关蛋白1，六次跨膜的前列腺上皮抗原2，六次跨膜的前列腺蛋白，Genbank登录号AF455138)；
(12)TrpM4(BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,瞬时受体电势阳离子通道，亚家族M，成员4，Genbank登录号NM_017636)；
(13)CRIPTO(CR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,畸胎瘤衍生生长因子，Genbank登录号NP_003203或NM_003212)；
(14)CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/EB病毒受体)或Hs.73792,Genbank登录号M26004)；
(15)CD79b(CD79B,CD79β,IGb(免疫球蛋白相关β),B29,Genbank登录号NM_000626)；
(16)FcRH2(IFGP4,IRTA4,SPAP1A(含有磷酸酶锚定蛋白1a的SH2结构域),SPAP1B,SPAP1C,Genbank登录号NM_030764)；
(17)HER2(ErbB2,Genbank登录号M11730)；
(18)NCA(CEACAM6,Genbank登录号M18728)；
(19)MDP(DPEP1,Genbank登录号BC017023)；
(20)IL20Rα(IL20Ra,ZCYTOR7,Genbank登录号AF184971)；
(21)Brevican(BCAN,BEHAB,Genbank登录号AF229053)；
(22)EphB2R(DRT,ERK,Hek5,EPHT3,Tyro5,Genbank登录号NM_004442)；
(23)ASLG659(B7h,Genbank登录号AX092328)；
(24)PSCA(前列腺干细胞抗原前体，Genbank登录号AJ297436)；
(25)GEDA(Genbank登录号AY260763)；
(26)BAFF-R(B细胞活化因子受体，BLyS受体3，BR3,Genbank登录号AF116456)；
(27)CD22(B细胞受体CD22-B同种型,Genbank登录号AK026467)；
(28)CD79a(CD79A,CD79α,免疫球蛋白相关α，能够与Igβ(CD79B)发生共价作用并在表面与Ig M分子形成复合物，转导参与B细胞分化信号的B细胞特异性蛋白，Genbank登录号NP_001774.1)；
(29)CXCR5(伯基特氏(Burkitt’s)淋巴瘤受体1，被CXCL13趋化因子活化的G蛋白偶联受体，在淋巴细胞迁移和体液防御中发挥作用，在HIV-2感染以及可能在艾滋病，淋巴瘤，骨髓瘤，和白血病中发挥作用，Genbank登录号NP_001701.1)；
(30)HLA-DOB(MHCII类分子的Beta亚基(Ia抗原)，其结合肽并将其呈递到CD4+T淋巴小细胞，Genbank登录号NP_002111.1)；
(31)P2X5(嘌呤受体P2X配体门控离子通道5，由胞外ATP门控的离子通道，可能涉及突触传递和神经新生，其缺陷可能导致特发性逼尿肌不稳定的病理生理状况，Genbank登录号NP_002552.2)；
(32)CD72(B细胞分化抗原CD72,Lyb-2,Genbank登录号NP_001773.1)；
(33)LY64(淋巴细胞抗原64(RP105),富含亮氨酸重复的I型膜蛋白(LRR)家族，调节B细胞活化和凋亡，功能的丧失与系统性红斑狼疮患者疾病活动增加有关，Genbank登录号NP_005573.1)；
(34)FcRH1(Fc受体样蛋白1，推定的免疫球蛋白Fc结构域受体，包含C2型类Ig样和ITAM结构域，可能在B淋巴细胞分化中起作用，Genbank登录号NP_443170.1)；
(35)IRTA2(易位相关免疫球蛋白超家族受体2，推定的免疫受体，可能在B细胞发育和淋巴瘤产生中起作用；由易位导致的基因失调发生在一些B细胞恶性病上，Genbank登录号NP_112571.1)；
(36)TENB2(推定的跨膜蛋白聚糖，与生长因子的EGF/调蛋白(heregulin)家族和卵泡抑素(follistatin)相关，Genbank登录号AF179274)。
如本文所用，“药物”或者代号“D”泛指任何具有期望的生物活性，并具有反应性官能团以便制备本发明所述偶联物的化合物。期望的生物活性包括，诊断，治愈，缓解，治疗，预防人或其它动物的疾病。因此，只要具有必需的反应性官能团，术语“药物”涉及的化合物包括正式国家药典，以及例如美国正式同种疗法药典，正式全国处方集，或者其任何增补本等确认的药物。典型的药物列于医师案头用药参考(PDR)和美国食品药品监督管理局(FDA)的橙皮书。随着新型药物不断被发现和发展，本专利规定这些药物也应纳入本发明所述偶联药物的前药。
较佳地，药物是指：一种用于癌症治疗的细胞毒性药物；一种具有期望生物活性的蛋白或多肽，例如一种毒素，如相思子毒素，蓖麻毒素A,假单胞菌外毒素，和白喉毒素；其他合适的蛋白包括肿瘤坏死因子，α-干扰素，β-干扰素，神经原生长因子，血小板衍生生长因子，组织型纤酶溶原生长因子，以及生物反应调节制剂，例如淋巴因子，白细胞介素-1(IL-1),白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-6(IL-6),粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),粒细胞集落刺激因子，或其它生长因子。
一方面，药物是美登素(maytansine)或类美登素(maytansinoids)。美登素化合物通过抑制微管蛋白的微管形成来抑制细胞增殖(Science 1975,189,1002-1005；US 5208020)。类美登素是美登素的衍生物。美登素和类美登素都具有高效的细胞毒性，但是它们在癌症治疗的临床应用上具有很大的局限性，这主要是源于此类分子对肿瘤的低选择性。但是，这种高细胞毒性促使它们成为抗体药物偶联物的首选药物部分。以下列出了美登素，类美登素，以及在抗体药物偶联物应用中经常利用的三个类美登素分子结构。
合成类美登素的主要原料是美登醇(maytansinol)，主要由安丝菌素(ansamitocins)水解得到。安丝菌素可以通过发酵的方式制备。安丝菌素衍生物(WO 2012/061590)和丙氨酰基美登醇(US 2012/0121615)据报道也可作为抗体药物偶联物的药物“弹头”(这两类分子结构见下图所示)。
一方面，药物是耳抑素肽类(auristatins)药物。耳抑素肽类药物是海兔毒素10(dolastatin 10)的衍生物，而后者是从海洋软体动物海兔体内分离出来的具有生物活性的多肽(US 7498298)。海兔毒素10通过结合微管蛋白(与长春新碱同样的结合区域)而抑制微管蛋白聚合。海兔毒素10，耳抑素肽PE，耳抑素肽E都是线性多肽，含有四个氨基酸(其中三个氨基酸是海兔毒素类化合物所独有的)和C-端酰胺基团。两个代表性的耳抑素肽类化合物，单甲基耳抑素肽E(MMAE)和单甲基耳抑素肽F(MMAF)，都是抗体药物偶联物的首选药物部分。
本发明中一种特别优选的耳抑素肽类(auristatins)药物是具有本发明提供的结构如式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ所示的化合物，更佳地，是如本发明提供的结构如化合物1-45的化合物。
一方面，药物是Tubulysins类药物。Tubulysins是从粘细菌中提取出来的一类天然产物，能有效抑制微管蛋白的聚合，因此具有抗细胞有丝分裂的活性，其中Tubulysin D的活性最好。Tubulysin D是一个复杂的四肽化合物，其结构中含有O-酰基/N,O-缩醛官能团，因此在酸性和碱性条件下都不稳定。US2011/0021568和US 2013/0224228分别披露了一系列tubulysin的类似物，其结构中去除了以上不稳定官能团，同时又具有高细胞活性。
一方面，药物是卡奇霉素类(calichemicins)药物。卡奇霉素类药物是抗肿瘤抗生素，通过结合DNA小沟并促使特定位点双螺旋DNA断裂，而导致细胞凋亡。卡奇霉素类药物具有体外亚皮克摩尔级别的高活性，但是它们的低治疗指数排除了临床应用前景。然而这种高活性却是它们成为抗体药物偶联物的理想候选药物(如吉妥单抗和Inotuzumab Ozogamicin)。
一方面，药物是阿霉素类(doxorubicins)。阿霉素能够嵌入DNA双螺旋结构从而阻断DNA复制，因此被用作化疗药物。但是由于阿霉素类较低的细胞毒性(针对人源癌细胞系，半数抑制浓度为0.1-0.2微摩尔，而用于抗体药物偶联物的细胞毒性药物活性通常为亚纳摩尔级)，导致其在抗体药物偶联物中的应用并不普遍。
一方面，药物是苯并二吡咯类抗生素(duocarmycins,CC-1065等)和其它的环丙基吡咯吲哚-4-酮(cyclopropapyrroloind-4-one,CPI)衍生物。这类化合物是有效的DNA小沟结合-烷基化试剂。环丙苯并吲哚-4-酮(cyclopropabenzindol-4-one,CBI)类似物的化学结构更稳定，生物活性更高，而且与它们含有天然CPI烷基化亚基的父系化合物相比更容易合成。一个代表性的CBI衍生物是酚羟基保护衍生物CBI(见下图)，具有弱化的前药毒性和增强的水溶性。
一方面，药物是吡咯并苯二氮卓类(pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodi-azepines，PBDs)或者PBD二聚体类(PBD dimers)。PBD是一类由链霉菌产生的天然产物，其独特特性在于能够在DNA小沟，确切是在嘌呤-鸟嘌呤-嘌呤序列处，形成非扭曲的共价加和物。应用PBD作为部分小分子策略靶向锁定DNA序列以及作为新型的抗癌和抗菌药物引起了越来越多的兴趣(Biochemistry 2008,47,11818-11829)。应用一个柔性碳链连接两个PBD单元的C8/C8’的羟基基团，所得的二聚体具有增强的生物活性(WO 2011/130616)。PBD二聚体被认为是可以产生序列选择性的DNA损伤，例如倒序的5′-Pu-GATC-Py-3′链间交联，从而导致其生物活性。这些化合物已被证明是高效的细胞毒性药物，可作为抗体药物偶联物的备选药物。
另一方面，药物并不仅仅局限于上述提到的类别，还包括所有可用于抗体药物偶联物的药物。
本文所述术语“连接子”或“抗体药物偶联物的连接子”是指一种具有双官能团或多官能团的分子，可分别与蛋白/抗体分子和药物分子反应，因此做为一种“纽带”将蛋白/抗体与药物分子连接起来。按照在细胞内药物释放的机制，“连接子”或“抗体药物偶联物的连接子”可被分为两类：不可断裂连接子(non-cleavable linker)和可断裂连接子(cleavable linker)。
不可断裂连接子是一种相对比较稳定的连接子，其结构很难在体内环境下降解断裂。对于含有不可断裂连接子的抗体药物偶联物，其药物释放机制为：偶联物与抗原结合并被细胞内吞后，抗体在溶酶体中被酶解，释放出由小分子药物，连接子，和抗体氨基酸残基共同组成的活性分子。由此带来的药物分子结构改变并不减弱其细胞毒性，但由于活性分子是带电荷的(氨基酸残基)，从而导致其较难渗入邻近细胞。因此，此类活性药物较难杀死邻近不表达靶向抗原(抗原阴性细胞)的肿瘤细胞(旁观者效应,bystander effect)(BioconjugateChem.2010,21,5-13)。常见的连接子例如MC连接子和MCC连接子等，如下图所示。
可断裂连接子，顾名思义，可以在目标细胞内断裂并释放出活性药物(小分子药物本身)。可断裂连接子可分为两个主要的类别：化学不稳定连接子和酶不稳定连接子。
化学不稳定连接子可以由于血浆和细胞质性质的不同而选择性的断裂。这样的性质包括pH值，谷胱甘肽浓度等。
对pH值敏感的连接子，通常又称为酸断裂连接子。这样的连接子在血液的中性环境下相对稳定(pH 7.3-7.5)，但是在弱酸性的内涵体(pH 5.0-6.5)和溶酶体(pH 4.5-5.0)内将会被水解。第一代的抗体药物偶联物大多应用这类连接子，例如腙，碳酸酯，缩醛，缩酮类。由于酸断裂连接子有限的血浆稳定性，基于此类连接子的抗体药物偶联物通常具有较短的半衰期(2-3天)。这种较短的半衰期在一定程度上限制了pH敏感连接子在新一代抗体药物偶联物中的应用。
对于谷胱甘肽敏感的连接子，又称二硫键连接子。药物释放是基于细胞内谷胱甘肽的高浓度(毫摩尔范围)与血液中相对较低的谷胱甘肽浓度(微摩尔范围)差异引起的。对于肿瘤细胞而言尤其如此，其低含氧量导致还原酶的活性增强，因而导致更高的谷胱甘肽浓度。二硫键具有热力学稳定性，因此在血浆中具有较好的稳定性。
酶不稳定连接子，如肽连接子，能够更好地控制药物释放。肽连接子能够被溶酶体内蛋白酶，如组织蛋白酶(Cathepsin B)或纤溶酶(在一些肿瘤组织中此类酶含量增加)有效地切断。这种肽连接被认为在血浆循环中非常稳定，这是因为细胞外不合宜的pH值及血清蛋白酶抑制剂导致蛋白酶通常在细胞外不具备活性。鉴于较高的血浆稳定性和良好的细胞内断裂选择性和有效性，酶不稳定连接子被广泛用做抗体药物偶联物的可断裂连接子。典型的酶不稳定连接子例如vc等。
自杀式连接子一般嵌合在可断裂连接子与活性药物之间，或者本身就是可断裂连接子的一部分。自杀式连接子的作用机制是：当可断裂连接子在合宜的条件下断裂后，自杀式连接子能够自发地进行结构重排，进而释放与之连接的活性药物。常见的自杀式连接子如对氨基苄醇类(PAB)等。
抗体药物偶联物
本发明提供的抗体药物偶联物由抗体、连接子和药物组成，所述连接子包括可断裂连接子组合或不可断裂连接子。
用途
本发明提供高活性的细胞毒性药物，可以广泛应用于在抗体偶联药物领域，做为高活性的“生物导弹弹头”。
本发明提供基于上述细胞毒性药物的抗体药物偶联物，靶向瞄准特殊的细胞群体，与细胞表面特异蛋白(抗原)结合，结合物内吞进入细胞内，药物以活性形式释放到细胞内。
本发明提供基于上述细胞毒性药物的抗体药物偶联物，靶向瞄准特殊的细胞群体，与细胞表面特异蛋白(抗原)结合，发生功效；或者在细胞外释放药物，药物渗入细胞内产生功效。
本发明提供一种复合物，包括有效剂量的药物偶联物和药学可接受的载体或媒介。
本发明提供治疗动物体内癌症或其他肿瘤的治疗方法，所述方法是给患有癌症或其他肿瘤的动物使用治疗有效量的本发明提供的抗体药物偶联物。
本发明提供治疗自身免疫疾病或炎症疾病的治疗方法，所述方法是给患有自身免疫疾病或炎症疾病的患者使用治疗有效量的本发明提供的抗体药物偶联物。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以被任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征所取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。所有反应都是在氮气保护下进行的(氢化反应除外)，因此在实施例里不再一一标明。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明下列实施例中采用的通用步骤是：
通用步骤A:采用DEPC缩合剂的成酰胺反应
将适量的的羧酸和胺(1-2当量比)溶于DCM，然后依次加入DIEA或TEA(2-5eq)和DEPC(1-2eq)。反应液在室温条件下搅拌直到反应完成(TLC或LC-MS检测)。将反应液浓缩除去溶剂，残余物用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤B:采用HATU缩合剂的成酰胺反应
将适量的的羧酸和胺(1-2当量比)溶于DCM，然后依次加入DIEA或TEA(2-5eq)和HATU(1-2eq)。反应液在室温条件下搅拌直到反应完成(TLC或LC-MS检测)。将反应液浓缩除去溶剂，残余物用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤C:胺基保护基Boc脱保护
将带有Boc保护基的胺基化合物溶于TFA/DCM混合溶液(v/v 1:1或其它比例)，反应液在室温下搅拌直到反应完成(TLC或LC-MS检测)。将反应液浓缩除去溶剂，所得目标产品的三氟乙酸盐可以直接用于下一步反应。或者将三氟乙酸盐用碳酸氢钠水溶液中和后用有机溶剂萃取，有机相用水洗涤，干燥，浓缩后得到粗品，继续用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤D:胺基保护基Fmoc脱保护
将带有Fmoc保护基的胺基化合物溶于DEA/DCM混合溶液(v/v 1:2其它比例)，反应液在室温下搅拌直到反应完成(TLC或LC-MS检测)。将反应液浓缩除去溶剂，粗品用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤E:氨基酸/羧酸叔丁酯的合成
将氨基酸/羧酸溶于适量的醋酸叔丁酯，并将溶液冷却至0℃。向溶液中缓慢加入高氯酸(1.5eq)。反应液在室温下搅拌直到反应完成(TLC或LC-MS检测)。反应液依次用水和1.0M盐酸溶液洗涤，将合并后的水相用碳酸钾溶液调节pH～9，然后用DCM萃取适当次数。合并后的有机相经水相洗涤，干燥，浓缩，残余物用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤F:羧酸叔丁酯脱保护
将羧酸叔丁酯溶于TFA/DCM混合溶液(v/v 1:1或其它比例)，反应液在室温下搅拌直到反应完成(TLC或LC-MS检测)。将反应液浓缩除去溶剂，粗品可直接用于下一步反应，也可用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤G:应用二(对硝基苯)碳酸酯对醇羟基的活化
将适量的醇，二(对硝基苯)碳酸酯(2eq)和TEA或DIEA(3eq)依次加入DCM中，反应液在室温(或适当温度)下搅拌一定的时间。如果醇没有反应完全，更多的二(对硝基苯)碳酸酯可以补加并反应更长时间，直到醇全部反应(TLC或LCMS)。将反应液浓缩除去溶剂，粗品用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤H:胺与对硝基苯碳酸酯(活化的醇)反应生成氨基甲酸酯
将胺与通用步骤F得到的对硝基苯基碳酸酯(活化的醇)(1-2当量)溶解在DCM中，在室温下反应直到完成(TLC或LCMS检测)。将反应液浓缩除去溶剂，粗品用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤I:胺与对硝基苯碳酸酯(活化的醇)反应生成氨基甲酸酯
将胺，由通用步骤F得到的对硝基苯碳酸酯(活化的醇)(1-2当量)和HOBt溶解在吡啶/DMF混合溶液中。反应液在室温下搅拌直到反应完成(TLC或LCMS检测)。将反应液浓缩除去溶剂，粗品用柱色谱或反相高效液相色谱纯化得到目标产品。
通用步骤J:抗体药物偶联物制备
向抗体溶液(10mg/mL，25mM硼酸-硼酸钠缓冲溶液，25mM氯化钠，1mM二乙烯三胺五乙酸，pH～8.0)中加入DTT(1-100eq，或较优地，2.7eq用以还原两对链间二硫键从而产生4个可供偶联的半胱氨酸巯基(均值)，储备液浓度10mM)。反应液于37℃恒温摇床内孵育2h。
反应液经超滤或脱盐柱除去还原剂，同时将抗体置换到磷酸盐缓冲溶液PBS(100mM，10mM氯化钠，1mM二乙烯三胺五乙酸，pH值7.0)；
向冷却至10℃的还原抗体溶液中加入二甲亚砜和连接子-药物化合物(二甲亚砜储备液，1-10eq，或较优地，8eq)，并保证反应液中二甲亚砜体积占比达15％左右。偶联反应在10℃进行0.5h。
向反应液加入过量的半胱氨酸溶液，用以淬灭未反应的连接子-药物化合物。淬灭反应在10℃进行30min。反应液先经超滤或分离柱除去连接子-药物-半胱氨酸加合物以及过量的半胱氨酸，然后经由0.2毫米孔径的过滤装置除菌，并在4℃条件下保存。
通用步骤K:酶联免疫吸附测定(ELISA)
采用间接ELISA方法考察待测抗体或抗体药物偶联物与对应抗原的结合能力：将抗原与固相载体(96孔酶标板)连接，形成固相抗原，洗涤除去未结合的抗原；加梯度稀释的抗体或受检抗体药物偶联物，其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原-抗体复合物，未结合固相抗原的抗体或抗体药物偶联物经洗涤除去；加酶标抗抗体，使其与结合在固相抗原上的抗体或ADC抗体结合，未结合的抗抗体经洗涤除去；加入底物溶液，用酶标仪读取450nm/630nm处的光密度值，绘制曲线，计算EC50。
通用步骤L:细胞增殖抑制实验(Cell Proliferation Inhibition Assay)
通常，抗体或抗体药物偶联物的细胞抑制活性是通过以下方法测定的：将表达肿瘤相关抗原或受体蛋白的哺乳动物细胞与抗体或抗体药物偶联物在细胞培养基中相接触；细胞孵育2到5天时间；测定细胞数量，绘制曲线，计算IC50。
除非另外说明，所有的无水试剂都是直接从供应商购买的，并保存在氮气下。购买的所有其它试剂和溶剂都是高纯度的，并且使用前不经过进一步纯化。
核磁共振波谱是在Bruker Avance III 500兆核磁共振波谱仪上采集的。化学位移(δ)单位是ppm，以四甲基硅烷为参照系(化学位移为0)，偶合常数(J)单位是Hz。
液相色谱-质谱联用分析方法中，低分辨质谱数据是在一台与惠普Agilent1200高效液相色谱仪接口的Agilent 6110(酸法)或6120B(碱法)质谱仪上采集的。
方法一(Method 1)：酸法高效液相色谱方法采用沃特世Sunfire C18反相色谱柱(4.60×50mm，3.5μm)进行分离，洗脱液梯度为1.4分钟内5％-95％B相(乙腈，含0.01％TFA)在A相(水相，含0.01％TFA)中，流速为2.3mL/min，柱温为50℃；
方法二(Method 2)：碱法高效液相色谱方法采用沃特世Xbridge C18反相色谱柱(4.60×50mm，3.5μm)进行分离，洗脱液梯度为1.5分钟内5％-95％B相(乙腈)在A相(水相，含10mM碳酸氢铵)中，流速为2.0mL/min，柱温为40℃。
制备用反相-高效液相色谱纯化(prep-RP-HPLC)是在吉尔森(Gilson)仪器上完成的，使用的分离柱为沃特世Sunfire C18反相色谱柱(250×19mm，10μm)。
方法三(Method 3):酸法制备。流动相:A:含0.1％TFA的水相；B:ACN。流速：20mL/min。
方法四(Method 4):碱法制备。流动相:A:含10mM碳酸氢铵的水相；B:ACN。流速：20mL/min。
使用的细胞系是SK-BR-3人乳腺癌细胞。该细胞系是从ATCC得到的。Her2抗原购自义翘神州公司(北京)。抗体H(赫赛汀的生物类似物)购自嘉和生物药业有限公司(上海)。酶标抗抗体购自西格玛公司(上海)。底物溶液购自Decent生物技术公司(上海)。Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖-毒性检测试剂盒购自Dojindo公司(上海)。
关键中间体(Key Intermediates,KIs)
本发明中所使用的关键中间体如下所示。其中，AE,Fmoc-MMAE,MC,MC-Val-Cit-PABC-PNP,KI-1,KI-2,KI-3,KI-4,KI-5都是按照文献报道的方法合成的(US 5635483,6884869,7498298)。
关键中间体KI-7的合成
合成步骤1
将二乙醇胺(4.0g,38.0mmol)和TEA(19.2g,190mmol)溶解于DCM(300mL)中，然后缓慢加入TsCl(26.1g,137mmol)。反应液在室温下搅拌18h。有机相依次用10％柠檬酸溶液，水，和饱和食盐水洗涤，然后干燥，过滤，浓缩得到白色固体47(19.5g)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝2.12min；m/z(ES+)＝568.0(M+H)+。
合成步骤2
将化合物47(2.0g,3.52mmol)和L-缬氨酸叔丁酯(0.74g,3.52mmol)溶解于DIEA(20mL)中，反应液在127℃下剧烈搅拌18h。浓缩除去溶剂，向残余物中加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯萃取(40mL×3)。合并后的有机相经水洗，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 15:1)得到浅黄色固体48(1.1g)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.45min；m/z(ES+)＝397.3(M+H)+。
合成步骤3
将化合物48(900mg,2.27mmol)和对羟基苯甲酸(1.04g,7.5mmol)加入到氢溴酸的乙酸溶液(33％，3.9mL)。反应液在室温下搅拌过夜。向反应液中加入EtOAc(10mL)，继续搅拌5min。将沉淀过滤收集，用乙酸乙酯(20mL)洗涤。滤饼干燥后得到白色固体49(500mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 2):Rt＝0.46min；m/z(ES+)＝187.2(M+H)+。
合成步骤4
将化合物49(500mg,2.69mmol)溶解于1,4-二氧六环/水混合溶液(v/v 3:1,20mL)，然后依次加入碳酸氢钠(1.35g,16.1mmol)和9-芴甲基氯甲酸酯(Fmoc-Cl，829mg,3.22mmol)。反应液在室温下搅拌过夜。用10％柠檬酸溶液调节反应液pH至2～3，然后用乙酸乙酯萃取(20mL×3)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 3:1，然后DCM/MeOH 15:1)。粗品进一步经prep-RP-HPLC(Method 3:35％-50％B in 8min→95％B；Rt:5.7-7.1min)纯化得到白色固体50(190mg)。LC-MS(Method1):Rt＝1.74min；m/z(ES+)＝409.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.75(dd,2H),7.53(d,2H),7.39(d,2H),7.33(d,2H),4.59(d,2H),4.21(t,1H),3.79-3.67(m,4H),3.37-3.02(m,4H),2.25(m,1H),1.18(d,3H),1.04(d,3H)。A:water 0.1％TFA,B:ACN 35％-50％ACN in 8min,followed by 95％at rate of20mL/min,ret time:5.7～7.1min
合成步骤5
将化合物50(280mg,0.69mmol)和KI-1(245mg,0.69mmol)溶于DCM(6mL)，然后依次加入DIEA(265mg,2.06mmol)和DEPC(168mg,1.03mmol)。反应液在室温下搅拌3h，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc4:1)得到无色油状物51(280mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.65min；m/z(ES+)N/A。
合成步骤6
将化合物51(270mg)溶解在DCM(3mL)中，溶液冷却至10℃。加入三氟乙酸(3mL)，反应液在10℃搅拌4h。浓缩除去溶剂得到粗品(260mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 2):Rt＝1.96min；m/z(ES+)＝693.3(M+H)+。
关键中间体KI-8的合成
合成步骤1
将2-氰基乙基甘氨酸(6.5g,50.8mmol)加入到6M盐酸溶液(50mL),反应液在100℃下搅拌2天。浓缩除去溶剂得到粗品，于50℃真空干燥得到白色固体52(8.5g)。LC-MS(Method 1):Rt＝0.19min；m/z(ES+)＝148.1(M+H)+。
合成步骤2
将化合物52(8.5g)溶解于MeOH(100mL)中，并将溶液冷却至0℃。向溶液中滴加二氯亚砜(13.63g,115.6mmol)。反应液加热回流2h，浓缩除去溶剂得到53粗品(盐酸盐,12.5g)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝0.34min；m/z(ES+)＝176.1(M+H)+。
合成步骤3
将化合物53(12.5g)悬浮于DCM(300mL)中，依次加入TEA(21.64g,214.3mmol)和TsCl(17.7g,92.9mmol)。反应液在室温下搅拌18h。有机相依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱(PE/EtOAc4:1)得到无色油状液体54(13.0g)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.48min；m/z(ES+)＝330.0(M+H)+。
合成步骤4
将化合物54(13.0g)溶解于无水THF(200mL)中，并将溶液冷却至0℃。在50min内将氢化锂铝(2.99g,78.9mmol)分批加入上述溶液，反应液在0℃搅拌3h。加入饱和氯化铵溶液(3mL)淬灭反应，并将反应液浓缩除去溶剂。将残余物悬浮于饱和氯化铵溶液(150mL)和异丙醇/氯仿(v/v 3:1，150mL)混合溶液中，过滤除去沉淀，滤液中的水相分离出来，继续用异丙醇/氯仿(v/v3:1,100mL)萃取。有机相合并后干燥，浓缩得到浅黄色油状物55(11.5g)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 2):Rt＝1.61min；m/z(ES+)＝274.2(M+H)+。
合成步骤5
将化合物55(4.2g)悬浮于DCM(100mL)中，依次加入TEA(6.21g,61.5mmol)和TsCl(7.04g,36.9mmol)。反应液在室温下搅拌过夜。有机相依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，和浓缩。残余物用硅胶柱色谱(PE/EtOAc 4:1)得到浅黄色油状物56(3.7g)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.27min；m/z(ES+)＝599.2(M+NH4)+。
合成步骤6
将化合物56(3.7g)和L-缬氨酸叔丁酯(1.33g,6.37mmol)加入到DIEA(30mL)中，反应液在127℃下剧烈搅拌18h。浓缩除去溶剂，加入50毫升水，用EtOAc萃取(50mL×3)。有机相合并，水洗，干燥，浓缩。粗品用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc/DCM 15:1:1)得到黄色油状物57(2.3g)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 2):Rt＝2.47min；m/z(ES+)＝411.3(M+H)+。
合成步骤7
将化合物57(2.8g,6.82mmol)和对羟基苯甲酸(3.1g,22.5mmol)加入到氢溴酸的乙酸溶液(33％，20mL)中。反应液在室温下搅拌24h。向反应液中加入EtOAc(200mL),混合液搅拌5min。沉淀过滤，用乙酸乙酯(50mL)洗涤。滤饼经真空干燥得到白色固体58(氢溴酸盐，630mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝0.17min；m/z(ES+)＝201.2(M+H)+。
合成步骤8
将化合物58(630mg,3.15mmol)溶解于THF/H2O(v/v 5:1,12mL)中，随后依次加入碳酸氢钠(0.26g,3.15mmol)，TEA(0.95g,9.45mmol)和9-芴甲基琥珀酰亚氨基碳酸酯(Fmoc-OSu,1.38g,4.09mmol)。反应液在室温下搅拌18h。用10％的柠檬酸调节溶液pH 2～3，然后用乙酸乙酯萃取(20mL×3)。有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩。粗品用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 30:1)得到白色固体59(530mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝1.76min；m/z(ES+)＝423.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.75(d,2H),7.55(d,2H),7.40(m,2H),7.33(m,2H),4.72-4.55(m,2H),4.21(m,1H),3.82-3.10(m,9H),2.20-2.08(m,3H),1.18(t,3H),1.05-1.00(dd,3H)。
合成步骤9
将化合物59(400mg,0.95mmol)和KI-1(339mg,0.95mmol)溶于DCM(10mL),然后依次加入TEA(287mg,2.8mmol)和DEPC(200mg,1.23mmol)。反应液在室温下搅拌18h，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH40:1)得到白色固体60(610mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.77min；m/z(ES+)＝763.3(M+H)+。
合成步骤10
将化合物60(610mg)溶于DCM(3mL)中，溶液冷却至0℃。加入TFA(1.5mL)，反应液在10℃下搅拌4h。浓缩除去溶剂得到粗品(600mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝1.57min；m/z(ES+)＝707.4(M+H)+。
实施例1
化合物1的合成
合成步骤1
将DIEA(185mg,1.43mmol)加入到含有AE(350mg,0.48mmol)和二(对硝基苯)碳酸酯(91mg,0.96mmol)的DCM(10mL)溶液中,反应液在室温下搅拌18h。向反应液中再次加入二(对硝基苯)碳酸酯(142mg,0.46mmol)，混合液继续搅拌24h。浓缩除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(EtOAc/PE4:1→DCM/MeOH 30:1)得到白色固体61(340mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.66min；m/z(ES+)＝897.5(M+H)+。
合成步骤2
将化合物61(160mg,0.18mmol)溶于DCM(6mL),然后向溶液中依次加入2-(甲基氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(67mg,0.36mmol)和DIEA(69mg,0.54mmol)。反应液在室温下搅拌18h,浓缩除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 30:1)得到淡黄色固体62(105mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.33min；m/z(ES+)＝946.7(M+H)+。
合成步骤3
将化合物62(105mg)溶于DCM(3mL)中，冷却至10℃，然后加入TFA(3mL)。反应液在10℃下搅拌4h，浓缩除去溶剂。残余物溶于EtOAc(20mL)，然后用饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次。有机相干燥，浓缩得到淡黄色固体1(75mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.38min；m/z(ES+)＝846.6(M+H)+。
实施例2
化合物2,3,4的合成
化合物2，3，4的合成采用与化合物1类似的合成步骤，LC-MS表征数据见表1。
表1
实施例3
化合物5的合成
合成步骤1
将1,5-戊二醇(2.0g,19mmol)和TEA(6.72g,66.5mmol)溶于DCM(100mL)中，然后缓慢加入TsCl(8.69g,45.6mmol)。反应液在室温下搅拌18h，然后用10％柠檬酸溶液，水，和饱和氯化钠溶液洗涤。有机相经干燥，浓缩后得到白色固体63(8.0g)。粗品直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝2.10min；m/z(ES+)＝413.1(M+H)+。
合成步骤2
将化合物63(4.8g,11.7mmol)，L-缬氨酸叔丁酯盐酸盐(2.43g,11.7mmol)加入到DIEA(20mL)中。反应液在127℃下剧烈搅拌18h。冷却后，将反应液浓缩除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 5:1)得到黄色油状物64(2.8g)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.14min；m/z(ES+)＝242.3(M+H)+。
合成步骤3
将化合物64(2.8g)溶于DCM(5mL)，然后加入TFA(5mL)。反应液在室温下搅拌过夜。浓缩除去溶剂，得到棕色固体65(1.2g)，直接用于下一步反应。少量粗品用RP-HPLC纯化得到纯品，用于核磁波谱分析。LC-MS(Method 1):Rt＝0.36min；m/z(ES+),186.2(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ3.82(d,1H),3.65(d,1H),3.54(d,1H),3.37(t,1H),3.03(t,1H),3.33(m,1H),2.10-1.80(m,5H),1.55-1.40(m,1H),1.17(d,3H),1.06(d,3H)。
合成步骤4
将化合物65(200mg,50％纯度,0.54mmol)，KI-1(194mg,0.54mmol)溶于DCM(9mL)中，然后依次加入DIEA(272mg，2.7mmol)和DEPC(114mg,0.70mmol)。反应液在室温下搅拌18h，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 5:1)得到无色油状液体66(250mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.49min；m/z(ES+),526.4(M+H)+。
合成步骤5
将化合物66(250mg)溶于DCM(3mL)，并将溶液冷却至0℃。加入TFA(3mL)，反应液在10℃℃下搅拌4h。浓缩除去溶剂得到粗品67(220mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝1.56min；m/z(ES+),470.7(M+H)+。
合成步骤6
将化合物67(220mg,0.47mmol)和化合物KI-3(160mg,0.47mmol)溶于DCM(8mL)，并冷却至0℃。向混合液中依次加入TEA(142mg,1.41mmol)和DEPC(99mg,0,61mmol)。反应液在室温下搅拌18h，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 40:1)得到浅黄色固体5(190mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.32min；m/z(ES+),772.5(M+H)+。
实施例4
化合物6的合成
合成步骤1
将二乙二醇(2.0g,18.9mmol)和TEA(6.69g,66mmol)溶于DCM(100mL)，然后缓慢加入TsCl(8.63g,45.3mmol)。反应液在室温下搅拌18h，然后用10％柠檬酸溶液，水，和饱和氯化钠溶液洗涤。有机相经干燥，浓缩后得到白色固体68(8.0g)。粗品直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝2.02min；m/z(ES+)＝415.1(M+H)+。
合成步骤2
将化合物68(2.95g,7.18mmol)，L-缬氨酸叔丁酯盐酸盐(1.5g,7.18mmol)加入到DIEA(15mL)中。反应液在127℃下剧烈搅拌18h。冷却后，浓缩除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 5:1)得到黄色油状液体69(0.9g)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.33min；m/z(ES+)＝244.3(M+H)+。
合成步骤3
将化合物69(0.9g)溶于DCM(2mL)，然后加入TFA(2mL)。反应液在室温下搅拌过夜。浓缩除去溶剂，得到灰色固体70(400mg)，直接用于下一步反应。少量粗品用RP-HPLC纯化得到纯品，用于核磁波谱分析。LC-MS(Method1):Rt＝0.35,0.43min；m/z(ES+)＝188.2(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.04(s,4H),3.80(d,1H),3.60(br s,2H),3.36(br s,2H),2.37(m,1H),1.20(d,3H),1.08(d,3H)。
合成步骤4
将化合物70(200mg,50％纯度,0.54mmol)和KI-1(194mg,0.54mmol)溶于DCM(9mL)中,然后依次加入DIEA(272mg，2.7mmol)和DEPC(114mg,0.70mmol)。反应液在室温下搅拌18h，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 5:1)得到无色油状液体71(200mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.74min；m/z(ES+)＝528.4(M+H)+。
合成步骤5
将化合物71(200mg)溶于DCM(3mL)，并将溶液冷却至0℃。加入TFA(3mL)，反应液在10℃下搅拌3h。浓缩除去溶剂得到粗品72(190mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝1.22min；m/z(ES+)＝472.4(M+H)+。
合成步骤6
将化合物72(190mg,0.38mmol)，KI-3(140mg,0.41mmol)溶于DCM(8mL)，并冷却至0℃。向混合液中依次加入TEA(115mg,1.14mmol)和DEPC(80mg,0.49mmol)。反应液在室温下搅拌18小时，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 40:1)得到淡黄色固体6(200mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.36min；m/z(ES+)＝774.5(M+H)+。
实施例5
化合物7的合成
合成步骤1
将化合物KI-4(200mg,0.48mmol)，二(对硝基苯)碳酸酯(298mg,0.96mmol)溶于DCM(5mL)，然后加入DIEA(124mg,11mmol)。反应液在室温下搅拌18h，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 25:1)得到浅黄色固体73(200mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.28min；m/z(ES+)＝586.3(M+H)+。
合成步骤2
将化合物73(200mg,0.34mmol)溶于二氯甲烷(6mL)，然后依次加入1-甲基哌嗪(38mg,0.38mmol)和DIEA(49mg,0.38mmol)。反应液在室温下搅拌18h，浓缩除去溶剂。残余物用prep-RP-HPLC(Method 3:40％-60％B in 8min→95％B；Rt:4.2～5.1min)纯化得到白色固体74(135mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.01min；m/z(ES+)＝547.3(M+H)+。
合成步骤3
将化合物74(135mg)加入到DCM(6mL)/TFA(3mL)混合溶液中。反应液在室温下搅拌18h，浓缩除去溶剂得到浅黄色油状液体75(112mg)，直接用于下一步反应。
合成步骤4
将化合物75(112mg,0.25mmol)和KI-6(159mg,0.25mmol)溶于DCM(5mL)，然后依次加入TEA(25mg,0.25mmol)和DEPC(41mg,0.25mmol)。反应液在室温下搅拌18h，加入DCM(25mL)稀释，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 20:1)得到白色固体76(210mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.80min；m/z(ES+)＝534.0[1/2(M+2H)]+。
合成步骤5
将化合物76(86mg,0.081mmol)加入到DEA(1mL)/DCM(3mL)混合溶液，反应液在室温下搅拌16h。浓缩除去溶剂，残余物用prep-RP-HPLC(Method4:40％-60％B in 8min→95％B；Rt:5.1～5.8min)制备得到白色固体7(40mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝1.97min；m/z(ES+)＝844.5(M+H)+。
实施例6
化合物8的合成
合成步骤1
将化合物Fmoc-MMAE(220mg,0.23mmol)和二(对硝基苯)碳酸酯(142mg,0.46mmol)溶于DCM(20mL)，然后加入DIEA(91mg,0.70mmol)。反应液在室温下搅拌18h，补加二(对硝基苯)碳酸酯(142mg)后反应过夜。浓缩除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(EtOAc/PE 4:1)得到白色固体77(200mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝2.41min；m/z(ES+)N/A(M+H)+。
合成步骤2
将化合物77(70mg,0.063mmol)溶于DCM(6mL)，然后加入吗啡啉(0.5mL)和DIEA(16mg,0.13mmol)。反应液在室温下搅拌21h，浓缩除去溶剂。残余物用prep-RP-HPLC(Method 3:30％-50％B in 8min→95％B；Rt:9-9.8min)纯化得到白色固体8(26mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.52min；m/z(ES+)＝831.5(M+H)+。
实施例7
化合物9-16的合成
化合物9-16的合成采用与化合物8类似的合成步骤，LC-MS表征数据见表2。
表2
实施例8
化合物17的合成
合成步骤1
将化合物KI-7(80mg,0.12mmol)溶于DCM(6mL)，然后冷却至0℃，依次加入DIEA(44mg,0.35mmol)，KI-3(41mg,0.13mmol)和DEPC(28mg,0.17mmol)。反应液在室温下搅拌4h，浓缩除去溶剂，粗品78直接进行下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝1.95min；m/z(ES+)＝995.6(M+H)+。
合成步骤2
向合成步骤1得到的化合物78粗品中加入DEA(0.5mL)和DCM(1mL)。反应液在室温下搅拌过夜，浓缩除去溶剂，残余物用prep-RP-HPLC(Method 4:35％-60％B in 8min→95％B；Rt:4.5-5.5min)纯化得到白色固体17(60mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.49min；m/z(ES+)＝773.5(M+H)+。
实施例9
化合物18的合成
合成步骤1
将化合物KI-8(287mg,0.41mmol)和KI-3(130mg,0.41mmol)溶于DCM(10mL)，然后将溶液冷却至0℃，依次加入TEA(207mg,20.5mmol)和DEPC(87mg,0.53)。反应液在室温下搅拌过夜。有机相依次用水洗涤(10mL×2)，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 30:1)得到白色固体79(200mg)。
合成步骤2
将化合物79(200mg,0.20mmol)加入到DCM(3mL)/DEA(0.5mL)混合溶液中。反应液在室温搅拌过夜，浓缩除去溶剂，残余物用RP-HPLC(Method 3:30％-45％B in 8min→95％B；Rt:5.0-6.0min)纯化得到白色固体(110mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.40min；m/z(ES+)＝787.5(M+H)+。
实施例10
化合物19-21的合成
合成原料80b(WO 2013/072813)和80c(WO 2007/008848)是按照文献报道的方法(少量改动)合成。
化合物21的合成
合成步骤1
将化合物80c(210mg,1.11mmol)和KI-2(351mg,1.22mmol)溶于DCM(20mL)，并冷却到0℃。向溶液中依次加入TEA(336mg,3.33mmol)和DEPC(235mg,1.44mmol)。反应液在室温下搅拌18h，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 10:1)得到浅黄色固体81c(150mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.89min；m/z(ES+)＝459.3(M+H)+。
合成步骤2
将化合物81c(150mg)溶于DCM(2mL),并将溶液冷却至0℃。加入TFA(1mL)，反应液在10℃下搅拌3h。浓缩除去溶剂，得到粗品82c(TFA盐，120mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝1.21min；m/z(ES+)＝359.2(M+H)+。
合成步骤3
将化合物82c(120mg,0.335mmol)和化合物KI-7(231mg,0.335mmol)溶于DCM(10mL)。将溶液冷却至0℃，然后依次加入DIEA(216mg,1.68mmol)和DEPC(71mg,0.435mmol)。反应液在室温下搅拌18h。有机相依次经水洗，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 40:1to 15:1)得到浅黄色油状物83c(400mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝2.12min；m/z(ES+)＝517.5[1/2(M+2H)]+。
合成步骤4
将化合物83c(400mg,0.387mmol)溶于DCM(1.5mL)，然后加入DEA(0.5mL)。反应液在室温下搅拌过夜，浓缩除去溶剂。残余物用prep-RP-HPLC(Method 4:35％-65％B in 8min→95％B in 4min；Rt:4.0-5.0min)纯化得到白色固体21(65mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.81min；m/z(ES+)＝811.6(M+H)+。
化合物20-21的合成采取与化合物19的合成类似的合成步骤。LC-MS表征数据见表3。
表3
实施例11
化合物22的合成
合成步骤1
将化合物KI-7(166mg,0.24mmol)和KI-5(103mg,0.27mmol)溶于DCM(10mL)，冷却至0℃，然后依次加入DIEA(93mg,0.72mmol)和DEPC(60mg,0.36mmol)。反应液在室温下搅拌4h，浓缩除去溶剂。粗品84直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝2.09min；m/z(ES+)＝1065.7(M+H)+。
合成步骤2
向化合物84粗品中加入DCM(3mL)和DEA(1mL)，反应液在室温下搅拌过夜。浓缩除去溶剂，残余物用prep-RP-HPLC(Method 4:40％-70％B in 8min→95％B in 4min；Rt:7.3-8.3min)纯化得到白色固体85(60mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.66min；m/z(ES+)＝843.6(M+H)+。
合成步骤3
将化合物85(8mg)溶于DCM(0.6mL)，然后将溶液冷却至0℃，加入TFA(0.2mL)。反应液在10℃下搅拌3h，浓缩除去溶剂。残余物用prep-RP-HPLC(Method 3:20％-30％B in 8.2min→95％B in 4min；Rt:8.2-9.0min)纯化得到白色固体22(5mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.36min；m/z(ES+)＝787.5(M+H)+。
实施例12
化合物23的合成
合成步骤1
将化合物KI-8(314mg,0.45mmol)和KI-5(173mg,0.45mmol)溶于DCM(10mL)，冷却至0℃，然后依次加入TEA(135mg,1.34mmol)和DEPC(94mg,0.58mmol)。反应液在室温下搅拌过夜，依次经水洗，干燥，浓缩。粗品用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 30:1)得到白色固体86(200mg)。
合成步骤2
将化合物86(400mg,0.37mmol)溶于DCM(3mL)/DEA(1mL)混合溶液，反应液在室温下搅拌过夜。浓缩除去溶剂，残余物用prep-RP-HPLC(Method 3:33％-58％B in 8min→95％B in 4min；Rt:7.5-9.5min)纯化得到白色固体87(240mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.51min；m/z(ES+),857.5(M+H)+。
合成步骤3
将化合物87(10mg,0.012mmol)溶于DCM(0.6mL)，然后将溶液冷却至0℃，加入TFA(0.2mL)。反应液在10℃搅拌2.5h，浓缩除去溶剂。残余物用prep-RP-HPLC(Method 3:20％-30％B in 8.2min→95％B in 4min；Rt:7.7-8.8min)纯化得到白色固体23(5mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.36min；m/z(ES+)＝801.5(M+H)+。
实施例13
化合物24-30的合成
合成步骤1：氨基酸叔丁酯的合成
化合物89a的合成
将化合物88a(500mg,2.5mmol)溶于醋酸叔丁酯(5mL)，冷却至0℃。向溶液中缓慢滴加高氯酸(0.21mL，3.76mmol)。反应液在室温下搅拌12h。有机相用水(10mL)和1.0M盐酸(15mL)洗涤，合并水相用10％碳酸钾溶液调节pH～9，然后用DCM(20mL×3)萃取。将合并的有机相干燥，浓缩，残余物用硅胶柱色谱(EtOAc/PE 1:5)纯化得到无色油状物89a(430mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.57min；m/z(ES+),256.1(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,2H),7.47(d,1H),7.38-7.32(m,3H),4.15(m,1H),3.21(m,2H),1.22(s,9H)。
化合物89b的合成
化合物88b(500mg,2.5mmol)经过与89a合成类似的反应步骤，得到无色油状物89b(42mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝1.65min；m/z(ES+),229.2(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,1H),8.40(s,2H),7.56(s,1H),4.27(s,1H),3.32–3.19(m,2H),1.32(s,9H)。
化合物89c的合成
将化合物88c(1.0g,6.71mmol)溶于醋酸叔丁酯(6mL)，冷却至0℃。向溶液中缓慢滴加高氯酸(0.81mL，10.1mmol)。反应液在室温下搅拌18h。将白色沉淀过滤，用乙酸乙酯洗涤。滤液浓缩得到无色油状物89c(130mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝1.17min；m/z(ES+)＝206.1(M+H)+。
化合物89d的合成
化合物88d(盐酸盐，500mg,2.32mmol)经过与89a合成类似的反应步骤，得到无色油状物89d(340mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.82min；m/z(ES+)＝236.2(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),7.33-7.25(m,3H),7.17(d,2H),3.70(s,1H),3.22(m,1H),2.85(m,1H),2.60-2.55(m,2H),1.42(s,9H)。
化合物89e的合成
化合物88e(260mg,1.45mmol)经过与89a合成类似的反应步骤，得到89e(83mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.62min；m/z(ES+)＝236.2(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.08(s,2H),7.30-7.19(m,3H),7.14(d,2H),3.06-2.96(m,4H),2.87(dd,1H),1.37(s,9H)。
化合物89f的合成
化合物88f(盐酸盐，500mg,2.18mmol)经过与89a合成类似的反应步骤，得到无色油状物89f(320mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.88min；m/z(ES+)＝250.2(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.03(s,2H),7.34-7.27(m,2H),7.21-7.20(m,3H),3.46(m,1H),2.75-2.60(m,4H),1.83(m,2H),1.41(s,9H)。
化合物89g的合成
参考文献报道的方法合成(Tetrahedron 2005，61，11132–11140)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.66min；m/z(ES+)＝236.2(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.33–7.20(m,5H),3.93(dd,1H),3.38(dd,1H),3.16(dd,1H),2.72(s,3H),1.30(s,9H)。
化合物24的合成
合成步骤2
将化合物89a(235mg,0.92mmol)和KI-2(220mg,0.77mmol)溶于DCM(4mL)，然后依次加入DIEA(267μL，1.53mmol)和DEPC(134μL,0.92mmol)。反应液在室温下搅拌过夜，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc4:1)得到化合物90a(276mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.36min；m/z(ES+)＝525.3(M+H)+。
合成步骤3
将化合物90a(276mg,0.53mmol)溶于DCM，并冷却至0℃。加入TFA(1mL,25eq)，反应液在室温下搅拌3h，浓缩除去溶剂。残余物用饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用DCM萃取(20mL×3)。合并的有机相依次经干燥，浓缩得到粗品91a(115mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 2):Rt＝1.96min；m/z(ES+)＝425.3(M+H)+。
合成步骤4
将化合物91a(100mg,0.24mmol)和KI-7(163mg,0.24mmol)溶于DCM(4mL)，然后依次加入DIEA(82μL，0.47mmol)和DEPC(41μL,0.28mmol)。反应液在室温下搅拌过夜，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 50:1)得到化合物92a(163mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝2.21min；m/z(ES+)＝519.4(M+H)+。
合成步骤5
将化合物92a(163mg,0.15mmol)加入到DEA(1mL)/DCM(3mL)混合溶液。反应液在室温下搅拌过夜，浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH/NH3·H2O 15:1:0.1)得到化合物93a(84mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.35min；m/z(ES+)＝877.5(M+H)+。
合成步骤6
将化合物93a(2.0mg,0.0023mmol)溶于DCM(0.4mL)，然后加入TFA(0.2mL)。反应液在室温下搅拌2h，浓缩除去溶剂。残余物用prep-RP-HPLC纯化(Method 3:15％-60％B in 8min→95％B in 4min；Rt:9.6min)得到纯品24。LC-MS(Method 1):Rt＝1.56min；m/z(ES+)＝821.3(M+H)+。
化合物25-30的合成
化合物25-30的合成采取与化合物24的合成类似的合成步骤，LC-MS表征数据见表4。
表4
实施例14
化合物31-46的合成
合成步骤1：化合物94a-o的合成
化合物94a的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(155mg,0.58mmol)和O-甲基羟胺盐酸盐(98mg,1.17mmol)溶于DCM(2mL)，然后依次加入TEA(235mg,2.32mmol)和DEPC(114mg,0.70mmol)。反应液在室温下搅拌过夜。浓缩除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 50:1)得到白色固体94a(133mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝1.83min；m/z(ES+)＝317.0(M+Na)+。
化合物94b的合成
采用与94a类似的合成步骤，得到白色固体94b。LC-MS(Method 2):Rt＝1.89min；m/z(ES+)＝331.2(M+Na)+。
化合物94c的合成
采用与94a类似的合成步骤，得到白色固体94c。LC-MS(Method 2):Rt＝2.06min；m/z(ES+)＝393.0(M+Na)+。
化合物94e的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(200mg,0.75mmol)溶于THF(2mL)并冷却至-10℃，然后向其中加入N-甲基吗啡啉(83mg,0.82mmol)和氯甲酸甲酯(77mg,0.82mmol)。反应液搅拌20min，加入乙胺(33％水溶液，307mg,2.25mmol)。反应液在室温下搅拌过夜，然后浓缩除去溶剂。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 50:1)得到白色固体94e(217mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝1.92min；m/z(ES+)＝315.3(M+Na)+。
化合物94f的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(265mg,1mmol)溶于THF(4mL)并冷却至-20℃，然后向其中依次加入N-甲基吗啡啉(101mg,1mmol)和氯甲酸异丁酯(137mg,1mmol)。反应液搅拌3分钟后，加入甲胺(30％水溶液，220μL,1.3mmol)。反应液在继续搅拌1h，然后加入5％碳酸氢钠溶液(4Ml)。室温下搅拌30min后，用DCM(20mL×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水洗，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 2:1)得到94f(173mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝1.85min；m/z(ES+)＝179.2(M+H-100)+。
化合物94g的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(150mg,0.57mmol),叔丁胺(42mg,0.57mmol)和TEA(115mg,1.14mmol)溶于THF(5mL)。将溶液冷却至0℃，然后加入BOP试剂(328mg,0.74mmol)。反应液在0℃搅拌2h，然后升至室温搅拌过夜。反应用水淬灭，浓缩除去挥发性溶剂。水相用EtOAc萃取(20mL×3)。合并的有机相经饱和食盐水洗，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc 3:1)得到94g(137mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝2.10min；m/z(ES+)＝321.3(M+H)+。
化合物94h的合成
采用与94a类似的合成步骤，得到白色固体94h。LC-MS(Method 2):Rt＝1.99min；m/z(ES+)＝329.3(M+Na)+。
化合物94i的合成
采用与94a类似的合成步骤，得到白色固体94i。LC-MS(Method 2):Rt＝2.11min；m/z(ES+)＝321.3(M+H)+。
化合物94j的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(350mg,1.32mmol)和N-羟基琥珀酰亚胺(182mg,1.58mmol)溶于THF(8mL)，并将溶液冷却至0℃，然后加入DCC(326mg,1.58mmol)。反应液在0℃下搅拌30min，然后升至室温搅拌6h。过滤除去固体，滤液冷却至0℃，然后加入二甲胺水溶液(33％，4.9mL,31.7mmol)。反应液在0℃下搅拌30min,然后升至室温搅拌过夜。浓缩除去易挥发溶剂，水相用乙酸乙酯萃取。有机相依次用5％的柠檬酸，饱和碳酸氢钠水溶液，和饱和食盐水洗，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(EtOAc/PE 1:4)得到94j。LC-MS(Method 2):Rt＝1.96min；m/z(ES+)＝293.2(M+H)+。
化合物94k的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(159mg,0.60mmol)溶于DMF(5mL),并冷却至0℃。向溶液中依次加入化合物93l(150mg,1.20mmol,合成参考文献J.Chem.Soc.1942,432)，HOBt(122mg,0.90mmol)，EDCI(138mg,0.72mmol)和DIEA(314μL,1.80mmol)。反应液升至室温搅拌24h，倒入由半饱和氯化铵水溶液和EtOAc组成的混合溶液。有机相分离后，依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩得到94k(167mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.95min；m/z(ES+)＝357.2(M+Na)+。
化合物94l的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(187mg,0.71mmol)溶于DMF(5mL),并冷却至0℃。向溶液中依次加入2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙醇(150mg,0.78mmol)，HOBt(95mg,0.71mmol)和EDCI(135mg,0.71mmol)。反应液升至室温搅拌24h，浓缩除去溶剂。残余物用乙酸乙酯溶解，然后依次经水，1N盐酸，1N氢氧化钠溶液，和饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 50:1)得到化合物94l(278mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.67min；m/z(ES+)＝441.3(M+H)+。
化合物94m的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(99mg,0.42mmol)溶于DMF(3mL),并冷却至0℃。向溶液中依次加入14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷醇(100mg,0.38mmol)，HOBt(51mg,0.38mmol)和EDCI(73mg,0.38mmol)。反应液升至室温搅拌24h，浓缩除去溶剂。残余物用乙酸乙酯溶解，然后依次经水，1N盐酸，1N氢氧化钠溶液，和饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 30:1)得到化合物94m(215mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.39min；m/z(ES+)＝485.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.49(t,1H),8.20(s,2H),7.33-7.23(m,5H),3.97(m,1H),3.52-3.27(m,20H),3.17-3.15(m,1H),3.01-2.98(m,2H)。
化合物94n的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(80mg,0.28mmol)溶于DMF(3mL),并冷却至0℃。向溶液中依次加入17-氨基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷醇(68mg,0.26mmol)，HOBt(35mg,0.26mmol)和EDCI(50mg,0.26mmol)。反应液升至室温搅拌24h，浓缩除去溶剂。残余物用乙酸乙酯溶解，然后依次经水，1N盐酸，1N氢氧化钠溶液，和饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 30:1)得到化合物94n(90mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.40min；m/z(ES+)＝529.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.30-7.20(m,5H),4.36(br s,1H),3.75-3.40(m,21H),3.25-2.90(m,6H),1.39(s,9H)。
化合物94o的合成
将化合物N-Boc-L-苯丙氨酸(44mg,0.17mmol)溶于DMF(3mL),并冷却至0℃。向溶液中依次加入2-(2-(2-甲氧乙氧基)乙氧基)乙基-1-胺(30mg,0.17mmol)，HOBt(23mg,0.17mmol)和EDCI(32mg,0.17mmol)。反应液升至室温搅拌24h，浓缩除去溶剂。残余物用乙酸乙酯溶解，然后依次经水，1N盐酸，1N氢氧化钠溶液，和饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 50:1)得到化合物94o(59mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝1.90min；m/z(ES+)＝411.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.96(t,1H),7.30-7.23(m,4H),7.19(m,1H),6.87(d,1H),4.12(m,1H),3.50(m,6H),3.44-3.39(m,4H),3.26-3.16(m,5H),2.92(dd,1H),2.71(dd,1H),1.29(s,9H)。
化合物43的合成
合成步骤2
将化合物94l(278mg,0.63mmol)溶于DCM(5mL)，并将溶液冷却至0℃。加入TFA(1.2mL,16mmol)，反应液在室温下搅拌3h。浓缩除去溶剂，残余物用饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用DCM(20mL×3)萃取。合并的有机相经干燥，浓缩，残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 20:1)得到95l(158mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝0.98min；m/z(ES+)＝341.1(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91(t,1H),7.27-7.19(m,5H),4.61(s,1H),3.50–3.47(m,10H),3.41–3.34(m,5H),3.25-3.16(m,2H),2.91(dd,1H),2.60(dd,1H),1.71(br s,2H)。
合成步骤3
将化合物95l(35mg,0.10mmol)和KI-2(27mg,0.092mmol)溶于DCM(2mL)，然后依次加入DIEA(33μL,0.18mmol)和DEPC(16μL，0.11mmol)。反应液在室温下搅拌过夜。加入DCM(20mL),溶液用饱和氯化钠溶液洗涤，水相用DCM(20mL×2)萃取，合并的有机相经干燥，浓缩得到粗品96l(83mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝1.47min；m/z(ES+)＝610.4(M+H)+。
合成步骤4
将化合物96l(83mg,0.14mmol)溶于DCM(3mL)，并将溶液冷却至0℃。加入TFA(0.30mL,4.1mmol)，反应液在室温下搅拌3h。浓缩除去溶剂，残余物用饱和碳酸氢钠中和，然后用DCM(20mL×3)萃取。合并后的有机相干燥，浓缩，残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH/NH3·H2O 10:1:0.1)得到97l(43mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.08min；m/z(ES+)＝510.4(M+H)+。
合成步骤5
将化合物97l(43mg,0.084mmol)和KI-7(58mg,0.084mmol)溶于DCM(4mL),然后依次加入DIEA(30μL，0.17mmol)和DEPC(15μL，0.10mmol)。反应液在室温下搅拌过夜，加入饱和氯化钠溶液(30mL)，用DCM萃取(20mL×3)。合并的有机相经干燥，浓缩得到粗品98l(70mg)，直接用于下一步反应。LC-MS(Method 1):Rt＝1.63min；m/z(ES+)＝1184.6(M+H)+。
合成步骤6
向化合物98l(75mg,0.059mmol)中加入DCM(3mL)和DEA(3mL)，反应液在室温下搅拌过夜。浓缩除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH/NH3·H2O 10:1:0.1)得到42(35mg)。LC-MS(Method 2):Rt＝1.63min；m/z(ES+)＝962.5(M+H)+。
化合物31-41,43-45的合成
从化合物94a-k,94m-o起始，采用与化合物42类似的合成方法，得到化合物31-41,43-45。LC-MS表征数据见表5。
表5
实施例15
连接子-药物vc-17的合成
将化合物MC-Val-Cit-PABA-PNP(43mg)，17(30mg)和HOBt(1mg)加入到吡啶(0.6mL)/DMF(3mL)混合溶液中，反应液在室温下搅拌24h。产物用prep-RP-HPLC(Method 3:35％-55％B in 8min→95％B in 4min；Rt:6.2-7.0min)纯化得到白色固体vc-17(22mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.61min；m/z(ES+)＝686.5[1/2(M+2H)]+。
实施例16
其它连接子-药物vc-Drug的合成与vc-17采用类似的合成步骤，LC-MS表征数据见表6。
表6
实施例17
连接子-药物vc-22的合成
合成步骤1
将化合物MC-Val-Cit-PABA-PNP(39mg)，85(30mg)和HOBt(1mg)加入到吡啶(0.6mL)/DMF(3mL)混合溶液，反应液在室温下搅拌24h。产物用prep-RP-HPLC(Method 3:40％-70％B in 8min→95％B in 4min；Rt:7.4-8.4min)纯化得到白色固体vc-85(30mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.72min；m/z(ES+)＝721.3[1/2(M+2H)]+。
合成步骤2
将化合物vc-85(30mg)溶于DCM(2mL)，冷却至0℃，然后加入TFA(1mL)。反应液在10℃下搅拌4h，浓缩除去溶剂。残余物用prep-RP-HPLC(Method3:37％-65％B in 8min→95％B in 4min；Rt:5.0-6.0min)纯化得到vc-22(18mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.66min；m/z(ES+)＝693.5[1/2(M+2H)]+。
实施例18
其它连接子-药物vc-Drug的合成与MC-vc-17采用类似的合成步骤，LC-MS表征数据见表7。
表7
实施例19
连接子-药物MC-22的合成
合成步骤1
将化合物MC(10mg)和85(30mg)溶于DCM(5mL)，然后依次加入DIEA(14mg)和HATU(27mg)，反应液在室温下搅拌24h。产物用prep-RP-HPLC(Method 3:40％-70％B in 8min→95％B in 4min；Rt:7.4-8.6min)纯化得到白色固体MC-85(30mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.75min；m/z(ES+)＝1036.5(M+H)+。
合成步骤2
将化合物MC-85(30mg)溶于DCM(2mL)，冷却至0℃，然后加入TFA(1mL)。反应液在10℃下搅拌4h，浓缩除去溶剂。残余物用prep-RP-HPLC(Method3:35％-60％B in 8min→95％B in 4min；Rt:5.5-6.5min)纯化得到MC-22(20mg)。LC-MS(Method 1):Rt＝1.68min；m/z(ES+)＝980.5(M+H)+。
实施例20
其它连接子-药物MC-Drug的合成与MC-22采用类似的合成步骤，LC-MS表征数据见表8。
表8
实施例21
抗体药物偶联物的合成采用通用步骤J提供的偶联方法，所得抗体药物偶联物的平均DAR～4。所得抗体药物偶联物的细胞增殖抑制实验(通用步骤L)结果见表9，表10。
表9
抗体药物偶联物 IC50(ng/mL) 抗体药物偶联物 IC50(ng/mL)
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表10
抗体药物偶联物 IC50(ng/mL) 抗体药物偶联物 IC50(ng/mL)
H-MC-5 90.2 H-MC-31 13.0
H-MC-6 49.0 H-MC-32 10.8
H-MC-7 3820 H-MC-33 15.9
H-MC-18 67.4 H-MC-34 12.7
H-MC-19 48.9 H-MC-35 13.3
H-MC-20 21.7 H-MC-36 19.1
H-MC-21 28.2 H-MC-37 N/A
H-MC-22 7.1 H-MC-38 9.6
H-MC-23 3.9 H-MC-39 N/A
H-MC-24 30.3 H-MC-40 N/A
H-MC-25 24.7 H-MC-41 11.1
H-MC-26 N/A H-MC-42 16.6
H-MC-27 72.0 H-MC-43 18.1
H-MC-28 335 H-MC-44 17.1
H-MC-29 6960 H-MC-45 19.3
H-MC-30 99300
结果表明，其中一些抗体药物偶联物具有较高的细胞增值抑制活性，其所采用的海兔毒素10的衍生物具有进一步开发应用的前景。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种如式Ⅰ所示的化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物，
其中：
R1,R2选自H,-C1-C8烷基,或者R1,R2连接成环,具有-(CR14R15)n-Z-(CR16R17)m-的结构，其中R14，R15，R16，和R17选自H，-C1-C8烷基；Z选自O,NR18，CR19R20,其中R18，R19，R20选自H,-C1-C8烷基；n，m分别选自0-8范围内的整数。
R3，R4，R6选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R5，R9，R10，R11选自H，-C1-C8烷基；
R7，R8选自H，-OH，-C1-C8烷基，或-O-(C1-C8烷基)；
R12,R13选自H,-C1-C8烷基,-OR21,-R22X,或者R12,R13连接成环,具有-(CR23R24)p-W-(CR25R26)q-,其中W选自O,NR27,CR28R29；X选自-OH,-NR30R31；p，q选自0-8范围内的整数；
R21选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R22选自亚烷基，亚烯基，亚炔基，亚芳基，-(CH2CH2O)r-(CH2)s-，或其中任意组合；
r，s分别选自0-8范围内的整数；
R23，R24，R25，R26，R27，R28，R29和R30选自H，-C1-C8烷基；
R31选自H，-C1-C8烷基，-OR32；其中R32选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基。
2.如权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物，其结构如式Ⅱ所示，
其中：
R1,R2选自H,-C1-C8烷基,或者R1,R2连接成环,具有-(CR14R15)n-Z-(CR16R17)m-的结构，其中R14，R15，R16和R17选自H，-C1-C8烷基；Z选自O,NR18，CR19R20,其中R18，R19，R20选自H,-C1-C8烷基；n，m分别选自0-8范围内的整数。
R12,R13选自H,-C1-C8烷基,-OR21,-R22X,或者R12,R13连接成环,具有-(CR23R24)p-W-(CR25R26)q-,其中W选自O,NR27,CR28R29；X选自-OH,-NR30R31；p，q分别选自0-8范围内的整数；
R21选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R22选自亚烷基，亚烯基，亚炔基，亚芳基，-(CH2CH2O)r-(CH2)s-，或其中任意组合；
r，s分别选自0-8范围内的整数；
R23，R24，R25，R26，R27，R28，R29和R30选自H，-C1-C8烷基；
R31选自H，-C1-C8烷基，-OR32；其中R32选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基。
3.如权利要求2所述的化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物，所述化合物的结构如下式所示，
4.一种如式Ⅲ所示的化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物，
其中：
R1，R2，R3，R4选自H，-C1-C8烷基；
m，n分别选自2-4范围内的整数。
R5，R6，R8选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R7，R11，R12选自H，-C1-C8烷基；
R9，R10选自H，-OH，-C1-C8烷基，或-O-(C1-C8烷基)；
R13，R14选自H，-OH，-OR16，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R16选自H，-C1-C8烷基；
P选自1-8范围内的整数；
R15选自-C3-C8烷基，芳基，-C3-C8杂环基，-COOH，-C(＝O)NR17R18；
R17,R18选自H,-C1-C8烷基,-OH，-OR19，或者R1,R2连接成环,具有-(CR20R21)p-Z-(CR22R23)q-的结构，其中R19，R20，R21，R22和R23选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；Z选自O,NR24，CR25R26,其中R24，R25和R26选自H,-C1-C8烷基；p，q分别选自0-8范围内的整数。
5.如权利要求4所述的化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物，其结构如式Ⅳ所示，
其中：
m，n分别选自2-4范围内的整数。
R12选自H，-C1-C8烷基；
R13，R14选自H，-OH，-OR16，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；
R16选自H，-C1-C8烷基；
p选自1-8范围内的整数；
R15选自-C3-C8烷基，芳基，-C3-C8杂环基，-COOH，-C(＝O)NR17R18；
R17,R18选自H,-C1-C8烷基,-OH，-OR19，或者R1,R2连接成环,具有-(CR20R21)p-Z-(CR22R23)q-的结构，其中R19，R20，R21，R22和R23选自H，-C1-C8烷基，芳基，杂环基，芳烷基，杂芳烷基；Z选自O,NR24，CR25R26,其中R24，R25和R26选自H,-C1-C8烷基；p，q分别选自0-8范围内的整数。
6.如权利要求5所述的化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物，所述化合物的结构如下式所示，
7.一种药物组合物，其中包括如权利要求1-6任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物和药学上可接受的载体。
8.一种如式Ⅴ所示的抗体药物偶联物，
L-(A-D)n V
其中，L是抗体，抗体片段或蛋白；A是连接子部分；D是如权利要求1-6任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物；n是一个范围在1-8的整数。
9.如权利要求8所述的抗体药物偶联物在肿瘤，自身免疫疾病和抗炎症的领域中的应用。
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