CN106255693A - Zeste增强子同源物2的抑制剂 - Google Patents

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W.H.米勒
S.P.罗默里尔
S.K.韦尔马
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Abstract

本发明涉及新的式(I)化合物，其为Zeste增强子同源物2(EZH2)的抑制剂，涉及包含它们的药物组合物，涉及它们的制备方法，以及它们治疗癌症的用途。

Description

Zeste增强子同源物2的抑制剂
技术领域
本发明涉及化合物，其抑制Zeste增强子同源物2(EZH2)并且因此在癌细胞中有效抑制增殖和/或诱导细胞凋亡。
背景技术
表观遗传修饰在许多细胞过程(包括细胞增殖、分化和细胞存活)的调节中起着重要作用。总体表观遗传修饰在癌症中是常见的，且包括导致致癌基因、肿瘤抑制基因和信号通路的异常活化或失活的DNA和/或组蛋白甲基化的总体变化、非编码RNA的失调以及核小体重构。但是，与癌症中出现的基因突变不同，这些表观遗传变化可通过选择性抑制所参与的酶而被逆转。已知参与组蛋白或DNA甲基化的多个甲基化酶在癌症中失调。因此，特定甲基化酶的选择性抑制剂将有效用于治疗增殖性疾病，例如癌症。
EZH2(人EZH2基因：Cardoso，C，等人；European J of Human Genetics，第8卷，第3期，174-180页，2000)为多梳抑制复合物2(Polycomb Repressor Complex 2，PRC2)的催化亚单位，其功能是通过将组蛋白H3的赖氨酸27三甲基化(H3K27me3)来使靶基因沉默。组蛋白H3是参与真核细胞染色质结构的五种主要组蛋白之一。以主要球状结构域和长的N末端尾为特征的组蛋白涉及核小体结构，即'串珠'结构。虽然组蛋白被高度地翻译后修饰，但组蛋白H3是五种组蛋白中被最广泛修饰的。单独的术语“组蛋白H3”是有意模糊的，因为它没有区分序列变体或修饰状态。组蛋白H3是表观遗传学(epigenetics)新领域中的重要蛋白，其中其序列变体和可变的修饰状态被认为在基因的动力学和长期调节中发挥着作用。
已经在许多实体瘤(包括前列腺、乳腺、皮肤、膀胱、肝、胰腺、头颈的肿瘤)中观测到了增加的EZH2表达并且所述增加的EZH2表达与癌症进攻性、转移性和不良预后有关(Varambally等人，2002；Kleer等人，2003；Breuer等人，2004；Bachmann等人，2005；Weikert等人，2005；Sudo等人，2005；Bachmann等人，2006)。例如，在表达高水平EZH2的肿瘤中，在前列腺切除术后存在高复发风险，在具有高EZH2水平的乳腺癌患者中存在转移增加、无疾病生存期缩短和死亡增加的风险(Varambally等人，2002；Kleer等人，2003)。最近，在UTX(ubiquitously transcribed tetratricopeptide repeats X，泛转录的三十四肽重复X)(即H3K27去甲基化酶，其与EZH2的功能相反)中的失活突变已经在多个实体瘤和血液肿瘤类型(包括肾肿瘤、成胶质细胞瘤、食管肿瘤、乳腺肿瘤、结肠肿瘤、非小细胞肺肿瘤、小细胞肺肿瘤、膀胱肿瘤、多发性骨髓瘤和慢性髓样白血病肿瘤)中得以证实，且低UTX水平与乳腺癌中低存活有关，意味着UTX功能的丧失导致H3K27me3的增加和靶基因的抑制(Wang等人，2010)。总而言之，这些数据表明，在许多肿瘤类型中，增加的H3K27me3水平导致癌症的恶化，并且EZH2活性的抑制可提供治疗益处。
许多研究报道，通过siRNA或shRNA直接敲除EZH2或通过SAH水解酶抑制剂3-去氮腺嘌呤A(deazaneplanocin A，DZNep)的治疗间接消耗EZH2均降低癌细胞系在体外的增殖与侵入并降低体内肿瘤生长(Gonzalez等人，2008，GBM 2009)。虽然不知道异常EZH2活性导致癌症进展的确切机理，但是许多EZH2靶基因是肿瘤抑制剂，意味着肿瘤抑制剂功能的丧失是关键机理。此外，EZH2在永生化或原代上皮细胞中的过表达促进锚定无依赖性生长和侵入且需要EZH2催化活性(Kleer等人，2003；Cao等人，2008)。
因此，有力证据显示，EZH2活性的抑制降低了细胞增殖和侵入。因此，抑制EZH2活性的化合物将可用于治疗癌症。
发明内容
本发明涉及式(I)化合物：
其中：
L为(C2-C8)亚烷基或(C2-C8)亚烯基；
R1为氢、卤素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基(C2-C6)烯基、(C5-C6)环烯基、(C5-C6)环烯基(C1-C6)烷基、(C5-C6)环烯基(C2-C6)烯基、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-C6)烷基-、杂环烷基(C2-C6)烯基、苯基、苯基(C1-C6)烷基、苯基(C2-C6)烯基、杂芳基、杂芳基(C1-C6)烷基、杂芳基(C2-C6)烯基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-C(O)NRaNRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb、-NRaNRaC(O)ORa、-ORa、-OC(O)Ra、或-OC(O)NRaRb，其中各环烷基、环烯基、双环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；
R2为氢、卤素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基(C2-C6)烯基、(C5-C6)环烯基、(C5-C6)环烯基(C1-C6)烷基、(C5-C6)环烯基(C2-C6)烯基、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-C6)烷基-、杂环烷基(C2-C6)烯基、苯基、苯基(C1-C6)烷基、苯基(C2-C6)烯基、杂芳基、杂芳基(C1-C6)烷基、杂芳基(C2-C6)烯基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb或-C(O)NRaNRaRb，其中各环烷基、环烯基、双环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；
R3选自：氢、卤素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C4)烷氧基、-B(OH)2、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C4)烷基-、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-C4)烷基-、苯基、苯基(C1-C2)烷基、杂芳基、杂芳基(C1-C2)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-C(O)NRaNRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb、-NRaNRaC(O)ORa、-ORa、RaO(C1-C4)烷基-、RaO(C3-C6)炔基-、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb，其中各环烷基、双环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；
各Rc独立地为-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；和
Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、杂芳基(C1-C4)烷基-或杂芳基，其中任意所述环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；
或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表5-或6-元饱和或不饱和环，其任选地含有选自氧、氮和硫的额外的杂原子，其中所述环任选独立地被以下基团取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羟基、氧代基团、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述环任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合；
或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合的6-至10-元桥连的双环系统；
或其药学上可接受的盐。
本发明的另一方面涉及诱导实体瘤的癌细胞凋亡的方法；治疗实体瘤癌症的方法。
本发明的另一方面涉及包含式(I)化合物和药学上可接受的赋形剂的药物制剂。
在另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，在制备用于治疗EZH2介导的障碍(如通过诱导癌细胞凋亡)的药物中的用途。
在另一方面，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗EZH2介导的疾病中的用途。本发明进一步提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐作为活性治疗物质在治疗EZH2介导的疾病中的用途。
在另一方面，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。
在另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗EZH2介导的障碍。
在另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗细胞增殖疾病。
在另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症，包括治疗实体瘤，例如脑瘤(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、莱-杜病(Lhermitte-Duclos disease)、乳腺癌、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀胱癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤和甲状腺瘤。
在另一方面，提供了共同给药本发明式(I)化合物和其他活性成分的方法。
在另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤药的组合，其用于治疗EZH2介导的障碍。
在另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤药的组合，其用于治疗细胞增殖疾病。
在另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤药的组合，其用于治疗癌症，包括治疗实体瘤，例如脑瘤(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、莱-杜病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀胱癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤和甲状腺癌。
发明详述
本发明涉及上述式(I)化合物。
在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R1为氢、卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R1为(C1-C4)烷基。在具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R1为甲基。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R2为氢、卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R2为(C1-C4)烷基。在具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R2为异丙基或仲丁基。在更具体地实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R2为异丙基。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为杂芳基，其任选独立地被以下基团取代1或2次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；各Rc独立地为-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；和Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、杂芳基(C1-C2)烷基-或杂芳基，其中任意所述环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表5-或6-元饱和或不饱和环，其任选地含有选自氧、氮和硫的额外的杂原子，其中所述环任选独立地被以下基团取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羟基、氧代基团、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述环任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合；或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合的6-至10-元桥连的双环系统。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为杂芳基，其任选被以下基团取代：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基杂环烷基-、卤素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基或杂环烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为杂芳基，其任选被以下基团取代：杂环烷基或(C1-C4)烷基-杂环烷基-。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为杂芳基，其任选被-NRaRb取代。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为呋喃基、苯硫基(thiophenyl)、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、噁唑基、异噁唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基或三嗪基，其各自任选被-NRaRb取代。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为呋喃基、苯硫基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、噁唑基、异噁唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基或三嗪基，其各自任选被以下基团取代：吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吗啉基或硫吗啉基。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为吡啶基，其任选被以下基团取代：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；各Rc独立地为-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；且Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、杂芳基(C1-C2)烷基-或杂芳基，其中任意所述环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表5-或6-元饱和或不饱和环，其任选地含有选自氧、氮和硫的额外的杂原子，其中所述环任选独立地被以下基团取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羟基、氧代基团、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述环任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合；或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合的6-至10-元桥连的双环系统。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为吡啶基，其任选被以下基团取代：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基杂环烷基-、卤素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基或杂环烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为吡啶基，其任选被以下基团取代：杂环烷基或(C1-C4)烷基-杂环烷基-。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为吡啶基，其任选被-NRaRb取代。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为吡啶基，其任选被以下基团取代：吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吗啉基或硫吗啉基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为吡啶基，其被哌嗪基取代。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3选自：氢、-SO2(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、羟基(C1-C4)烷基-、羟基(C3-C6)炔基-、(C1-C4)烷氧基、苯基、杂芳基和氰基，其中所述苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1或2次：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基杂环烷基-、卤素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基或杂环烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3选自：卤素、苯基和杂芳基，其中所述苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1或2次：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基杂环烷基-、卤素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基或杂环烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3选自：卤素、苯基和杂芳基，其中所述苯基或杂芳基任选被杂环烷基或(C1-C4)烷基-杂环烷基-取代。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3选自：氢、氰基、卤素、(C1-C4)烷氧基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基和三嗪基，其中所述呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基或三嗪基任选被(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基杂环烷基-、卤素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基或杂环烷基取代。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为苯基，其任选被以下基团取代：-NRaRb或RaRbN(C1-C4)烷基-。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为氰基、卤素、(C1-C4)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、羟基(C1-C4)烷基-、羟基(C3-C6)炔基-或(C1-C4)烷氧基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为羟基(C3-C6)炔基-。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为氰基、卤素、(C1-C4)烷基或(C1-C4)烷氧基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为卤素。在具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为氟、氯或溴。在更具体地实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为氯。在另一具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中R3为氰基。
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中L为(C4-C5)亚烷基或(C4-C5)亚烯基。在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中L选自：
在另一实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中L选自：
在具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中L为
在另一具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中L为
在另一具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中L为
在具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中：
L为(C4-C5)亚烷基或(C4-C5)亚烯基；
R1为氢、卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基；
R2为氢、卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基；和
R3选自：氢、-SO2(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、羟基(C1-C4)烷基-、羟基(C3-C6)炔基-、(C1-C4)烷氧基、苯基、杂芳基和氰基，其中所述苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1或2次：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基杂环烷基-、卤素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基或杂环烷基；
或其药学上可接受的盐。
在另一具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中：
L为(C4-C5)亚烷基或(C4-C5)亚烯基；
R1为(C1-C4)烷基；
R2为(C1-C4)烷基；和
R3选自：卤素、苯基和杂芳基，其中所述苯基或杂芳基任选被杂环烷基或(C1-C4)烷基-杂环烷基-取代；
或其药学上可接受的盐。
在另一具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中：
L选自:
R1为(C1-C4)烷基；
R2为(C1-C4)烷基；和
R3为卤素；
或其药学上可接受的盐。
在另一具体实施方案中，本发明涉及式(I)化合物，其中：
L选自:
R1为(C1-C4)烷基；
R2为(C1-C4)烷基；和
R3为吡啶基，其任选被以下基团取代：吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吗啉基或硫吗啉基；
或其药学上可接受的盐。
本发明的具体化合物包括：
(E)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
(Z)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
2-氯-4-异丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
(E)-4-异丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
(E)-4-异丙基-12-甲基-14,17-二氧代-6,9,10,13,14,15,16,17-八氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-甲腈；和
(E)-2-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
或其药学上可接受的盐。
通常但不是绝对地，本发明的盐是药学上可接受的盐。所公开的化合物的含有碱性胺官能团或其他碱性官能团的盐可通过本领域已知的任何合适的方法制备，包括用无机酸处理游离碱，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或用有机酸处理游离碱，所述有机酸诸如乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖酸(诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羟基酸(诸如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(诸如对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等)。药学上可接受的盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、扁桃酸盐和磺酸盐(诸如二甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐和萘-2-磺酸盐)。
所公开的化合物的含有羧酸官能团或其他酸性官能团的盐可通过与合适的碱反应制备。所述药学上可接受的盐可用提供药学上可接受的阳离子的碱制得，所述盐包括碱金属盐(尤其是钠盐和钾盐)、碱土金属盐(尤其是钙盐和镁盐)、铝盐和铵盐，以及所述药学上可接受的盐可从生理学可接受的有机碱制得，所述有机碱诸如三甲基胺、三乙基胺、吗啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二环己基胺、N,N’-二苄基乙二胺、2-羟基乙基胺、双-(2-羟基乙基)胺、三-(2-羟基乙基)胺、普鲁卡因、二苄基哌啶、去氢枞胺(dehydroabietylamine)、N,N’-二去氢枞胺、葡萄糖胺、N-甲基葡萄糖胺、三甲基吡啶、奎宁、喹啉，和碱性氨基酸诸如赖氨酸和精氨酸。
不是药学上可接受的其他盐可用于制备本发明化合物，并且这些应被视为形成本发明的另一方面。这些盐诸如草酸盐或三氟乙酸盐，尽管它们本身不是药学上可接受的，但是可用于制备在获得本发明化合物和它们的药学上可接受的盐时用作中间体的盐。
式(I)化合物或其盐可按立体异构形式存在(例如，其含有一个或多个不对称碳原子)。单独的立体异构体(对映异构体和非对映异构体)和这些异构体的混合物包括在本发明范围内。同样地，应理解式(I)的化合物或盐可按不同于该式中所示的互变异构形式存在，并且这些也包括在本发明范围内。应理解，本发明包括上文定义的具体组的所有组合和亚类。本发明的范围包括立体异构体的混合物以及经纯化的对映异构体或对映异构体/非对映异构体富集的混合物。应理解，本发明包括上文定义的具体组的所有组合和亚类。
本发明还包括同位素标记的化合物，其除以下事实外与式(I)所述的那些化合物相同：一个或多个原子被原子质量或质量数不同于天然常见的原子质量或质量数的原子代替。可引入本发明化合物及其药学上可接受的盐中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，诸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。
含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本发明的化合物和所述化合物的药学上可接受的盐在本发明范围内。同位素标记的本发明的化合物，例如引入了放射性同位素(诸如3H或14C)的那些化合物，用于药物和/或底物组织分布测定。氚代的(即3H)和碳-14(即14C)同位素由于其易于制备及可检测性而是特别优选的。11C和18F同位素特别用于PET(正电子发射断层扫描术)，以及125I同位素特别用于SPECT(单光子发射计算机断层扫描)，所有这些都用于脑成像。此外，用较重的同位素诸如氘(即2H)取代可因导致更大的代谢稳定性而提供治疗益处，例如体内半衰期增加或剂量需求减小，由此在一些情况中是优选的。通常可通过进行下文的方案和/或实施例中披露的操作，通过用容易获得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备同位素标记的式(I)化合物和其他化合物。
本发明还提供了药物组合物(也称为药物制剂)，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一或多种赋形剂(在制药领域也称为载体和/或稀释剂)。所述赋形剂在与该制剂的其他成分相容且对其接受者(即，患者)无毒方面是可接受的。
合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选具体的剂型而变化。此外，可根据在组合物中所起的具体功能来选择合适的药学上可接受的赋形剂。例如，可根据促进制备均一剂型的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。可根据促进制备稳定的剂型的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。可根据在给药至患者后促进本发明化合物从身体的一个器官或部分携带或运输至身体的另一器官或部分的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。某些药学上可接受的赋形剂可根据其提高患者顺应性的能力进行选择。
合适的药学上可接受的赋形剂包括下列赋形剂类型：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、粒化剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、增甜剂、矫味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以以多于一种功能和以替代性功能来使用，取决于所述赋形剂在制剂中存在多少和在制剂中存在何种其它成分。
具有本领域的知识和技术的技术人员能够选择出以适当量用于本发明的合适的药学上可接受的赋形剂。此外，有许多本领域技术人员可用的资源，这些资源描述了药学上可接受的赋形剂且其可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)，The Handbook of Pharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)，和The Handbook of Pharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and thePharmaceutical Press)。
本发明的药物组合物使用本领域技术熟练人员已知的技术和方法制备。通常用于本领域的一些方法描述在Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack PublishingCompany)中。
药物组合物可为每个剂量单位含有预定量的活性成分的单位剂量形式。所述单位可含有治疗有效剂量的式(I)化合物或其盐，或一定比例的治疗有效剂量的式(I)化合物或其盐，从而在给定的时间可给予多个单位剂量形式以达到期望的治疗有效剂量。优选的单位剂量制剂是本申请上文所述的含有活性成分的每日剂量或亚剂量或其适当的比例的那些。此外，所述药物组合物可通过药学领域熟知的任何方法制备。
药物组合物可适应于通过任何适当的途径给药，例如，经口服(包括含服或舌下)、直肠、鼻、局部(包括含服、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)途径给药。所述组合物可通过药学领域已知的任何方法制备，例如，通过使活性成分与一种或多种赋形剂结合。
当适应于口服给药时，药物组合物可为离散单位诸如片剂或胶囊剂；粉末或颗粒；于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食用泡沫或搅打剂(whip)；水包油型液体乳液或油包水型乳液。本发明的化合物或其盐或本发明的药物组合物也可被掺入到糖果、薄片剂(wafer)和/或条带型(tongue tape)制剂中，用于作为“快速溶解”的药物给药。
例如，就以片剂或胶囊剂形式进行的口服给药而言，可将活性药物组分与口服的无毒的药学上可接受的惰性载体如乙醇、甘油、水等混合。粉末剂或颗粒剂如下制备：将化合物研磨至合适的微细尺寸，然后与经类似研磨的药物载体如可食用的碳水化合物(如淀粉或甘露醇)混合。也可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
胶囊剂如下制备：如上所述制备粉末混合物，然后填充到成形的明胶或非明胶壳中。可将助流剂和润滑剂如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加到粉末混合物中，然后进行填充操作。也可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂被摄入时的药物利用度。
此外，当期望或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然胶和合成胶如阿拉伯胶、西黄蓍胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
片剂如下配制：例如制备粉末混合物，制粒或预压片(slugging)，加入润滑剂和崩解剂，然后压制成片剂。粉末混合物如下制备：将经合适研磨的化合物与上述稀释剂或基质以及任选的粘合剂(如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液延迟剂(solution retardant)(如石蜡)、吸收促进剂(如季胺盐)和/或吸收剂(如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。粉末混合物可如下制粒：润湿粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶液、纤维素溶液或聚合物溶液，然后挤压过筛。作为可选择的制粒方法，粉末混合物可通过压片机来处理，导致不完全成形的预压片破裂成颗粒。可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油的方式来对颗粒进行润滑以防止与片剂成形模粘连。然后将经润滑的混合物压制成片剂。本发明的化合物或盐也可与自由流动的惰性载体组合，并在不经历制粒或预压片步骤的情况下直接压制成片剂。可提供透明的或不透明的保护性包衣，所述包衣由以下包衣层构成：由虫胶形成的隔离包衣层、由糖或聚合物形成的包衣层和由蜡形成的抛光包衣层。可将染料加到这些包衣中以区分不同的剂量。
口服流体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可按剂量单位形式来制备，从而使给定的量含有预定量的活性成分。糖浆剂可通过将本发明的化合物或其盐溶于经合适矫味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的含醇媒介物来制备。悬浮剂可通过将本发明的化合物或其盐分散在无毒的媒介物中来制备。也可加入增溶剂和乳化剂(如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(如薄荷油、天然甜味剂、糖精或其它人造甜味剂)等。
当适当时，可对用于口服给药的单位剂量制剂进行微囊化。也可例如通过将颗粒物质包衣或包埋到聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或维持释放。
在本发明中，对于递送药物组合物而言，片剂和胶囊剂是优选的。
根据本发明的另一方面，提供了制备药物组合物的方法，其包括将式(I)化合物或其盐与至少一种赋形剂混合(或掺合)。
本发明还提供了在哺乳动物，尤其人中进行治疗的方法。本发明的化合物和组合物用于治疗细胞增殖性疾病。可通过本文提供的方法和组合物得到治疗的疾病包括，但不限于，癌症(下文进一步讨论)、自身免疫性疾病、真菌病症、关节炎、移植排斥、炎性肠病、医疗操作(medical procedure)后诱导的增殖，所述医疗操作包括，但不限于，手术、血管成形术等。应理解，在一些情况下，细胞可能并不在高增殖或低增殖状态(异常状态)但仍需要进行治疗。例如，在伤口愈合过程中，尽管细胞可能是“正常”增殖的，但仍可能需要增殖强化。因此，在一个实施方案中，本发明包括施用至患有或即将患有任一种这些疾病或病症的细胞或个体。
本文提供的组合物和方法尤其被认为适用于治疗癌症，包括肿瘤，例如前列腺癌、乳腺癌、脑癌、皮肤癌、宫颈癌、睾丸癌等。它们尤其用于治疗转移性或恶性肿瘤。更具体地，可通过本发明的组合物和方法得到治疗的癌症包括，但不限于以下肿瘤类型，例如星形细胞癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、喉癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、前列腺癌和甲状腺癌和肉瘤。更具体地，这些化合物可用于治疗：心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管癌(鳞状细胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤、间皮瘤；胃肠道：食道(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤(vipoma))、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道：肾(腺癌、威尔姆斯肿瘤(Wilm's tumor)(肾胚细胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状上皮细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；肝：肝癌(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞性腺瘤、血管瘤；胆道：胆囊癌、壶腹癌、胆管癌；骨：成骨性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣(osteocartilaginous exostose))、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液纤维瘤(chondromyxofibroma)、骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：头骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤(meningiosarcoma)、神经胶质瘤病)、脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤(松果体瘤)、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质瘤(oligodendroglioma)、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科：子宫(子宫内膜癌)、宫颈(宫颈癌、肿瘤前宫颈病变(pre-tumor cervical dysplasia))、卵巢(卵巢癌(浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌(unclassified carcinoma))、颗膜细胞瘤(granulosa-thecalcell tumor)、塞-莱细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状上皮细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状上皮细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)、输卵管(癌))；血液方面：血液(髓细胞性白血病(急性和慢性)、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome))、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(恶性淋巴瘤)；皮肤：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状上皮细胞癌、卡波西肉瘤、发育不良痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；和肾上腺：神经母细胞瘤。因此，本文所述术语“癌细胞”包括患有任一上述病症或相关病症的细胞。
本发明化合物可与其他治疗剂，尤其是可提高化合物活性或体内处置时间的药剂组合或共同给药。本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物并使用至少一种其他治疗方法。在一个实施方案中，本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和手术治疗。在一个实施方案中，本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和放射疗法。在一个实施方案中，本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和至少一种支持性护理药物(例如，至少一种镇吐药)。在一个实施方案中，本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和至少一种其他化疗剂。在一个具体实施方案中，本发明包括施用至少一种本发明化合物和至少一种抗肿瘤药。在另一实施方案中，本发明包括治疗方案，其中本公开的EZH2抑制剂本身并没有活性或并没有显著活性，但是当其与另一疗法组合时(所述另一疗法作为单独疗法时可以是有活性的或无活性的)，该组合提供有用的治疗效果。
本文所用的术语“共同给药”及其衍生词语是指同时给药或以任意单独的方式相继给药本文所述的EZH2抑制化合物和已知用于治疗癌症的一种或多种其他活性成分(包括化疗和放射治疗)。当向有治疗癌症需要的患者给药时，本文所用术语一种或多种其他活性成分还包括已知的或被证明有有益性质的任意化合物或治疗剂。优选地，如果所述给药不是同时的，那么该化合物以彼此极接近的时间进行给药。此外，所述化合物是否以同一剂型施用并不重要，例如一种化合物可局部给药而另一化合物可口服给药。
通常，在治疗本发明中指定的癌症时，可以共同给药对所治疗的易感肿瘤具有活性的任何抗肿瘤药物。该药物的实例参考V.T.Devita和S.Hellman(主编)的CancerPrinciples and Practice of Oncology，第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams&Wilkins Publishers。本领域一般技术人员将能够根据药物的具体特征和所涉及癌症辨别药物的何种组合将是有用的。可用于本发明的典型抗肿瘤药物包括，但不限于，抗微管剂例如二萜类化合物和长春花生物碱；铂配位络合物；烷基化剂例如氮芥、氧氮磷杂环己二烯(oxazaphosphorine)、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯；抗生素例如蒽环类、放线菌素和博莱霉素；拓扑异构酶II抑制剂例如表鬼臼毒素；抗代谢剂例如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；拓扑异构酶I抑制剂例如喜树碱；激素和激素类似物；DNA甲基转移酶抑制剂例如阿扎胞苷和地西他滨；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促细胞凋亡剂；以及细胞周期信号转导抑制剂。
通常，对所治疗的易感肿瘤具有活性的任意化学治疗剂可与本发明化合物组合使用，条件是该具体药物与采用本发明化合物的疗法在临床上兼容。用于本发明的典型抗肿瘤剂包括，但不限于：烷化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、抗有丝分裂药、核苷类似物、拓扑异构酶I和II抑制剂、激素和激素类似物；维甲酸，组蛋白脱乙酰基酶抑制剂；信号转导通路抑制剂，包括细胞生长或生长因子功能的抑制剂、血管生成抑制剂和丝氨酸/苏氨酸或其他激酶抑制剂；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂；反义疗法和免疫治疗剂，包括单克隆抗体、疫苗或其他生物制剂。
核苷类似物是指转化成三磷酸脱氧核苷酸并代替胞嘧啶并入到复制的DNA中的化合物。DNA甲基转移酶共价地连接至该经修饰的碱基上，导致酶失活以及降低的DNA甲基化。核苷类似物的实例包括阿扎胞苷和地西他滨，它们都用于治疗骨髓增生异常疾病。组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂包括伏立诺他，其用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤。HDAC通过组蛋白脱乙酰基作用来修饰染色质。此外，它们具有各种作用底物，包括各种转录因子和信号分子。其他HDAC抑制剂正在研发。
信号转导通路抑制剂是阻断或抑制化学过程的那些抑制剂，所述化学过程引起细胞内变化。如本文所用，这一变化是细胞增殖或分化或存活。用于本发明的信号转导通路抑制剂包括，但不限于，受体酪氨酸激酶的抑制剂、非受体酪氨酸激酶的抑制剂、SH2/SH3结构域阻断剂、丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂、磷脂酰肌醇-3-OH激酶的抑制剂、肌醇信号传导和Ras癌基因的抑制剂。信号转导通路抑制剂可与上述组合物和方法中的本发明化合物组合使用。
受体激酶血管生成抑制剂也可用于本发明中。涉及VEGFR和TIE-2的血管生成抑制剂在上述针对信号传导抑制剂(两者都是受体酪氨酸激酶)中进行讨论。其他抑制剂可与本发明化合物组合使用。例如，抗VEGF抗体，其不识别VEGFR(受体酪氨酸激酶)，但结合至该配体；整联蛋白(αvβ3)的小分子抑制剂，其抑制血管生成；内皮他丁和血管他丁(非-RTK)也可被证明用于与本发明化合物组合。VEGFR抗体的一个实例是贝伐单抗
生长因子受体的多种抑制剂正在研发且包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂、反义寡核苷酸和适体。任意这些生长因子受体抑制剂可与本发明化合物组合用于本文所述的任意组合物和方法/用途中。曲妥珠单抗是生长因子功能的抗-erbB2抗体抑制剂的实例。生长因子功能的抗-erbB2抗体抑制剂的一个实例是西妥昔单抗(ErbituxTM，C225)。贝伐单抗是直接针对VEGFR的单克隆抗体的实例。表皮生长因子受体的小分子抑制剂的实例包括但不限于拉帕替尼和厄洛替尼甲磺酸伊马替尼是PDGFR抑制剂的一个实例。VEGFR抑制剂的实例包括帕唑帕尼ZD6474、AZD2171、PTK787、舒尼替尼和索拉非尼。
抗微管或抗有丝分裂剂是时相特异性药物(phase specific agent)，其在细胞周期中的M期或有丝分裂期具有抗肿瘤细胞的微管的活性。抗微管剂的实例包括但不限于二萜类化合物(diterpenoid)和长春花生物碱(vinca alkaloid)。
天然来源的二萜类化合物是时相特异性的抗癌剂，其在细胞周期中的G2/M期起作用。认为二萜类化合物通过与该蛋白结合，使微管的β-微管蛋白亚单位稳定。然后使蛋白的分解受到抑制，有丝分裂停止，接着发生细胞死亡。二萜类化合物的实例包括但不限于紫杉醇及其类似物多西他赛。
紫杉醇，5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R,3S)-N-苯甲酰基-3-苯基异丝氨酸酯，其是从太平洋紫杉树(Taxusbrevifolia)中分离出来的天然二萜产物，且作为可注射的溶液市售。其为萜类紫杉烷家族的成员。其在1971年由Wani等人首次分离出来(J。Am。Chem，Soc.,93：2325,1971)，并通过化学和X-射线结晶学方法表征其结构。其活性的机理之一是关于紫杉醇能结合微管蛋白，进而抑制癌细胞生长的能力。Schiff等,Proc.Natl,Acad,Sci。USA,77：1561-1565(1980)；Schiff等,Nature,277：665-667(1979)；Kumar,J。Biol,Chem,256：10435-10441(1981)。有关一些紫杉醇衍生物的合成和抗癌活性的综述，参见D.G.I.Kingston等,Studies in Oranic Chemistry第26卷,标题为“New trends in Natural ProductsChemistry 1986”,Attaur-Rahman,P.W.Le Quesne编辑(Elsevier,Amsterdam,1986)第219-235页。
在美国，已经批准紫杉醇的临床用于治疗难治的卵巢癌(Markman等,YaleJournal of Biology and Medicine,64：583,1991；McGuire等,Ann.Int.,Med.,111：273,1989)和用于治疗乳腺癌(Holmes等,J.Nat.Cancer Inst.,83：1797,1991)。其为治疗皮肤癌(Einzig等,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.,20：46)和头颈癌(Forastire等,Sem.Oncol.,20：56,1990)的可能的候选药物。该化合物还具有治疗多囊性肾病(Woo等,Nature,368：750,1994)、肺癌和疟疾的潜力。采用紫杉醇治疗患者，导致骨髓抑制(多重细胞谱系(multiplecell lineage),Ignoff,R.J.等,Cancer Chemotherapy Pocket Guide,1998)，这与高于阈浓度(50nM)的给药的持续时间有关(Kearns,C.M.等,Seminars in Oncology,3(6)p.16-23,1995)。
多西他赛(Docetaxel)，5β-20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R,3S)-N-羧基-3-苯基异丝氨酸N-叔丁基酯，三水合物，作为可注射的溶液市售。多西他赛可用于治疗乳腺癌。多西他赛是适量(q.v.)紫杉醇的半合成衍生物，其利用天然前体即从欧洲浆果紫杉树的针叶中提取的10-去乙酰基浆果赤霉素III制备。多西他赛的剂量限制性毒性是嗜中性白细胞减少症。
长春花生物碱(Vinca alkaloids)是来源于长春花属植物的时相特异性的抗肿瘤药物。长春花生物碱通过特异性地结合微管蛋白而在细胞周期的M期(有丝分裂)起作用。因此，被结合的微管蛋白分子不能聚合成微管。认为有丝分裂在中期被停止，随后细胞死亡。长春花生物碱的实例包括但不限于长春碱，长春新碱和长春瑞滨。
长春碱(Vinblastine)，长春碱硫酸盐，以注射液市售。尽管已经表明其有可能作为各种实体瘤的二线治疗，但是其主要用于治疗睾丸癌和各种淋巴瘤，包括霍奇金病以及淋巴细胞和组织细胞的淋巴瘤。骨髓抑制是长春碱的剂量限制性副作用。
长春新碱(Vincristine)，长春碱22-氧代-硫酸盐，以注射溶液市售。长春新碱显示用于治疗急性白血病，还发现用于针对霍奇金和非霍奇金恶性淋巴瘤的治疗方案中。脱发和神经作用是长春新碱最常见的副作用，并产生较小程度的骨髓抑制和胃肠粘膜炎作用。
长春瑞滨(Vinorelbine)，3',4'-二脱氢-4'-脱氧-C'-去甲长春碱(norvincaleukoblastine)[R-(R*,R*)-2,3-二羟基丁二酸二盐(1：2)(盐)]，以长春瑞滨酒石酸盐注射溶液市售，是半合成的长春花生物碱。长春瑞滨可作为单独的药物或与其它化学治疗剂(如顺铂)组合，用于治疗各种实体瘤，特别是非小细胞肺癌、晚期乳腺癌和激素难治的前列腺癌。骨髓抑制是长春瑞滨最常见的剂量限制性副作用。
铂配位络合物(Platinum coordination complex)是非时相特异性的抗癌剂，其与DNA相互作用。铂络合物进入肿瘤细胞，进行水合作用，并与DNA形成链内部和链之间的交联，导致对肿瘤不利的生物学作用。铂配位络合物的实例包括但不限于顺铂和卡铂。
顺铂，顺式-二氨二氯合铂，以注射溶液市售。顺铂主要用于治疗转移性睾丸癌和卵巢癌以及晚期的膀胱癌。顺铂的主要剂量限制性副作用是肾毒性和耳毒性，所述肾毒性可通过饮水和利尿来控制。
卡铂，二氨[1,1-环丁烷-二羧酸根(2-)-O,O']合铂，以注射溶液市售。卡铂主要用于晚期卵巢癌的一线和二线治疗。骨髓抑制是卡铂的剂量限制性毒性。
烷化剂是非时相特异性的抗癌药物和强亲电子试剂。通常，烷化剂借助于烷基化作用，通过DNA分子的亲核部分如磷酸基(phosphate)、氨基、巯基、羟基、羧基和咪唑基，与DNA形成共价键。这种烷基化作用破坏核酸功能，导致细胞死亡。烷化剂的实例包括但不限于氮芥(如环磷酰胺、美法仑和苯丁酸氮芥)、磺酸烷基酯(如白消安、亚硝基脲如卡莫司汀)，以及三氮烯(如达卡巴嗪)。
环磷酰胺(Cyclophosphamide)，2-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1,3,2-氧氮磷杂环己二烯2-氧化物一水合物，以注射溶液或片剂市售。环磷酰胺可作为单独的药物或与其它化学治疗剂组合，用于治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。脱发、恶心、呕吐和白细胞减少症是环磷酰胺最常见的剂量限制性副作用。
美法仑(Melphalan)，4-[双(2-氯乙基)氨基]-L-苯基丙氨酸，以注射溶液或片剂市售。美法仑可用于多发性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮癌的姑息疗法。骨髓抑制是美法仑最常见的剂量限制性副作用。
苯丁酸氮芥(Chlorambucil)，4-[双(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，以片剂市售。苯丁酸氮芥可用于慢性淋巴细胞性白血病和恶性淋巴瘤(如淋巴肉瘤、巨滤泡性淋巴瘤和霍奇金病)的姑息疗法。骨髓抑制是苯丁酸氮芥最常见的剂量限制性副作用。
白消安(Busulfan)，1,4-丁二醇二甲磺酸酯，以片剂市售。白消安用于慢性髓细胞性白血病的姑息疗法。骨髓抑制是白消安最常见的剂量限制性副作用。
卡莫司汀(Carmustine)，1,3-[双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲，以单瓶装的冻干产物市售。卡莫司汀可作为单独的药物或与其它药物组合，用于脑瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤的姑息疗法。延迟的骨髓抑制是卡莫司汀最常见的剂量限制性副作用。
达卡巴嗪(Dacarbazine)，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺，以单瓶装的产物市售。达卡巴嗪可用于转移性恶性黑素瘤的治疗，并且可与其它药物组合，用于霍奇金病的二线治疗。恶心、呕吐和厌食是达卡巴嗪最常见的剂量限制性副作用。
抗生素类抗癌剂(Antibiotic anti-neoplastics)是非时相特异性的药物，其结合或嵌入DNA中。通常，这种作用导致稳定的DNA复合物或链断裂，破坏核酸的正常功能，导致细胞死亡。抗生素类抗肿瘤药物的实例包括但不限于放线菌素(如更生霉素)；蒽环类(anthrocyclins)(如柔红霉素和多柔比星)；以及博来霉素。
更生霉素(Dactinomycin，也称为放线菌素D)，以注射液形式市售。更生霉素可用于威尔姆斯肿瘤和横纹肌肉瘤的治疗。恶心、呕吐和厌食是更生霉素最常见的剂量限制性副作用。
柔红霉素(Daunorubicin)，(8S-顺式-)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧基-α-L-来苏-己吡喃糖基)-氧基]-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮盐酸盐，以脂质体可注射形式或可注射形式市售。柔红霉素可在急性非淋巴细胞性白血病和晚期HIV相关的卡波西肉瘤的治疗中用于诱导缓解。骨髓抑制是柔红霉素最常见的剂量限制性副作用。
多柔比星(Doxorubicin)，(8S,10S)-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧-α-L-来苏-己吡喃糖基)氧基]-8-乙醇酰基-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮盐酸盐，以或ADRIAMYCIN注射溶液市售。多柔比星主要用于急性成淋巴细胞性白血病和急性成髓细胞性白血病的治疗，但也是治疗某些实体瘤和淋巴瘤的有用组分。骨髓抑制是多柔比星最常见的剂量限制性副作用。
博来霉素(Bleomycin)，是从轮丝链霉菌(streptomyces verticilus)菌株中分离出来的细胞毒素糖肽类抗生素的混合物，以市售。博来霉素可作为单独的药物或与其它药物组合，用于鳞状细胞癌、淋巴瘤和睾丸癌的姑息疗法。肺部和皮肤的毒性是博来霉素最常见的剂量限制性副作用。
拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于表鬼臼脂毒素。
表鬼臼脂毒素(Epipodophyllotoxins)是来源于曼德拉草(mandrake)植物的时相特异性的抗肿瘤药物。表鬼臼脂毒素通常通过与拓扑异构酶II和DNA形成三元复合物，导致DNA链断裂来影响处于细胞周期的S和G2期的细胞。链断裂物积聚，接着细胞死亡。表鬼臼脂毒素的实例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。
依托泊苷(Etoposide)，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(R)-亚乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液或胶囊市售，并且常称之为VP-16。依托泊苷可作为单独的药物或与其它化疗剂组合，用于治疗睾丸癌和非小细胞肺癌。骨髓抑制是依托泊苷最常见的副作用。白细胞减少症的发生率(incidence)倾向于比血小板减少症的发生率更严重。
替尼泊苷(Teniposide)，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(R)-噻吩亚甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液市售，并且通常称之为VM-26。替尼泊苷可作为单独的药物或与其它化疗剂组合，用于治疗儿童急性白血病。骨髓抑制是替尼泊苷最常见的剂量限制性副作用。替尼泊苷可引起白细胞减少症和血小板减少症。
抗代谢肿瘤药物(Antimetabolite neoplasti)是时相特异性的抗肿瘤药物，其作用于细胞周期的S期(DNA合成)，通过抑制DNA的合成，或者通过抑制嘌呤或嘧啶碱基的合成进而限制DNA的合成。因此，S期不能继续进行下去，接着细胞死亡。抗代谢类抗肿瘤药物的实例包括但不限于氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤，以及吉西他滨。
5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1H,3H)嘧啶二酮，以氟尿嘧啶市售。5-氟尿嘧啶的给药导致胸苷酸合成的抑制，并且还掺入到RNA和DNA中。结果通常是细胞死亡。5-氟尿嘧啶可作为单独的药物或与其它化疗剂组合，用于治疗乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌和胰腺癌。骨髓抑制和粘膜炎是5-氟尿嘧啶的剂量限制性副作用。其它的氟嘧啶类似物包括5-氟脱氧尿嘧啶核苷(氟尿苷)和5-氟脱氧尿嘧啶核苷一磷酸。
阿糖胞苷(Cytarabine)，4-氨基-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-2(1H)-嘧啶酮，以市售，并且通常称之为Ara-C。认为阿糖胞苷在S-期具有细胞时相特异性，其通过将阿糖胞苷末端掺入到生长的DNA链中而抑制DNA链的延长。阿糖胞苷作为单独的药物或与其它化疗剂组合，用于治疗急性白血病。其它的胞苷类似物包括5-氮杂胞苷和2',2'-二氟脱氧胞苷(吉西他滨)。阿糖胞苷引起白细胞减少症、血小板减少症和粘膜炎。
巯基嘌呤，1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮一水合物，以市售。巯基嘌呤在S-期通过至今尚未清楚的机理抑制DNA的合成而具有细胞时相特异性。巯基嘌呤可作为单独的药物或与其它化疗剂组合，用于治疗急性白血病。预期骨髓抑制和胃肠粘膜炎是高剂量巯基嘌呤的副作用。可使用的巯基嘌呤类似物是硫唑嘌呤。
硫鸟嘌呤(Thioguanine)，2-氨基-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮，以市售。硫鸟嘌呤在S-期通过至今尚未清楚的机理抑制DNA的合成而具有细胞时相特异性。硫鸟嘌呤可作为单独的药物或与其它化疗剂组合，用于治疗急性白血病。骨髓抑制，包括白细胞减少症、血小板减少症和贫血是给药硫鸟嘌呤最常见的剂量限制性副作用。然而，还发生胃肠副作用，而且该副作用可能是剂量限制性的。其它的嘌呤类似物包括喷司他丁、赤式羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyl adenine)、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨。
吉西他滨(Gemcitabine)，2'-脱氧-2',2'-二氟胞苷一盐酸盐(β-异构体)，以市售。吉西他滨通过阻断细胞通过G1/S边界的发展在S-期具有细胞时相特异性。吉西他滨可与顺铂组合，用于治疗局部的晚期非小细胞肺癌，也可以单独地用于治疗局部的晚期胰腺癌。骨髓抑制(包括白细胞减少症、血小板减少症和贫血)是给药吉西他滨最常见的剂量限制性副作用。
甲氨蝶呤，N-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸，以甲氨蝶呤钠市售。甲氨蝶呤在S-期具有细胞时相特异性作用，其通过抑制合成嘌呤核苷酸和胸苷酸所需的脱氢叶酸还原酶来抑制DNA的合成、修复和/或复制。甲氨蝶呤可作为单独的药物或与其它化疗剂组合，用于治疗绒毛膜癌、脑膜白血病、非霍奇金淋巴瘤，以及乳腺癌、头癌、颈癌、卵巢癌和膀胱癌。预期骨髓抑制(白细胞减少症、血小板减少症和贫血)和粘膜炎是给药甲氨蝶呤的副作用。
喜树碱(Camptothecins)，包括喜树碱和喜树碱衍生物，其可作为拓扑异构酶I抑制剂来使用或开发。认为喜树碱细胞毒素活性与其拓扑异构酶I抑制活性相关。喜树碱的实例包括但不限于伊立替康、托泊替康，以及下述7-(4-甲基哌嗪子基-亚甲基)-10,11-亚乙二氧基-20-喜树碱的各种旋光体。
盐酸伊立替康(Irinotecan HCl)，(4S)-4,11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶子基哌啶子基)羰基氧基]-1H-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮盐酸盐，以注射溶液市售。
伊立替康(Irinotecan)是喜树碱的衍生物，其与其活性代谢物SN-38一起结合在拓扑异构酶I-DNA复合物上。认为由于双链不可修复的(irreparable)断裂，导致出现细胞毒性，所述断裂是由拓扑异构酶I：DNA：伊立替康或SN-38三元复合物与复制酶之间的相互作用引起的。伊立替康可用于治疗结肠或直肠的转移癌。盐酸伊立替康的剂量限制性副作用是骨髓抑制，包括嗜中性白细胞减少症，以及包括腹泻的胃肠道效应。
盐酸托泊替康(Topotecan HCl)，(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14-(4H,12H)-二酮一盐酸盐，以注射溶液市售。托泊替康是喜树碱的衍生物，其与拓扑异构酶I-DNA复合物结合，并阻止单链断裂物的再连接，所述单链断裂物是拓扑异构酶I响应DNA分子的扭转张力(torsional strain)所引起的。托泊替康用于卵巢转移癌和小细胞肺癌的二线治疗。盐酸托泊替康的剂量限制性副作用是骨髓抑制，主要是嗜中性白细胞减少症。
药物组合物可按照每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量形式存在。该单位依据所治疗的疾病、给药途径和患者的年龄、体重和状况，可含有，例如，0.5mg-1g，优选1mg-700mg，更优选5mg-100mg的式(I)化合物，或药物组合物可按照每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量形式存在。优选的单位剂量组合物是含有如上文所述的活性成分的日剂量或亚剂量或其适当分数的那些。此外，该药物组合物可通过药学领域熟知的任意方法制备。
药物组合物可适于任意合适的途径的施用，例如，口服(包括含服或舌下)、直肠、鼻、局部(包括含服、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内或真皮内)途径。该组合物可通过药物领域已知的任意方法制备，例如，通过将式(I)化合物与一种或多种载体或赋形剂组合。
适用于口服给药的药物组合物可为离散单位，例如片剂或胶囊；粉剂或颗粒；水性或非水液体中的溶液或混悬液；食用泡沫或搅打剂；水包油的液体乳液或油包水的液体乳液。
胶囊是通过以下制备的：按上述制备粉末混合物并填充到成形的明胶鞘中。可在填充操作前，将助流剂和润滑剂，例如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、固体聚乙二醇加至该粉末混合物中。还可加入崩解剂或增溶剂，例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，使得当该胶囊被摄取时提高药物的利用度。
此外，当需要或必要时，还可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入到该混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中所用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括，但不限于，淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂是通过如下制备的，例如，制备粉末混合物、制粒或预压(slugging)、添加润滑剂和崩解剂并压制成片。粉末混合物是通过以下制备的，将适当粉碎的化合物与上述稀释剂或基质混合，并任选地，与粘合剂(例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液延迟剂(例如石蜡)、再吸收加速剂(例如季盐)和/或吸收剂(例如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。用片剂成形模，通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油可将该粉末混合物制粒。然后将该经润滑的混合物压制成片。本发明化合物还可与自由流动的惰性载体组合且无需进行制粒或预压步骤而直接压制成片。可提供由虫胶隔离包衣、糖或聚合材料的包衣和蜡的抛光包衣组成的透明或不透明的保护包衣。可将染料加至这些包衣以区分不同的剂量。
口服流体(例如溶液、糖浆和酏剂)可以单位剂量形式制备，使得给定量含有预定量的式(I)化合物。糖浆可通过将该化合物溶于适当矫味的水溶液中进行制备，而酏剂通过使用无毒的醇媒介物制备。混悬液可通过将该化合物分散于无毒媒介物中进行配制。还可加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其他人造甜味剂)等。
当适当时，可对用于口服给药的单位剂量制剂进行微囊化。也可例如通过将颗粒物质包衣或包埋到聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或维持释放。
适用于直肠给药的药物组合物可以栓剂或灌肠剂存在。
适用于阴道给药的药物组合物可以阴道栓剂、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂存在。
适用于胃肠外给药的药物制剂包括水性和非水无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，其使得该组合物与预期接受者的血液等渗；和水性和非水无菌混悬液，其可包含悬浮剂和增稠剂。该药物组合物可存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密闭的安瓿和小瓶且可储存于冷冻干燥的(冻干的)条件下，其仅需在使用前立即加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
应理解，除了上面特别提及的成分，该药物组合物可根据所探讨的制剂类型包含本领域常用的其他试剂，例如适用于口服给药的那些可包含矫味剂。
本发明化合物的治疗有效量将取决于许多因素，包括，例如，预期接受者的年龄和体重、需要治疗的确切病症和其严重性、该制剂的性质和给药途径且最终由开处方人员慎重决定。但是，治疗贫血的式(I)化合物的有效量的通常范围是每天0.001-100mg/kg接受者体重，适当地范围为每天0.01-10mg/kg体重。对于70kg成年哺乳动物，每天的实际量将适当地为7-700mg且该量可以每日单一剂量给予或以每天若干(例如2、3、4、5或6个)亚剂量给予，使得总的剂量相同。有效量的盐或溶剂合物等可按式(I)化合物本身有效量的比例来确定。预期类似的剂量将适用于治疗上述其他病症。
定义
术语以其被接受的含义使用。以下定义旨在阐明，而非限制所定义的术语。
本文所用术语“烷基”表示具有指定碳原子数的饱和、直链或支链烃部分。术语“(C1-C6)烷基”是指含有1-6个碳原子的烷基。示例性的烷基包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。
本文所用术语“亚烷基”表示具有指定碳原子数的饱和、直链或支链二价烃部分。术语“(C2-C8)亚烷基”是指含有2-8个碳原子的亚烷基。
当术语“烷基”与其他取代基组合使用时，例如“卤代(C1-C4)烷基”、“羟基(C1-C4)烷基”或“苯基(C1-C2)烷基-”，术语“烷基”旨在涵盖二价直链或支链烃基，其中连接点是通过烷基部分。术语“卤代(C1-C4)烷基”旨在表示在含有1-4个碳原子的烷基的1个或多个碳原子上具有1个或多个可相同或不同的卤素原子的基团，其可以是直链或支链碳基。在本发明中所用的“卤代(C1-C4)烷基”的实例包括，但不限于，-CF3(三氟甲基)、-CCl3(三氯甲基)、1,1-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基和六氟异丙基。在本发明中所用的“苯基(C1-C2)烷基-”的实例包括，但不限于，苄基(苯基甲基)、1-甲基苄基(1-苯基乙基)和苯乙基(2-苯基乙基)。在本发明中所用的“羟基(C1-C4)烷基”的实例包括，但不限于，羟基甲基、羟基乙基和羟基异丙基。
“烷氧基”是指含有通过氧连接原子连接的上文所定义的烷基的基团。术语“(C1-C4)烷氧基”是指具有至少1个和最多4个碳原子的直链或支链烃基，其通过氧连接原子连接。在本发明中所用的示例性的“(C1-C4)烷氧基”包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基。
当使用术语“烯基”时，其是指直链或支链的烃链，其含有指定的碳原子数和至少1个且至多4个碳-碳双键。实例包括乙烯基(或亚乙烯基)和丙烯基(或亚丙烯基)。
当使用术语“亚烯基”时，其是指直链或支链二价烃部分，其含有指定的碳原子数和至少1个且至多4个碳-碳双键。
当使用术语“炔基”(或“亚炔基”)时，其是指直链或支链的烃链，其含有指定的碳原子数和至少1个且至多4个碳-碳叁键。实例包括乙炔基(或亚乙炔基)和丙炔基(或亚丙炔基)。
当使用“环烷基”时，其是指含有指定碳原子数的非芳族的、饱和、环状烃环。因此，例如，术语“(C3-C8)环烷基”是指具有3-8个碳原子的非芳族的环状烃环。在本发明中所用的示例性的“(C3-C8)环烷基”包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
本文所用术语“环烯基”是指非芳香、环状烃环，其含有指定的碳原子数和至少一个碳-碳双键。术语“(C5-C8)环烯基”是指具有5-8个环碳原子的非芳香环状烃环。用于本发明的示例性的“(C5-C8)环烯基”包括环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。
本文所用的术语“环烷基氧基-”是指含有通过氧连接原子连接的上文定义的环烷基的基团。本发明中所用的示例性的“(C3-C8)环烷基氧基-”包括环丙基氧基、环丁基氧基、环戊基氧基、环己基氧基、环庚基氧基和环辛基氧基。
本文所用术语“二环烷基”是指含有指定碳原子数的饱和的桥连、稠合或螺环的双环烃环系统。示例性的“(C6-C10)二环烷基”包括，但不限于双环[2.1.1]己基、双环[2.1.1]庚基、双环[3.2.1]辛基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.2.2]壬基、双环[3.3.1]壬基、双环[3.3.2]癸基、双环[4.3.1]癸基、双环[2.2.0]己基、双环[3.1.0]己基、双环[3.2.0]庚基、双环[4.1.0]庚基、八氢并环戊二烯基(octahydropentalenyl)、双环[4.2.0]辛基、十氢萘基、螺[3.3]庚基、螺[2.4]庚基、螺[3.4]辛基、螺[2.5]辛基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基和螺[4.5]癸基。
术语“卤素”和“卤代”表示氯、氟、溴或碘取代基。“羟基”或“羟基”旨在表示基团-OH。
“杂环烷基”表示基团或部分，其包含非芳族的、单价单环或双环基团，其为饱和或部分不饱和的，含有3-10个环原子，包含1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子(包括N-氧化物、硫氧化物和硫二氧化物)。在本发明中所用的杂环烷基的示例性实例包括，但不限于，氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、吡唑啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、噁唑啉基、噻唑啉基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、1,3-二氧杂环戊烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、1,3-二噁烷基、1,4-二噁烷基、1,3-氧硫杂环戊烷基、1,3-氧硫杂环己烷基、1,3-二噻烷基、1,4-二噻烷基、六氢-1H-1,4-二氮杂基、氮杂双环[3.2.1]辛基、氮杂双环[3.3.1]壬基、氮杂双环[4.3.0]壬基、氧杂双环[2.2.1]庚基、1,1-二氧化四氢-2H-噻喃基和1,5,9-三氮杂环癸基。
本文所用术语“杂芳基”是指芳香环系统，其含有一个或多个碳和至少一个选自氮、氧和硫的杂原子(包括N-氧化物)。杂芳基可以是取代或未取代的单环或多环。单环杂芳基可在该环上具有1-4个杂原子，而多环杂芳基可含有1-8个杂原子。双环杂芳基环可含有8-10个成员原子。单环杂芳环可含有5-6个成员原子(碳原子和杂原子)。示例性的5至6元杂芳基包括，但不限于，呋喃基、苯硫基(thiophenyl)、噻吩基(thienyl)、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、噁唑基、异噁唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基和三嗪基。其他示例性的杂芳基包括，但不限于苯并呋喃基、异苯并呋喃基、2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)、二氢苯并二氧杂环己二烯基(dihydrobenzodioxinyl)、苯并噻吩基、吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、苯并咪唑基、二氢苯并咪唑基、苯并噁唑基、二氢苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、二氢苯并异噻唑基、吲唑基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、三唑并吡啶基、嘌呤基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、1,5-二氮杂萘基、1,6-二氮杂萘基、1,7-二氮杂萘基、1,8-二氮杂萘基和蝶啶基。
本文所用术语“氰基”是指基团-CN。
本文所用术语“任选地”是指随后描述的事件可能发生或不发生，且包括发生的事件和不发生的事件二者。
除非另外提及，否则本文所用短语“任选取代的”或其变体表示被一个或多个取代基任选取代，包括多个取代度的情况。该短语不应被理解成重复本文所述和描绘的取代基。
本文所用术语“治疗”是指在先前患有或确诊的患者或受试者中，减轻具体病症、消除或减少该病症的一种或多种症状、减缓或消除该病症的进展和延迟该病症的复发。
本文所用术语“有效量”是指由例如研究人员或临床医师所探索的将引起组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂的量。
术语“治疗有效量”是指与未接受该量的相应受试者相比，引起疾病、障碍或副作用的改进的治疗、治愈、预防或改善，或降低疾病或障碍进展速度的任意量。术语在其范围内还包括提高正常生理功能的有效量。对于在疗法中的用途，治疗有效量的式(I)化合物及其盐可以化学原料施用。此外，所述活性成分可以药物组合物存在。
化合物制备
缩写
Boc2O 一缩二碳酸二叔丁酯
CaCl2 氯化钙
Cbz 羧基苄基
CHCl3 氯仿
CH3CN 乙腈
Cs2CO3 碳酸铯
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCM 二氯甲烷
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
dppf 1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁
EtOAc 乙酸乙酯
EDC N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-碳二亚胺盐酸盐
ES 电喷雾
Et3N 三乙胺
Et2O 二乙醚
EtOH 乙醇
H 小时
HCl 盐酸
H2O 水
HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HPLC 高效液相色谱
Hunig’s base N,N-二异丙基乙胺
LCMS 液相色谱质谱
MeOH 甲醇
MgCl2 氯化镁
MgSO4 硫酸镁
min 分钟
MS 质谱
Na2CO3 碳酸钠
NaH 氢化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NaI 碘化钠
NaOH 氢氧化钠
Na2SO4 硫酸钠
NH4Cl 氯化铵
PdCl2(dppf)-DCM [1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)-二氯
甲烷络合物
Pd2(dba)3 三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯(0)
TBME 叔丁基甲基醚
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
一般性合成方案
本发明化合物可通过各种方法，包括熟知的标准合成方法制备。示例性的一般性合成方法如下所示，然后具体的本发明化合物在工作实施例中进行制备。本领域技术人员将理解，如果本文所描述的取代基与本文所述的合成方法相容，则该取代基可用对该反应条件稳定的合适的保护基团进行保护。该保护基团可在反应顺序中合适的点进行脱除以提供所需的中间体或目标化合物。在下文所述的全部方案中，根据合成化学的一般原则，在有必要的位点，针对敏感或反应性基团使用保护基团。保护基团根据有机合成的标准方法进行处理(T.W.Green和P.G.M.Wuts，(1991)Protecting Groups in Organic Synthesis，John Wiley&Sons，其保护基团引入本文作为参考)。使用本领域技术人员熟悉的方法，在该化合物合成的合适的阶段将这些基团脱除。方法及反应条件的选择以及它们的执行顺序应与本发明化合物的制备一致。起始材料是市售可得的或使用本领域技术人员已知的方法从市售可得的起始材料制备的。
其中L为亚烯基的式(I)化合物可根据反应式1或通过类似方法进行制备。在适当的溶剂(例如二甲基亚砜)中，使用适当的试剂(例如EDC)将适当官能化的烯基-取代的4-羧基吲哚A偶联至适当官能化的烯基-取代的3-氨基甲基吡啶B。在适当的溶剂(例如二氯甲烷)中，使用适当的试剂(例如Grubbs一代或二代RCM催化剂)的酰胺C的闭环置换提供大环D。在适当的溶剂(例如1,4-二噁烷)中，使用适当的试剂(例如盐酸)水解该2-甲氧基吡啶，得到式(I)化合物。
反应式1：式(I)化合物的合成，其中L为亚烯基(其中n为0-6，m为0-6且m+n＝0-6)。
其中L为亚烷基的所述式(I)化合物可根据反应式2或类似方法进行制备。在适当的条件下，例如在催化性钯炭的存在下，在氢气气氛中，在适当的溶剂(例如乙酸乙酯)中氢化大环D，得到饱和的大环E。在适当的溶剂(例如1,4-二噁烷)中，使用适当的试剂(例如盐酸)水解该2-甲氧基吡啶部分，得到式(I)化合物。
反应式2：式(I)化合物的合成，其中L为亚烷基(其中n为0-6，m为0-6且m+n＝0-6)。
实验
以下指引适用于本文所述的全部实验操作。除非另外提及，否则所有反应是在正氮气压下，使用烘干的玻璃器具进行的。所指定的温度是外部的(即浴温度)且是近似的。通过注射器转移对空气和湿度敏感的液体。试剂按原样使用。所用的溶剂是那些供应商标注为“无水”的溶剂。溶液中的试剂所标注的摩尔浓度是近似的且使用前并未相对于相应的标准进行滴定。除非另外提及，否则所有的反应是通过搅拌棒进行搅拌的。除非另外提及，否则加热是使用含有硅油的加热浴进行的。反应是使用配有Biotage微波EXP小瓶(0.2–20mL)和隔垫和瓶盖的Biotage InitiatorTM 2.0，用微波辐射(0–400W，2.45GHz)进行的。基于溶剂和离子电荷所使用的辐射水平(即高、正常、低)是基于供应商的说明。使用干冰/丙酮或干冰/2-丙醇将温度冷却至-70℃以下。用作干燥剂的硫酸镁和硫酸钠是无水级别的且可互换使用。被描述为“真空”或“减压下”除去的溶剂是通过旋转蒸发完成的。
制备型正相硅胶色谱是使用以下进行的：配有RediSep或ISCO Gold硅胶柱(4g-330g)的Teledyne ISCO CombiFlash Companion仪器或配有SF25硅胶柱(4g–3-00g)的Analogix IF280仪器或配有HP硅胶柱(10g–100g)的Biotage SP1仪器。除非另外提及，否则反相HPLC纯化是使用YMC-pack柱(ODS-A 75x30mm)作为固相进行的。除非另外提及，否则使用25mL/min A(乙腈-0.1％TFA):B(水-0.1％TFA)的移动相，10-80％梯度A(10min)，在214nM处进行UV检测。
PE Sciex API 150单四极杆质谱仪(PE Sciex，Thornhill，Ontario，Canada)是阳离子检测模式下，使用电喷雾电离进行操作。该雾化气体产生自零空气发生器(BalstonInc.，Haverhill，MA，USA)并以65psi递送，而所述气帘气(curtain gas)是以50psi从Dewar液氮容器中递送的高纯氮。施加到电喷雾针上的电压是4.8kV。室口(orifice)设定在25V且质谱仪以0.5扫描/秒的速率进行扫描，其使用0.2amu的步幅质量并收集分布数据。
方法A，LCMS。使用配有Hamilton 10uL注射器(其执行向Valco 10通进样阀的注入)的CTC PAL自动采样器(LEAP Technologies，Carrboro，NC)，将样品送入该质谱仪。所述HPLC泵是Shimadzu LC-10ADvp(Shimadzu Scientific Instruments，Columbia，MD)，其以0.3mL/min和在3.2分钟内由4.5％A至90％B的线性梯度，然后保持0.4分钟。流动相由容器A中的100％(H2O 0.02％TFA)和容器B中的100％(CH3CN 0.018％TFA)组成。固定相是Aquasil(C18)且柱尺寸为1mm x 40mm。检测是由214nm处的UV、蒸发光散射(ELSD)和MS进行的。
方法B，LCMS。或者，使用具有LC/MS的Agilent 1100分析型HPLC系统并在1mL/min和在2.2分钟内由5％A至100％B的线性梯度，然后保持0.4min。流动相由容器A中的100％(H2O 0.02％TFA)和容器B中的100％(CH3CN 0.018％TFA)组成。固定相是具有3.5um颗粒尺寸的Zobax(C8)且柱尺寸为2.1mm x 50mm。检测是由214nm处的UV、蒸发光散射(ELSD)和MS进行的。
方法C，LCMS。或者，使用配有毛细管柱(50×4.6mm，5μm)的MDSSCIEX API 2000。HPLC是在配有柱Zorbax SB-C18(50×4.6mm，1.8μm)的Agilent-1200系列UPLC系统上进行的，其用CH3CN:醋酸铵缓冲液进行洗脱。该反应是在微波(CEM，Discover)中进行的。
1H-NMR谱在400MHz进行记录，其使用Bruker AVANCE 400MHz仪器，配有ACD Spectmanager v.10用于再处理。所指代的多重性为：s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quint＝五重峰，sxt＝六重峰，m＝多重峰，dd＝双二重峰，dt＝双三重峰等和br表示宽信号。除非另外提及，否则所有NMR是在DMSO-d6中进行。
分析型HPLC：产物用以下进行分析，Agilent 1100分析型色谱系统，具有4.5x75mm Zorbax XDB-C18柱(3.5um)，梯度为在4分钟内从5％CH3CN(0.1％甲酸)至95％CH3CN(0.1％甲酸)的H2O溶液(0.1％甲酸)以2mL/min进行，并且接着保持1min。
实施例的制备
实施例1：(E)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮
4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲腈的制备，
在-78℃，向2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-甲腈(1.5g，9.25mmol)在四氢呋喃(40mL)中的溶液中加入双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(10.17mL，10.17mmol)并将该混合物在-78℃搅拌1小时。加入3-溴丙-1-烯(0.880mL，10.17mmol)并将该混合物在-78℃搅拌1小时并历时1小时温热至0℃。然后将该混合物在0℃搅拌3小时。将该反应用饱和NH4Cl水溶液淬灭并用EtOAc(3x)萃取。将该合并的有机物用Na2SO4干燥并浓缩。将该残余物使用反相HPLC纯化，其使用Trilution软件，以及phenomenex Gemini 5u C18(2)100A，AXIA30x100mm5micron，运行10-分钟(30mL/min，40％ACN/H2O(0.1％甲酸)至80％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm处进行UV检测，得到4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲腈(1.01g，54％)，其为淡黄色油。LC-MS(ES)m/z＝203[M+H]+。
(4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲胺的制备，
在0℃，向4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲腈(700mg，3.46mmol)在二乙醚(15mL)中的溶液中加入LAH(2M在THF中，3.46mL，6.92mmol)并将该混合物缓慢温热至室温并在室温搅拌3小时。将该混合物用冰浴冷却并用最小量的水淬灭(直至不再有氢气产生)。将该混合物用DCM处理并过滤并将残余物用DCM:MeOH(10:1)洗涤。将合并的有机相浓缩并将残余物使用柱色谱(硅胶，在DCM中的0-13％MeOH)纯化，得到(4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲胺(604mg，85％)，其为淡黄色油。LC-MS(ES)m/z＝190(主要)207[M+H]+(次要)。
3-烯丙基-6-氯-1H-吲哚-4-甲酸甲酯的制备，
向6-氯-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(1000mg，4.77mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入烯丙醇(0.324mL，4.77mmol)并将该混合物通过鼓入氮气脱气5分钟。加入三乙基硼烷(1.431mL，1.431mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(276mg，0.239mmol)并将该混合物加热至75℃并在75℃搅拌18小时。将该混合物浓缩并将残余物使用柱色谱(硅胶，在己烷中的0-70％EtOAc)纯化，得到3-烯丙基-6-氯-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(714mg，60％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝250[M+H]+。
3-烯丙基-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯的制备，
向3-烯丙基-6-氯-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(700mg，2.80mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入氢化钠(60wt％的矿物油中的分散体，168mg，4.21mmol)并将该混合物在0℃搅拌30分钟。加入2-碘丙烷(620mg，3.64mmol)并将该反应在室温搅拌18小时。将该混合物用10％NH4Cl水溶液淬灭并用EtOAc(3x)萃取。将该合并的有机物干燥(Na2SO4)并浓缩，将残余物使用柱色谱纯化(硅胶，在己烷中的0-60％EtOAc)，得到3-烯丙基-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(550mg，67％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝292[M+H]+。
3-烯丙基-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸的制备，
向3-烯丙基-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(500mg，1.714mmol)在甲醇(8mL)中的溶液中加入氢氧化钠水溶液(6M，1.428mL，8.57mmol)并将该混合物在室温搅拌18小时。将该混合物浓缩以除去甲醇并将所得水溶液使用1N HCl酸化至pH 3，然后用DCM(3x)萃取。将该合并的有机物用Na2SO4干燥并浓缩，得到3-烯丙基-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(445mg，93％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝278[M+H]+。
3-烯丙基-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺的制备，
向3-烯丙基-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(442mg，1.591mmol)在二甲基亚砜(8mL)中的溶液中加入(4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲胺(345mg，1.671mmol)、EDC(610mg，3.18mmol)和N-甲基吗啉(0.875mL，7.96mmol)并将该混合物在室温搅拌18小时。将该混合物用水淬灭并用EtOAc(3x)萃取。将该合并的有机物用Na2SO4干燥并浓缩。将该残余物使用柱色谱(硅胶，在己烷中0-100％EtOAc)纯化，得到3-烯丙基-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺(550mg，74％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝466[M+H]+。
(E)-2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮和(Z)-2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮的制备，
向3-烯丙基-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-6-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺(200mg，0.429mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入Grubbs二代催化剂(36.4mg，0.043mmol)并将该混合物在氮气氛下回流搅拌2小时。将该混合物稀释并过滤。将该滤液浓缩并将残余物使用反相HPLC纯化，其使用Trilution软件，以及phenomenex Gemini 5u C18(2)100A，AXIA 30x100mm 5micron，运行10-分钟(30mL/min，50％ACN/H2O(0.1％TFA)至85％ACN/H2O(0.1％TFA))，在254nm处进行UV检测，得到(E)-2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(46mg，24％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝438[M+H]+。
还分离出(Z)-2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(21mg，11％)，其为白色固体LC-MS(ES)m/z＝438[M+H]+。
(E)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮的制备，
向(E)-2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-苯并[11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(15mg，0.034mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中加入HCl的1,4-二噁烷溶液(4M，500μl，2.000mmol)并将该混合物在70℃搅拌20小时。将该混合物浓缩并将残余物使用反相HPLC纯化，其使用Trilution软件，以及phenomenex Gemini 5u C18(2)100A，AXIA 30x100mm 5micron，运行10-分钟(30mL/min，40％ACN/H2O(0.1％甲酸)至80％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm处进行UV检测，得到(E)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(12mg)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝424[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δppm 1.39(d，J＝6.80Hz，6H)2.11(s，3H)2.17(br.s.，2H)2.54(br.s.，2H)3.28(br.s.，2H)4.21(br.s.，2H)4.70-4.81(m，1H)5.13(br.s.，2H)5.83(s，1H)7.00(s，1H)7.37(s，1H)7.61-7.75(m，1H)8.08(br.s.，1H)11.27(s，1H)。
实施例2:(Z)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮，
向(Z)-2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(18mg，0.041mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中加入HCl的1,4-二噁烷溶液(4M，500μl，2.000mmol)并将该混合物在70℃搅拌20小时。将该混合物浓缩并将残余物用CH3CN洗涤并在真空干燥，得到(Z)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(17mg)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝424[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.44(d J＝7.05Hz，6H)2.12(s，3H)2.32-2.42(m，2H)2.84(t，J＝6.95Hz，2H)3.45(d，J＝5.56Hz，2H)4.43(d，J＝5.31Hz，2H)4.69-4.80(m，1H)5.07-5.21(m，2H)5.98(s，1H)7.01(d，J＝1.52Hz，1H)7.42(s，1H)7.65(d，J＝1.77Hz，1H)8.28(t，J＝5.43Hz，1H)11.48(br.s.，1H)。
实施例3:2-氯-4-异丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮
2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮的制备，
将(E)-2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(30mg，0.068mmol)在乙酸乙酯(2mL)中的溶液通过鼓入氮气脱气10分钟。加入Pt/C(5wt％，8mg)并将该溶液用氢气吹扫5分钟，然后在氢气气氛(气球)下搅拌1小时。将该混合物过滤并将滤液浓缩，得到2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(28mg，93％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝440[M+H]+。
2-氯-4-异丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮的制备，
向2-氯-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(26mg，0.059mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中加入HCl的1,4-二噁烷溶液(4M，500μl，2.000mmol)并将该混合物在70℃搅拌20小时。将该混合物浓缩并将残余物用CH3CN洗涤并真空干燥，得到2-氯-4-异丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(25mg)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝426[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.25(br.s.，2H)1.35-1.43(m，8H)1.74-1.82(m，2H)2.12(s，3H)2.54-2.62(m，2H)2.82(t，J＝6.57Hz，2H)4.50(d，J＝5.56Hz，2H)4.66-4.79(m，1H)5.93(s，1H)6.97(d，J＝1.77Hz，1H)7.34(s，1H)7.62(d，J＝1.77Hz，1H)8.54(t，J＝5.56Hz，1H)11.46(s，1H)
实施例4:(E)-4-异丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮
3-烯丙基-6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯的制备
向6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(700mg，2.76mmol)在THF(12mL)中的溶液中加入烯丙醇(0.187mL，2.76mmol)，将该混合物通过鼓入氮气脱气5分钟。加入Pd(PPh3)4(159mg，0.138mmol)和三乙基硼烷(1M，THF，0.827mL，0.827mmol)并将该混合物加热至75℃并搅拌7小时。将该混合物浓缩并将残余物使用柱色谱纯化(硅胶，0-60％EtOAc在己烷中)，得到3-烯丙基-6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(535mg，66％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝293.9，295.9[M+H]+。
3-烯丙基-6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯的制备
向3-烯丙基-6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(530mg，1.802mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入NaH(60％的矿物油中的分散物，108mg，2.70mmol)并将该混合物在0℃搅拌30min。加入2-碘丙烷(0.234mL，2.342mmol)并将该反应混合物在室温搅拌18小时。将该混合物用10％NH4Cl水溶液淬灭并用EtOAc(3x)萃取。将该合并的有机物用Na2SO4干燥并浓缩。将该残余物使用柱色谱(硅胶，在己烷中的0-60％EtOAc)纯化，得到3-烯丙基-6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(440mg，73％)，其为淡黄色油。LC-MS(ES)m/z＝336.0，338.1[M+H]+。
3-烯丙基-6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸的制备
向3-烯丙基-6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(440mg，1.309mmol)在MeOH(6mL)中的溶液中加入NaOH水溶液(5M，1.091mL，6.54mmol)并将该混合物在室温搅拌18小时。将该混合物浓缩以除去MeOH并将所得水溶液使用HCl水溶液(1N)酸化至pH 3，然后用DCM(3x)萃取。将该合并的有机物用Na2SO4干燥并浓缩，得到3-烯丙基-6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(395mg，94％)，其为淡黄色固体。LC-MS(ES)m/z＝322.0，324.0[M+H]+。
3-烯丙基-6-溴-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺的制备
向3-烯丙基-6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(390mg，1.210mmol)在DMSO(6mL)中的溶液中加入(4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲胺(250mg，1.210mmol)、N-甲基吗啉(0.798mL，7.26mmol)、EDC(464mg，2.421mmol)和HOAt(330mg，2.421mmol)并将该混合物在室温搅拌18小时。将该混合物用水淬灭并用EtOAc(3x)萃取。将该合并的有机物用Na2SO4干燥并浓缩。将该残余物使用柱色谱(硅胶，在己烷中的0-100％EtOAc)纯化，得到3-烯丙基-6-溴-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺(530mg，86％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝510.2，512.2[M+H]+。
(E)-2-溴-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮的制备
将3-烯丙基-6-溴-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺(360mg，0.705mmol)在DCM(30mL)中的溶液通过鼓入氮气进行脱气5分钟。加入Grubbs一代催化剂(32mg，0.038mmol)并将该反应混合物在室温搅拌7小时。将该混合物浓缩并将残余物使用柱色谱(硅胶，在己烷中的0-80％EtOAc)纯化，得到(E)-2-溴-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(178mg，52％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝482.1，484.1[M+H]+。
(E)-4-(5-(4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-17-氧代-6,9,10,15,16,17-六氢-4H-吡啶并[4’,3’:11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备
向10mL微波管中加入(E)-2-溴-4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(80mg，0.166mmol)、4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(84mg，0.216mmol)、DME(2mL)、水(0.667mL)和Na2CO3水溶液(2M，0.083mL，0.166mmol)并将该混合物通过鼓入氮气进行脱气5分钟。加入PdCl2(dppf)-DCM(10.83mg，0.013mmol)并将该管密封。将该混合物在140℃微波反应器中加热20min。将该混合物浓缩并将该残余物溶于MeOH中并过滤。将该滤液使用反相HPLC纯化，其使用Trilution软件，Gemini 5u C18 110A，AXIA 30x50mm 5micron，运行10-分钟(30mL/min，45％ACN/H2O(0.1％NH4OH)至80％ACN/H2O(0.1％NH4OH))，在254nm处进行UV检测，得到(E)-4-(5-(4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-17-氧代-6,9,10,15,16,17-六氢-4H-吡啶并[4’,3’:11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(67mg。61％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝665.5[M+H]+(次要)，305.3(主要)。
(E)-4-异丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮二盐酸盐的制备
向(E)-4-(5-(4-异丙基-14-甲氧基-12-甲基-17-氧代-6,9,10,15,16,17-六氢-4H-吡啶并[4’,3’:11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(64mg，0.096mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中加入HCl(4M在1,4-二噁烷中，0.6mL，2.400mmol)并将该混合物在70℃搅拌20小时。将该混合物浓缩并将残余物使用反相HPLC纯化，其使用Trilution软件，phenomenex Gemini 5u C18(2)100A，AXIA30x100mm 5micron，运行10-分钟(30mL/min，20％ACN/H2O(0.1％甲酸)至80％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm处进行UV检测，得到(E)-4-异丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮二盐酸盐(39mg，64％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝551.3[M+H]+(次要)，276.2(主要)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:1.44(d，J＝6.4Hz，6H)，2.15(s，3H)，2.17–2.25(m，2H)，2.54–2.64(m，3H),3.22–3.37(m，6H)，3.88–4.02(m，5H)，4.20–4.34(m，1H)，4.85-4.96(m，1H)，5.10–5.23(m，2H)，5.94(s，1H)，7.28-7.36(m，2H)，7.39(s，1H)，7.89(s，1H)，8.16–8.20(m，1H)，8.28–8.40(m，1H)，8.50–8.53(m，1H)，9.44(br.s.，2H)，11.49(br.s.，1H)。
实施例5.(E)-4-异丙基-12-甲基-14,17-二氧代-6,9,10,13,14,15,16,17-八氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-甲腈
向10mL可密封管中加入(E)-2-溴-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(50mg，0.107mmol)、氰化锌(14.41mg，0.123mmol)、DMF(1mL)、dppf(7.69mg，0.014mmol)、锌(1.745mg，0.027mmol)和Pd2(dba)3(12.71mg，0.014mmol)并将该混合物通过鼓入氮气进行脱气。将该管密封并将该混合物在120℃加热6小时。将该混合物浓缩并将残余物用DMSO处理并过滤。将该滤液使用反相HPLC纯化，其使用Trilution软件，phenomenex Gemini 5uC18(2)100A，AXIA 30x100mm 5micron，运行10-分钟(30mL/min，38％ACN/H2O(0.1％甲酸)至78％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm处UV检测，得到(E)-4-异丙基-12-甲基-14,17-二氧代-6,9,10,13,14,15,16,17-八氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-甲腈(15mg，33％)的产物，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝415.2[M+H]+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ:1.43(d，J＝6.6Hz，6H)，2.12(s，3H)，2.18(br.s.，2H)，2.54-2.62(m，2H)，3.30-3.33(m，2H)，4.09-4.35(m，2H)，4.87(quin.，J＝6.6Hz，1H)，5.03-5.21(m，2H)，5.84(s，1H)，7.32(d，J＝1.3Hz，1H)，7.68(s，1H)，8.21(d，J＝1.3Hz，2H)，11.29(s，1H)。
实施例6:(E)-2-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮
向10mL微波管中加入(E)-2-溴-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(70mg，0.090mmol)、NaI(2.69mg，0.018mmol)、锌(1.172mg，0.018mmol)、DMSO(2mL)和DBU(0.014mL，0.090mmol)并将该混合物通过鼓入氮气脱气5分钟。加入2-甲基丁-3-炔-2-醇(37.7mg，0.448mmol)和Pd(PPh3)4(10.36mg，8.97μmol)并将该管密封。将该混合物在85℃搅拌3小时。将该混合物冷却并过滤。将该滤液使用反相HPLC纯化，其使用Trilution软件，phenomenex Gemini 5u C18(2)100A，AXIA 30x100mm 5micron，运行10-分钟(30mL/min，35％ACN/H2O(0.1％甲酸)至70％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm处UV检测，得到(E)-2-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(13mg，30％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝472.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:1.40(d，J＝6.8Hz，6H)，1.50(s，6H)，2.11(s，3H)，2.18(br.s.，2H)，2.55(br.s.，2H)，3.29(br.s.，2H)，4.22(br.s.，2H)，4.78(quin.，J＝6.6Hz，1H)，5.08-5.22(m，2H)，5.46(s，1H)，5.84(s，1H)，7.01(d，J＝1.0Hz，1H)，7.41(s，1H)，7.60(d，J＝1.3Hz，1H)，8.01(br.s.，1H)，11.30(s，1H)。
测定方案
评估本文包含的化合物抑制PRC2复合物中EZH2的甲基转移酶活性的能力。人PRC2复合物是通过如下制备的：在Sf9细胞中共表达5个成员蛋白(FLAG-EZH2、EED、SUZ12、RbAp48、AEBP2)的每一个，然后共纯化。酶活性是通过闪烁迫近分析法(SPA)测定的，其中将氚代甲基从3H-SAM转移至单核小体(mononucleosome)的组蛋白H3上的赖氨酸残基上，所述单核小体是从HeLa细胞纯化得到的。单核小体在SPA珠上被捕获并将所得信号在ViewLux读板器上读取。
部分A.化合物的制备
1.将固体溶于100％DMSO中制备10mM化合物储备液。
2.在384孔板上，将各测试化合物溶于100％DMSO以建立11个点的连续稀释(1:3稀释，最高浓度10mM)，第6栏和第18栏为DMSO对照。
3.将100nL化合物从稀释板分配至反应板(Grenier Bio-One，384孔，Cat#784075)。
部分B.试剂的制备
制备以下溶液：
1. 50mM Tris-HCl，pH 8：每1L碱缓冲液，混合1M Tris-HCl(pH 8)(50mL)和蒸馏水(950mL)。
2. 1x测试缓冲液：每10mL 1x测试缓冲液，混合50mM Tris-HCl(pH 8)(9958uL)，1M MgCl2(20uL)，2M DTT(20uL)和10％吐温-20(2uL)以提供50mM Tris-HCl(pH 8)、2mMMgCl2、4mM DTT、0.002％吐温-20的最终浓度。
3. 2x酶溶液：每10mL 2x酶溶液，混合1x测试缓冲液和PRC2复合物以提供10nM的最终酶浓度。
4. SPA珠混悬液：每1mL的SPA珠混悬液，混合PS-PEI涂覆的LEADSeeker珠子(40mg)和ddH2O(1mL)，以提供40mg/mL的最终浓度。
5. 2x底物溶液：每10mL 2x底物溶液，混合1x测试缓冲液(9728.55uL)，800ug/mL单核小体(125uL)，1mM冷的SAM(4uL)和7.02uM3H-SAM(142.45uL；0.55mCi/mL)以提供5ug/mL核小体、0.2uM冷的SAM和0.05uM 3H-SAM的最终浓度。
6. 2.67x淬灭/珠子混合物：每10mL 2.67x淬灭/珠子混合物，混合ddH2O(9358uL)，10mM冷的SAM(267uL)，40mg/mL珠子混悬液(375uL)以提供100uM冷的SAM和0.5mg/mL SPA珠子的最终浓度。
部分C.在384孔Grenier Bio-One板上的测试反应
化合物的添加
1.以100nL/孔将100x化合物分配至测试孔中(如上所述)。
2.以100nL/孔将100％DMSO分配至第6和18栏，分别用于高对照和低对照。
测定
1.以5uL/孔将1x测试缓冲液分配至第18栏(低对照反应)。
2.以5uL/孔将2x酶溶液分配至第1-17、19-24栏。
3.以500rpm旋转该测试板约1分钟。
4.堆叠该测试板，覆盖最顶端的板。
5.在室温，用该酶培养该化合物/DMSO 30分钟。
6.以5uL/孔将2x底物溶液分配至第1-24栏。
7.以500rpm旋转该测试板约1分钟。
8.堆叠该测试板，覆盖最顶端的板。
9.在室温培养该测试板1小时。
淬灭/珠子的添加
1.以5uL/孔将3x淬灭/珠混合物分配至第1-24栏。
2.用粘性TopSeal密封各测试板的顶部。
3.以500rpm旋转该测试板约1分钟。
4.使该板保持平衡>20min。
读板
1.在Viewlux读板器上读取测试板，其采用613nm的发射滤波器，读取时间为300秒。
试剂的加入可采取手动或用自动液体处理器。
*该测试中的最终DMSO浓度为1％。
*阳性对照是在第6栏；阴性对照是在第18栏。
*化合物的最终起始浓度为100μM。
结果
抑制百分比是由各化合物浓度相对于DMSO对照计算的并将所得值使用ABASE数据拟合软件包内的标准IC50拟合参数进行拟合。
本发明示例性的化合物通常根据上述或类似的测定进行测试且被发现是EZH2的抑制剂。该IC50值的范围是约40nM至约500nM。根据本文所示测试测定的具体生物活性列于下表。重复该测试流程可得到略有不同的IC50值。
实施例 EZH2 IC50(nM)
1 40
2 316
3 500
4 32
5 158
6 200

Claims (16)

1.式(I)化合物：
其中：
L为(C2-C8)亚烷基或(C2-C8)亚烯基；
R1为氢、卤素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基(C2-C6)烯基、(C5-C6)环烯基、(C5-C6)环烯基(C1-C6)烷基、(C5-C6)环烯基(C2-C6)烯基、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-C6)烷基-、杂环烷基(C2-C6)烯基、苯基、苯基(C1-C6)烷基、苯基(C2-C6)烯基、杂芳基、杂芳基(C1-C6)烷基、杂芳基(C2-C6)烯基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-C(O)NRaNRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb、-NRaNRaC(O)ORa、-ORa、-OC(O)Ra或-OC(O)NRaRb，其中各环烷基、环烯基、双环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；
R2为氢、卤素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基(C2-C6)烯基、(C5-C6)环烯基、(C5-C6)环烯基(C1-C6)烷基、(C5-C6)环烯基(C2-C6)烯基、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-C6)烷基-、杂环烷基(C2-C6)烯基、苯基、苯基(C1-C6)烷基、苯基(C2-C6)烯基、杂芳基、杂芳基(C1-C6)烷基、杂芳基(C2-C6)烯基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb或-C(O)NRaNRaRb，其中各环烷基、环烯基、双环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；
R3选自：氢、卤素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C4)烷氧基、-B(OH)2、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C4)烷基-、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-C4)烷基-、苯基、苯基(C1-C2)烷基、杂芳基、杂芳基(C1-C2)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-C(O)NRaNRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb、-NRaNRaC(O)ORa、-ORa、RaO(C1-C4)烷基-、RaO(C3-C6)炔基-、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb，其中各环烷基、双环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；
各Rc独立地为-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；和
Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、杂芳基(C1-C4)烷基-或杂芳基，其中任意所述环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；
或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表5-或6-元饱和或不饱和环，其任选地含有选自氧、氮和硫的额外的杂原子，其中所述环任选独立地被以下基团取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羟基、氧代基团、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述环任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合；
或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合的6-至10-元桥连的双环系统；
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为氢、卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基。
3.权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为(C1-C4)烷基。
4.权利要求1-3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为氢、卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基。
5.权利要求4的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为(C1-C4)烷基。
6.权利要求1-5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为卤素。
7.权利要求1-5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为杂芳基，其任选独立地被以下基团取代1或2次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；
各Rc独立地为-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；和
Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、杂芳基(C1-C2)烷基-或杂芳基、其中任意所述环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；
或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表5-或6-元饱和或不饱和环，其任选地含有选自氧、氮和硫的额外的杂原子，其中所述环任选独立地被以下基团取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羟基、氧代基团、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述环任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合；
或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合的6-至10-元桥连的双环系统。
8.权利要求7的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为吡啶基，其任选被以下基团取代：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-杂环烷基-、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、杂环烷基、苯基、杂芳基、苯基(C1-C2)烷基或杂芳基(C1-C2)烷基；
各Rc独立地为-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；和
Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、杂芳基(C1-C2)烷基-或杂芳基，其中任意所述环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳基任选独立地被以下基团取代1、2或3次：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；
或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表5-或6-元饱和或不饱和环，其任选地含有选自氧、氮和硫的额外的杂原子，其中所述环任选独立地被以下基团取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羟基、氧代基团、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述环任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合；
或Ra和Rb与它们所连接的氮一起代表任选地与(C3-C6)环烷基、杂环烷基、苯基或杂芳环稠合的6-至10-元桥连的双环系统。
9.权利要求8的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为吡啶基，其任选被以下基团取代：杂环烷基或(C1-C4)烷基-杂环烷基-。
10.权利要求1-9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中L为(C4-C5)亚烷基或(C4-C5)亚烯基。
11.权利要求10的化合物或其药学上可接受的盐，其中L选自：
12.权利要求1的化合物，其为：
(E)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
(Z)-2-氯-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
2-氯-4-异丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
(E)-4-异丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
(E)-4-异丙基-12-甲基-14,17-二氧代-6,9,10,13,14,15,16,17-八氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-甲腈；或
(E)-2-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-异丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氢-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮杂环十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；
或其药学上可接受的盐。
13.药物组合物，其包含权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
14.治疗癌症的方法，其包括向患有癌症的患者给药治疗有效量的权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求13的药物组合物。
15.权利要求14的方法，其中所述癌症选自：脑癌(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、莱-杜病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀胱癌、头颈癌、肾脏癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤和甲状腺癌。
16.权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗EZH2介导的障碍的药物中的用途。
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