CN1062310C - 植物间基因组杂交亲和性的分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种采用生化方法对植物间基因组杂交亲和性的分析方法，该方法首先提取所需要改良的农作物及其它外源基因植物的总DAN，然后总DNA经处理，标上(³H)DNTP为探针，经限制性内切酶酶切、电泳，然后通过印渍方法转印到硝酸纤维膜上进行Southern杂交，再通过放射自显影对杂交膜进行检查，放入闪烁仪中，测定其放射温度，再对测定数据进行处理。

Description

植物间基因组杂交亲和性的分析方法

本发明涉及采用生物技术对农作物间基因组杂交亲和性的分析方法

作物品种的改良是提高粮食产量的重要措施之一，运用生物技术与常规技术相结合，原则是提高育种工作水平的重要途径。由于现有的品种资源中缺乏抵抗害和逆境的基因以及适应高水肥的基因型，人们自然把目标转向各种各样的野生及种外的基因源，但是这些异种基因源植物能否和所需品种进行常规杂交，杂交成功率如何，可以通过它们基因组间杂交亲和程度的分析进行予测，本发明研制出一种定量测定植物间基因组杂交亲和的分析方法，它可以非常直观的作出理论依据。

本发明目标在于，研制的植物间基因组杂交亲和性分析方法，该方法用经限制性的内切酶和超声波处理后标有｜³H｜DNTP的所需改良的植物总加A为探针，对经酶切、电泳、印渍转印至硝酸纤维素膜上的所需改良植物及外源基因植物总DNA酶切谱带进行Sourther杂交，杂交膜经放射自显影检查后，用液体闪烁仪测定其放射性强度，然后在对测定数据进行处理，即可获得结果。

本发明所述的一种植物间基因组杂交亲和性的分析方法，该方法首先提取所需要改良的农作物及其它外源基因(野生植物及其它基因源植物)的总DAN，然后总DNA通过限制性内切酶及超声波处理，制备成0.1-5Kb的DNA片段再进行｜³H｜DNTP标记，制备成放射性探针；将提取的所需改良的农作物及其外源基因植物的总DNA经限制性内切酶酶切、电泳，然后通过印渍方法转印到硝酸纤维素膜上，用制备的同位素探针和转印后的硝酸纤维素膜进行Southern杂交，然后再通过放射自显影对每张杂交膜进行检查，放入闪烁仪中，测定其放射强度，再对测定数据进行处理。

实施例(取新冬2号小麦为所需改良植物，以大赖草、新春2号小麦为外源基因植物进行杂交亲和性分析)

首先提取出新冬2号小麦，大赖草，新春2号小麦的总DNA，其次将新冬2号小麦总DNA通过限制性内切酶及超声波处理，制备出0.1-5Kb的DNA片段，再通过缺口标记标上｜³H｜DNTP，分离纯化后，获得探针，将新冬2号总DNA、大赖草总DNA，新春2号总DNA经限制性内切酶酶切，电泳分别转至硝酸纤维素膜上，将这些膜放在一个杂交代中(同时加一条相同面积的空白薄膜作时照)，与探针进行Southern杂交，经放射自显影确定各膜是否有污染斑点后，将这些薄膜分别装入样品瓶中在闪烁仪中测定其放射强度，处理数据，其所得结果如下：

样品	CPN	减对照后CPN	%百分比
新冬2号小麦新春2号小麦大赖草空白对照	14114914730201672	12442747513480	10060.110.80

Claims (3)

1、一种植物间基因组杂交亲和性的分析方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

a)、提取所需要改良植物的总DNA，并通过限制性内切酶及超声波处理，制备成0.1-5Kb的DNA片段，将该总DNA片段进行｜³H｜DNTP标记，制备成放射性探针。

b)、分别提取所需改良的植物的总DNA和外源基因植物的总DNA，其中所述的外源基因植物选自野生植物及其它基因源植物，将所述总DNA分别经限制性内切酶酶切，电泳，然后通过印迹方法分别转印到硝酸纤维素膜上；

c)、用制备的同位素探针和转印后的硝酸纤维素膜进行Southern杂交；

d)、根据杂交信号的相对强度确定植物间的亲和性。

2、根据权利要求1所述的植物间基因组杂交亲和性的分析方法，其特征在于，其中步骤d)的操作过程是通过放射自显影对每张杂交膜进行检查，将检查无污染斑点的杂交膜分别装入样品瓶中，在闪烁仪中测定其放射性强度，以转印有外源基因植物总DNA杂交膜的放射性强度占转印有所需改良的植物总DNA的杂交膜的放射性强度的百分数作为植物间的亲和性百分数。

3、根据权利要求2的植物间基因组杂交亲和性的分析方法，其中还包含一条相同面积的空白硝酸纤维素作为对照，计算亲和性百分数时分别减去对照杂交膜的放射性强度。