CN106178065A - 一种载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，包括如下步骤：该法包括配制质量浓度为8％～14％的聚乙烯醇(PVA)溶液；配制质量浓度为的2％～3％海藻酸钠(SA)溶液；分别移取体积比为1:4～4:1的PVA溶液与SA溶液混合，再加入一定量的MH制成纺丝溶液；将纺丝溶液进行静电纺丝，得到纺丝膜。该方法制备的纺丝膜敷料具有良好吸收性能、透气性能，无刺激性，不引起异物反应，可以很好的在创面部位释放药物，促进创面愈合，护理简单。

Description

一种载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法

技术领域

本发明涉及一种抗菌敷料，特别涉及一种载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法。

背景技术

在日常生活工作中，人们容易因刀伤、刮伤、碰伤、刺伤或手术需要等导致皮肤损伤，形成伤口，易致细菌侵入引起感染甚至化脓，给患者的身心健康带来很大的影响。因此，在皮肤伤口护理过程中，选择好的伤口敷料，防止伤口感染显得尤为重要。

伤口敷料是指盖在伤口上、有保护作用的覆盖物，可以协助控制出血，防止感染并吸收分泌物，减少感染，促进伤口愈合，减少疤痕。目前，伤口的护理一般采用的传统敷料有药绵、纱布、止血绷带、止血海绵等。从临床应用可知，普通药棉、纱布敷贴伤口时，肉芽组织易长入敷料网眼中致粘连结痂，换药时易导致新生组织损伤，给患者带来痛苦。止血绷带透气性差，渗透液多的伤口易诱发感染，伤口愈合期较长、愈合后疤痕明显，使用不方便。

针对传统敷料中的不足，近年来许多由新材料、新技术制成的功能更全面的新型伤口敷料如吸液型敷料、封闭和半封闭敷料、水凝胶型敷料等研制成功，尤其是随着电纺丝技术的成熟和发展，国内外对电纺丝敷料的研究成为热点。电纺丝是采用静电纺丝技术将聚合物或高分子的溶液或熔体，利用高压静电的方法进行喷射拉伸而获得电纺丝，该纺丝直径范围一般在几纳米到几微米，相比传统的纺丝方法直径小1～2个数量级。目前电纺丝方法主要有共纺静电纺丝，多层电纺丝，同轴电纺丝等。在医药方面，由于电纺丝作为伤口敷料孔隙率高有利于细胞粘附和增殖，透气透湿性好，对伤口渗透液有一定的吸附作用，这些优势为伤口的修复和愈合提供良好环境，也因此广泛受到大家的关注。

目前应用于电纺丝膜敷料的制备材料有壳聚糖、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚丙交酯，聚乙交酯聚、聚ε-己内酯(PCL)、聚乙烯醇(PVA)、聚氨酯、聚丙烯酰胺、羟甲基纤维素、藻酸盐等材料。聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)是一种无毒、无刺激性的亲水性高聚物，PVA分子中含有大量的-OH基团，可以吸收大量的水分并形成牢固的氢键，具有良好的生物亲和性、成纤性、成膜性、粘接性、生物降解性能，在纤维、薄膜、粘合剂和生物医学材料等领域具有广泛用途。

海藻酸钠(sodium alginate,SA)是由-D-甘露糖醛酸(M)和-L-古洛糖醛酸(G)2种结构单元，通过(1-4)糖苷键链接而成的线性嵌段共聚物。SA为无毒，有良好生物降解性和相容性的缓、控释材料，且与钙离子结合具有较好的止血作用，常用于止血敷料或渗透液吸收敷料。

盐酸莫西沙星(moxifloxacin hydrochloride,MH)为第四代具有抗菌活性的8-甲氧基氟喹诺酮类抗菌药。MH在体外对革兰阳性菌、革兰阴性菌、厌氧菌、抗酸菌和非典型微生物如支原体、衣原体和军团菌有广谱抗菌活性。MH在体内活性高，抗菌力强，半衰期长，与其它抗菌药物无交叉耐药性，广泛用于上、下呼吸道感染和皮肤及软组织感染。

基于此，本发明采用共纺静电纺丝法，探索研制一种具有良好吸收性能、透气性能，无刺激性，不引起异物反应，可以很好的在创面部位释放药物，促进创面愈合，护理简单的纺丝膜敷料。

发明内容

本发明的目的在于提出一种制备对创面修复疗效较好、毒副作用低，且见效快的伤口敷料的方法。

该制备方法包括如下步骤：

1)将质量浓度计的8％～14％的PVA溶液和2％～3％的SA溶液，按1:4～4:1的体积比制得的混合液中加入MH制成纺丝溶液；

2)将步骤1)所得纺丝溶液进行静电纺丝，得到纺丝膜。

所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法的第一优选技术方案，步骤1中所述的PVA溶液的质量浓度为11％～13％。

所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法的第二优选技术方案，步骤1中所述溶液的溶剂为水或水与DMSO、THF、DMF、1,2-丙二醇的混合溶液中的任何一种溶液。

所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法的第三优选技术方案，步骤1中所述的SA溶液的质量浓度为2％。

所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法的第四优选技术方案，步骤1中所述的PVA溶液和SA溶液的体积比为1:3～3:2。

所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法的第五优选技术方案，步骤1中所述的MH的质量是PVA和SA总质量的0.2％～4％。

所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法的第六优选技术方案，所述的MH的质量是PVA和SA总质量的2％～3％。

所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，步骤2中所述的静电纺丝过程中的工艺参数为：恒流泵流速为0.1～0.8ml·h-1，输出电压为10～18kV，纺丝时间为5～15h，接收距离为5～20cm。

所述的载莫西沙星的静电纺丝膜抗菌敷料的制备方法制备的纺丝膜在医用敷料中的应用。

和现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1)本发明应用的载体材料聚乙烯醇是一种无毒、无刺激性的亲水性高聚物，含有大量的-OH基团，可以吸收大量的水分并形成牢固的氢键，同时还具有良好的成膜性。

2)本发明应用的另一种载体材料海藻酸钠是一种无毒，且具有良好生物降解性和相容性的缓、控释材料。

3)本发明制备的MH/PVA/SA纺丝膜透气性能良好，且对皮肤无刺激性。

4)本发明制备的MH/PVA/SA纺丝膜具有抗菌和促进伤口愈合的作用。

附图说明

图1：不同溶剂制备纺丝的显微镜图，其中a)水，b)氯仿:水体积比为4:1，c)1，2-丙二醇:水体积比为4:1，d)DMSO:水体积比为4:1，e)四氢呋喃:水体积比为4:1，f)DMF:水体积比为4:1

图2：2％MH/PVA/SA纺丝膜体外药物释放图，其中a时间(h)，b累积释放率(％)

图3：不同样品DSC图谱，其中a)MH，b)PVA，c)SA，d)MH、PVA和SA的物理混合物，e)MH/PVA/SA纺丝膜

图4：不同样品的IR图谱，其中a)MH，b)PVA/SA纺丝膜，c)MH、PVA和SA物理混合物，d)MH/PVA/SA纺丝膜

图5：扫描电镜图，其中a)PVA/SA纺丝膜，b)2％MH/PVA/SA纺丝膜

图6：MH/PVA/SA纺丝膜对金葡菌、大肠杆菌抑菌效果，其中A金葡菌，B大肠杆菌，a)PVA/SA纺丝膜，b)0.5％MH/PVA/SA纺丝膜，c)2％MH/PVA/SA纺丝膜，d)4％MH/PVA/SA纺丝膜

图7：抑菌结果比较，其中a)金葡菌，b)大肠杆菌，1.2％MH/PVA/SA纺丝膜，2.PVA/SA纺丝膜，3.创口贴片，4.洁净滤纸片

图8：不同时间点刺激性照片，其中a)去除PVA/SA贴剂1h，b)去除PVA/SA贴剂24h，c)去除PVA/SA贴剂48h，d)去除MH/PVA/SA贴剂1h，e)去除MH/PVA/SA贴剂24h，f)去除MH/PVA/SA贴剂48h，g)去除纱布1h，h)去除纱布24h，i)去除纱布48h

图9：大鼠伤口部位愈合照片，其中a)造模后1天，b)造模后3天，c)造模后8天，d)造模后11天，e)造模后14天；a未敷贴敷料，b敷贴创口贴，c敷贴PVA/SA纺丝膜贴剂，d敷贴2％MH/PVA/SA纺丝膜贴剂

图10：伤口皮肤和正常皮肤HE染色图，其中a)PVA/SA给药8天，b)2％MH/PVA/SA给药8天，c)创可贴处理8天，d)未处理8天，e)PVA/SA给药14天，f)2％MH/PVA/SA给药14天，g)创可贴处理14天，h)正常皮肤

具体实施方式

实施例1

于80℃的水浴中，用蒸馏水将PVA在磁力搅拌器上搅拌，充分溶胀，完全溶解，配制成浓度为8％、10％、12％和14％的PVA溶液，配置中发现PVA溶液浓度为12％时，溶液粘度较适合纺丝，制备的纺丝呈串珠状的少且不会堵塞喷头。

实施例2

在常温下，用蒸馏水将SA在磁力搅拌器上搅拌，充分溶胀，完全溶解，配制成浓度为2％、2.5％和3％的SA溶液。分别移取体积比为3:2的12％PVA与上述不同浓度的SA溶液充分搅拌均匀，在室温下于纺丝仪上纺丝，结果列于下表1。

表1

实施例3

平行称取五份质量比为9:1，总质量为0.4g的PVA与SA，精密移取4ml蒸馏水，置于80℃水浴温度上于磁力搅拌器上充分搅拌溶解，再冷却后分别加入水及DMSO、THF、DMF、1,2-丙二醇有机溶剂各1ml在室温下充分搅拌均匀配制成溶剂体积比均为4:1的纺丝溶液，于纺丝仪上纺丝，考察溶剂对纺丝形貌、直径大小和均匀度的影响，载玻片接纺丝在显微镜下放大400×观察。

如图1所示a)、b)、f)中的纺丝直径大小及串珠状纺丝数量相似，纺丝表面相对较为光滑。但以氯仿:水作为溶剂的纺丝溶液其粘度较大，易堵塞喷头；以1，2-丙二醇:水(v:v＝4:1)为溶剂制备的纺丝直径虽小但串珠状纺丝多，表面不光滑；d)、e)以DMSO:水(v:v＝4:1)、THF:水(v:v＝4:1)为溶剂的纺丝虽表面光滑，但纺丝棱角模糊、直径很不均匀。而比较a)、f)可知水及DMF:水(v:v＝4:1)作为溶剂纺出的两种纺丝形态无明显差异，以DMF:水为溶剂的静电纺丝溶液其喷丝速度稍快。

实施例4

配制12％PVA和2％SA体积比依次为8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、2:8的纺丝溶液，取各纺丝溶液适量在电纺仪器上，设置静电纺丝条件高压电14kV，恒流泵流速0.3ml·h-1，接收距离10cm纺丝，用载玻片接纺丝于400×显微镜下观察，观察两者体积比对纺丝的影响，结果列于表2。

表2

表3为12％PVA和2％SA体积比对纺丝溶液的PH及电导率的影响，由表可知随着2％SA体积增大，纺丝溶液pH和电导率均增大。当pH在6.56以下时，纺丝溶液可纺性好。经显微镜下观察，12％PVA:2％SA体积比为2:8、4:6时，喷出的为小液滴，无纺丝喷出；体积比为6:4、7:3、8:2可纺性较好，且PVA含量越高，溶液可纺性越好。考虑SA在伤口敷料中的吸收渗透液作用，应尽量增大SA含量。

表3

实施例5

分别称取0.2％、0.5％、1％、2％、4％MH(MH与载体材料PVA和SA的质量百分比)加入12％PVA和2％SA体积比为3:2的纺丝溶液中，遮光在室温下于磁力搅拌器上搅拌6h，均匀分散溶解，再装于注射器中。设置纺丝条件：高压电14kV，恒流泵流速0.3ml·h^-1，接收距离10cm，于电纺仪上纺丝。

用载玻片接纺丝在400×显微镜下观察，以纺丝直径大小、均匀性和串珠状纺丝多少为指标，确定体积比的影响。经静电纺丝可知，加有4％的MH纺丝溶液喷出的全为小液滴，无法纺丝；将加有0.2％、0.5％、1％、2％的MH/PVA/SA电纺丝于400×显微镜下观察可知MH的量较少时纺丝表面光滑，随着MH量的增大，串珠状纺丝越多，纺丝溶液可纺性变差。

实施例6

设置电压分别为10kV、14kV、18kV，以电纺丝直径及串珠状纺丝多少为指标，考察电压对电纺丝制备的影响。试验发现在10kV时纺丝直径较大且串珠状较多；电压越高，越容易喷出纺丝，且喷出的纺丝直径越小；但在电压为18kV时喷丝尖端易发生放电现象。

实施例7

恒流泵的流速选择0.1ml·h^-1、0.3ml·h^-1、0.5ml·h^-1、0.8ml·h^-1，考察流速对电纺丝制备的影响。经试验发现，在0.8ml·h^-1时，喷头处的液滴较大，偶尔还有液滴喷落于液滴板上，无法纺丝；在0.5ml·h^-1时几乎无液滴喷出，纺丝直径较小且串珠状纺丝较少；在0.1ml·h^-1、0.3ml·h^-1时纺丝直径较小且均匀。

实施例8

喷头与接收器之间的接收距离设置20cm、15cm、10cm、5cm，考察接收距离对纺丝直径及串珠状纺丝多少的影响。经试验表明各接收距离对制备的纺丝直径影响均较小，可知接收距离对纺丝的制备影响较少。

实施例9

设置纺丝时间为5h、10h、15h，考察喷丝时间对纺丝膜柔韧性的影响。试验得知纺丝时间为5h，难从收集器上撕取下纺丝膜；当纺丝时间为15h时，纺丝膜较厚，韧性变小。

实施例10

取适量MH/PVA/SA纺丝膜，均匀剪碎成0.25cm²装入透析袋(分子透过量为8000～12000)，置于装有50ml经脱气处理的PBS(pH 7.4)的锥形瓶中，在SHZ-82恒温汽浴振荡器中进行药物体外释放试验。设置温度为(37±0.5)℃，振荡频率为50r·min^-1，在0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、26h各时间点定时取样，每次1ml，经0.45μm滤膜过滤，同时补充等量同温度的新鲜释放介质，取续滤液采用HPLC法测定，计算不同时间的药物累积释放率计算公式如下：

$Q(\%)=\frac{C_n\·V+V_i\underset{i=0}{\overset{n-i}{\mathrm{\Σ}}}{C}_i}{m_{\mathrm{drug}}}\×100\%$

公式中，Q：药物的累积释放量，％；n：置换释放介质的次数，Cn：第n个时间点所取样品浓度，mg·ml^-1；V：释放介质体积，mL；Vi：第i个时间点的取样体积；Ci：第i个时间点所取样品浓度(V₀及C₀均为零)，mg·ml^-1；m_drug：MH/PVA/SA纺丝膜中MH的质量，mg。

以药物累积释放率Q和时间t绘制释放曲线如图2所示。

理化性质研究

1.差示扫描量热分析(DSC)表征

分别取MH原料药、PVA、SA、PVA/SA处方比例物理混合物、PVA/SA纺丝膜、MH/PVA/SA纺丝膜粉碎，精密称取适量，以氧化铝为参比，扫描速率为10℃·min^-1进行DSC扫描，如图3所示。

由DSC分析结果知，MH晶体在250℃有一个尖锐的吸热峰为MH熔点，MH/PVA/SA物理混合物、MH/PVA/SA纺丝膜在250℃没有吸热峰，均在190℃和310℃左右有吸热峰。结果显示，MH/PVA/SA纺丝膜中MH结晶峰消失，而从c)中可知SA在245℃左右有一尖锐的放热峰，一种可能为MH的吸热峰与SA的放热峰抵消，另一种可能为MH/PVA/SA纺丝膜中MH以非晶体存在于基质中。

2.红外光谱(IR)分析表征

分别取MH原料药、PVA/SA纺丝膜、MH/PVA/SA三者物理混合物、MH/PVA/SA纺丝膜，以KBr为参比进行IR分析，结果如图4所示。

由IR图谱知，在MH、MH/PVA/SA物理混合物中均有1707.6，1453cm^-1的特征强吸收峰，而在MH/PVA/SA纺丝膜中则无这个特征吸收峰，说明MH在MH/PVA/SA纺丝膜中的存在形态发生变化。PVA/SA纺丝膜在3399.4cm^-1为宽吸收峰，MH/PVA/SA纺丝膜在3449.9cm^-1也为宽吸收峰，吸收峰明显向高波数方向移动。MH在1623.9、1707.6、3470.4cm^-1处的吸收峰则与MH/PVA/SA纺丝膜中的1642.8、1733.7、3449.9cm^-1处的吸收峰对应，不同程度的向高波或低波方向移动。以上变化可推测MH与PVA和SA之间形成了氢键。

3.扫描电镜(SEM)表征

采用静电纺丝方法，用铝箔收集PVA/SA纺丝膜、2％MH/PVA/SA纺丝膜，将各纺丝膜在50℃下烘干后在表面喷金，用扫描电子显微镜(SEM)，放大倍数为5k，加速电压为10kV，观察其表面形态，拍摄各纺丝膜形态见图5。

由SEM图可知a)和b)中纺丝总体上形态相似，但前者直径大小较后者均匀，且无纺锤体或串珠状纺丝，纺丝之间粘连较少，推测MH药物的加入对纺丝溶液的可纺性有一定影响。

4.稳定性试验

4.1稳定性试验考察项目

本研究按最佳处方平行制备3批2％MH/PVA/SA纺丝膜贴剂，采用外观性状、药物含量、基质中晶体情况为评价指标对其进行加速试验以考察贴剂稳定性。外观性状：肉眼观察颜色基质中晶体情况：各取3份于显微镜下观察药物含量：各取3份，称取约纺丝膜12mg置于烧杯中，加入蒸馏水于水浴温度50℃中在磁力搅拌器上遮光搅拌2h后冷却转移至10ml容量瓶中，超声15min后加蒸馏水定容，摇匀后用0.45μml滤膜过滤，取续滤液在293nm处采用HPLC法测定。

4.2加速试验

本试验将2％MH/PVA/SA纺丝膜贴剂在温度40℃，相对湿度(RH)75％的条件下进行加速试验6个月，于1、2、3、6个月取样进行测定，所得结果见表4。结果显示，加速试验条件下2％MH/PVA/SA纺丝膜加速3个月，药物含量降低较少，纺丝膜颜色无变化，纺丝表面无晶体析出；加速6个月后MH含量有少量下降，纺丝膜表面有少量晶体析出。

表4

透气性能研究

以口罩无纺布作为空白对照组(厚度为0.20mm)，口罩无纺布和MH/PVA/SA两层叠加(厚度为0.35mm)作为试验组，以口罩无纺布均匀涂抹MH/PVA/SA纺丝溶液经干燥后的膜(厚度为0.30mm)作为对照组。分别将各组绷紧密封于装足量固体氯化钙的称量瓶(规格为40×25mm)口上，每组设置3个平行试验，验3批。将各组一起置于由玻璃干燥器、有孔隔板组成的自制透气性试验装置内，孔隔板下层放有适量饱和氯化钠溶液(温度为37℃时，其相对湿度为75±1％)。设置温度为37℃，称量计算24h内固体氯化钙的质量变化，由水蒸气透过率计算公式：

$R_{\mathrm{wvp}}=\frac{W}{A\·\mathrm{\Δp}}$

公式中，R wvp为水蒸气透过率(g·h^-1·cm^-2mmHg^-1)，W为单位时间内水蒸气透过纺丝膜的重量(g·h^-1)，A为水蒸气透过纺丝膜的面积(以称量瓶口面积11.9cm²计算)，Δp为纺丝膜两侧蒸汽压差(mmHg)。确保称量瓶内有足量固体氯化钙时，即可认为纺丝膜内侧蒸汽压为零，在37℃，相对75％RH条件下，纺丝膜两侧蒸汽压差为23.8mmHg。即有透气性能计算公式如下：P＝R_wvp·d公式中：P为透气性能(g·h^-1·cm^-1·3mmHg^-1)，d为纺丝膜厚度，R_wvp为水蒸气透过率(g·h^-1·cm^-2mmHg^-1)。数据经SPSS软件进行统计学分析得结果见表5。

表5

附：与空白对照组比较：﹡P<0.05

由表可知，试验组和空白对照组、试验组和对照组的透气性能均相差较大(p<0.05)，有显著性差异。

抑菌试验

1.LB液体培养基的制备

称取蛋白胨2g、酵母浸粉1g、氯化钠2g，溶解在蒸馏水中，放入锥形瓶中，加蒸馏水至200ml搅拌混匀，用牛皮纸封口，在121℃高压蒸气灭菌30min，冷却后放入4℃冰箱中保存。

2.LB固体培养基的制备

取蛋白胨5g，酵母浸粉2.5g，氯化钠5g，溶解在蒸馏水中，放入锥形瓶中，加入2％的琼脂粉，加蒸馏水至500ml搅拌混匀，用封口膜封口，在121℃高压蒸气灭菌30min，冷却于4℃冰箱中保存。

3.金葡菌和大肠杆菌固体培养基的制备

将新鲜培养的金葡菌、大肠杆菌单个菌落接种至30ml LB培养液中，在37℃，200r·min-¹恒温汽浴振荡器中振荡培养24h。将2中制备的LB固体培养基在微波炉中加热溶解，待冷至不烫手但仍为液体时，在预先灭菌的操作台中将培养的标准金葡菌、大肠杆菌菌液(约2ml)倒入溶解的LB固体培养基中，摇匀，倒至直径90mm平皿中，每块板厚度4±0.5mm左右。琼脂凝固后用保鲜膜密封，于4℃冰箱中保存待用。

4.纺丝膜及创口贴片的制备及使用

4.1不同含量的MH/PVA/SA纺丝膜的制备：采用打孔器将PVA/SA纺丝膜、0.5％、2％、4％MH/PVA/SA纺丝膜制备成直径为0.45cm的纺丝膜圆片(厚度约为0.3mm)，烘干，称重待用。

4.2试验用创口贴的准备：创口贴去背衬层，用打孔器打成直径为0.45cm的贴片，烘干，称重备用。

5.抑菌圈测定

5.1以0.5％、2％、4％MH/PVA/SA纺丝膜为试验组，以PVA/SA纺丝膜片为阴性对照组，分别置于含金葡菌、大肠杆菌菌液LB固体培养基的培养皿中，在37℃条件下恒温培养24h，观察抑菌情况并测量抑菌圈直径，试验平行进行3次。从图6，表6中结果可知：采用4％、2％MH/PVA/SA纺丝膜对大肠杆菌抑菌作用较强，PVA/SA纺丝膜对大肠杆菌、金葡菌几乎无抑菌作用。

表6

5.2以2％MH/PVA/SA纺丝膜为试验组，以PVA/SA纺丝膜为阴性对照组，以创口贴和滤纸片作为对照组，分别置于含金葡菌、大肠杆菌LB固体培养基的培养皿中，在37℃条件下恒温培养24h，将该试验平行进行3次，观察抑菌情况并测量抑菌圈直径。

从图7可知2％MH/PVA/SA纺丝膜对大肠杆菌、金葡菌均有抑菌作用，且对大肠杆菌作用较强；PVA/SA纺丝膜对大肠杆菌、金葡菌则只有较弱或几乎无抑菌作用；某创可贴和洁净滤纸片对大肠杆菌和金葡菌均无抑菌作用。

刺激性试验

1.试验动物

家兔4只，雌雄各半，体重为2.2～2.5kg，在动物中心洁净室中单笼饲养，自由饮水摄食，黑暗光照各12h。

2.造模

破损皮肤刺激性试验造模：于给药前24h用脱毛膏将兔两侧对称脱毛共6个部位，每块去毛面积3×3cm，用消毒小刀划“日”字，以渗血为度，破损皮肤面积1.0×2.0cm。

3.给药

将其随机分为A、B组，A组单次给药，B组多次给药。给药采用左右侧自身对照方案，左前，右中侧敷贴2％MH/PVA/SA纺丝膜贴剂做为试验组，右前，左中侧敷贴PVA/SA纺丝膜贴剂作为阴性对照组，右后、左后侧敷贴无菌纱布对照组。单次给药试验：敷用贴剂前均用75％的乙醇消毒，敷贴5h，敷贴结束后除去受试物并用洁净温水清洁给药部位。多次给药试验：连续在同一部位给药，每次给药时间均为5h，每天给药一次，连续敷贴4天，敷贴各敷料时用无刺激性胶布和绷带加以固定，敷贴结束后除去各敷料并用温水清洁给药部位。

4.观察及评价指标

结果观察：在自然光线下观察皮肤反应，按表7给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分。单次给药皮肤刺激性试验，在去除药物后1h、24h、48h和72h肉眼观察并记录敷贴部位有无红斑和水肿等情况并评分。多次给药皮肤刺激性试验，在每次去除药物后1h记录红斑及水肿、敷贴部位是否有色素沉着、出血点等情况并评分。末次贴敷后，在去除药物后1h、24h、48h和72h肉眼观察并记录敷贴部位有无红斑和水肿等情况。

表7

表8

6.刺激性评分及统计学处理结果

所有数据用SPSS10.0统计软件行单因素方差分析以确定组间差异，结果以均数±标准差(X±s)表示。

表9

表9为单次给药刺激性评分结果，经计算得知红斑、焦痂形成和水肿形成的刺激性评分均在0～0.49，为无刺激性。单因素方差分析得知，试验组与对照组、阴性对照组进行比较P＞0.05，说明试验组与对照组、阴性对照组均无显著性差异。

表10

表10为多次给药刺激性评分结果，经计算得知红斑、焦痂形成和水肿形成的刺激性评分均在0～0.49，为无刺激性。试验组与对照组、阴性对照组进行比较P＞0.05，说明试验组与对照组、阴性对照组均无显著性差异。给药后去除药物1h、24h、48h，拍照，照片见图8。

药效学试验

1.试验动物

SD大鼠12只，雌雄各半，体重为280±20g，在动物中心洁净室中饲养，用苦味酸按序号标记，随机将SD大鼠分成A、B两组，自由饮水摄食，光照、黑暗各12h。

2.伤口模型的建立

于造模前24h用脱毛膏将SD大鼠背部脱毛，面积为5×4cm，脱毛后将脱毛膏洗净以免皮肤损伤。造模时，采用12％的水和氯醛腹腔注射进行麻醉，以75％乙醇溶液消毒后，用打孔器在大鼠脊柱两侧对称性印记4个直径为1cm的圆形皮肤，用消毒剪刀沿印记剪去该部位皮肤，深至真皮但不损伤皮下血管，建立4个皮肤伤口模型。

3.伤口的处理

给药采用自身对照方案，A组SD大鼠左前侧敷贴2％MH/PVA/SA纺丝膜贴剂作为试验组，右前侧敷贴PVA/SA纺丝膜贴剂作为阴性对照组，左后侧敷贴创可贴作为对照组，右后侧不敷贴敷料作为空白对照组。考虑各伤口部位皮肤不同，将B组SD大鼠左前侧敷贴创可贴，右前侧不敷贴敷料，左后侧敷贴2％MH/PVA/SA纺丝膜贴剂，右后侧敷贴PVA/SA纺丝膜贴剂，再用透气、无刺激性胶布和绷带加以固定，进行自身对照治疗试验。

4.伤口愈合情况

分别于造模后1天、3天、8天、11天、14天，观察记录各伤口感染和愈合情况并用相机拍照，见图9。

从图9可知：造模后第3天，所有创面均有向伤口中心愈合的趋势，创面均有少量的炎性渗出物和鲜红色的肉芽组织。造模后第8天，试验组和阴性对照组伤口几乎无感染症状，创面收缩明显，开始结痂，伤口愈合速度明显比对照组和空白对照组快；对照组伤口感染症状明显，伤口部位脓肿且有较多的渗出液，空白对照组有明显的肿块和发炎症状，皮肤表面鼠毛开始生长。造模后第11天，对照组和空白对照组部位明显有红肿、发炎症状，试验组和阴性对照组伤口接近愈合。造模后第14天，对照组脓肿消退，而空白对照组肿块仍未消退，且有增大趋势；试验组和阴性对照组伤口几乎痊愈。

5.伤口愈合评价指标

分别于造模后1、3、8、11、14天，从垂直于脊柱和平行于脊柱两个方向测量伤口直径，用直径的平均值来计算愈合残留面积，并计算愈合百分率。

$\mathrm{HR}=\frac{\mathrm{AO}-\mathrm{AT}}{\mathrm{AO}}\&times;100\%$

公式中：HR(healing rate)：愈合百分率；AO(original incisional area)：原创面面积；AT(new area at interval time)：愈合残留面积。(原创面积为0.79cm²)经测定得各组伤口直径并计算愈合百分率结果见表11。

表11

从表11统计分析得知对照组在造模后第3天和第8天比其他组愈合百分率均高，而在造模后第14天，愈合百分率情况有一定的改变。

6.伤口皮肤取材及HE染色

取正常皮肤和给药8、14天的伤口皮肤取创面及周围正常皮肤组织，浸渍于pH为7.4的4％多聚甲醛溶液中，石蜡包埋，常规切片行HE染色。将HE染色切片于200×显微镜下观察创面肉芽组织的生长及创面再上皮化情况并拍照比较各部位伤口皮肤及正常组织显微结构HE染色图见图10。

从图10染色发现创面第8天时创口贴和未敷贴创面有明显的炎症反应，创面渗出物痂下软组织有大量中性粒细胞浸润，无肉芽组织形成。2％MH/PVA/SA纺丝膜贴剂和PVA/SA纺丝膜贴剂敷贴处创面没有明显炎症反应，出现新生肉芽组织，即出现大量成纤维细胞。创面第14天时，创口贴和未敷贴创面处仍然有少量炎症反应，2％MH/PVA/SA纺丝膜贴剂和PVA/SA纺丝膜贴剂敷贴处创面皮肤组织与正常组织相似，PVA/SA纺丝膜敷贴处其皮肤汗腺开始形成。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制，所属领域的普通技术人员应当理解，参照上述实施例可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换，这些未脱离本发明精神和范围的任何修改或者等同替换均在申请待批的权利要求保护范围之内。

Claims (9)

1.一种载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，包括如下步骤：

1)将质量浓度计的8％～14％的PVA溶液和2％～3％的SA溶液，按1:4～4:1的体积比制得的混合液中加入MH制成纺丝溶液；

2)将步骤1)所得纺丝溶液进行静电纺丝，得到纺丝膜。

2.根据权利要求1所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，其特征在于，所述的PVA溶液的质量浓度为11％～13％。

3.根据权利要求1所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，其特征在于，步骤1中所述溶液的溶剂为水或水与DMSO、THF、DMF、1,2-丙二醇的混合溶液中的任何一种溶液。

4.根据权利要求1所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的SA溶液的质量浓度为2％。

5.根据权利要求1所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的PVA溶液和SA溶液的体积比为1:3～3:2。

6.根据权利要求1所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的MH的质量是PVA和SA总质量的0.2％～4％。

7.根据权利要求6所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，其特征在于，所述的MH的质量是PVA和SA总质量的2％～3％。

8.根据权利要求1所述的载莫西沙星电纺丝膜抗菌敷料的制备方法，其特征在于，步骤2中所述的静电纺丝过程中的工艺参数为：恒流泵流速为0.1～0.8ml·h^-1，输出电压为10～18kV，纺丝时间为5～15h，接收距离为5～20cm。

9.根据权利要求1-7任一项所述的载莫西沙星的静电纺丝膜抗菌敷料的制备方法制备的纺丝膜在医用敷料中的应用。