CN106117282B - 大黄中蒽醌苷类物质的分离方法 - Google Patents

大黄中蒽醌苷类物质的分离方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，包括如下步骤：提取、富集和分离纯化，在分离纯化步骤中通过高速逆流色谱仪进行分离时，采用正己烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑水溶剂系统进行洗脱；在通过制备色谱仪进行分离时，采用甲醇溶液进行洗脱。根据本发明的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，采用高速逆流色谱和制备色谱实现优势互补，两者结合使用，使得分离过程简便、快捷，大大提高化合物的分离效率。

Description

大黄中蒽醌苷类物质的分离方法
技术领域
本发明涉及物质分离领域，具体涉及大黄中蒽醌苷类物质的分离方法。
背景技术
掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄为蓼科植物，是大黄药材的主要来源。大黄药材中含有含量很高的蒽醌类成分，具有较强的抗菌、解热、保肝、降血脂、止血、抗肿瘤、调节免疫等多重作用。然而，蒽醌类尤其是蒽醌苷类物质的缺乏严重制约了其进一步的药理活性研究。大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷是其中很重要的三种蒽醌苷类成分，但由于传统柱色谱分离手段的限制，很难同时分离得到上述三种蒽醌苷，尤其是大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷为同分异构体，使用传统柱色谱无法实现分离。
发明内容
本发明的一个目的在于提出一种可以简便、快捷地将大黄中的蒽醌苷类物质分离的方法。
根据本发明实施例的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，包括如下步骤：提取：将大黄的根干燥后粉碎，并在第一预定温度下用乙醇溶液回流提取，将提取液减压浓缩后得到粗提物；富集：将粗提物用去离子水溶解后，用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液进行萃取，并将萃取后的去离子水进行过柱操作，用乙醇溶液对分离柱进行洗脱，得到洗脱液，将洗脱液减压浓缩，以得到含有目标成分的富集物；分离纯化：将富集物依次通过高速逆流色谱仪和制备色谱仪，以将富集物中的蒽醌苷类物质进行分离纯化；其中，在通过高速逆流色谱仪进行分离时，在第二预定温度下采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统进行洗脱；在通过制备色谱仪进行分离时，采用甲醇溶液进行洗脱。
根据本发明实施例的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统通过高速逆流色谱仪对富集的蒽醌苷类物质进行分离，由于大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水中的分配系数与其它两种蒽醌苷类物质的分配系数比值大于1.5，从而将大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷与其他蒽醌苷类物质分离。分离后的蒽醌苷类物质通过制备色谱仪再次进行分离，采用甲醇溶液洗脱，由于大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷极性的差别，从而将大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷与大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷分离。高速逆流色谱是利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。制备色谱集高效分离，在线监测，自动控制于一体，并且分离模式多样，如正相、反相、排阻色谱、离子交换色谱等。高速逆流色谱和制备色谱可实现优势互补，两者结合可大大提高化合物的分离效率。
另外，根据本发明上述实施例的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，还可以具有如下附加的技术特征：
进一步地，在分离纯化步骤中，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统中各溶剂的体积比为V正己烷：V乙酸乙酯：V甲醇：V水＝(3～5)：(4～6)：(1～3)：(4～6)，第二预定温度为20℃～40℃。
进一步地，在分离纯化步骤中，甲醇溶液中甲醇的质量浓度为40％～60％。
进一步地，在分离纯化步骤中，在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱。
进一步地，在富集步骤中，分离柱采用非极性大孔树脂柱，非极性大孔树脂柱为D101型大孔树脂、AB-8型大孔树脂、D3520型大孔树脂和X-5型大孔树脂中的任意一种。
进一步地，在富集步骤中，乙醇溶液的体积是分离柱中柱床的体积的5倍～20倍。
进一步地，在富集步骤中，乙醇溶液中乙醇的质量浓度为50％。
进一步地，在富集步骤中，在用质量浓度为50％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱前，先用质量浓度为40％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱，且所述质量浓度为40％的乙醇溶液的体积是所述分离柱中柱床的体积的5倍～20倍。
进一步地，在富集步骤中，水、石油醚和乙酸乙酯的体积比为1:4:2。
进一步地，在提取步骤中，每1g大黄的干燥的根采用10mL～60mL的乙醇溶液进行回流提取，乙醇溶液中乙醇的质量浓度为50％～95％，第一预定温度为50℃～80℃。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1是本发明实施例的大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷(1)和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷(2)和大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷(3)的HSCCC分离图；
图2是本发明实施例的大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷(1)和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷(2)的制备色谱分离图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式详细描述本发明的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法。
根据本发明实施例的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，包括如下步骤：
提取：将大黄的根干燥后粉碎，并在第一预定温度下用乙醇溶液回流提取，将提取液减压浓缩后得到粗提物。具体地，本发明中所述的大黄可以包括掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄等，其根部均含有含量很高的蒽醌苷类成分。将大黄的根干燥并粉碎后，在温度约为50℃～80℃下，用质量浓度大致为50％～95％的乙醇溶液回流提取，回流提取的次数可以为1次～3次，每次1h～3h，可提高提取的蒽醌苷类成分的含量，将提取液减压浓缩后即可得到粗提物。
富集：将粗提物用去离子水溶解后，用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液进行萃取，并将萃取后的去离子水进行过柱操作，用乙醇溶液对分离柱进行洗脱，得到洗脱液，将洗脱液减压浓缩，以得到含有目标成分的富集物。其中，经过多次试验验证，当石油醚、乙酸乙酯和水的体积比为4:2:1时，可以将小极性杂质成分除掉。在过柱操作过程中，分离柱采用非极性大孔树脂柱，为D101型大孔树脂、AB-8型大孔树脂、D3520型大孔树脂和X-5型大孔树脂的任意一种。在过柱过程中，采用的乙醇溶液的质量浓度大致为50％，乙醇溶液的体积大概是分离柱中柱床的体积的5倍～20倍。在用质量浓度为50％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱前，先用质量浓度为40％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱，质量浓度为40％的乙醇溶液的体积是分离柱中柱床体积的5倍～20倍左右，以去除非目标成分。
分离纯化：将富集物依次通过高速逆流色谱仪和制备色谱仪，以将富集物中的蒽醌苷类物质进行分离纯化；其中，在通过高速逆流色谱仪进行分离时，在第二预定温度下采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统进行洗脱；在通过制备色谱仪进行分离时，采用甲醇溶液进行洗脱。其中，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统中各成分的体积比约为V正己烷：V乙酸乙酯：V甲醇：V水＝(3～5)：(4～6)：(1～3)：(4～6)，第二预定温度约为20℃～40℃。甲醇溶液中，甲醇的质量浓度约为40％～60％。制备色谱的色谱柱可以采用C18色谱柱。采用高速逆流色谱仪进行分离时，由于大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水中的分配系数与其它两种蒽醌苷类物质的分配系数比值大于1.5，从而将大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷与其他蒽醌苷类物质分离。分离后的蒽醌苷类物质通过制备色谱仪再次进行分离，采用甲醇溶液洗脱，由于大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷极性的差别，从而将大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷与大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷分离。高速逆流色谱是利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。制备色谱集高效分离，在线监测，自动控制于一体，并且分离模式多样，如正相、反相、排阻色谱、离子交换色谱等。高速逆流色谱和制备色谱可实现优势互补，两者结合可大大提高化合物的分离效率。
下面通过具体实施例详细描述本发明的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法。
实施例1
实施例1是掌叶大黄中蒽醌苷类物质的具体分离过程，包括如下步骤：
(1)提取：将掌叶大黄的根干燥并粉碎至约40目后，以1g：10mL的比例用质量浓度为50％的乙醇在50℃下回流提取1h，得到提取液。然后将提取液减压浓缩，得粗提物。
(2)富集：将粗提物用去离子水溶解，再用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液萃取，其中石油醚、乙酸乙酯和水的体积比为4:2:1；将萃取的水相部分上D101型大孔吸附树脂柱，依次用5倍柱床体积的质量浓度为40％的乙醇和5倍柱床体积的质量浓度为50％的乙醇洗脱，其中50％的乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。
(3)分离纯化：将含有目标成分的富集物首先通过高速逆流色谱仪，采用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其中V正己烷：V乙酸乙酯：V甲醇：V水＝3:4:1:4，流动相流速为1.5mL/min，主机转速为700rpm，分离温度为20℃，进样量为50mg，得到大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷单体以及大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物。然后将大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物用制备色谱分离，采用的色谱柱为Reprosil 100 C18(250×20mm i.d.,10μm)，流动相为甲醇溶液，甲醇的质量浓度为40％，等度洗脱，流动相流速为10mL/min，检测波长为254nm，采用重复进样方式，进样间隔为10min，即可得到大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷两种单体。
实施例2
实施例2是药用大黄中蒽醌苷类物质的具体分离过程，包括如下步骤：
(1)提取：将药用大黄的根干燥并粉碎至100目后，以1g：60mL的比例用质量浓度为95％的乙醇在80℃下回流提取3次，每次提取3h，然后合并得到提取液。将提取液减压浓缩，得粗提物。
(2)富集：将粗提物用去离子水溶解，再用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液萃取，其中石油醚、乙酸乙酯和水的体积比为4:2:1；将萃取的水相部分上AB-8型大孔吸附树脂柱，依次用20倍柱床体积的质量浓度为40％的乙醇和20倍柱床体积的质量浓度为50％的乙醇洗脱，其中50％的乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。
(3)分离纯化：将含有目标成分的富集物首先通过高速逆流色谱仪，采用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其中V正己烷：V乙酸乙酯：V甲醇：V水＝5:6:3:6，流动相流速为3mL/min，主机转速为900rpm，分离温度为40℃，进样量为200mg，即得到大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷单体以及大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物。将大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物用制备色谱分离，采用色谱柱为Reprosil 100 C18(250×20mm i.d.,10μm)，流动相为甲醇溶液，甲醇的质量浓度为60％，等度洗脱，流动相流速20mL/min，检测波长254nm，采用重复进样方式，进样间隔为20min，即得到大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷两种单体。
实施例3
实施例3是唐古特大黄中蒽醌苷类物质的具体分离过程，包括如下步骤：
(1)提取：将唐古特大黄的根干燥并粉碎至60目后，以1g：20mL的比例用质量浓度为70％的乙醇在70℃下回流提取2次，每次提取2h，然后合并得到提取液。将提取液经减压浓缩，得粗提物。
(2)富集：将粗提物用去离子水溶解，再用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液萃取，其中石油醚、乙酸乙酯和水的体积比为4:2:1；将萃取的水相部分上X-5型大孔吸附树脂柱，依次用8倍柱床体积的质量浓度为40％的乙醇和7倍柱床体积的质量浓度为50％的乙醇洗脱，其中50％乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。
(3)分离纯化：将含有目标成分的富集物首先通过高速逆流色谱仪，采用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其中V正己烷：V乙酸乙酯：V甲醇：V水＝4:5:2:5，流动相流速为1.6mL/min，主机转速为800rpm，分离温度为30℃，进样量为100mg，得到大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷单体以及大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物。将大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物用制备色谱分离，采用的色谱柱为Reprosil 100 C18(250×20mm i.d.,10μm)，流动相为甲醇溶液，甲醇的质量浓度为42％，等度洗脱，流动相流速为18mL/min，检测波长为254nm，采用重复进样方式，进样间隔为15min，即得到大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷两种单体。
实施例4
实施例4是唐古特大黄中蒽醌苷类物质的具体分离过程，包括如下步骤：
(1)提取：将唐古特大黄的根干燥并粉碎至80目后，以1g：30mL的比例用质量浓度为60％的乙醇在60℃下回流提取2次，每次提取2h，合并得到的提取液。将提取液经减压浓缩，得粗提物。
(2)富集：将粗提物用去离子水溶解，再用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液萃取，其中石油醚、乙酸乙酯和水的体积比为4:2:1；将萃取的水相部分上D3520型大孔吸附树脂柱，依次用10倍柱床体积的质量浓度为40％的10倍柱床体积的乙醇和质量浓度为50％的乙醇洗脱，其中50％乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。
(3)分离纯化：将含有目标成分的富集物首先通过高速逆流色谱仪，采用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其中V正己烷：V乙酸乙酯：V甲醇：V水＝4:5:2:5，流动相流速为2mL/min，主机转速为800rpm，分离温度为35℃，进样量为150mg，得到大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷单体以及大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物。将大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物用制备色谱分离，采用色谱柱为Reprosil 100 C18(250×20mm i.d.,10μm)，流动相为甲醇溶液，甲醇的质量浓度为50％，等度洗脱，流动相流速为12mL/min，检测波长为254nm，采用重复进样方式，进样间隔为12min，即得到大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷两种单体。
实施例5
实施例5是依次对高速逆流色谱仪和制备色谱仪分离后的物质通过1H-NMR和13C-NMR进行鉴定。
大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷的结构式为：
大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的结构式为：
大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷的结构式为：
如图1所示，经鉴定，图1中的3物质为大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷，说明高速逆流色谱仪能够将大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷与其他蒽醌苷类物质分离。图1中的1和2为大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的混合物，将此混合物经过制备色谱后，如图2所示，图2中的1为大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷，图2中的2为大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷，可见大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷的峰清晰可见，且能够分离，说明制备色谱可以将大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷分离。
根据本发明实施例的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统通过高速逆流色谱仪对富集的蒽醌苷类物质进行分离，由于大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水中的分配系数与其它两种蒽醌苷类物质的分配系数比值大于1.5，从而将大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷与其他蒽醌苷类物质分离。分离后的蒽醌苷类物质通过制备色谱仪再次进行分离，采用甲醇溶液洗脱，由于大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷极性的差别，从而将大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷与大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷分离。高速逆流色谱是利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。制备色谱集高效分离，在线监测，自动控制于一体，并且分离模式多样，如正相、反相、排阻色谱、离子交换色谱等。高速逆流色谱和制备色谱可实现优势互补，两者结合可大大提高化合物的分离效率。
在本发明的描述中，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (4)

1.大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
提取：将大黄的根干燥后粉碎，并在第一预定温度下用乙醇溶液回流提取，将提取液减压浓缩后得到粗提物；其中，每1g大黄的干燥的根采用10mL～60mL的乙醇溶液进行回流提取，所述乙醇溶液中乙醇的质量浓度为50％～95％，所述第一预定温度为50℃～80℃；
富集：将所述粗提物用去离子水溶解后，用石油醚和乙酸乙酯的混合溶液进行萃取，并将萃取后的去离子水进行过柱操作，用乙醇溶液对分离柱进行洗脱，得到洗脱液，将所述洗脱液减压浓缩，以得到含有目标成分的富集物；其中，所述乙醇溶液中乙醇的质量浓度为50％，在采用质量浓度为50％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱前，先用质量浓度为40％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱，且所述质量浓度为40％的乙醇溶液的体积是所述分离柱中柱床的体积的5倍～20倍；所述水、石油醚和乙酸乙酯的体积比为1:4:2；
分离纯化：将所述富集物依次通过高速逆流色谱仪和制备色谱仪，以将富集物中的蒽醌苷类物质进行分离纯化；
其中，在通过高速逆流色谱仪进行分离时，在第二预定温度下采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统进行洗脱，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统中各溶剂的体积比为V正己烷：V乙酸乙酯：V甲醇：V水＝(3～5)：(4～6)：(1～3)：(4～6)，所述第二预定温度为20℃～40℃；在通过制备色谱仪进行分离时，采用甲醇溶液进行洗脱，所述甲醇溶液中甲醇的质量浓度为40％～60％。
2.根据权利要求1所述的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，其特征在于，
在所述分离纯化步骤中，在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱。
3.根据权利要求1所述的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，其特征在于，
在所述富集步骤中，所述分离柱采用非极性大孔树脂柱，所述非极性大孔树脂柱为D101型大孔树脂、AB-8型大孔树脂、D3520型大孔树脂和X-5型大孔树脂中的任意一种。
4.根据权利要求1所述的大黄中蒽醌苷类物质的分离方法，其特征在于，
在所述富集步骤中，所述乙醇溶液的体积是所述分离柱中柱床的体积的5倍～20倍。
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