CN106085929A - 一种城市垃圾处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种城市垃圾处理方法。由于脂肪酶具有很强的分解油脂的能力从而可以为各个微生物提供营养物质。木糖氧化碱菌反硝化亚种、解淀粉芽孢杆菌、汉逊德巴利酵母汉逊变种、菱型伊萨酵母、嗜角蛋白粉落霉和巴氏诺卡菌这几种菌在组合使用时能够充分的合理利用营养物质，特别是在酵母中转入了脂肪酶之后，其对于油脂类的降解能力得到大幅度的提高，使得城市垃圾处理的能力和效率得到了大幅度的提高，而且整个处理周期也得到了缩短，具有极高的应用和推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于城市垃圾处理的方法。
背景技术
我国虽然是发展中国家，但是近年来城市化水平也逐年提高，2015年，我国城镇化率达到56.1％，城镇常住人口达到了7.7亿，如此众多的人口，每天产生的垃圾也是天量。城市垃圾由于垃圾复杂，处理困难，焚烧是城市垃圾(包括生活垃圾和医疗垃圾)处理的一个重要手段。
垃圾焚烧作为目前主要的垃圾处理技术之一，已经有150年左右的发展历史，最开始是在欧洲发展起来的，经过处理的垃圾焚烧产生的热量可以用于火力发电，我国垃圾焚烧发电虽起步较晚，但发展迅速。1988年，深圳建立起我国第一座引进日本三菱进口设备和技术的垃圾发电厂一一深圳市政环卫综合处理厂。2000年，珠海建立起第一座以国产设备为主的垃圾发电厂一一珠海垃圾发电厂(日处理垃圾3X 200吨，装机容量6MW)。随后浙江宁波、杭州、上海浦东和浦西、山东荷泽、广东南海、山西太原、重庆、湖南长沙、天津、广州等多个城市的垃圾发电厂相继建成。目前，我国已有垃圾发电厂140多座。
但是由于我国城市垃圾具有成分杂、水分高、热值低等特点，其含水量一般都在50％以上，平均热值只有低，特别在南方地区垃圾中含水量更大，这种状况不利于焚烧。焚烧炉一般采用炉排进行垃圾焚烧，由于炉排的机械设计，无法将焚烧炉封闭，焚烧时飞灰中的有害气体难免排出；而垃圾未封闭焚烧，温度低，垃圾燃烧不充分，二噁英类有害物质无法得到有效的抑制；第三，机械传动的炉排结构相对复杂，维护工作较重。同时，焚烧过程中将产生大量的飞灰，如按每吨垃圾产生3％的焚烧飞灰来计算，每年我国至少会产生14万吨以上的焚烧飞灰，并且逐年增长。焚烧时产生的飞灰虽然垃圾焚烧场采取了收集措施，但由于产生的飞灰量大，温度高，除尘设备如布袋除尘、静电除尘无法达到大量收集飞灰中灰尘的要求，而且更换麻烦，效果不理想，相当多的焚烧飞灰排放在大气中，对垃圾焚烧场周边地区污染相当严重，而且由于焚烧飞灰富集对人体有致癌作用的二恶英和呋喃等毒性物质，对焚烧场周边的人群造成极大的伤害。许多垃圾处理厂由于设备复杂，维护成本高，处理方法复杂，运行成本很高，无法真正有效地对垃圾进行处理。
垃圾卫生填埋处置方式自问世以来，由于具有技术可靠、工艺简单、管理方便以及投资省、运行费用低、适用范围广、对垃圾成分无严格要求、可作最终处置等一系列优点，在许多国家得到了广泛的应用，在我国垃圾填埋处置约占全部垃圾处理量的70％，而且在今后相当长时间内，卫生填埋将是我国生活垃圾处理与处置不可替代的主要手段。但现行传统垃圾卫生填埋处理处置技术仅把填埋场作为一个被动接受垃圾的系统，填埋垃圾的自然降解速度很慢，垃圾渗滤液处理困难，在封场后相当长一段时间内仍需要对填埋场进行维护和管理，存在占用大量土地，封场后维护监管期长，填埋场再用困难等弊端，不符合可持续发展战略等缺点。
堆肥法是生活垃圾生物处理的一种重要方法，它可以使垃圾中的有机物质在微生物作用下逐渐分解形成稳定的腐殖质类物质。传统厌氧堆肥法，发酵周期长达4-6个月，占地面积大，有机物分解慢，产生恶臭，蚊蝇孳生，污水四溢，形成二次污染。80年代后，人们开始研究向堆肥中接种一些微生物，加快垃圾中难降解有机物的降解，縮短垃圾堆体从中温升至高温的时间，迅速杀灭蚊蝇虫卵及有害病原菌，縮短发酵周期。但目前的专利技术多采用一些人工驯化的微生物菌种，这些菌种接种到垃圾后，由于其在野生条件下生存能力较差，在生长速度上很难与垃圾中的土著微生物竞争，容易受土著微生物的抑制，难以保证接种微生物发挥效应。
CN 1724480 A中公开了高效微生物复合菌剂处理城市生活垃圾的技术，它采用接种微生物复合菌剂在好氧动态发酵条件下处理生活垃圾，既依次将生活垃圾分拣、粉碎、接种高效微生物复合菌剂、在动态好氧条件下发酵。主发酵周期为7～8天，发酵周期仍然偏长。
CN 103525804 A一种用于垃圾降解的生物处理剂，所述生物处理剂通过蜡状芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、类产碱假单胞菌和酿酒酵母与载体的共同作用，能高效降解生活垃圾，尤其是餐厨垃圾，降解率达到85％，但是该菌剂特异性的适用于厨房垃圾，并不适合大规模的城市垃圾的处理。
因此，开发一种制备简单，适宜于大规模的城市垃圾处理的微生物菌剂从而用于城市生活垃圾的处理变得迫在眉睫。
发明内容
本发明一个技术方案为提供一种混合菌剂，所述的混合菌剂为木糖氧化碱菌反硝化亚种CGMCC 1.768、解淀粉芽孢杆菌CGMCC 1.1177、汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏诺卡菌CGMCC4.1128，各菌扩大培养后，菌液混合的体积比为10～15∶5～10∶10～20∶1～30∶5～15∶10～20。
本发明另外一个技术方案为提供一种混合菌剂，所述的混合菌剂为木糖氧化碱菌反硝化亚种CGMCC 1.768、解淀粉芽孢杆菌CGMCC 1.1177、汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏诺卡菌CGMCC4.1128，各菌扩大培养后，菌液混合的体积比为10：5：10：1：5：10。所述的菌液混合体积比也可以为：12：5：12：20：7：6。其中菌液的浓度为2*108个个/ml。
本发明另外提供一种能够表达脂肪酶的表达载体。所述载体为真核表达载体。
更加优选的所述的载体为pScIKP载体。
所述的脂肪酶，为从假单胞菌中分离获得的，其序列如SEQ ID NO：1所示，命名为Pslip。
本发明另外提供一种脂肪酶的变体，所述的脂肪酶在SEQ ID NO：4所示氨基酸序列有一处突变，所述突变为83A，101G，112E，124L，143T，165A，249N，261L，268L，291H，322M，343A，385G，401G，423K，505T，522Q，529G，542I，561A，569G，570Q，583A或591V任一一处突变。
具体的，所述的突变位点的取代形式分别为在SEQ ID NO：4序列有一个A83T，G101Q，E112S，L124V，T143G，A165S，N249S，L261K，L268Q，H291S，M322T，A343M，G385Q，G401S，K423v，T505S，Q522P，G529N，I542E，A561Q，G569S，Q570P，A583S或V591L的突变。所述A83T为第83位点的A替换T。
本发明另外提供一种真核表达载体，所述载体为在pScIKP载体的基础上融合了如SEQ ID NO：1所示脂肪酶基因，命名为pScIKP-Pslip。
所述的脂肪酶变体也分别构建为表达载体，pScIKP-Pslip-A83T，pScIKP-Pslip-G101Q，pScIKP-Pslip-E112S，pScIKP-Pslip-L124V，pScIKP-Pslip-T143G，pScIKP-Pslip-A165S，pScIKP-Pslip-N249S，pScIKP-Pslip-L261K，pScIKP-Pslip-L268Q，pScIKP-Pslip-H291S，pScIKP-Pslip-M322T，pScIKP-Pslip-A343M，pScIKP-Pslip-G385Q，pScIKP-Pslip-G401S，pScIKP-Pslip-K423v，pScIKP-Pslip-T505S，pScIKP-Pslip-Q522P，pScIKP-Pslip-G529N，pScIKP-Pslip-I542E，pScIKP-Pslip-A561Q，pScIKP-Pslip-G569S，pScIKP-Pslip-Q570P，pScIKP-Pslip-A583S或pScIKP-Pslip-V591L。
本发明另外提供一种优化的混合菌剂，所述的混合菌剂为木糖氧化碱菌反硝化亚种CGMCC 1.768、解淀粉芽孢杆菌CGMCC 1.1177、汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏诺卡菌CGMCC 4.1128，各菌扩大培养后，菌液混合的体积比为10～15∶5～10∶10～20∶1～30∶5～15∶10～20；其中汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831和菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592中分别导入了pScIKP-Pslip载体或pScIKP-Pslip-A83T，pScIKP-Pslip-G101Q，pScIKP-Pslip-E112S，pScIKP-Pslip-L124V，pScIKP-Pslip-T143G，pScIKP-Pslip-A165S，pScIKP-Pslip-N249S，pScIKP-Pslip-L261K，pScIKP-Pslip-L268Q，pScIKP-Pslip-H291S，pScIKP-Pslip-M322T，pScIKP-Pslip-A343M，pScIKP-Pslip-G385Q，pScIKP-Pslip-G401S，pScIKP-Pslip-K423v，pScIKP-Pslip-T505S，pScIKP-Pslip-Q522P，pScIKP-Pslip-G529N，pScIKP-Pslip-I542E，pScIKP-Pslip-A561Q，pScIKP-Pslip-G569S，pScIKP-Pslip-Q570P，pScIKP-Pslip-A583S或pScIKP-Pslip-V591L载体。
本发明另外提供一种垃圾处理方法，首先原生垃圾先经过粗分选工序，分选出竹木类、废电池、塑料、玻璃、打火机、金属、织物等进行回收，将砖瓦石块等无机材料用于新型建材的制造；将剩余的有机物质混合物破碎搅拌混匀，在混合过程中加入混合菌种，将混合菌种按照体积比1：50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照垃圾重量的0.5％(V/W)加入，通风供氧发酵5天，温度控制在45°C，将生物处理所产生的渗滤水经发酵罐底管道进入污水处理系统，产生的废气经过发酵罐上部的管道进入废气处理系统；将发酵后的产物作为有机肥进行后续的利用。所述的混合菌种为各个菌种经扩大培养后，按如下体积比混合：木糖氧化碱菌反硝化亚种CGMCC 1.768、解淀粉芽孢杆菌CGMCC 1.1177、汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏诺卡菌CGMCC 4.1128，各菌扩大培养后，菌液混合的体积比为10～15∶5～10∶10～20∶1～30∶5～15∶10～20。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
城市垃圾含有很多物质，特别是城市的餐厨废弃物富含油脂和蛋白质等营养物质，如果不经过降解，无法被酿酒酵母当做碳源和氮源所利用，脂肪酶具有很强的分解油脂的能力从而可以为各个微生物提供营养物质。木糖氧化碱菌反硝化亚种、解淀粉芽孢杆菌、汉逊德巴利酵母汉逊变种、菱型伊萨酵母、嗜角蛋白粉落霉和巴氏诺卡菌这几种菌在组合使用时能够充分的合理利用营养物质，特别是在酵母中转入了脂肪酶之后，其对于油脂类的降解能力得到大幅度的提高，使得城市垃圾处理的能力和效率得到了大幅度的提高，而且整个处理周期也得到了缩短，具有极高的应用和推广价值。
具体实施方式
实施例1脂肪酶基因的克隆
以假单胞菌DNA为模板，采用引物1加入EcoRI酶切位点：
GGATCCatgggtgtgtatgactacaaga，与引物2加入SpeI酶切位点：
ACTAGTtcaggcgatcacgattccatcagc；进行了PCR扩增。其中基因的PCR反应条件为：94℃5min，94℃45s，54.6℃40s，72℃103s，循环30次，70℃10min，4℃永恒。
通过胶回收系统回收条带1854bp左右，通过测序，其序列如SEQ ID NO：1所示。在NCBI中通过blast比对，发现其就是脂肪酶的一种。
按照变本领域常规基因突变方式，将所述的基因分别在A 83T，G 101Q，E112S，L124V，T 143G，A 165S，N 249S，L 261K，L 268Q，H 291S，M 322T，A 343M，G 385Q，G 401S，K423v，T 505S，Q 522P，G 529N，I 542E，A 561Q，G 569S，Q 570P，A583S或V 591L进行点突变，具体的实施方式采用重叠PCR的方式获得了突变后的目的基因。
实施例2转基因酵母细胞的制备
将实施例1得到的编码序列以及相应的突变序列以及pScIKP载体分别用限制性内切酶EcoRI和SpeI双酶切，纯化双酶切后的产物，将两者用T4DNA连接酶连接过夜，平板转化，鉴定重组子，通过PCR鉴定获得了57个阳性的重组子。其中，通过质粒提取，并鉴定，成功获得了重组质粒pScIKP-Pslip。同时类似的也分别获得了重组质粒pScIKP-Pslip-A 83T，pScIKP-Pslip-G 101Q，pScIKP-Pslip-E 112S，pScIKP-Pslip-L 124V，pScIKP-Pslip-T143G，pScIKP-Pslip-A 165S，pScIKP-Pslip-N 249S，pScIKP-Pslip-L 261K，pScIKP-Pslip-L 268Q，pScIKP-Pslip-H 291S，pScIKP-Pslip-M 322T，pScIKP-Pslip-A 343M，pScIKP-Pslip-G 385Q，pScIKP-Pslip-G 401S，pScIKP-Pslip-K 423v，pScIKP-Pslip-T505S，pScIKP-Pslip-Q 522P，pScIKP-Pslip-G 529N，pScIKP-Pslip-I 542E，pScIKP-Pslip-A 561Q，pScIKP-Pslip-G 569S，pScIKP-Pslip-Q 570P，pScIKP-Pslip-A583S和pScIKP-Pslip-V 591L。
在酿酒酵母进行电转化之前，对汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592进行抗性筛选标记G418的敏感性测定，发现CGMCC2.1831和CGMCC2.1592在浓度为175μg/ml的YH平板上酵母已经被抑制而不能生长，因而在筛选转化子的时候可以用超过175μg/ml的G418的浓度来筛选。
将上述得到的基因表达重组质粒pScIKP-Pslip用限制性内切酶ApaI线性化后，用电穿孔转化法转入所述的二个酵母中，在G418的浓度为175μg/ml的YPD琼脂平板上培养4d后，挑取能够正常生长的菌落即为转有上述重组质粒的转化子。以基因特异性的引物1和引物2进行菌落PCR，均能成功扩增出大小为1854bp左右的的基因片段，验证了基因确实已经转入并整合入二个酵母基因组中。
使用上述相似的方法，将pScIKP-Pslip-A83T，pScIKP-Pslip-G101Q，pScIKP-Pslip-E112S，pScIKP-Pslip-L124V，pScIKP-Pslip-T143G，pScIKP-Pslip-A 165S，pScIKP-Pslip-N 249S，pScIKP-Pslip-L 261K，pScIKP-Pslip-L 268Q，pScIKP-Pslip-H 291S，pScIKP-Pslip-M322T，pScIKP-Pslip-A343M，pScIKP-Pslip-G385Q，pScIKP-Pslip-G 401S，pScIKP-Pslip-K 423v，pScIKP-Pslip-T 505S，pScIKP-Pslip-Q 522P，pScIKP-Pslip-G529N，pScIKP-Pslip-I 542E，pScIKP-Pslip-A561Q，pScIKP-Pslip-G569S，pScIKP-Pslip-Q570P，pScIKP-Pslip-A583S和pScIKP-Pslip-V591L载体也都分别导入汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831和菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592中，并通过PCR验证了导入成功。
实施例3菌剂的制备
将木糖氧化碱菌反硝化亚种CGMCC 1.768、解淀粉芽孢杆菌CGMCC 1.1177、汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏诺卡菌CGMCC 4.1128，各菌按照最适培养基扩大培养后，菌液混合的体积比为10：5：10：1：5：10制备得到相应的菌剂。其中各菌混合前的浓度为2*108个/ml。
导入了脂肪酶基因或其变体汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831和菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592分别替换上述原始的没有导入脂肪酶基因的汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592对应的制备成为相应的菌剂。菌剂命名为：Pslip菌剂，A83T菌剂，G101Q菌剂，E112S菌剂，L124V菌剂，T143G菌剂，A165S菌剂，N249S菌剂，L261K菌剂，L268Q菌剂，H291S菌剂，M322T菌剂，A343M菌剂，G385Q菌剂，G401S菌剂，K423v菌剂，T505S菌剂，Q522P菌剂，G529N菌剂，I542E菌剂，A561Q菌剂，G569S菌剂，Q570P菌剂，A583S菌剂或V 591L菌剂。
实施例4菌剂垃圾处理效果验证
将来自某垃圾处理厂的垃圾经过粗分，去掉一些固体和不能分解的部分，分选出竹木类、废电池、塑料、玻璃、打火机、金属、织物等进行回收，将砖瓦石块等无机材料用于新型建材的制造。将剩余的有机质混合物破碎搅拌混匀，在混合过程中加入混合菌种，将混合菌种按照体积比1：50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照垃圾重量的0.5％(V/W)加入，通风供氧发酵5天，温度控制在45°C，将生物处理所产生的渗滤水经发酵罐底管道进入污水处理系统，产生的废气经过发酵罐上部的管道进入废气处理系统；将发酵后的产物作为有机肥进行后续的利用。所述的混合菌种为各个菌种经扩大培养后，按如下体积比混合：木糖氧化碱菌反硝化亚种CGMCC 1.768、解淀粉芽孢杆菌CGMCC 1.1177、汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏诺卡菌CGMCC 4.1128，各菌扩大培养后，菌液混合的体积比为10∶10∶20∶30∶15∶20，各菌液在混合前的细胞浓度为2*108个/ml。混合后的菌剂浓度为也基本相同。通过处理后，垃圾的重量减重率(垃圾减重率-(分选后的垃圾重量-发酵好的垃圾重量)/分选后的垃圾重量X100％)为40.21％。
同时检测处理后的垃圾样品中的脂肪含量以及蛋白质含量。脂肪含量测定方法：参照GB/T5009.6-2003方法中索氏抽提法，利用SZC-C脂肪测定仪乙醚作为提取剂，测定处理后的垃圾中脂肪含量。粗蛋白含量测定方法：参照GB/T6432-94方法用KDY-9820型凯氏定氮仪，测定处理后垃圾中粗蛋白含量。通过测定，二者的含量分别为6.32％，2.1％。处理后的垃圾在味觉上仍然呈现酸败气味。
将汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592分别导入了脂肪酶基因后的转基因的汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC 2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC2.1592制备得到的菌剂按照上述相似的方法，也分别测定相应的数据，结果如下：
实施例5有机肥效果验证
将实施例4发酵之后得到的发酵产物，经过干燥粉碎后，以每m2玉米苗田施加10kg发酵后的有机肥的比例，分别施加本发明制备得到的有机肥，施加之后，不施加其它肥料，行距株距相同，从发芽开始，培养100d，测定1m2内植株的生物量，具体数据如下：
从以上结果可以看出，本发明制备的到的有机肥，其油脂类物质能够更好的被消化为小分子的物质从而被植物利用，提高了植物的利用效率。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
〈110〉窦欣童
〈120〉一种城市垃圾处理方法
〈160〉4
〈210〉1
〈211〉1854
〈212〉DNA
〈213〉人工序列
〈400〉Pslip
1 atgggtgtgt atgactacaa gaacttcggc acagccgatt ccaaagcgtt attcaccgac
61 gctatggcga tcacgctgta ttcctatcac aacctcgaca atggctttgc caccggctac
121 cagcacaacg gcttcggcct gggcttgccg gcgactttgg ttaccgcgct gctgggcggc
181 accgactctc aaggcgtgat ccccggcatt ccctggaacc ccgattcgga aaaagccgcc
241 ctggaggccg tgcaaaaagc cggctggacg cccatcacgg cctcgcaact gggttatgac
301 ggcaaggtcg acgctcgcgg aacgttcttc ggcgagaagg ccgggtacac cagcgcgcag
361 gtcgaaatcc tcggcaagta cgatgctcaa ggccatctca gcgaaatcgg catcgccttt
421 cgcggcacca gcggcccgcg ggaaatcttg atcggcgatt ccatcggcga cgtgatcaac
481 gatctgctgg cggcgctagg tcccaaggat tatgcgaaaa actatgtggg tgaagccttc
541 ggcaatctgc tcggcgacgt catggcgttt gcccaggcca atggcctgtc gggaaaaaac
601 gtgctggtca gcggccacag cctcggcggg ctggcggtca acagcctggc ggacttgagc
661 gcggagaagt ggtccgggtt ctaccaggat tccaactaca tcgcctacgc gtccccgacc
721 cagagcagca ccgacaaagt gctcaatgtc ggctatgaaa acgacccggt ttttcgggct
781 ctcgacggtt catccttcaa cctttcgtcg gtgggtgtgc acgatgccgc caaggcctcg
841 gcgaccgata acatcgtcag cttcaacgat cactacgcct cgaccgcatg gaatgtgctg
901 ccgttctcca tcctcaacat cccgacctgg atctcgcact tgccgaccgc ctatggcgac
961 ggcatgaacc gggtgatcga atcgaagttc tacgacctca ccagcaagga ctcgacgatc
1021 gtcgtcgcca atctctcgga cccggcacgc gccaatacct gggttcagga cctcaatcgc
1081 aacgccgaaa cccacaaggg cagtaccttc atcatcggca gcgacggcaa cgacctgatt
1141 cagggtggca agggtaacga ctacctggag gggcgtgacg gtaacgacac cttccgtgac
1201 ggcggcggct acaacatcgt attgggtggc aagggcagca acgtgctgga cttgcagcag
1261 tcggtgaaaa atttcaactt tgccaacgat ggcgccggca ccctctatgt tcgtgacgcc
1321 aatggcggta tcagcatcac ccgagacatc ggcagtattg tcaccaagga accggggttc
1381 ttgtgggggc tgttcaagga tgatgtgacg cacagtgtga cggccaatgg acttgccgtc
1441 ggcaacaacc tgacgtcata cgcgtcatcg gtgaagggcg gcacgggggc cgatacgctc
1501 aaggcgcata cgacgggcga ttggttgttc ggtctggacg gcaacgatca tttgatcggc
1561 ggccagggca acgatgtgtt tgtgggcggg gcggggaatg acctgatgga atcggggggc
1621 gggattgata cgttcctgtt cagcggtgcg tttggtcagg accgggtggt ggggtatcag
1681 gcaaacgaca agctggtatt cctcggggtt cagggggtcg cgccgaatga tgactatcgg
1741 gctcatgcca cgacggtggg gcaggatacg gtgctgacgt ttggcgggga ttcggtgacg
1801 ttggttgggg tggcgctcaa tagcctcagt gctgatggaa tcgtgatcgc ctga
〈210〉2
〈211〉28
〈212〉DNA
〈213〉人工序列
〈400〉引物1
GGATCCatgggtgtgtatgactacaaga
〈210〉3
〈211〉28
〈212〉DNA
〈213〉人工序列
〈400〉引物2
ACTAGTtcaggcgatcacgattccatcagc
〈210〉4
〈211〉617
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉Pslip蛋白质
1 MGVYDYKNFG TADSKALFTD
21 AMAITLYSYH NLDNGFATGY
41 QHNGFGLGLP ATLVTALLGG
61 TDSQGVIPGI PWNPDSEKAA
81 LEAVQKAGWT PITASQLGYD
101 GKVDARGTFF GEKAGYTSAQ
121 VEILGKYDAQ GHLSEIGIAF
141 RGTSGPREIL IGDSIGDVIN
161 DLLAALGPKD YAKNYVGEAF
181 GNLLGDVMAF AQANGLSGKN
201 VLVSGHSLGG LAVNSLADLS
221 AEKWSGFYQD SNYIAYASPT
241 QSSTDKVLNV GYENDPVFRA
261 LDGSSFNLSS VGVHDAAKAS
281 ATDNIVSFND HYASTAWNVL
301 PFSILNIPTW ISHLPTAYGD
321 GMNRVIESKF YDLTSKDSTI
341 VVANLSDPAR ANTWVQDLNR
361 NAETHKGSTF IIGSDGNDLI
381 QGGKGNDYLE GRDGNDTFRD
401 GGGYNIVLGG KGSNVLDLQQ
421 SVKNFNFAND GAGTLYVRDA
441 NGGISITRDI GSIVTKEPGF
461 LWGLFKDDVT HSVTANGLAV
481 GNNLTSYASS VKGGTGADTL
501 KAHTTGDWLF GLDGNDHLIG
521 GQGNDVFVGG AGNDLMESGG
541 GIDTFLFSGA FGQDRVVGYQ
561 ANDKLVFLGV QGVAPNDDYR
581 AHATTVGQDT VLTFGGDSVT
601 LVGVALNSLS ADGIVIA*
Claims (6)
1.一种城市生活垃圾的处理方法，包括施加一种混合菌剂。
2.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于：所述的混合菌剂为木糖氧化碱菌反硝化亚种CGMCC 1.768、解淀粉芽孢杆菌CGMCC 1.1177、汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592、嗜角蛋白粉落霉CGMCC3.3544、巴氏诺卡菌CGMCC4.1128，各菌扩大培养后，菌液混合的体积比为10~15∶5~10∶10~20∶1~30∶5~15∶10~20。
3. 如权利要求2所述的处理方法，其特征在于：其中汉逊德巴利酵母汉逊变种CGMCC2.1831、菱型伊萨酵母CGMCC 2.1592中分别导入了pScIKP-Pslip质粒，其中pScIKP-Pslip为pScIKP载体上加入了Pslip基因，所述基因的序列如SEQ ID No：1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID No：4所示。
4. 如权利要求3所述的处理方法，其特征在于：其中Pslip基因编码的氨基酸序列存在一个突变，所述的突变位点为在SEQ ID No：4所示序列基础上分别进行如下突变：A83T，G101Q，E112S，L124V，T143G，A165S，N249S，L261K，L268Q，H291S，M322T，A343M，G385Q，G401S，K423v，T505S，Q522P，G529N，I542E，A561Q，G569S，Q570P，A583S或V591L。
5. 一种处理城市生活垃圾的处理方法，首先原生垃圾先经过粗分选工序，分选出竹木类、废电池、塑料、玻璃、打火机、金属、织物等进行回收，将砖瓦石块等无机材料用于新型建材的制造；将剩余的有机物质混合物破碎搅拌混匀，在混合过程中加入混合菌种，将混合菌种按照体积比1 ： 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照垃圾重量的 0.5% (V/W)加入，通风供氧发酵5天，温度控制在45℃，将生物处理所产生的渗滤水经发酵罐底管道进入污水处理系统，产生的废气经过发酵罐上部的管道进入废气处理系统，产生的有机物质作为有机肥被利用；其中混合菌种为权利要求3-4中任一所述的菌剂。
6. 一种蛋白变体，其特征在于：所述蛋白变体是在SEQ ID No：4所示序列基础上进行如下任一点突变：A83T，G101Q，E112S，L124V，T143G，A165S，N249S，L261K，L268Q，H291S，M322T，A343M，G385Q，G401S，K423 V，T505S，Q522P，G529N，I542E，A561Q，G569S，Q570P，A583S或V591L。
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