CN106047833A

CN106047833A - OsCIPK31及其编码基因在调控植物除草剂抗性中的应用

Info

Publication number: CN106047833A
Application number: CN201610659128.8A
Authority: CN
Inventors: 李天亚; 玄元虎; 刘景淼
Original assignee: Shenyang Agricultural University
Current assignee: Shenyang Agricultural University
Priority date: 2016-08-12
Filing date: 2016-08-12
Publication date: 2016-10-26
Anticipated expiration: 2036-08-12
Also published as: CN106047833B

Abstract

本发明公开了OsCIPK31及其编码基因在调控植物除草剂抗性中的应用。OsCIPK31为氨基酸序列是序列1的蛋白质；OsCIPK31编码基因为如下1)或2)或3)：1)编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码OsCIPK31的cDNA分子或基因组DNA分子；3)在严格条件下与1)限定的核苷酸序列杂交，且编码OsCIPK31的cDNA分子或基因组DNA分子。实验证明，向植物中导入OsCIPK31编码基因，植物抗除草剂能力增强，敲除该编码基因可导致植物对除草剂敏感，可以利用OsCIPK31及其编码基因调控植物的除草剂抗性。

Description

OsCIPK31及其编码基因在调控植物除草剂抗性中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域中OsCIPK31及其编码基因在调控植物除草剂抗性中的应用。

背景技术

除草剂在现代农业中应用非常广泛，其施用可减少杂草生长并提高目的作物产量。阿特拉津是一种常用的除草剂，它的杀草谱较广，适用范围广，但对作物也产生药害。因此研究作物抗阿特拉津的机制和研发抗除草剂品种在农业生产实践中十分关键,既具有理论价值,也具有实践意义。

Calcineurin B-like(CBL)-interacting protein kinase(CIPK)是Ca²⁺信号下游关键因子。CBL特异性结合钙离子后激活其结合激酶蛋白CIPK传到下游信号。CBL-CIPK复合体已报道参与各种植物抗逆途径，如盐、干旱、低温和渗透压带来的对植物的胁迫。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何调控植物的除草剂抗性。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了调控CIPK蛋白质活性的物质或调控植物CIPK蛋白质含量的物质在下述D1)-D4)中任一种中的应用：

D1)调控植物除草剂抗性；

D2)培育抗除草剂植物；

D3)制备调控植物除草剂抗性产品；

D4)制备培育抗除草剂植物产品。

所述调控CIPK蛋白质活性可通过选自改变CIPK蛋白质表达量、改变CIPK蛋白质编码基因的表达量、改变CIPK蛋白质编码基因拷贝数、启动子置换、启动子突变和基因突变的一种或多种方法实现。

上述应用中，CIPK蛋白质可来源于E1)、E2)或E3)：E1)植物；E2)单子叶植物；E3)水稻。在本发明的实施例中，CIPK蛋白质为来源于水稻的名称为OsCIPK31的蛋白质。

上述应用中，所述调控植物CIPK蛋白质含量的物质可为调控CIPK蛋白质编码基因表达的物质。

上述应用中，CIPK蛋白质可为如下A1)、A2)或A3)：

A1)氨基酸序列是序列1的蛋白质；

A2)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

为了使A1)中的蛋白质便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1、标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL

上述A2)中的CIPK蛋白质，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述A2)中的CIPK蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述A2)中的CIPK蛋白质的编码基因可通过将序列2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

上述应用中，所述调控植物CIPK蛋白质含量的物质可为CIPK蛋白质或其相关生物材料；所述生物材料为下述B1)至B7)中的任一种：

B1)编码CIPK蛋白质的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；

B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；

B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；

B5)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

B6)含有B1)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2)所述表达盒的转基因植物组织；

B7)含有B1)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2)所述表达盒的转基因植物器官。

上述应用中，所述编码CIPK蛋白质的核酸分子可为如下1)或2)或3)：

1)编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；

2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码CIPK蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；

3)在严格条件下与1)限定的核苷酸序列杂交，且编码CIPK蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子。

其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。

其中，序列2所示的DNA分子编码序列1所示的CIPK蛋白质。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的编码CIPK蛋白质的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的CIPK蛋白质的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码CIPK蛋白质且具有CIPK蛋白质功能，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的编码序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

上述应用中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。

上述应用中，B2)所述的含有编码CIPK蛋白质的核酸分子的表达盒(CIPK基因表达盒)，是指能够在宿主细胞中表达CIPK蛋白质的DNA，该DNA不但可包括启动CIPK基因转录的启动子，还可包括终止CIPK基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。可用于本发明的启动子包括但不限于：组成型启动子，组织、器官和发育特异的启动子，和诱导型启动子。启动子的例子包括但不限于：花椰菜花叶病毒的组成型启动子35S：来自西红柿的创伤诱导型启动子，亮氨酸氨基肽酶("LAP",Chao等人(1999)Plant Physiol 120：979-992)；来自烟草的化学诱导型启动子，发病机理相关1(PR1)(由水杨酸和BTH(苯并噻二唑-7-硫代羟酸S-甲酯)诱导)；西红柿蛋白酶抑制剂II启动子(PIN2)或LAP启动子(均可用茉莉酮酸甲酯诱导)；热休克启动子(美国专利5，187，267)；四环素诱导型启动子(美国专利5，057,422)；种子特异性启动子，如谷子种子特异性启动子pF128(CN101063139B(中国专利200710099169.7))，种子贮存蛋白质特异的启动子(例如，菜豆球蛋白、napin,oleosin和大豆beta conglycin的启动子(Beachy等人(1985)EMBO J.4：3047-3053))。它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用。此处引用的所有参考文献均全文引用。合适的转录终止子包括但不限于：农杆菌胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)、花椰菜花叶病毒CaMV 35S终止子、tml终止子、豌豆rbcS E9终止子和胭脂氨酸和章鱼氨酸合酶终止子(参见，例如：Odell等人(I⁹⁸⁵)Nature 313:810；Rosenberg等人(1987)Gene,56:125；Guerineau等人(1991)Mol.Gen.Genet,262:141；Proudfoot(1991)Cell,64:671；Sanfacon等人Genes Dev.,5:141；Mogen等人(1990)Plant Cell,2:1261；Munroe等人(1990)Gene,91:151；Ballad等人(1989)Nucleic Acids Res.17:7891；Joshi等人(1987)Nucleic Acid Res.,15:9627)。

可用现有的表达载体构建含有所述CIPK基因表达盒的重组载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。如pAHC25、pBin438、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb(CAMBIA公司)等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3′端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3′端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂碱合成酶基因Nos)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3′端转录的非翻译区均具有类似功能。使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、抗生素的标记基因(如赋予对卡那霉素和相关抗生素抗性的nptII基因，赋予对除草剂膦丝菌素抗性的bar基因，赋予对抗生素潮霉素抗性的hph基因，和赋予对氨甲喋呤抗性的dhfr基因，赋予对草甘磷抗性的EPSPS基因)或是抗化学试剂标记基因等(如抗除莠剂基因)、提供代谢甘露糖能力的甘露糖-6-磷酸异构酶基因。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

上述应用中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。所述质粒具体可为PGA1611载体。

B3)所述重组载体可含有序列2的DNA序列。进一步B3)所述重组载体具体可为PGA1611-OsCIPK31。所述PGA1611-OsCIPK31为将PGA1611载体的HindIII和BamHI识别序列间的DNA序列替换为序列1所示的DNA片段得到的表达序列2所示的蛋白质的重组载体。

上述应用中，所述微生物可为酵母、细菌、藻或真菌。其中，细菌可为农杆菌，如农杆菌LBA4404。

上述应用中，所述转基因植物细胞系、转基因植物组织和转基因植物器官均不包括繁殖材料。

上述应用中，所述除草剂可为阿特拉津。

上述应用中，所述植物可为M1)或M2)：M1)单子叶植物或双子叶植物；M2)水稻。

为解决上述技术问题，本发明还提供了下述X1)-X4)中任一所述的方法：

X1)培育抗除草剂转基因植物的方法，包括使受体植物中表达CIPK蛋白质，提高受体植物中CIPK蛋白质的含量，或提高受体植物中CIPK蛋白质的活性；

X2)培育抗除草剂转基因植物的方法，包括向受体植物中导入所述CIPK蛋白质的编码基因得到除草剂抗性高于所述受体植物的抗除草剂转基因植物；

X3)培育对除草剂敏感转基因植物的方法，包括降低受体植物中CIPK蛋白质含量，或降低受体植物中CIPK蛋白质的活性；

X4)培育对除草剂敏感植物的方法，包括抑制受体植物中所述CIPK蛋白质的编码基因的表达得到除草剂抗性低于所述受体植物的除草剂敏感植物。

上述方法中，所述CIPK蛋白质的编码基因可为所述编码CIPK蛋白质的核酸分子。

在本发明的实施例中，所述CIPK蛋白质的编码基因(即序列2所示的DNA分子)通过含有CIPK基因表达盒的CIPK基因重组表达载体导入目的植物中。所述CIPK基因表达盒中，启动CIPK基因转录的启动子为Ubiquitin启动子。

上述方法中，其中所述CIPK基因可先进行如下修饰，再导入受体种子植物中，以达到更好的表达效果：

1)根据实际需要进行修饰和优化，以使基因高效表达；例如，可根据受体植物所偏爱的密码子，在保持本发明所述CIPK基因的氨基酸序列的同时改变其密码子以符合植物偏爱性；优化过程中，最好能使优化后的编码序列中保持一定的GC含量，以最好地实现植物中导入基因的高水平表达，其中GC含量可为35％、多于45％、多于50％或多于约60％；

2)修饰邻近起始甲硫氨酸的基因序列，以使翻译有效起始；例如，利用在植物中已知的有效的序列进行修饰；

3)与各种植物表达的启动子连接，以利于其在植物中的表达；所述启动子可包括组成型、诱导型、时序调节、发育调节、化学调节、组织优选和组织特异性启动子；启动子的选择将随着表达时间和空间需要而变化，而且也取决于靶物种；例如组织或器官的特异性表达启动子，根据需要受体在发育的什么时期而定；尽管证明了来源于双子叶植物的许多启动子在单子叶植物中是可起作用的，反之亦然，但是理想地，选择双子叶植物启动子用于双子叶植物中的表达，单子叶植物的启动子用于单子叶植物中的表达；

4)与适合的转录终止子连接，也可以提高本发明基因的表达效率；例如来源于CaMV的tml，来源于rbcS的E9；任何已知在植物中起作用的可得到的终止子都可以与本发明基因进行连接；

5)引入增强子序列，如内含子序列(例如来源于Adhl和bronzel)和病毒前导序列(例如来源于TMV,MCMV和AMV)。

所述CIPK基因表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导、基因枪等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。

所述方法还包括从导入序列2所示的CIPK的编码基因的植株中筛选表达所述编码基因的植株，得到所述转基因小麦。

上述方法中，所述除草剂可为阿特拉津。

上述方法中，所述受体植物可为M1)或M2)：M1)单子叶植物或双子叶植物；M2)水稻。

为解决上述技术问题，本发明还提供了抗除草剂产品。

本发明所提供的抗除草剂产品，含有CIPK蛋白质或所述生物材料。

上述抗除草剂产品可以以CIPK蛋白质或所述生物材料作为活性成分，还可以将CIPK蛋白质或所述生物材料与其它抗除草剂物质进行组合得到的组合物作为活性成分。

本发明中，所述转基因植物理解为不仅包含将所述TaZnF2基因转化目的植物得到的第一代转基因植物，也包括其子代。对于转基因植物，可以在该物种中繁殖该基因，也可用常规育种技术将该基因转移进入相同物种的其它品种，特别包括商业品种中。所述转基因植物包括种子、愈伤组织、完整植株和细胞。

实验证明，本发明的CIPK蛋白质及其编码基因可以调控植物的除草剂抗性：将本发明的CIPK蛋白质的编码基因导入植物后得到的转基因植物中CIPK蛋白质编码基因的表达显著升高，将CIPK蛋白质的编码基因敲除得到的突变体中CIPK蛋白质编码基因的表达显著下降。除草剂对转基因植物的鲜重抑制率显著低于野生型植物，对突变体的鲜重抑制率显著高于野生型植物；除草剂对转基因植物的叶绿素抑制率显著低于野生型植物，对突变体cipk31的叶绿素抑制率显著高于野生型植物。表明，向植物中导入CIPK蛋白质编码基因，植物的抗除草剂能力增强；相反，敲除植物CIPK蛋白质编码基因可导致植物对除草剂敏感。可以利用本发明的CIPK蛋白质及其编码基因调控植物的除草剂抗性。

附图说明

图1为OsCIPK31基因敲除突变体中T-DNA(Ds)在OsCIPK31基因中的插入位置(A)和PGA1611-OsCIPK31重组载体部分结构示意图(B)。其中，CIPK31OX表示PGA1611-OsCIPK31。

图2为野生型(WT)、突变体cipk31和转PGA1611-OsCIPK31水稻在是否经阿特拉津处理的表型(A)和OsCIPK31基因表达差异(B)。

图3为野生型(WT)、突变体cipk31和转PGA1611-OsCIPK31水稻的鲜重抑制率。

图4为野生型(WT)、突变体cipk31和转PGA1611-OsCIPK31水稻的叶绿素抑制率。

图2-图4中，CIPK31OX表示转PGA1611-OsCIPK31水稻。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的突变体cipk31(Piao HL,Xuan YH,Park SH,Je BI,Park SJ,ParkSH,Kim CM,Huang J,Wang GK,Kim MJ,Kang SM,Lee IJ,Kwon TR,Kim YH,Yeo US,Yi G,Son D,Han CD.OsCIPK31,a CBL-interacting protein kinase is involved ingermination and seedling growth under abiotic stress conditions in riceplants.Mol Cells.2010,30:19-27)为从水稻Ds突变体库中筛选出的OsCIPK31基因敲除突变体，该突变体中T-DNA(Ds)在OsCIPK31基因中的插入位置如图1中A所示。

下述实施例中用到的限制性内切酶均为Takara产品。

实施例1、用于过表达OsCIPK31基因的重组载体构建

本发明提供了来源于水稻的OsCIPK31基因，OsCIPK31(LOC_Os03g20380)基因的核苷酸序列为序列2第1-1350位核苷酸，编码的蛋白质的名称为OsCIPK31，该蛋白的氨基酸序列为序列1。

提取水稻日本晴的RNA，反转录为cDNA。以此cDNA为模板，以5′-AAGCTTATGTATAGGGCTAAGAGGGCTG-3′和5′-GGATCCTCACGCCGCGGCGCCGTTG-3′为引物扩增，得到PCR产物。

用HindIII和BamHI酶切该PCR产物，将得到的含有序列2的酶切产物命名为酶切产物1；用HindIII和BamHI酶切PGA1611载体(Piao HL,Xuan YH,Park SH,Je BI,Park SJ,Park SH,Kim CM,Huang J,Wang GK,Kim MJ,Kang SM,Lee IJ,Kwon TR,Kim YH,Yeo US,YiG,Son D,Han CD.OsCIPK31,a CBL-interacting protein kinase is involved ingermination and seedl ing growth under abiotic stress conditions in riceplants.Mol Cells.2010,30:19-27)，得到PGA1611骨架载体。连接酶切产物1与PGA1611骨架载体，使序列1所示的DNA分子插入PGA1611载体的HindIII和BamHI位点间，得到重组载体。

经过测序，该重组载体为将序列表中序列1自5′末端第1位-1350位核苷酸所示的OsCIPK31基因插入PGA1611载体的HindIII和BamHI酶切位点间(结构示意图如图1中B所示)，将该重组载体命名为PGA1611-OsCIPK31。该重组载体中Ubiquitin基因的启动子(pUbiquitin)启动OsCIPK31基因的表达。

实施例2、获得转基因水稻

1、过表达转基因株系的获得

1)过表达转基因株系的获得

将实施例1获得的PGA1611-OsCIPK31转入农杆菌LBA4404(Takara Bio company，Cat.9115)，得到重组菌。将该重组菌命名为LBA4404/PGA1611-OsCIPK31。

将LBA4404/PGA1611-OsCIPK31转化到水稻日本晴(以下也称为野生型水稻)中，潮霉素筛选，获得了20个T₀代转PGA1611-OsCIPK31水稻，即为CIPK31过表达转基因株系。

2)分子鉴定

对上述获得的20个T₀代转PGA1611-OsCIPK31水稻、突变体cipk31和野生型水稻(WT)进行分子鉴定，提取水稻根的总RNA经反转录后，用如下引物进行RT-PCR方法鉴定：

OsCIPK31-F:AGTAGCTCCATCCTTACATG

OsCIPK31-R:TGGCAAAAACCACGTTCACG

内参基因为Actin，内参引物为：

Actin-F:TCCATCTTGGCATCTCTCAG

Actin-R:GTACCCGCATCAGGCATCTG

结果如图2所示，CIPK31敲除突变体(cipk31)中OsCIPK31基因的相对表达量低于野生型水稻(WT)，T₀代转PGA1611-OsCIPK31水稻中OsCIPK31基因的相对表达量高于野生型水稻(WT)，且差异均达到显著性水平，结果如图2中B所示。

采用同样的方法将空载体PGA1611载体转入野生型水稻中，得到T₀代转PGA1611水稻。

将上述T₀代转PGA1611-OsCIPK31水稻和T₀代转PGA1611水稻均播种传代，分别得到T₁代转PGA1611-OsCIPK31水稻和T₁代转PGA1611水稻。

2、RNA干扰转基因表型观察

将野生型水稻(WT)、OsCIPK31基因敲除突变体cipk31以及T₁代转PGA1611-OsCIPK31水稻与T₁代转PGA1611水稻播种于阿特拉津-MS培养基(阿特拉津-MS培养基为向MS培养基中加入阿特拉津得到的阿特拉津质量百分比浓度为2％的液体培养基)，并用不含阿特拉津的MS液体培养基作为对照，将播种当天记为处理第0天。

每个株系10株，实验重复3次，结果取平均值。

在处理第14天拍照(图2中A)，然后测定各植株的整株的鲜重与叶片中叶绿素含量，计算鲜重抑制率与叶绿素抑制率，鲜重抑制率＝(未经阿特拉津处理的植株鲜重-经阿特拉津处理的植株鲜重)/未经阿特拉津处理的植株鲜重×100％，叶绿素抑制率＝(未经阿特拉津处理的植株叶绿素含量-经阿特拉津处理的植株叶绿素含量)/未经阿特拉津处理的植株叶绿素含量×100％。

T₁代转PGA1611水稻的鲜重抑制率与野生型水稻无显著差异，T₁代转PGA1611-OsCIPK31水稻的鲜重抑制率(鲜重抑制率为38.7±6.4％)显著低于野生型水稻(WT)(鲜重抑制率为61.9±5.7％)，突变体cipk31的鲜重抑制率(鲜重抑制率为77.1±5.8％)显著高于野生型水稻(WT)(图3)。

T₁代转PGA1611水稻的叶绿素抑制率与野生型水稻无显著差异，T₁代转PGA1611-OsCIPK31水稻的叶绿素抑制率(叶绿素抑制率为29.7±5.6％)显著低于野生型水稻(WT)(叶绿素抑制率为54.9±4.9％)，突变体cipk31的叶绿素抑制率(叶绿素抑制率为29.7±5.6％)显著高于野生型水稻(WT)(图4)。

表明，向水稻中导入OsCIPK31基因，水稻的抗阿特拉津能力增强；相反，敲除OsCIPK31基因可导致水稻对阿特拉津敏感。

Claims

1.调控CIPK蛋白质活性的物质或调控植物CIPK蛋白质含量的物质在下述D1)-D4)中任一种中的应用：

D1)调控植物除草剂抗性；

D2)培育抗除草剂植物；

D3)制备调控植物除草剂抗性产品；

D4)制备培育抗除草剂植物产品。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：CIPK蛋白质来源于E1)、E2)或E3)：E1)植物；E2)单子叶植物；E3)水稻。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述调控植物CIPK蛋白质含量的物质为调控CIPK蛋白质编码基因表达的物质。

4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：CIPK蛋白质为如下A1)、A2)或A3)：

A1)氨基酸序列是序列1的蛋白质；

A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述调控植物CIPK蛋白质含量的物质为CIPK蛋白质或其相关生物材料；所述生物材料为下述B1)至B7)中的任一种：

B1)编码CIPK蛋白质的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；

5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于：所述编码CIPK蛋白质的核酸分子为如下1)或2)或3)：

1)编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；

6.根据权利要求1-5中任一所述的应用，其特征在于：所述除草剂为阿特拉津；所述植物为M1)或M2)：M1)单子叶植物或双子叶植物；M2)水稻。

7.下述X1)-X4)中任一所述的方法：

X2)培育抗除草剂转基因植物的方法，包括向受体植物中导入权利要求1-4中任一所述CIPK蛋白质的编码基因得到除草剂抗性高于所述受体植物的抗除草剂转基因植物；

X4)培育对除草剂敏感植物的方法，包括抑制受体植物中权利要求1-4中任一所述CIPK蛋白质的编码基因的表达得到除草剂抗性低于所述受体植物的除草剂敏感植物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述CIPK蛋白质的编码基因为权利要求4或5中所述编码CIPK蛋白质的核酸分子。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述除草剂为阿特拉津；所述受体植物为M1)或M2)：M1)单子叶植物或双子叶植物；M2)水稻。

10.抗除草剂产品，其特征在于：所述产品含有权利要求1-4中任一所述CIPK蛋白质或权利要求4或5中所述生物材料。