CN105949254B - 一种糖苷化合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种糖苷化合物及其制备方法，属于天然化合物技术领域。本发明通过云芝栓孔菌和灵芝属真菌发酵共培养，得到具有式I所示结构的糖苷化合物。本发明获得的糖苷化合物在制备提高呼吸道上皮细胞Beas‑2B细胞活性的药物、抑制革兰氏阳性菌的药物和抑制人类致病菌药物中有很好的应用，本发明为充分开发利用云芝栓孔菌合成天然产物的潜力提供了一条新途径。

Description

一种糖苷化合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及天然化合物技术领域，具体涉及一种糖苷化合物及其制备方法。
背景技术
云芝栓孔菌属担子菌门木腐真菌，又称杂色云芝、彩绒革盖菌、杂色云芝、云芝蘑等。研究发现其含甾体类、三萜类、有机酸类、生物碱类、葡糖醇类、蛋白质类、糖类、糖肽类等化合物，还含胞外黏性物质、胃蛋白酶抑制剂、18种人体所需的氨基酸和维生素B1、B2、B6及铜、铁、钾、锌等10多种人体所需的活性微量元素等其他类化合物。云芝栓孔菌具有去湿、化痰、疗肺疾等功效，可以治疗慢性支气管炎、迁延性肝炎、白血病、小儿痉支炎等疾病；该菌也可作为肝癌免疫治疗的药物，其菌丝体提取的多糖和从发酵液中提取的多糖均具有强烈地抑癌性。
目前云芝栓孔菌的培养通常采用传统培养方法，食药用真菌的研究主要针对其单培养菌丝体，子实体或发酵液，从中提取纯化出多种活性天然产物，有很高的食药用价值，但往往缺乏结构新颖性的化合物，且有效药用组分种类较少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种糖苷化合物及其制备方法，该糖苷化合物在制备提高呼吸道上皮细胞Beas-2B细胞活性的药物、抑制革兰氏阳性菌的药物和抑制人类致病菌药物中有很好的应用，本发明为充分开发利用云芝栓孔菌合成天然产物的潜力提供了一条新途径。
本发明提供了具有式I所示结构的糖苷化合物，
本发明还提供了上述糖苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
以云芝栓孔菌和灵芝属真菌发酵共培养，得到具有式I所示结构的糖苷化合物。
优选的是，所述灵芝属真菌为树舌灵芝或木灵芝。
优选的是，所述共培养具体为：
将灵芝属真菌接种后进行发酵培养；
在所述灵芝属真菌接种1～2天后，将云芝栓孔菌接种进行发酵培养；
待云芝栓孔菌培养3～4天后，将所述灵芝属真菌的发酵液接种于云芝栓孔菌发酵液中进行发酵共培养18～23天，得到糖苷化合物。
优选的是，所述灵芝属真菌的发酵液在云芝栓孔菌发酵液中的接种量40～60％。
优选的是，所述发酵共培养的培养温度为26～28℃，所述发酵共培养在摇床上进行，摇床的转速为160～180rpm。
优选的是，所述发酵共培养的培养基包括以下质量含量的组分：葡萄糖8～12g/L，磷酸二氢钾0.8～1.4g/L，硫酸镁0.3～0.5g/L，蛋白胨1.5～3g/L，余量的水。
本发明还提供了上述技术方案所述的糖苷化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备提高呼吸道上皮细胞Beas-2B细胞活性的药物中的应用。
本发明还提供了上述技术方案所述的糖苷化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备抑制革兰氏阳性菌的药物中的应用。
本发明还提供了上述技术方案所述的糖苷化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备抑制人类致病菌药物中的应用。
本发明提供的具有式I所示结构的糖苷化合物具有提高呼吸道上皮细胞Beas-2B细胞活性，抑制人类致病菌和革兰氏阳性菌的功能，能够应用在提高呼吸道上皮细胞Beas-2B细胞活性、抑制革兰氏阳性菌和抑制人类致病菌的药物的制备中，为充分开发利用云芝栓孔菌合成天然产物的潜力提供了一条新途径。
附图说明
图1本发明实施例1式I所示糖苷化合物的一维质子核磁共振图谱；
图2本发明实施例1式I所示糖苷化合物的一维13C核磁共振图谱；
图3本发明实施例1式I所示糖苷化合物的二维异核多键相关核磁共振图谱；
图4本发明实施例1式I所示糖苷化合物的相关谱二维核磁共振图谱；
图5本发明实施例1式I所示糖苷化合物的二维异核单量子相关核磁共振图谱；
图6本发明实施例1式I所示糖苷化合物的碳谱DEPT90°谱；
图7本发明实施例1式I所示糖苷化合物的碳谱DEPT135°谱；
图8本发明实施例2不同浓度式I所示糖苷化合物处理后的BEAS-2B细胞活性；
图9本发明比较例1式I所示糖苷化合物抑制枯草芽孢杆菌的抑菌圈图谱；
图10本发明比较例1式I所示糖苷化合物抑制链球菌的抑菌圈图谱；
图11本发明比较例2式I所示糖苷化合物抑制新型隐球菌的抑菌圈图谱。
生物保藏说明
云芝栓孔菌(Trametes versicolor)。本菌种保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.12241，保藏时间为2016年4月19日。
具体实施方式
本发明提供了一种具有式I所示结构的糖苷化合物，
本发明的化合物为
N-(4-甲氧基苯基)甲酰胺2-氧-β-D-木糖苷。
本发明还提供了上述糖苷化合物的制备方法，包括以下步骤：
以云芝栓孔菌和灵芝属真菌发酵共培养，得到具有式I所示结构的糖苷化合物。
在本发明中，所述灵芝属真菌优选为树舌灵芝或木灵芝，本发明对所述树舌灵芝和木灵芝的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的树舌灵芝和木灵芝的市售商品即可。
在本发明中，所述共培养优选具体为：
将灵芝属真菌接种后进行发酵培养；
在所述灵芝属真菌接种1～2天后，将云芝栓孔菌接种进行发酵培养；
待云芝栓孔菌培养3～4天后，将所述灵芝属真菌的发酵液接种于云芝栓孔菌发酵液中进行发酵共培养18～23天，得到具有式I所示结构的糖苷化合物。
本发明中，在所述灵芝属真菌和云芝栓孔菌分别进行发酵培养过程中，本发明先进行灵芝属真菌的发酵培养，在所述灵芝属真菌的发酵培养开始1～2天后，再进行云芝栓孔菌的发酵培养。设置时间差的目的是为获得较高的起始菌体密度，以保证有相对充足的菌体量，从而获得更多的目标产物。在本发明中，所述灵芝属真菌的接种量优选为40～60％，所述云芝栓孔菌的接种量30～50％，所述灵芝属真菌和云芝栓孔菌的接种量优选相同。
本发明中，待云芝栓孔菌培养3～4天，菌丝体均有绿豆粒大小时，将所述灵芝属真菌的发酵液接种于云芝栓孔菌发酵液中进行发酵共培养。在本发明中，所述灵芝属真菌的发酵液在云芝栓孔菌发酵液中的接种量优选为40～60％，更优选为50％。
在本发明中，所述发酵共培养的时间优选为18～23天，更优选为20天，得到糖苷化合物。
在本发明中，所述发酵共培养的培养温度优选为26～28℃，更优选为28℃，所述发酵共培养优选在摇床上进行，摇床的转速为160～180rpm，更优选为160rpm。
当将灵芝属真菌发酵液接种到云芝栓孔菌发酵液中时，优选在混合后的发酵液中添加总培养体积30～60％的新鲜培养基，更优选为50％。
在本发明中，所述发酵共培养的培养基优选包括8～12g/L的葡萄糖，更优选为10g/L；
所述发酵共培养的培养基优选包括0.8～1.4g/L的磷酸二氢钾，更优选为1.2g/L；
所述发酵共培养的培养基优选包括0.3～0.5g/L的硫酸镁，更优选为0.35g/L；
所述发酵共培养的培养基优选包括1.5～3g/L的蛋白胨，更优选为2g/L；
所述发酵共培养的培养基包括余量的水。
在本发明中，所述灵芝属真菌和云芝栓孔菌分别进行培养时，所用培养基、培养温度和摇床培养条件与发酵共培养过程中的条件相同。
本发明发酵共培养得到的发酵液优选先采用常规的萃取方法进行式I所示糖苷化合物的分离纯化；然后经由不同形式的纯化方法，分离萃取得到的混合物，所述纯化方法包括硅胶柱层析或Flash中压制备，纯化过程中使用的不同极性的溶剂包括石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷及甲醇。
糖苷化合物是许多大型真菌和植物的次级代谢产物，一般具有抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗氧化、抗病毒、降血糖、治疗白血病、防治心脑血管疾病等多种生物活性。在本发明中，式I所示糖苷化合物能够提高呼吸道上皮细胞Beas-2B细胞活性，抑制人类致病菌和革兰氏阳性菌。
本发明还提供了上述技术方案所述的糖苷化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备提高呼吸道上皮细胞Beas-2B细胞活性的药物中的应用。所述糖苷化合物的有效剂量范围为1～5μM，更优选为3μM。
本发明还提供了上述技术方案所述的糖苷化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备抑制革兰氏阳性菌的药物中的应用。在本发明中，所述革兰氏阳性菌优选为枯草芽孢杆菌和/或链球菌。所述糖苷化合物产生50％抑制所需的浓度(IC50)为30～40μg/mL，更优选为35μg/mL。
本发明还提供了上述技术方案所述的糖苷化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备抑制人类致病菌药物中的应用。在本发明中，所述人类致病菌优选为新型隐球菌。所述糖苷化合物产生50％抑制所需的浓度(IC50)为40～50μg/mL，更优选为45μg/mL。
下面结合具体实施例对本发明所述的糖苷化合物及其制备方法做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
以50％的接种量将树舌灵芝和云芝栓孔菌接种于500mL规格的三角瓶(含100mL培养基)中，其中云芝栓孔菌接种时间比树舌灵芝要延迟2天。待云芝栓孔菌培养3天后，待两菌株菌丝体长到绿豆粒大小时，以50％的接种量(50mL，弃去部分培养基)将树舌灵芝菌丝体连同发酵液接种到云芝栓孔菌发酵液中，并添加50mL新鲜培养基，28℃下，160rpm水平摇床上培养20天。
培养基含有葡萄糖10g/L，磷酸二氢钾1.2g/L，硫酸镁0.35g/L和蛋白胨2g/L。共培养20天，收集发酵液。
取30L树舌灵芝和云芝栓孔菌共培养得到的发酵液，按体积比1：1加入乙酸乙酯连续萃取3次；合并萃取液，减压旋蒸得浸膏1.1g。在硅胶柱(26×457mm，青岛海洋化工厂，200-300目)上，使用石油醚-乙酸乙酯(20:1,10:1,5:1,1:1)，二氯甲烷-甲醇(20:1,10:1,5:1,1:1,0:1)体系作为洗脱液，对浸膏进行层析，得到9个组分，质谱检测发现，其中组分6(二氯甲烷：水＝10：1)和7(二氯甲烷：水＝5：1)中均含有本申请式I所示糖苷化合物(m/z+300.1075)，合并组分6和7，得到糖苷化合物粗组分60mg。接着对糖苷化合物粗组分进行中压分离(艾杰尔Flash分离柱：CO140080-0)，以甲醇-水体系进行洗脱(MeOH％，10-90％，60min；流速30mL/min)，质谱检测合并含式I所示糖苷化合物的馏分，共30mg。然后在硅胶柱上进一步分离纯化，以二氯甲烷-甲醇(体积比40:1,20:1,10:1,8:1,5:1,1:1,0:1)体系，每一比例洗脱液三倍柱体积洗脱，质谱检测发现式I所示糖苷化合物存在于8:1和5:1洗脱比例的洗脱液中。合并含式I所示糖苷化合物的馏分，然后在高压制备(HPLC)上进行进一步纯化，HPLC参数如下：制备柱：Venusil XBP C18(2)(21.2x250mm)，流速：8mL/min；流动相A：超纯水；流动相B：甲醇；梯度：10％，5min；10-90％，40min；接样体积：8mL。合并含m/z 300组分，质谱检测，得式I所示糖苷化合物的单体9mg。
实施例2
以40％的接种量将木灵芝和云芝栓孔菌接种于1000mL规格的三角瓶(含200mL培养基)中，其中云芝栓孔菌接种时间比木灵芝要延迟1天。待云芝栓孔菌培养4天后，待两菌株菌丝体均有绿豆粒大小时，以40％的接种量(50mL)将木灵芝菌丝体连同发酵液接种到云芝栓孔菌发酵液中，并添加100mL新鲜培养基，26℃下，180rpm水平摇床上培养18天。
培养基含有葡萄糖10g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.5g/L和蛋白胨2g/L。共培养18天，收集发酵液。
取20L木灵芝和云芝栓孔菌共培养得到的发酵液，减压旋蒸浓缩至100mL，然后以80％乙醇静置沉淀多糖。离心取上清，浓缩至200mL，以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇等体积分别萃取3次，质谱检测发现本申请式I所示糖苷化合物(m/z+300.1075)主要集中在二氯甲烷和乙酸乙酯萃取层。合并两萃取相，浓缩得浸膏300mg。在艾杰尔中压分离系统上对浸膏进行中压分离(Flash分离柱：CO140080-0)，以甲醇-水体系进行洗脱(MeOH％，10-90％，60min；30mL/min)，质谱检测合并含式I所示糖苷化合物的馏分，共50mg。然后在高压制备(HPLC)上进行纯化，HPLC参数如下：制备柱：Venusil XBP C18(2)(21.2x250mm)，流速：8mL/min；流动相A：超纯水；流动相B：甲醇；梯度：10％B，5min；10-90％B，40min。质谱检测，合并含m/z 300组分共10mg。为进一步纯化粗馏分，在高压制备(HPLC)上以Agilent ZORBAXSB-C18(9.4x150mm)半制备柱进行分离，流速：5mL/min；流动相A：超纯水；流动相B：甲醇；梯度：10-25％B，60min。质谱检测，得式I所示糖苷化合物的单体6.7mg。
实施例3
化合物的分离及定性
以45％的接种量将树舌灵芝和云芝栓孔菌接种于500mL三角瓶(含100mL培养基)中，其中云芝栓孔菌接种时间比树舌灵芝要延迟2天。待云芝栓孔菌培养4天后，待两菌株菌丝体均有绿豆粒大小时，以45％的接种量将树舌灵芝菌丝体连同发酵液接种到云芝栓孔菌培养的发酵罐中，28℃下，160rpm转速下培养23天。
培养基含有葡萄糖9g/L，磷酸二氢钾1.2g/L，硫酸镁0.35g/L和蛋白胨2g/L。共培养23天，收集发酵液。
取10L树舌灵芝和云芝栓孔菌共培养得到的发酵液，冻干得干粉900mg。以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇超声提取，分别萃取3次，质谱检测发现本申请式I所示糖苷化合物(m/z+300.1075)主要集中在二氯甲烷和乙酸乙酯萃取层。合并两萃取相，浓缩得浸膏200mg。在硅胶柱(26×457mm，青岛海洋化工厂，200-300目)上，使用二氯甲烷-甲醇(40:1,20:1,10:1,5:1,1:1,0:1)体系作为洗脱液，对浸膏进行层析，得到6个组分，质谱检测发现本申请式I所示糖苷化合物主要集中在10:1和5:1的洗脱液中，减压旋干得60mg粗组分。在艾杰尔中压分离系统上对浸膏进行中压分离(Flash分离柱CO140080-0)，以甲醇-水体系进行洗脱(MeOH％，20-60％，50min，30mL/min)，质谱检测合并含式I所示糖苷化合物的馏分，共20mg。然后在高压制备(HPLC)上进行纯化，HPLC参数如下：制备柱：Venusil HILIC(21.2x250mm)，流速：8mL/min；流动相A：超纯水；流动相B：甲醇；梯度：80-20％B，60min。质谱检测，合并含m/z 300组分共9mg。为进一步纯化粗馏分，在高压制备(HPLC)上以AgilentZORBAX SB-C18(9.4x150mm)半制备柱进行分离，流速：5mL/min；流动相A：超纯水；流动相B：甲醇；梯度：10％，5min；10-30％，40min。质谱检测，得式I所示糖苷化合物的单体3.7mg。
式I所示糖苷化合物为：
N-(4-甲氧基苯基)甲酰胺2-氧-β-D-木糖苷。
通过以下步骤鉴别式I所示糖苷化合物的化学结构：
分离糖苷化合物的[M+H]+分子量为300.1075。该分子量由高分辨率电喷雾电离质谱仪(high-resolution electron spray ionization mass spectrometer，HRESIMS)在正离子模式下采集得到的。分离糖苷化合物的分子式为C13H17NO7，且不饱和度为6。
利用以下方法评估分离化合物的结构：使用600MHz核磁共振光谱(NMRspectrometer)测定质子核磁共振(1H-NMR)、13C核磁共振(13C-NMR)、异核多键相关核磁共振光谱(HMBC NMR spectrum)、相关谱(COSY)、异核单量子相关核磁共振光谱(HSQC NMRspectrum)、碳谱DEPT90°谱和碳谱DEPT135°谱。氘溶剂为CD3OD。
糖苷化合物的一维质子核磁共振(proton nuclear magnetic resonance，1H-NMR)图谱如图1所示。1H-NMR(600MHz，MeOD)：δH 8.27(1H,br s)，8.04(1H,d)，6.76(1H,d)，6.62(1H,q)，4.81(1H,d)，3.95(1H，m),3.77(3H，brs)，3.58(1H，m)，3.50(1H，d)，3.44(1H,s)，3.36(1H，s)。NMR图谱的质子信号显示出，三个芳香烃质子、一个与苯环连接的甲氧基、一个醛基质子以及六元糖环质子。
糖苷化合物的一维13C核磁共振(One-dimensional 13C NMR)图谱如图2所示，其中芳环的化学位移在δC 159.0、149.0、123.9、122.4、108.4、104.5，甲氧基的碳信号位于δC56.9，醛基碳信号位于δC 161.4。六元糖环的碳信号位于δC104.4、77.5、74.9、71.3、67.4。根据HRESIMS分析，分离化合物的不饱和度如下：芳环具有4个不饱和度，醛基和六元糖环各具有1个不饱和度。
糖苷化合物的二维异核多键相关(Heteronuclear Multiple Bond Coherence，HMBC)核磁共振图谱如图3所示。在δH 3.77处和碳化学位移为δC 159.0处、δH4.81处和碳化学位移为δC 149.0处均具有远程偶合。
糖苷化合物的相关谱(correlation spectroscopy，COSY)二维核磁共振图谱如图4所示。δH 3.77与δH 6.76、6.62相关。亦即证实，甲氧基与苯环直接连接。
糖苷化合物的二维异核单量子相关(Heteronuclear Singular QuantumCoherence，HSQC)核磁共振图谱如图5所示。碳化学位移(δC)与质子化学位移有关，并位于以下10个位置：161.4、123.9、108.4、104.5、104.4、77.5、74.9、71.3、67.4和56.9。
糖苷化合物的碳谱DEPT90°谱如图6所示。CH信号δC123.9、108.4和104.5亦显示有苯环存在。
糖苷化合物的碳谱DEPT135°谱如图7所示。δC67.4显示存在CH2，δC56.9亦显示甲氧基的存在。
糖苷化合物的1H NMR数据(600MHz，于CD3OD中)和13C NMR数据(150MHz，于CD3OD中)统计见表1，由表1可得：糖苷化合物的结构为：N-(4-甲氧基苯基)甲酰胺2-氧-β-D-木糖苷，即式I所示的糖苷化合物。
表1糖苷化合物的1H NMR数据(600MHz，于CD3OD中)和13C NMR数据(150MHz，于CD3OD中)
实施例2
式I所示糖苷化合物的提高呼吸道上皮细胞BEAS-2B细胞活性作用
BEAS-2B细胞系(人永生化支气管上皮细胞系)菌种来源于American TypeCulture Collection(Manassas,VA,USA)。所用培养基为DMEM(HyClone)含10％FBS(fetalbovine serum,Gibco)，培养条件为37℃，5％CO2的潮湿环境。通过CellTiterAQueousOne Solution(Promega,Madison,WI,USA)对细胞活性进行测定。细胞以3000细胞每孔的浓度接种于96孔板进行过夜培养，并给以不同浓度式I所示糖苷化合物处理24h。依据使用手册，CellTiterAQueous One Solution反应试剂添加到每个孔中，继续培养4h。然后在微孔板分光光度计(Multiskan FC,Thermo scientific)490nm波长下测定吸光值。每一浓度6组生物平行。
表2不同浓度式I所示糖苷化合物处理后的BEAS-2B细胞活性
*p＜0.05；与对照组(无式I所示糖苷化合物处理)的差异显著性
不同浓度式I所示糖苷化合物处理后BEAS-2B细胞活性变化如表2和图8所示，式I所示糖苷化合物能显著提高BEAS-2B细胞的细胞活性，相对于对照组，活性提高最高达1.6倍，由此显示此化合物具有活化BEAS-2B细胞的潜力。在0到2μM的浓度范围内，式I所示糖苷化合物提高细胞活性的能力随剂量增加而增强，在2μM时具有最高的提高活性能力；浓度继续增加则活性降低，推测是由于浓度过高，引起渗透压增加，不利于细胞生长。
比较例1
式I所示糖苷化合物的抗革兰氏阳性菌的作用
取相同培养时间的云芝栓孔菌和树舌灵芝单培养发酵液150mL，分别浓缩至5mL，过滤除菌，备用。供试菌株(枯草芽孢杆菌，链球菌)在试管内活化后，分别取200μL均匀涂布于固体培养上，每个菌三组平行。然后每个平板成三角形打孔，其中两个孔内分别添加200μL浓缩后菌液，剩下一孔添加纯化的0.17mM式I所示糖苷化合物。于28℃条件下培养12h后观察。
如图9和图10所示，式I所示糖苷化合物具有一定的抑制枯草芽孢杆菌和链球菌的作用，抑菌圈的直径均在1cm以上，而云芝栓孔菌和树舌灵芝的单培养发酵液均未见到有明显的抑制作用。
比较例2
式I所示糖苷化合物的抗人类致病菌的作用
取相同培养时间的云芝栓孔菌和树舌灵芝单培养发酵液150mL，分别浓缩至5mL，过滤除菌，备用。供试菌株新型隐球菌在试管内活化后，分别取200μL均匀涂布于固体培养上，每个菌三组平行。然后每个平板成三角形打孔，其中两个孔内分别添加200μL浓缩后菌液，剩下一孔添加纯化的0.17mM单式I所示糖苷化合物。于28℃条件下培养12h后观察。
如图11所示，式I所示糖苷化合物具有一定的抑制新型隐球菌的作用，抑菌圈的直径均在1cm以上，而云芝栓孔菌和树舌灵芝的单培养发酵液均未见到有明显的抑制作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.具有式I所示结构的糖苷化合物，
。
2.权利要求1所述的糖苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
以云芝栓孔菌和灵芝属真菌发酵共培养，得到具有式I所示结构的糖苷化合物；
所述灵芝属真菌为树舌灵芝或木灵芝；
所述共培养具体为：
将灵芝属真菌接种后进行发酵培养；
在所述灵芝属真菌接种1～2天后，将云芝栓孔菌接种进行发酵培养；
待云芝栓孔菌培养3～4天后，将所述灵芝属真菌的发酵液接种于云芝栓孔菌发酵液中进行发酵共培养18～23天，得到糖苷化合物；
所述灵芝属真菌的发酵液在云芝栓孔菌发酵液中的接种量40～60％；
所述发酵共培养的培养温度为26～28℃；
所述发酵共培养在摇床上进行，摇床的转速为160～180rpm；
所述发酵共培养的培养基包括以下质量含量的组分：葡萄糖8～12g/L，磷酸二氢钾0.8～1.4g/L，硫酸镁0.3～0.5g/L，蛋白胨1.5～3g/L，余量的水。
3.权利要求1所述的糖苷化合物或权利要求2所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备提高呼吸道上皮细胞Beas-2B细胞活性的药物中的应用。
4.权利要求1所述的糖苷化合物或权利要求2所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备抑制革兰氏阳性菌的药物中的应用。
5.权利要求1所述的糖苷化合物或权利要求2所述制备方法制备得到的糖苷化合物在制备抑制人类致病菌药物中的应用。
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