CN105901471A - 一种竹荪中抑菌成分的提取方法 - Google Patents

一种竹荪中抑菌成分的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种竹荪中抑菌成分的提取方法，先取竹荪粉末，加至NaOH溶液中浸提，得到浸提液，再加入含有胰蛋白酶的磷酸盐缓冲溶液，加热酶解，将酶解液进行过滤，得滤渣，对滤渣进行压榨，去除过量水分，得湿粉，然后对湿粉进行采用水蒸气蒸馏法蒸馏，最后将蒸馏过的湿粉干燥后投入萃取釜中，通入提携剂与超临界CO2流体，溶解有萃出物的CO2流体经减压阀进入精馏柱分离，即得。本发明提取方法对竹荪中抑菌活性物质的提取效率高、所得有效成分抑菌活性好。

Description

一种竹荪中抑菌成分的提取方法
技术领域
本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及一种竹荪中抑菌成分的提取方法。
背景技术
21世纪以来，食源性致病菌对于食品安全的威胁愈发严重。据WHO在2002年3月公布的信息表明，全球每年发生食源性疾病达数十亿例，每年因食源性致病菌污染引起腹泻而死亡的 0-15岁儿童达170万。而在我国，从2003-2005年全国报告的重大食物中毒事故中，食源性致病菌占40%以上。为防止其对人类健康和相关食品产业造成的巨大危害，科研工作者们开发出许多方法，如气调包装、冷冻保藏等，但均对食品的风味产生一定影响。适量添加化学防腐剂能有效地解决该问题，但由于目前广泛使用的化学防腐剂易带来环境污染、破坏生态平衡等原因，现已逐渐开始停止使用。因此，开发利用安全、无毒的天然防腐剂，特别是植物源类的抑菌物质，就成为当前科研领域的热点。
竹荪作为一种功能性食品，很早就被我国的劳动人民发现具有防腐抑菌的活性。其含有丰富的生理活性物质和营养物质，据文献报道，竹荪具有免疫调节、抗氧化等功能。而目前国内外对于竹荪抑菌活性的研究，传统的技术路线是采用水蒸气蒸馏法和有机溶剂提取法来获得粗提物，用滤纸片扩散法或琼脂稀释法测定抑菌效果。其在提取方法和药敏性实验方法上都存在着可以改进的地方。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种竹荪中抑菌成分的提取方法，该方法对竹荪中抑菌活性物质的提取效率高、所得有效成分抑菌活性好。
一种竹荪中抑菌成分的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，取竹荪粉末，加至质量浓度为1～3%浓度的NaOH溶液中浸提，得到浸提液；
步骤2，在步骤1的浸提液中加入含有质量浓度1～4%胰蛋白酶的磷酸盐缓冲溶液，加热至35～45℃进行酶解，得到酶解液；
步骤3，将步骤2所得酶解液进行过滤，得滤渣，对滤渣进行压榨，去除过量水分，得湿粉；
步骤4，对步骤3所得湿粉进行采用水蒸气蒸馏法，蒸馏温度为50～70℃；
步骤5，将水蒸气蒸馏后的湿粉干燥后投入萃取釜中，通入提携剂与超临界CO2流体，溶解有萃出物的CO2流体经减压阀进入精馏柱分离，即得。
进一步地，步骤1中浸提时间为2～5h。
进一步地，步骤2中磷酸缓冲液的pH为5.8～8.5。
进一步地，步骤2中磷酸盐缓冲溶液的加入体积与竹荪粉末重量的比为15～20mL：1g。
进一步地，步骤4中蒸馏时间为1～3h。
进一步地，步骤5中萃取温度40～55℃，压力20～30MPa，二氧化碳流量为200～220kg/h，萃取时间3～4小时。
进一步地，步骤5中精馏柱压力为8～30MPa，温度为20～45℃，精馏时间为0.5～2h。
本发明提取方法对竹荪中抑菌活性物质的提取效率高、所得有效成分抑菌活性好。
具体实施方式
实施例1
一种竹荪中抑菌成分的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，取竹荪粉末，加至质量浓度为1%浓度的NaOH溶液中浸提，得到浸提液；
步骤2，在步骤1的浸提液中加入含有质量浓度1%胰蛋白酶的磷酸盐缓冲溶液，加热至45℃进行酶解，得到酶解液；
步骤3，将步骤2所得酶解液进行过滤，得滤渣，对滤渣进行压榨，去除过量水分，得湿粉；
步骤4，对步骤3所得湿粉进行采用水蒸气蒸馏法，蒸馏温度为50℃；
步骤5，将水蒸气蒸馏后的湿粉干燥后投入萃取釜中，通入提携剂与超临界CO2流体，溶解有萃出物的CO2流体经减压阀进入精馏柱分离，即得。
其中，步骤1中浸提时间为2h；步骤2中磷酸缓冲液的pH为5.8，磷酸盐缓冲溶液的加入体积与竹荪粉末重量的比为15mL：1g；步骤4中蒸馏时间为1h；步骤5中萃取温度40℃、压力30MPa、二氧化碳流量为200kg/h、萃取时间4小时，精馏柱压力为8MPa、温度为20℃、精馏时间为0.5h。
实施例2
一种竹荪中抑菌成分的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，取竹荪粉末，加至质量浓度为2%浓度的NaOH溶液中浸提，得到浸提液；
步骤2，在步骤1的浸提液中加入含有质量浓度4%胰蛋白酶的磷酸盐缓冲溶液，加热至35℃进行酶解，得到酶解液；
步骤3，将步骤2所得酶解液进行过滤，得滤渣，对滤渣进行压榨，去除过量水分，得湿粉；
步骤4，对步骤3所得湿粉进行采用水蒸气蒸馏法，蒸馏温度为60℃；
步骤5，将水蒸气蒸馏后的湿粉干燥后投入萃取釜中，通入提携剂与超临界CO2流体，溶解有萃出物的CO2流体经减压阀进入精馏柱分离，即得。
其中，步骤1中浸提时间为4h；步骤2中磷酸缓冲液的pH为6.5，磷酸盐缓冲溶液的加入体积与竹荪粉末重量的比为20mL：1g；步骤4中蒸馏时间为3h；步骤5中萃取温度50℃、压力20MPa、二氧化碳流量为210kg/h、萃取时间3小时，精馏柱压力为25MPa、温度为30℃、精馏时间为1h。
实施例3
一种竹荪中抑菌成分的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，取竹荪粉末，加至质量浓度为2%浓度的NaOH溶液中浸提，得到浸提液；
步骤2，在步骤1的浸提液中加入含有质量浓度3%胰蛋白酶的磷酸盐缓冲溶液，加热至35℃进行酶解，得到酶解液；
步骤3，将步骤2所得酶解液进行过滤，得滤渣，对滤渣进行压榨，去除过量水分，得湿粉；
步骤4，对步骤3所得湿粉进行采用水蒸气蒸馏法，蒸馏温度为60℃；
步骤5，将水蒸气蒸馏后的湿粉干燥后投入萃取釜中，通入提携剂与超临界CO2流体，溶解有萃出物的CO2流体经减压阀进入精馏柱分离，即得。
其中，步骤1中浸提时间为3h；步骤2中磷酸缓冲液的pH为7，磷酸盐缓冲溶液的加入体积与竹荪粉末重量的比为18mL：1g；步骤4中蒸馏时间为2h；步骤5中萃取温度50℃、压力25MPa、二氧化碳流量为210kg/h、萃取时间3小时，精馏柱压力为25MPa、温度为30℃、精馏时间为1.5h。
实施例4
一种竹荪中抑菌成分的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，取竹荪粉末，加至质量浓度为3%浓度的NaOH溶液中浸提，得到浸提液；
步骤2，在步骤1的浸提液中加入含有质量浓度4%胰蛋白酶的磷酸盐缓冲溶液，加热至35℃进行酶解，得到酶解液；
步骤3，将步骤2所得酶解液进行过滤，得滤渣，对滤渣进行压榨，去除过量水分，得湿粉；
步骤4，对步骤3所得湿粉进行采用水蒸气蒸馏法，蒸馏温度为70℃；
步骤5，将水蒸气蒸馏后的湿粉干燥后投入萃取釜中，通入提携剂与超临界CO2流体，溶解有萃出物的CO2流体经减压阀进入精馏柱分离，即得。
其中，步骤1中浸提时间为5h；步骤2中磷酸缓冲液的pH为8.5，磷酸盐缓冲溶液的加入体积与竹荪粉末重量的比为20mL：1g；步骤4中蒸馏时间为3h；步骤5中萃取温度55℃、压力20MPa、二氧化碳流量为220kg/h、萃取时间3小时，精馏柱压力为30MPa、温度为45℃、精馏时间为2h。
实施例5
本实施例与实施例3的区别在于：步骤2中磷酸盐缓冲溶液的pH为3.5。
实施例6
本实施例与实施例3的区别在于：步骤3所得湿粉不经过水蒸气蒸馏直接进行超临界萃取。
选用单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌0157：H7、肠炎沙门氏菌、副溶血性弧菌作为供试菌种，检测实施例1至6所得提取物对5中供试菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）效价。
由上述实验结果可知，本发明提取方法对竹荪中抑菌活性物质的提取效率高、所得有效成分抑菌活性好。实施例5中，磷酸缓冲液的酸性过大，使得胰蛋白酶降解了竹荪中抑菌活性物质，导致提取效率下降；实施例6中，采用水蒸气蒸馏可以进一步减少杂质对抑菌活性物质提取效率的影响，提高提取率。

Claims (7)

1.一种竹荪中抑菌成分的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，取竹荪粉末，加至质量浓度为1～3%浓度的NaOH溶液中浸提，得到浸提液；
步骤2，在步骤1的浸提液中加入含有质量浓度1～4%胰蛋白酶的磷酸盐缓冲溶液，加热至35～45℃进行酶解，得到酶解液；
步骤3，将步骤2所得酶解液进行过滤，得滤渣，对滤渣进行压榨，去除过量水分，得湿粉；
步骤4，对步骤3所得湿粉进行采用水蒸气蒸馏法，蒸馏温度为50～70℃；
步骤5，将水蒸气蒸馏后的湿粉干燥后投入萃取釜中，通入提携剂与超临界CO2流体，溶解有萃出物的CO2流体经减压阀进入精馏柱分离，即得。
2.根据权利要求1所述的竹荪中抑菌成分的提取方法，其特征在于：步骤1中浸提时间为2～5h。
3.根据权利要求1所述的竹荪中抑菌成分的提取方法，其特征在于：步骤2中磷酸缓冲液的pH为5.8～8.5。
4.根据权利要求1所述的竹荪中抑菌成分的提取方法，其特征在于：步骤2中磷酸盐缓冲溶液的加入体积与竹荪粉末重量的比为15～20mL：1g。
5.根据权利要求1所述的竹荪中抑菌成分的提取方法，其特征在于：步骤4中蒸馏时间为1～3h。
6.根据权利要求1所述的竹荪中抑菌成分的提取方法，其特征在于：步骤5中萃取温度40～55℃，压力20～30MPa，二氧化碳流量为200～220kg/h，萃取时间3～4小时。
7.根据权利要求1所述的竹荪中抑菌成分的提取方法，其特征在于：步骤5中精馏柱压力为8～30MPa，温度为20～45℃，精馏时间为0.5～2h。
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Title
曹奕: ""竹荪中抑菌物质的提取方法优化及其抑菌机理的初步探究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

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