CN105900874B

CN105900874B - 一种类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系的培育方法

Info

Publication number: CN105900874B
Application number: CN201610252833.6A
Authority: CN
Inventors: 邓岳文; 王庆恒; 杜晓东; 黄荣莲; 焦钰; 雷超; 吴小芬; 梁飞龙; 李俊辉
Original assignee: Guangdong Ocean University
Current assignee: Guangdong Ocean University
Priority date: 2016-04-22
Filing date: 2016-04-22
Publication date: 2018-08-31
Anticipated expiration: 2036-04-22
Also published as: CN105900874A

Abstract

本发明公开了一种类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系培育方法。本发明的培育方法基本步骤包括亲本挑选、群体构建、幼体培育、海区养殖和多代群体选择步骤，可培育出类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系；获得的新品系中，96%个体的贝壳棱柱层为金黄色、96%个体的外套膜、闭壳肌与鳃丝为金黄色，其体内类胡萝卜素含量是对照群体的2‑5倍。本发明利用群体选择育种技术培育类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝新品系，具有明显的金黄壳色，而且贝体内类胡萝卜素含量高；本发明方法容易在生产单位推广，具有显著的实用价值与经济价值。

Description

一种类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系的培育方法

技术领域

本发明涉及一种马氏珠母贝优良品种的选育方法，具体说是一种类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系的培育方法，属于水产养殖技术领域。

背景技术

类胡萝卜素是一类脂溶性的有色化合物，广泛存在自然界中，一般只能在植物、真菌和某些细菌中合成。自1928 年Kuhn和Karrer首次阐明了β-胡萝卜素的结构以来，已经报道了800多种类胡萝卜素。类胡萝卜素在动物体内具有重要的生物功能，人体类胡萝卜素的摄入量与抗氧化、细胞调节、基因表达以及免疫能力的强弱密切相关，类胡萝卜素还可以有效降低患癌症以及心血管等疾病的风险。对于水产动物而言，类胡萝卜素起到改善卵质、减少胚胎发育死亡率、提高免疫生殖能力与着色等作用。双壳类、腹足类、多板类及头足类等贝类体内含有丰富的类胡萝卜素，但贝类自身不能合成类胡萝卜素，主要通过食物链从食物中摄取并在体内沉积，体内的部分类胡萝卜素还可以被转化为其他形式；目前国内有关类胡萝卜素含量研究的经济养殖贝类包括华贵栉孔扇贝Chlamys nobilis、虾夷扇贝Patinopecten yessoensis、栉孔扇贝Chlamys farreri与三角帆蚌Hyriopsis cumingii。

马氏珠母贝是我国南方沿海重要的经济养殖贝类，主要用于生产有核珍珠，是我国广东、广西与海南特色海洋产业。在上世纪90年代达到产业高峰，年产珍珠20吨，从业人员30万，近几年来珍珠产业严重下滑，目前年产量3-5吨。珍珠颜色是决定珍珠商业价值的重要指标之一。马氏珠母贝生产的珍珠（未经过加工）颜色常有白色、金黄色以及少量的粉色，其中白色带粉的珍珠最为珍贵。现有研究表明，类胡萝卜素可能是决定珍珠颜色的重要因素之一，如，有机类胡萝卜素能使淡水养殖珍珠呈现颜色，而白色珍珠不含有有类胡萝卜素。除了生产珍珠以外，马氏珠母贝也是一种重要经济食用贝类，具有较高营养价值，具有丰富蛋白质营养，谷氨酸与甘氨酸等呈味氨基酸，不饱和脂肪酸、牛磺酸，锌与硒等微量元素。马氏珠母贝壳颜色包括褐色、红色、金黄与白色等，不同壳色个体的生长性状与产珠性状均存在明显差异。

近年来，本专利的申请人对此进行了大量的研究，结果表明，马氏珠母贝金黄壳色群体的类胡萝卜素含量明显高于正常壳色（褐色）群体，然而金黄壳色群体内个体间类胡萝卜素含量存在明显不同，这主要受到遗传因素影响。目前未见关于类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系的培育方法相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结合遗传育种技术手段筛选金黄色壳个体类胡萝卜素含量高的个体作为亲本繁育子代群体，以获得具有金黄色壳外壳、类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系的培育方法；该方法包括亲本挑选、构建群体、幼体培育、海区养殖和多代群体选择等步骤，通过在马氏珠母贝育苗上采用人工解剖授精方式、珍珠贝育苗过程中，建立马氏珠母贝不换水苗种育苗的方法等措施，对传统的育种技术进行改良，不需转基因生物技术，即可实现类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝新品系的培育。

本发明的技术方案如下：一种类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系的培育方法，基本步骤如下：

（1）亲本选择：先直接挑选贝壳棱柱层为金黄色的个体，再利用开口钳栓口，挑选闭壳肌、外套膜与鳃丝均呈现金黄色的马氏珠母贝个体作为亲本；

（2）群体构建：将亲本解剖，剪取性腺，利用300目筛绢冲洗、分散配子；将雌性亲本的卵子与雄性的精子混合授精；受精卵在1000L孵化桶孵化，受精后20-24h，收集孵化桶中上浮的D型幼虫，转移到4m×3m×2.5m水泥池或1000L玻璃钢桶进行幼体培育；

（3）幼体培育：幼体培育密度为0.5-1.0个/ml，微量充气，不换水；每天定点投喂饵料，投喂时间为8:00，幼体浮游期间投喂酵母片；当40-50%数量的幼体出现眼点后，投放附着基，幼体附着后，每天换水1次，换水量为50%，投喂虾塘藻；附着基上的苗种规格达到2mm，将苗种从附着基转移到目数80目的网袋；

（4）海区养殖：将步骤（3）装有苗种的网袋转移到海区养殖，每隔5-7天清洗网袋表面的污泥与附着物，根据苗种规格，及时更换网袋调整养殖密度，养殖密度由初始的1000-1500个/袋逐渐降低为40个/笼；由初始的网目为80目的网袋更换为孔径为2.5-3.0cm的单层网笼；

（5）群体选择：从步骤（4）获得的群体中挑选贝壳棱柱层、外套膜、闭壳肌与鳃丝均为金黄色的个体作为亲本；剪取亲本性腺，利用300目筛绢冲洗、分散配子；将雌性亲本卵子与雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化，受精后20-24h，收集上浮的D型幼虫，转移到4m×3m×2.5m水泥池培育；按照步骤（3）与（4）进行苗种培育与海区养殖；

（6）新品系培育：重复步骤（5）2-3次，培育出选育群体，该选育群体具有明显金黄色外壳，闭壳肌、外套膜与鳃丝均为金黄色养殖新品系，且金黄色外壳的个体比例达到96%以上。

优选的，步骤（2）和步骤（5）所述受精卵孵化条件为：孵化水温26-30℃，盐度28-30。

优选的，步骤（3）所述酵母片投喂量为0.1-0.5mg/l，虾塘藻投喂量25000-50000cells/ml。

优选的，所述步骤（5）中，从群体中挑选的亲本其类胡萝卜素含量大于群体类胡萝卜素含量平均值的10-15%，所挑选亲本数量为80-100个，雌雄比为1:1。

进一步的，步骤（4）所述根据苗种规格，及时更换网袋调整养殖密度的方法是：当苗种规格达到2-3mm时，养殖密度为1000-1500个/袋，网袋为80目；当苗种规格达到5-6cm时，养殖密度为40个/笼，网笼孔径为2.5-3.0cm。

本发明相对于现有技术的有益效果如下：

（1）结合遗传育种技术手段筛选金黄色壳个体类胡萝卜素含量高的个体作为亲本繁育子代群体，能有效提高养殖群体的类胡萝卜素含量；在传统育种的技术上进行了优化，不需要转基因生物技术，操作方便，能培育出同时具有金黄色壳与类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系；经本发明方法选育的新品系具有明显金黄色外壳，闭壳肌、外套膜与鳃丝均为金黄色，且金黄色壳个体比例达到96%以上；与现有的马氏珠母贝相比，本发明选育的新品系其体内的类胡萝卜素含量可提高150%以上；

（2）群体构建过程采用人工解剖授精方式，在珍珠贝育苗过程中，建立了马氏珠母贝不换水苗种育苗方法，充分考虑和结合了马氏珠母贝的生长、生活习性，通过在对马氏珠母贝新品种的选育过程不同阶段，变化水、饵料投喂、养殖密度等养殖条件，使幼体、苗种在最适合的环境下生长从而提高受精率，也可促使培育过程其体内类胡萝卜素含量的提高；

（3）经本发明方法选育的新品系，96%个体的贝壳棱柱层为金黄色、96%个体的外套膜、闭壳肌与鳃丝为金黄色，其体内类胡萝卜素含量是对照群体的2-5倍；本发明方法容易在生产单位推广，具有明显的实用价值与经济价值。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。

实施例采用以下步骤实现本发明：2009年4月和6月，构建群体。挑选贝壳棱柱层、外套膜、闭壳肌与鳃丝均呈现金黄色的马氏珠母贝个体作为亲本，贝龄2龄，壳长6.0-6.5cm，剪取性腺，利用300目筛绢冲洗、分散配子；将雌性亲本卵子与雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化；受精20h后，将上浮的D型幼虫转移到1000L玻璃钢桶培育；孵化水温26-28℃，盐度28；幼体密度控制为1个/ml，微充气，幼体培育期间不换水；浮游期间投喂酵母片，投喂量为0.1-0.5mg/l；当50%的幼体出现眼点后，投放附着基，幼体附着后，每天换水1次，换水量为50%，投喂虾塘藻；附着板的苗种规格达到2mm，将苗种从附着板转移到网袋；海区养殖前期每隔5-7天清洗网袋表面的污泥与附着物，根据苗种生长情况，及时更换网袋；养殖密度由初始的1500个/袋逐渐降低为40个/笼；网目由初始的80目更换为孔径为2.5-3.0cm的单层网笼。

2011年4月，第2代选育群体构建。从群体中筛选贝壳棱柱层、外套膜、闭壳肌与鳃丝均呈现金黄色，亲本平均性状大于群体平均值15%；剪取性腺，利用300目筛绢冲洗、分散配子；将雌性亲本卵子与雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化；受精20h后，将上浮的D型幼虫转移到1000L玻璃钢桶培育；孵化水温26-28℃，盐度28；幼体密度控制为1个/ml，微充气，幼体培育期间不换水；浮游期间投喂酵母片，投喂量为0.1-0.5mg/l；当50%的幼体出现眼点后，投放附着基，幼体附着后，每天换水1次，换水量为50%，投喂虾塘藻；苗种规格达到2mm，将苗种从附着板转移到网袋；海区养殖前期每隔5-7天清洗网袋表面的污泥与附着物，根据苗种生长情况，及时更换网袋；养殖密度由初始的1500个/袋逐渐降低为40个/笼；网目由初始的80目更换为孔径为2.5-3.0cm的单层网笼。

2013年5月，第3代选育群体构建。从第2代选育群体筛选贝壳棱柱层、外套膜、闭壳肌与鳃丝均呈现金黄色个体作为亲本，亲本平均性状性状大于群体平均值12%；剪取性腺，利用300目筛绢冲洗、分散配子；将雌性亲本卵子与雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化；受精20h后，将上浮的D型幼虫转移到1000L玻璃钢桶培育；孵化水温26-28℃，盐度28；幼体密度控制为1个/ml，微充气，幼体培育期间不换水；浮游期间投喂酵母片，投喂量为0.1-0.5mg/l；当50%的幼体出现眼点后，投放附着基，幼体附着后，每天换水1次，换水量为50%，投喂虾塘藻；附着板的苗种规格达到2mm，将苗种从附着板转移到网袋；海区养殖前期每隔5-7天清洗网袋表面的污泥与附着物，根据苗种生长情况，及时更换网袋；养殖密度由初始的1500个/袋逐渐降低为40个/笼；网目由初始的80目更换为孔径为2.5-3.0cm的单层网笼。

2015年5月，第4代选育群体构建。从第3代选育群体筛选贝壳棱柱层、外套膜、闭壳肌与鳃丝均呈现金黄色个体作为亲本，亲本平均性状大于平均值10%；剪取性腺，利用300目筛绢冲洗、分散配子；将雌性亲本卵子与雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化；受精20h后，将上浮的D型幼虫转移到1000L玻璃钢桶培育；孵化水温26-28℃，盐度28；幼体密度控制为1个/ml，微充气，幼体培育期间不换水；浮游期间投喂酵母片，投喂量为0.1-0.5mg/l；当50%的幼体出现眼点后，投放附着基，幼体附着后，每天换水1次，换水量为50%，投喂虾塘藻；附着板的苗种规格达到2mm，将苗种从附着板转移到网袋；海区养殖前期每隔5-7天清洗网袋表面的污泥与附着物，根据苗种生长情况，及时更换网袋；养殖密度由初始的1500个/袋逐渐降低为40个/笼；网目由初始的80目更换为孔径为2.5-3.0cm的单层网笼。贝龄1龄时，选育群体与对照群体的类胡萝卜素含量分别为184.32±8.72µg/g与72.56±7.66µg/g。

Claims

1.一种类胡萝卜素含量高的马氏珠母贝养殖新品系的培育方法，其特征在于：基本步骤如下：

（4）海区养殖：将步骤（3）装有苗种的网袋转移到海区养殖，每隔5-7天清洗网袋表面的污泥与附着物；根据苗种规格，及时更换网袋与调整养殖密度，养殖密度由初始的1000-1500个/袋逐渐降低为40个/笼；由初始的网目为80目的网袋更换为孔径为2.5-3.0cm的单层网笼；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）和步骤（5）所述受精卵孵化条件为：孵化水温26-30℃，盐度28-30。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）所述酵母片投喂量为0.1-0.5mg/l，虾塘藻投喂量25000-50000 cells/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4）所述根据苗种规格，及时更换网袋调整养殖密度的方法是：当苗种规格达到2-3mm时，养殖密度为1000-1500个/袋，网袋为80目；当苗种规格达到5-6cm时，养殖密度为40个/笼，网笼孔径为2.5-3.0cm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（5）中，从群体中挑选的亲本其类胡萝卜素含量大于群体类胡萝卜素含量平均值的10-15%，所挑选亲本数量为80-100个，雌雄比为1:1。